Veterinaria México

ISSN: 0301-5092
rmp@servidor.unam.mx
Universidad Nacional Autónoma de México
México

Macías Riveros, Dolly; Vázquez Chagoyán, Juan Carlos; Alonso Morales, Rogelio; Cajero Juárez,
Marco
Células madre y células troncoembrionarias: diferencias biológicas
Veterinaria México, vol. 38, núm. 4, octubre-diciembre, 2007, pp. 477-501
Universidad Nacional Autónoma de México
Distrito Federal, México

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=42338409

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 Artículo de revisión
Células madre y células troncoembrionarias:
Diferencias biológicas
Stem cells and embryonic stem cells:
Biological differences
Dolly Macías Riveros*+ Juan Carlos Vázquez Chagoyán* Rogelio Alonso Morales**
Marco Cajero Juárez***

Abstract
The stem cells have been classified in three types according to their natural niche of origin, aptitude and differen-
tial function: totipotential, pluripotential and multipotential; the first, called embryonic stem cells (ES) originate
from the morulae; the second, come from the inner cell mass of the blastocyst (ICM); and the third, known as
multipotent adult progenitor cells (MAPC) are found in some adult tissues. The biological difference lies in their
capabilities to produce cell lines, the totipotentials have the faculty to originate a complete organism, the pluri-
potential can generate all the cellular types and even the germinal line and the multipotentials can derivate in
specific lineages. The stem cells are able to self-renew, and originate daughter-cells compromised with certain
development routes; they are characterized for their indefinite division and are morphologically and function-
ally differentiated. When the stem cells and some progenitor types are extracted from their natural environment
and are grown in vitro, in suitable medium, can be transfected and remain in an undifferentiated state without
losing their potentiality; thus, when they are reintegrated to blastocyst receptors they are able to go on with their
development. The study and compilation of information about these biological qualities of differential function,
as well as their usefulness in homologous recombination and production of animal models that generate recom-
binant proteins, applicable for preventive-regenerating medicine and treatment of diseases, constitute the aim
of this work.

Key words: PROGENITOR CELLS, STEM CELLS, HOMOLOGOUS RECOMBINATION, GENE TARGE-
TING, RECOMBINANT PROTEINS, TRANSGENIC ANIMALS.

Resumen
Las células madre o progenitoras se han clasificado según su lecho natural de derivación, su aptitud y su función
diferencial, en tres tipos: totipotenciales, pluripotenciales y multipotenciales; las primeras, llamadas células madre
embrionarias, derivadas del cigoto en estadio de mórula; las segundas, provenientes de la masa celular interna
(MCI) del blastocisto; las terceras, denominadas células madre somáticas, se encuentran en algunos tejidos adul-
tos. La diferencia biológica radica en su capacidad para producir diversos linajes celulares; las totipotentes están
biológicamente aptas para dar origen a un organismo completo; las pluripotentes pueden generar todos los
tipos celulares, incluida la línea germinal; y las multipotentes pueden derivar en linajes específicos. Las células
troncales tienen la capacidad de autorrenovación y de originar células hijas comprometidas con determinadas
rutas del desarrollo; se caracterizan porque se dividen indefinidamente y además se diferencian de manera mor-

Recibido el 14 de agosto de 2006 y aceptado el 18 de enero de 2007.

*+Programa de Estudios de Posgrado, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México; Centro
de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Km 15.5, carretera Panamericana, tramo Toluca-Atlacomulco, San Cayetano
de Morelos, Estado de México, México, Telefax: (722) 296 5555, 296 8980, responsable de correspondencia, correo electrónico:
marmac4@uaemex.mx
*Programa de Estudios de Posgrado, Centro de Investigación y Estudios Avanzados en Salud Animal, Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Autónoma del Estado de México, Km 15.5, Carretera Panamericana, tramo Toluca-Atlacomulco, San Cayetano de
Morelos, Estado de México, México, Telefax: (722) 296 5555, 296 8980, correo electrónico: jcvc@uaemex.mx
**Laboratorio de Genética y Biología Molecular, Faculta de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autónoma de México,
04510, México, D. F, Telefax: 01 555 622 5956, correo electrónico: ralonsom@servidor.unam.mx
***Centro Multidisciplinario de Estudios en Biotecnología, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Michoacana San
Nicolás de Hidalgo, Km 9.5, carretera Morelia-Zinapécuaro, Posta Veterinaria, Morelia, Michoacán, México, Telefax: (443) 295 8029, correo
electrónico: cajeromarco@hotmail.com

