UNIVERSIDAD ESTATAL PENINSULA DE

SANTA ELENA
FACULTAD CIENCIAS DEL MAR

ELABORADO POR:

Grupo No. 1
Goya Andrés
Mejillón Andrés
Morán Adriana
Ramírez Elizabeth

PRÁCTICA No. 2 y 3 - GENÉTICA

TEMA: Etapas De Extracción Del ADN y Extracción de ADN Método de NaCl

DOCENTE:

BLGA. JANETH GALARZA PhD.

CURSO: 4/2

FECHA: 1 de agosto de 2017

PERIODO 2017 – I
 UPSE
FACULTAD DE CIENCIAS DEL MAR
CARRERA DE BIOLOGIA MARINA

INTRODUCCIÓN
La historia del gen corre paralela a la del ADN. En 1870 Friedrich Miescher realizo un
experimento en Tubingen, Alemania. Aquel joven médico investigaba las células
obtenidas del pus hallado en los vendajes desechados en las operaciones quirúrgicas. Se
dedicó a aislar las células sin dañarlas, filtrando y lavando los componentes celulares
obtuvo sedimentos bastantes puros para el análisis. Miescher fue capaz de separar los
núcleos del resto material celular. Probó muchas fórmulas para separar los núcleos y su
procedimiento final consistió en una serie de pasos en el que constaba eliminar las grasas
con alcohol y purificar hasta llegar a la sustancia nueva que nadie había observado antes.
El ADN fue aislado por Friedrich Meischer, no fue hasta 1941 que ver y McLead
demostraron que era la molécula portadora de información genética. Más tarde en 1953,
Watson y Crick, en Inglaterra descubrieron la estructura de la molecular del ADN, lo que
permitió entender que la información genética es almacenada y procesada. (Ruiz, 2012)
La estructura de la doble hélice ADN, con su apareamiento de bases complementarias,
fue uno de los descubrimientos más grandes de la biología del siglo XX. La estructura
misma indico la forma en la que la molécula de ADN podría replicarse, y por lo tanto
revelo el “secreto de la vida”. (Bishop, 2008)
La estructura del ADN es que es independiente de la secuencia particular de los
nucleótidos que lo componen. La secuencia de nucleótidos con que se constituye un ácido
nucleico no es importante en cuanto a la estructura, sino porque determina los
aminoácidos que constituyen el correspondiente polipéptidos. La relación entre a
secuencia del ADN y la secuencia de la proteína se denomina código genético. (Lewin,
2014)
El ADN también contiene secuencias como función consiste en ser reconocidas por una
molécula reguladora, generalmente una proteína. La función viene determinada por su
secuencia y no a través de un código mediador. Los dos tipos de regiones, los genes
expresados como proteínas y las secuencias reconocidas como tales, constituyen la
información genética.
La práctica la pudimos realizar en el laboratorio de biología con una muestra de musculo
de pescado. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En
primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder
acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para
dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan
disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble
en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre
el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de
otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la
unión de las proteínas al ADN. (Lewin, 2014).
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CARRERA DE BIOLOGIA MARINA

PRACTICA 2
TEMA: ETAPAS DE EXTRACCIÓN.
OBJETIVO: Explicar el proceso de extracción del ADN diferenciando las reacciones
que surgen en cada una de las etapas.

DESARROLLO:
1).- PREPARACIÓN DE LA MUESTRA (células)

2).- DISOCIAR LOS TEJIDOS: LISIS CELULAR: Homogenización:

a) método mecánico: trituración, maceración, coagulación a -80, nitrógeno
líquido
b) método químico: Detergentes: SDS, Triton x-100, CTAB, PVP
c) método enzimático: proteinasa K, lisosina, zimoliasa, tripsina, tris, EDTA.

3).- PURIFICACION DEL ADN. Acetato de K, fenol/cloroformo/isoamil alcohol.

4).- PRECIPATACION DEL ADN.- etanol 95% /100% (2- 2,5 vol); isopropanol 0,6 vol,
acetato de Na, acetato de amonio, cloruro de litio (deshidratación a -20 o -80 grados).

5).- LAVADO DEL ADN.- etanol 70% o 75%,

6.- RESUSPENDER: TE (Tris/EDTA); agua ultra pura.

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PRACTICA 3
TEMA: Extracción del ADN, método de NaCl
OBJETIVO: Extraer el ADN de células animales (o vegetales), aplicando un protocolo
basado en NaCl el cual permitirá obtener un ADN de alta calidad.

DESARROLLO:
1. Pese por duplicado de 40 a 50 mg de muestra y deposite en tubos eppendorf, triture.
2. Añada 600μLde tampón de extracción (0.05MTris – 0.1M EDTA), 70 μl de Sodium
Dodecyl Sulfate al 10% y 20μL de proteinasa K (20mg/mL), triturar fuertemente.
3. Incubar (baño maría) a 55°C por 15 minutos
4. Añadir 200μL de NaCl 5M y centrifugar 10000 rpm durante 5 minutos
5. Transferir 800μL de sobrenadante (ADN extraído) a un nuevo tubo eppendorf de
1.5mL.
6. Agregar 700μL de alcohol absoluto dejar en reposo 10 min o toda la noche a -20°C.
7. Centrifugar la muestra durante 5 minutos a una velocidad de 10000 rpm.
8. Descartar el sobrenadante; lavar el pellet de ADN añadiendo 800 μL de etanol frío al
70%.
9. Centrifugar durante 5 minutos a máxima velocidad de 12000 rpm
10. Secar el pellet a temperatura de 32°C (cerca al mechero) durante 10 minutos; el ADN
obtenido se resuspende en 50μL de H2O miliq y se almacena a -20°C.
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Bibliografía
Bishop, D. (2008). El descubriento de la doble helice del ADN. En DNA, Changing
Science and Society (pág. 5 y 6). Madrid - España: Ediciones Akal, S.A.
Lewin, B. (2014). El ADN es el material genético. En GENES IV (pág. 73 y 74).
Barcelona: Reverté. S.A.
Ruiz, J. S. (2012). Importancia de la genética. En Control Global de Riesgo
Cardiometabólico (pág. 195). Madrid: Ediciones Díaz de Santos.