CATEDRA: Microbiología

CATEDRÁTICO: Ing. Castañeda Dueñas, Julio

ESTUDIANTES:

- AROTOMA ORE, Freddy

- CURRI GIRON, Sadith mercedes
- ESPINOZA HUAMANI, Max Lismer
- FERNÁNDEZ AGUIRRE, Jhordan David
- GIRÁLDEZ MORAN, Karol Ninfa
- HUAYLLANI MARTÍNEZ, Dary Jhoshelin

CICLO: IV

SECCIÓN: “A”

HUANCAVELICA – PERÚ

2017
I
ÍNDICE

I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................ 1

II. MARCO TEÓRICO .............................................................................................................. 2

III. MATERIALES Y MÉTODOS ......................................................................................... 7

3.1. Materiales ...................................................................................................................... 7

3.2. Métodos ....................................................................................................................... 10

IV. RESULTADOS ............................................................................................................... 12

V. DISCUSIONES ................................................................................................................... 14

VI. CONCLUSIONES .......................................................................................................... 15

VII. RECOMENDACIONES ................................................................................................. 16

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 17

II
 I. INTRODUCCIÓN
La resistencia de las bacterias es el principal obstáculo para la eficacia terapéutica de los
antibióticos, pues no sólo puede anular la acción curativa si se manifiesta en el curso del
tratamiento, sino que tiene a la larga consecuencias todavía más graves para el conjunto
de la población, ya que provoca la desaparición de las cepas susceptibles y la
propagación de las resistentes. Ese es el motivo por el cual la determinación de la
sensibilidad de las bacterias a los antibióticos haya adquirido tanta importancia y sea
indispensable para hacer de los antibióticos un uso racional y para preservar la eficacia
de este grupo tan valioso de agentes terapéuticos. El conocimiento de la sensibilidad a
los antibióticos, del microorganismo causante de una enfermedad, no es sólo importante
para hacer la selección inicial del agente terapéutico correspondiente, sino que además
en aquellos casos en los cuales el paciente presente intolerancia a determinado fármaco,
permite seleccionar el más adecuado para ese paciente en particular. (Pedrique, 2002)

Los antibiogramas son métodos in vitro que determinan la susceptibilidad de los

microorganismos a una variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de
laboratorio específica y estandarizada. (Pedrique, 2002)

OBJETIVOS:

 Comprobar la acción de los diferentes antibióticos frente a los microorganismos

patógenos.
 Utilizar los diferentes agentes terapéuticos para observar la sensibilidad
bacteriana y/o inhibición

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 II. MARCO TEÓRICO
Antibiograma

¿Por qué realizar un antibiograma?

Se usa para medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la

responsable de una infección a uno o varios antibióticos. La sensibilidad in vitro es uno
de los requisitos previos para la eficacia in vitro de un tratamiento antibiótico. El
antibiograma sirve para obtener las decisiones terapéuticas individuales. (Crespo, 2002)

También se emplea para seguir la evolución de las resistencias bacterianas. Gracias a

estos seguimientos epidemiológicos, a escala de un servicio, un centro de atención
médica, una región o un país, es como puede adaptarse la antibioterapia empírica,
revisarse regularmente los espectros clínicos de los antibióticos y adoptarse ciertas
decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevención en los
hospitales. Hay entonces un doble interés: terapéutico y epidemiológico. (Crespo,
2002)

¿Cuándo realizar un antibiograma?

Siempre que una toma bacteriológica de finalidad diagnóstica haya permitido el

aislamiento de una bacteria considerada responsable de la infección.

Establecer esta responsabilidad exige una colaboración entre el bacteriólogo y el clínico.