Vet. Méx., 38 (4) 2007 477

 fológica y funcional. Cuando las células troncoembrionarias y algunos tipos de células progenitoras se extraen
de su entorno natural y se cultivan in vitro, en medios adecuados, pueden ser transfectadas y se mantienen
indiferenciadas, sin perder su potencial; así, al reintroducirse a blastocistos receptores continúan su desarrollo. El
estudio y la compilación de información acerca de estas cualidades biológicas de función diferencial, así como su
utilidad para aprovechar la recombinación homóloga y para producir modelos animales que generen proteínas
recombinantes, aplicables en medicina preventiva-regenerativa y tratamiento de enfermedades, constituyen el
objetivo de este trabajo.

Palabras clave: CÉLULAS PROGENITORAS, CÉLULAS TRONCALES, RECOMBINACIÓN HOMÓ-

LOGA, MUTAGÉNESIS DIRIGIDA, PROTEÍNA RECOMBINANTE, TRANSGÉNESIS ANIMAL.

Introduction Introducción

P
ara los organismos eucariontes, entre ellos los

F
or eukaryote organisms, among them mammals,
the basic structural and functional unity is the
cell, whose nucleus possesses the complete infor-
mation for each specific protein synthesis.1
Starting from only one cell, the fertilized egg must
divide and differentiate in a coordinated form, tem-
poral and spatial form, to generate nearly 240 diffe-
rent types of cells that conform the mature organism; 2
it is constituted by diploid cells (2n), called somatic,
and the ones with haploid chromosomal number (n),
denominated gamete or sexual; from there on, these
last develop new individuals, as the codified gene-
tic program by the nucleotides, which precise order
determines the genome of each species and each indi-
vidual.3
In this natural process four main factors inter-
vene: a) cellular proliferation, which increments the
cell number, but they do not differentiate; b) the
migration, that promotes pattern formations or mor-
phogenesis to establish embryonic axes; c) the spatial
organization of the cells, which induces propagation
of some and death of others; and d) the differentia-
tion, process by which new cellular types are expres-
sed.4
This biological program is executed by gene cir-
cuit regulators that “turn on and off”, controlling
the biochemical activity of the cell at molecular level,
according to its organization level and stage of deve-
lopment.5
When the embryonic genome is activated, a series
of mitotic divisions which contribute to define cellular
destiny by means of gradual liberation and restriction
of the expression potential in each lineage is initia-
ted; lastly, this leads to the formation of cellular types,
generated under the influence of the surroundings of
each cell, in embryonic changing specific niches.6
The existence of embryonic cells and somatic pro-
genitors, which lineages precede from the blastocyst
and from adult tissue, has generated a controversial
field of study, where proliferation characteristics and
derivation of these cells in the three germ layers, with
capacity to maintain their in vitro potential, migrate
mamíferos, la unidad estructural y funcional
básica es la célula, cuyo núcleo posee la infor-
mación completa para cada síntesis proteínica espe-
cífica.1
Partiendo de una sola célula, el huevo fertilizado
debe dividirse y diferenciarse de forma coordinada,
temporal y espacialmente, para generar cerca de 240
diferentes tipos de células que conforman al orga-
nismo maduro; 2 se constituye por células diploides
(2n), llamadas somáticas, y las de número cromosó-
mico haploide (n), denominadas gaméticas o sexua-
les; a partir de estas últimas se desarrollan nuevos
individuos, según el programa genético codificado
por los nucleótidos, cuyo orden preciso determina el
genoma de cada especie.3
En este proceso natural intervienen cuatro fac-
tores fundamentales: a) la proliferación celular, que
incrementa el número de células, pero no las diferen-
cia; b) la migración, que promueve la formación de
patrones o de morfogénesis para establecer los ejes
embrionarios; c) la organización espacial de las célu-
las, que induce la propagación de unas y la muerte
celular de otras; y d) la diferenciación, proceso por el
cual se expresan nuevos tipos celulares.4
Este programa biológico es ejecutado por circuitos
reguladores de genes que se “prenden y apagan”, con-
trolando la actividad bioquímica de la célula a nivel
molecular, según su grado de organización y estado
de desarrollo.5
Cuando el genoma embrionario se activa, se inicia
una serie de divisiones mitóticas que contribuyen a
definir el destino celular mediante la liberación y res-
tricción paulatina del potencial de expresión en cada
linaje, esto último lleva a la formación de tipos celu-
lares, generados bajo la influencia del entorno que
rodea a cada célula, en nichos específicos cambiantes
del embrión.6
La existencia de células embrionarias y progenito-
ras somáticas, cuyos linajes provienen del blastocisto
y de los tejidos adultos, ha generado un controvertido
campo de estudio, donde se aprovechan las caracterís-

