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1.

Objetivos
1.1 Objetivo general
Obtener etanol a partir de melaza como materia prima mediante fermentación realizada por
la Saccharomyces cerevisiae.
1.2 Objetivo específicos
 Utilizar el método para determinación de azucares reductores totales con DNS (acido
3,5-dinitrosalicilico) y el método de conteo celular por cámara de Neubauer, como
herramientas para el seguimiento del proceso de fermentación y determinar si hay
problemas durante el proceso
2 Diagrama de flujo de proceso. Conteo con Cámara de Neubauer

La concnetracionrecomendada Si la concentracion es de menos


Preparar una disolución para la de es 10^6 celulas/ml, asi se de 250000 celulas /m, los
medición en la cámara logra un estimado correcto de resultados obtenidos son poco
celulas confiables

Si la concentracion es superiro a
Se tiñe la muestra con azul de
Usando una micropipeta, se 2,5 millones de celulas/ml, el
metilo, el cual tiñe las células
toma 10 µL de la disolución error de conteo y el esfuerzo se
muertas.
multiplicaran

Se coloca la cámara en el •Se acerca la punta de la


Se posiciona la cámara en el
microscopio y se la cubre con micropipeta, y se deposita la
microscopio. Se única con el
un cubreobjetos, dejando un muestra, asegurándose de
objetivo 4X, y se incrementa el
espacio para introducir la llenar toda la cámara y no
aumento hasta llegar a 40X
muestra derramar muestra

Calculo de número de células Se ubica el cuadrante superior


Si la célula toca el límite de
aplicando al formula de izquierdo y se procede a contar
arriba o el limite izquierdo se
#Células=células las células. Se leerá cada
cuenta, caso contrario si está
contadas/volumen. Si es división del cuadrante en zig-
tocando el límite inferior y el
necesario se hace la corrección zag empezando de la esquina
limite derecho
por disolución superior izquierda
3. Muestra de cálculos [1]:
3.1. Se usará la fórmula para diluciones:
𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 (1)
Al fijar la concentración de células a medir en la cámara de 106 células/mL, se tiene C2.
V2 será un volumen al que se aforará para obtener la concentración deseada, para este caso
se tomará igual a 10 mL.
Para el primer conteo, se tiene C1, dependiendo de cómo se haya inoculado de levadura.
3.2. Con estos datos se calcula V1, se toma este volumen del inóculo y se afora hasta V2 con
agua destilada.
3.3. También se usará la fórmula de la cámara de Neubauer, esta es:
𝑐𝑒𝑙 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 ( )=
𝑚𝐿 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐á𝑚𝑎𝑟𝑎
Como el número de células es un promedio de los 4 cuadros grandes en los que se cuentan,
y el volumen de la cámara es de 10-4 mL, entonces se tiene que:
𝑐𝑒𝑙 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 ∗ 104
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 ( )= (2)
𝑚𝐿 4
Para hallar la concentración en el inóculo, se reemplaza la concentración de la ecuación (2)
en la ecuación (1), siendo esta C2, obteniendo así que:
𝑐𝑒𝑙 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 ∗ 104 𝑉2
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑖𝑛ó𝑐𝑢𝑙𝑜 ( ) = ∗
𝑚𝐿 4 𝑉1
3.4. Con la concentración hallada, se calcula un estimado de cuanto se espera que tenga el
inóculo en la próxima medición, se toma como C1 y se repite el procedimiento desde el punto
3.1.
Bibliografía:
[1]. http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara-Neubauer.pdf

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