En efecto, en ciertas circunstancias, el microbiólogo no podrá determinar con certeza
que el aislamiento de una bacteria exige un antibiograma, sin los datos clínicos que le
aporta el médico. Por ejemplo, una bacteria no patógena puede ser responsable de la
infección de un enfermo inmunodeprimido o en un lugar determinado del organismo. La
presencia de signos clínicos puede ser también determinante para la realización de un
antibiograma (por ejemplo: la infección urinaria con un número reducido de gérmenes).
(Bergoglio, 1993)

Sensibilidad bacteriana a los antibióticos

La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de la medida

de la sensibilidad de una bacteria a un determinado antibiótico. La CIM se define como
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la menor concentración de una gama de diluciones de antibiótico que provoca una
inhibición de cualquier crecimiento bacteriano visible. Es el valor fundamental de
referencia que permite establecer una escala de actividad del antibiótico frente a
diferentes especies bacterianas. (Jawetz, 1999)

Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina, y de

manera semi cuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos automatizados o semi
automatizados). Estos diferentes métodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa
bacteriana en función de su sensibilidad frente al antibiótico probado. Esta cepa se
denomina Sensible (S), Intermedia (I) o Resistente (R) al antibiótico. (Damaso, 1990)

Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana es, según la NCCLS:

Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso

de un tratamiento a la dosis habitual.
Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy
reducida. No es de esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo
de tratamiento.
Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede
conseguir efecto terapéutico en ciertas condiciones (fuertes
concentraciones locales o aumento de la posología).

Ciertas moléculas son representativas de un grupo de antibióticos. Los resultados (S, I,

R) obtenidos con estas moléculas pueden ser ampliados a los antibióticos del grupo, que
en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo: Equivalencia entre la cefalotina que se
ensaya y las restantes cefalosporinas de 1ª generación que no es necesario probar, ya
que el resultado puede deducirse del obtenido en la cefalotina).
Este hecho permite ensayar un número reducido de antibióticos, sin limitar por ello las
posibilidades terapéuticas. (Sanchez & Guzman, 1998)

Interpretación de un Antibiograma

Ciertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando se inscriben

en el DNA bacteriano. Su expresión en el organismo, en donde las condiciones en

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cuanto a medios son diferentes, expondría al riesgo de fracaso terapéutico. Para evitar
esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera global a fin de descubrir, a través
de la comparación de las respuestas para cada antibiótico, un mecanismo de resistencia
incluso débilmente expresado. Así, gracias a la interpretación, una cepa que aparece
como falsamente sensible será categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de
Klebsiella pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las
cefalosporìnas de 3" generación. El resultado de Sensible debe ser corregido a
Intermedio o Resistente, ya que la utilización de estos antibióticos correría el riesgo de
provocar un fracaso terapéutico). (Madigan & Brock, 1999)

Resistencia bacteriana

Cada antibiótico se caracteriza por un espectro natural de actividad antibacteriana. Este

espectro comprende las especies bacterianas que, en su estado natural, sufren una
inhibición de su crecimiento por concentraciones de su antibiótico susceptibles de ser
alcanzadas in vivo. A estas especies bacterianas se les dice naturalmente sensibles a
dicho antibiótico. Las especies bacterianas que no se encuentran incluidas dentro de
dicho espectro se denominan naturalmente resistentes. (Crespo, 2002)

El antibiótico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias resistentes eliminando las
sensibles. Es lo que se conoce con el nombre de presión de selección. El aumento de la
frecuencia de las cepas resistentes va unido casi siempre al uso intensivo del antibiótico
en cuestión (Damaso, 1990)

La resistencia natural es un carácter constante de todas las cepas de una misma

especie bacteriana. El conocimiento de las resistencias naturales permite prever la
inactividad de la molécula frente a bacterias identificadas (después del crecimiento) o
sospechosas (en caso de antiboterapia empírica). En ocasiones, constituye una ayuda
para la identificación, puesto que ciertas especies se caracterizan por sus resistencias
naturales. Ejemplos: Resistencia natural del Proteus mirabilis a las tetraciclinas y a la
colistina. Resistencia natural de la Klebsiella pneumoniae a las penicilinas (ampicilina,
amoxicilina). (Jawetz, 1999)