478
and integrate, originating the possibility to produce
and recuperate tissue.7
Other cells that have the capacity to generate
different lineages originate from embryonic terato-
carcinoma (ECC, embryonic carcinoma cells). 8 Tera-
tocarcinomas are gonad tumors that contain tissue
from the three embryonic germ layers,9 useful as
cellular models for research, 8,9 but with the disadvan-
tage of being aneuploid cells; besides, the results that
in vitro seem convincing might not have the same in
vivo response, due to redundancy and cellular interac-
tion that are not reproduced in the culture dish.10
While the potentiality and stable karyotype of
embryonic and adult stem cells constitute a powerful
instrument, that added to gene targeting technique
allows to venture in developmental biology from ano-
ther perspective, in animal production, preventive
and regenerative medicine, as well as diagnose and
treatment of diseases,11 consolidating a research area
that is rapidly evolving, and produces continuous
information in regard to new applications, properties,
protocols and results in cellular field.
Stem or progenitor cells
According to its differentiating function, stem cells
are classified in embryonic and somatic or adults,12
although they have received other denominations, so
that in pioneer articles the “stem cells” term is found;
now, depending on the geographical region were they
are being researched and the respective translation,
they are called stem, progenitors, “istaminales”, pre-
cursors or primitive cells.
These two recognized lineages of progenitor cells:
a) the pluripotent cells, blastocyst-derived, also called
embryonic stem cells (ESC) with capacity to migrate
towards the germ line,13 and b) multipotent cells, ori-
ginated from fetal or adult tissues, that have reached
a partial differentiation with restricted potentiality,
which depends on its evolutional progress; 14 that is,
they can in vivo renew and divide to originate more
stem cells, or differentiate into defined, specialized
and specific lineages.7,15
It is worth mentioning that it is not easy to obtain
a significant number of multipotent adult progeni-
tor cells, as consequence of the minimal quantity
that can be isolated from tissues, as well as their slow
ability to multiply in cultures; 16 they are difficult to
grow in laboratory and their proliferation possibility
decreases with age,14,17 in contrast to embryonic stem
cells, that have in vitro indefinite reproductive capa-
city.11 Nevertheless, these multipotent cells present
other important functional properties, like persis-
tent implantation in healthy and sick tissues14 and the
capacity of some of them to derive in cells originated
ticas de proliferación y derivación de estas células en
las tres capas germinales, con capacidad de mantener
su potencial in vitro, migrar e integrarse, originando
la posibilidad de producir y recuperar tejidos.7
Otras células que tienen la capacidad de generar
diferentes linajes son las procedentes de teratocar-
cinoma embrionario (ECC, por sus siglas en inglés,
embryonic carcinoma cells).8 Los teratocarcinomas son
tumores gonadales que contienen tejido de las tres
capas germinales embrionarias,9 útiles como modelos
celulares para investigación, 8,9 pero con desventajas
por ser células que presentan aneuploidias; además,
los resultados que parecen contundentes in vitro
pueden no tener la misma respuesta in vivo, debido a
la redundancia y a las interacciones celulares que no
se producen en la caja de cultivo.10
Mientras la potencialidad y el cariotipo estable de
las células madre embrionarias y adultas constituyen
un poderoso instrumento, que sumado a la técnica de
mutagénesis dirigida permite incursionar desde otra
perspectiva en la biología del desarrollo, en la produc-
ción animal, en la medicina preventiva y regenerativa,
así como en el diagnóstico y tratamiento de enferme-
dades,11 consolidando un área de investigación que
evoluciona rápidamente, y genera continua informa-
ción en cuanto a las nuevas aplicaciones, propiedades,
protocolos y resultados en el ámbito celular.
Células madre o progenitoras
De acuerdo con su función diferencial, las células
madre se clasifican en embrionarias y somáticas o
adultas,12 aunque han recibido otras denominaciones,
de tal forma que en los artículos pioneros se encuentra
el término stem cells; ahora, dependiendo de la región
geográfica donde se les investiga y de la respectiva
traducción, se les llama células madre, progenitoras,
istaminales, precursoras, primitivas o troncales.
Estos dos linajes reconocidos de células proge-
nitoras: a) las células pluripotentes, derivadas del
blastocisto, denominadas también células troncoem-
brionarias (CTE), con capacidad para migrar hacia la
línea germinal,13 y b) las células multipotentes, prove-
nientes de tejidos adultos o fetales, que han alcan-
zado una diferenciación parcial con potencialidad
restringida, que depende de su progresión evolutiva; 14
es decir, in vivo pueden renovarse y dividirse para ori-
ginar más células troncales, o diferenciarse hacia lina-
jes definidos, especializados y específicos.7,15
Cabe mencionar que obtener un número signifi-
cativo de células troncales adultas multipotentes no
es fácil, como consecuencia de la exigua cantidad
que puede aislarse de los tejidos, así como de su lenta
habilidad para multiplicarse en cultivo; 16 son difíciles
de crecer en el laboratorio y su posibilidad de prolife-
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 Cuadro 1
PRINCIPALES TIPOS DE CÉLULAS PROGENITORAS QUE SE HAN AISLADO,
TEJIDOS DE DONDE SE OBTUVIERON Y REFERENCIA
MAIN TYPES OF PROGENITOR CELLS THAT HAVE BEEN ISOLATED,
TISSUES WHERE THEY WERE OBTAINED AND REFERENCE
Tissue Type of stem cell Reference

