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cada proteína tiene una composición única de aminoácidos

aromáticos (fenilalanina, Phe, F; Tyr y Trp), el coeficiente de


extinción (e280) o su absortividad molar (em) deben ser
determinados para proteínas individuales para la estimación
del contenido proteico.
El intervalo de concentración que se puede determinar
depende del contenido de los aminoácidos Tyr y Trp, y oscila
entre 0,05 y 2 mg/mL
Ventajas del método de absorción a 280 nm

-Método rápido y relativamente sensible (varias veces más sensible que el método de Biuret).

-No existe interferencia del sulfato de amonio y otras sales buffer.

-Método no destructivo.

-Utilizado en detección de proteínas, posterior a purificación por columna.

Desventajas del método de absorción a 280 nm

-Los ácidos nucleicos también absorben en la región de 280 nm, por lo que pueden causar
interferencias.

-La solución debe ser clara e incolora. La turbidez puede producir resultados erráticos.

-Se requiere un sistema relativamente puro para utilizar este método.

http://foodsci.rutgers.edu/huang/Food_Analysis/Food%20Analysis%20Lab2.pdf

El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorción


de radiación ultravioleta – visible por una molécula, causando la promoción
de un electrón de un estado basal a un estado excitado, liberándose el
exceso de energía en forma de calor. La longitud de onda () comprende
entre 190 y 800 nm.
La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, éstos son
promovidos a estados excitados (de energía mayor). Al absorber radiación
electromagnética de una frecuencia correcta, ocurre una transición desde
uno de estos orbitales a un orbital vacío. Las diferencias entre energías
varían entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles,
provocan coloración en las moléculas ya que absorben energía en el visible
así como en el UV, como es el caso del β-caroteno.
Cuando un haz de radiación UV-Vis atraviesa una disolución conteniendo
un analito absorbente, la intensidad incidente del haz (Io) es atenuada hasta
I. Esta fracción de radiación que ha logrado traspasar la muestra es
denominada transmitancia (T) (T = I/Io). Por aspectos prácticos, se utilizará
la absorbancia (A) en lugar de la transmitancia (A = -logT), por estar
relacionada linealmente con la concentración de la especie absorbente
según la Ley de Beer-Lambert: A = ·l·c (: coeficiente de absortividad molar, l:
camino óptico, c: concentración de la especie absorbente)
Espectrofotómetro de absorción atómica - con quemador de aire - acetileno o quemador de óxido
nitroso - acetileno para la llama y un horno de grafito para determinaciones electro - térmicas con
fondo apropiado (corrección no atómica). Los parámetros del instrumento suelen ser dados por el
fabricante en el manual

instrumento

B) lámparas de descarga de cátodo hueco o de electrodo menos para todos los elementos.

(C) Horno - Horno programable o mufla con termostato manteniendo 450 ± 25 ° C

(D) Placa caliente - con control de calefacción para calentar hasta 300 ° C

(E) Platos de cuarzo o platino

(F) Botellas de poliestireno - con tapones a prueba de fugas - 100 ml

Limpie cuidadosamente y enjuague todos los objetos de vidrio y plástico con HNO3 o HCL para
evitar el metal

Contaminación - Primero lavar con agua y detergente, enjuagar con agua del grifo,

(B) Ácido clorhídrico A.R (6N) - Diluir 500 ml de HCl a 1 litro con agua

(C) Ácido Nítrico A.R 0,1 M - diluir 7 ml de ácido clorhídrico conc. Ácido a 1 litro.

(D) Se concentró ácido nítrico (Grado 1,40)

(E) Soluciones estándar de cadmio, cobre, plomo y zinc preparados como sigue:

(Se sugiere utilizar NIST Tractable toda la solución de 1000mg / l.

Solución de esto. Para obtener el mejor resultado, debe prepararse una solución de trabajo

Solución de digestión).
(1) Solución estándar de plomo-1mg / ml. Disolver 1.000 g de Pb en 7 ml de HNO3 concentrado en
1

Litro volumétrico. Diluir al volumen con agua. Estándar disponible comercialmente

Soluciones para AAS se pueden utilizar para todos los estándares de metal.

(2) Cadmio Solución estándar - 1 mg / ml. Disolver 1.000 g en 14 ml de agua y

7 ml de HNO3 concentrado en un matraz de 1 litro. Diluir al volumen con agua.

(3) Zinc Solución estándar - 1 mg / ml. Disolver 1.000 g de Zinc en 14 ml de agua + 7 ml

De HNO3 concentrado en un matraz aforado de 1 litro y diluir al volumen con agua.

(4) Solución estándar de cobre - 1 mg / ml. Disolver 1.000 gm de cobre en 7 ml de HNO3 en

Frasco de 1 litro. Diluir al volumen con agua.

(5) Hierro Solución estándar - 1 mg / ml. Disolver 1.000 g de hierro en 14 ml de agua y 7

Ml conc. HNO3 en un matraz volumétrico de 1 litro. Diluir al volumen con agua.

(E) Solución estándar de trabajo - Para el análisis del horno de grafito soluciones estándar diluidas

Con HNO3 0,1 M a una gama de estándares que cubren el rango lineal de los elementos a ser

determinado. Para el análisis de Flames, diluir soluciones estándar con 0,1 M HNO 3 a una gama de

Preparación de la curva de calibración:

Calibrar el ICP-OES. A continuación, lea la emisión de la muestra en blanco de una serie de


respectivas soluciones de metal de rango de trabajo en el ICP-OES. Utilice la mejor línea de
emisión (para una precisión óptima) dada por el proveedor del equipo. La absorción de la trama
contra μg de

Solución de metal / ml (0mg / l (muestra en blanco) 0,1 mg / l, 0,2 mg / l, 0,5 mg / l, 1 mg / ly 2


mg / l).

Estándar interno: Utilice itrio como un estándar interno

Medición de metales en la muestra: Leer la concentración en comparación con la calibración


preparada

curva. Si la concentración de la muestra medida está saliendo del rango de calibración, diluya

Más lejos en el rango de calibración.

QC Comprobar Estándar: Ejecutar estándares de control de calidad (certificación NIST / BAM /


IRRRM) después de 20
muestra

Spike: Añadir la concentración conocida de metales en la muestra y seguir, la digestión de


microondas

método. Analizar la muestra con punta y analizar la recuperación de los estándares de metal añadido
de

Muestra con punta. Utilice el factor de recuperación en el reporte final.Normas que cubran la
concentración de los elementos que han de determinarse