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 La resistencia adquirida es una característica propia de ciertas cepas, dentro de una
especie bacteriana naturalmente sensible, cuyo patrimonio genético ha sido modificado
por mutación o adquisición de genes. Contrariamente a las resistencias naturales, las
resistencias adquiridas son evolutivas, y su frecuencia depende a menudo de la
utilización de los antibióticos. En el caso de numerosas especies bacterianas, y teniendo
en cuenta la evolución de las resistencias adquiridas, el espectro natural de actividad no
es ya suficiente para guiar la elección de un tratamiento antibiótico. En ese caso, se hace
indispensable el antibiograma. (Jawetz, 1999)

Una resistencia cruzada es cuando se debe a un mismo mecanismo de resistencia.

En general, afecta a varios antibióticos dentro de una misma familia (Ejemplo: La
resistencia a la oxacilina en los estafilococos se cruza con todas los ß-lactámicos). En
ciertos casos, puede afectar a antibióticos de familias diferentes (Ejemplo: La resistencia
por impermeabilidad a las ciclinas se cruza con la resistencia al coloranfenicol y al
trimetoprima). (Bergoglio, 1993)

Una resistencia asociada es cuando afecta a varios antibióticos de familias

diferentes. En general, se debe a la Asociación de varios mecanismos de resistencia
(Ejemplo: La resistencia de los estafiolococos a la oxacilina va frecuentemente asociada
a las quinolonas, aminoglicósidos, macrolidos y ciclinas). (Chirinos, 1999)

Con el fin de tener en cuenta la evolución de las resistencias adquiridas y, por

consiguiente, proporcionar a los médicos datos útiles cuando deben proceder a la
elección empírica de una antibioterapia, la noción de espectro clínico completa la de
espectro natural. Definido para cada antibiótico, este espectro clínico se incluye en el
Resumen de las Características del Producto (RCP). Este espectro integra no solamente
datos bacteriológicos (espectro natural, frecuencia de las resistencias adquiridas), sino
también datos farmacocinéticas y clínicos (las especies descritas en el espectro son
aquellas para las que se ha demostrado la actividad clínica del producto). El espectro
clínico se revisa regularmente para tener en cuenta la evolución de las resistencias
adquiridas. (Madigan & Brock, 1999)

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Disco para antibiograma

Los discos, para antibiograma son producidos por casas comerciales bajo un riguroso
protocolo de control internacional. Cada disco contiene una concentración
predeterminada que permite una correlación más o menos precisa con la concentración
mínima inhibitoria que dicho antibiótico alcanza "in vivo" según los resultados de
CEPAS CONTROL resistencia o susceptibilidad. Solo deben utilizarse discos con
nombre genérico. Para que los resultados del antibiograma de discos sean realmente
confiables es de La conservación de los discos es crítica ya que de ella depende la
confiabilidad de los resultados. Se debe, por lo tanto, tener particular cuidado al
respecto siguiendo las indicaciones siguientes: Los recipientes individuales que
contienen los discos deben mantenerse refrigerados de 4-5°C. o almacenados a -20°C.
Hasta que sean utilizados; los discos que contienen drogas de la familia de la penicilina
o de las cefalosporinas deben mantenerse siempre congelados, excepción de una
pequeña cantidad de discos para el trabajo diario, los cuales pueden mantenerse
refrigerados hasta por una semana. Los nuevos recipientes con discos de sensibilidad
deben colocarse a temperatura ambiente antes de abrirlos para ponerlos en uso. Los
dispensadores que contienen discos para pruebas de susceptibilidad deben almacenarse
con un desecante en el refrigerador pero debe permitirse que alcancen la temperatura
ambiente antes de ser utilizados. Se debe desechar todo disco cuya fecha de expiración,
expresamente puesta por la casa manufacturadora, esté vencida. Los discos deben
mantenerse secos hasta que se utilicen. (Bergoglio, 1993)

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 III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Materiales
MATERIALES IMAGEN

Placa Petri

Tubos de ensayo

Pipeta

Matraz

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Asa bacteriológica

Mechero

Discos de antibióticos

Ciprofloxacino (CIP)

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Tetraciclina (TE)

Gentamicina (GM)

Rifampicina (RA)

Trimetoprim (SXT)

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 3.2. Métodos
Método Imagen
Utilizar las placas con el medio de
cultivo adecuado a las necesidades
nutritivas del germen a estudiar.

Usar el medio de cultivo Müller Hinton

para aislar los organismos a estudiar.

Sembrar los microorganismos e incubar.

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Diluir el inocuo en un tubo de ensayo
para para la siembra.

Colocar el disco antibiótico rifampicina

(RA) en centro y sembrar los
microorganismo por estria haciendo una
división equitativa para cada
microorganismos.

Realizar una siembra por superficie en la

placa Petri de escherichia - coli, colocar
5 discos antibióticos en lugares distintos
de la placa.

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 IV. RESULTADOS
DISCO ANTIBIÓTICO OBSERVACIÓN

ciprofloxacino (CIP)

tetraciclina (TE)

gentamicina (GM)

rifampicina (RA)

trimetoprim (SXT)

El efecto inhibidor de los discos en el escherichia - coli se da con mayor efectividad

con la gentamicina (GM) y el tetraciclina (GM) las cuales tienen un mayor radio de
inhibición en la placa realizada por lo cual su uso como controlador del crecimiento de
la escherichia - coli se da con una mayor efectividad.

la siguiente imagen muestra los efectos de cada disco antibiótico frente al escherichia -
coli.

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En la prueba realizado con el uso del disco antibiótico rifampicina (RA) con
microorganismos en la misma placa Petri, se trabajó con escherichia - coli,
estreptococos salmonela la rifampicina afecta más a la salmonela.

La siguiente imagen muestra el efecto de antibiótico rifampicina (RA) frente a los

diferentes microorganismo.

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V. DISCUSIONES
Una de las mediciones es la sensibilidad de una cepa bacteriana, muchas
bacterias y algunos hongos desarrollan resistencia a los agentes antimicrobianos
más actuales, en la que los antivirales son menos efectivos.
Como se pudo ver en los resultados el disco más efectivo que se puede decir es
el CTX como se puede observar con más claridad la especial disminución de la
intensidad de crecimiento del microorganismo en la zona interior del halo de
inhibición del disco de CTX. debido probablemente a la aparición de mutantes
en este caso es en la siembra de estafilococos hay una gran inhibición,
resistentes de dicho microorganismo capaces de soportar en mayor medida que
el resto el efecto inhibitorio del antibiótico.
Ya que no se puede predecir la susceptibilidad de las bacterias y hongos a los
agentes antimicrobianos, es necesario estudiar con frecuencia la sensibilidad
individual de cada bacteria u hongo.
Entonces es muy necesario someter a las bacterias y hongos usar frecuentemente
los antimicrobianos como el AGAR, etc., lo cual hace que disminuya la
resistencia de los virus, bacterias y virus.

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VI. CONCLUSIONES
- Gracias a esta práctica aprendimos a realizar todo el procedimiento para
conocer la sensibilidad de un microorganismo a algún medicamento
determinado,
- Realizamos los procedimientos para encontrar la CMI y la CMB
mediante los métodos de dilución en caldo y de difusión en agar.
- También supimos que al utilizar el método de dilución en caldo
encontramos tanto la CMI y la CMB.
- Mediante la utilización de multidisco solo sabemos a qué tipo de
medicamentos es susceptible el microorganismo.

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VII. RECOMENDACIONES
- Se recomienda mantener los materiales de laboratorio limpios.
- Se recomienda cuidar los materiales de laboratorio.
- Seguir los pasos explicados en la guia adecuadamente.
- Realizar la práctica de laboratorio con mucho cuidado para obtener buenos
resultados.

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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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