Cardiac Myocardiocytes Orlic et al., 2001 (19)

Brain Glials Jiang et al., 2003 (20)

Blood Hematopoietics Passegue et al., 2002 (21)

Nervous Glials Keene et al., 2000 (22)

Hepatic Hepatocytes Korbling et al., 2002 (23)

Vascular tissue Endothelium Jackson et al., 1999 (24)

Epithelial Chondrogenics Kramer et al., 2000 (25)

Thymus Epithelials Gill et al., 2002 (26)

Bone marrow Mesenchymals Koc et al., 2001 (27)

Pancreas Langerhans’ islets Choi et al., 2004 (28)

Embryo Embryonic stems Evans et al.,1981 (10)

from any of the embryonic, mesoderm, ectoderm or
endoderm layers.16,18
These qualities have favored research on proge-
nitor cells from epithelial, bone, blood and nervous
system, among others, as shown in Table 1.
Embryonic cells
At the moment that the spermatozoon fertilizes the
ovum, both pronuclei (one maternal and other pater-
nal) contribute with their genetic information, 5 they
unite to constitute the embryonic genome and syn-
gamy or true fertilization is produced; 4 immediately
mitotic division starts which gives origin to totipoten-
tial embryonic stem cells, 29 these are blastomeres, that
is, in a normal development process, each one divides
several times without differentiating, until the morula
consolidates, before blastocyst stage.1
As the cells reproduce and migrate from their ori-
ginal place, they lose totipotent capacity to generate
a complete individual28 and turn pluripotent; with an
aptitude to produce all types of cells from the orga-
nism, they set to form an embryoblast, 30 but these
stages of in vivo potentiality are ephemeral because
they rapidly disappear with the growth of the zygotes
(Figure 1); gastrula 32 process continues and initiates
differentiation in the three embryonic germ layers in
ración disminuye con la edad,14,17 a diferencia de las
células troncoembrionarias, que tienen capacidad de
reproducirse indefinidamente in vitro.11 Sin embargo,
estas células presentan otras importantes propiedades
funcionales, como la implantación persistente tanto
en tejidos sanos como enfermos14 y la capacidad de
algunas de ellas de derivar a células provenientes de
cualquiera de las capas embrionarias, mesodermo,
ectodermo o endodermo.16,18
Estas cualidades han favorecido la investigación
en las células progenitoras del sistema epitelial, óseo,
sanguíneo y nervioso, entre otros, como se muestra en
el Cuadro 1.
Células embrionarias
En el momento en que el espermatozoide fertiliza al
óvulo, los dos pronúcleos (uno materno y otro paterno)
aportan la información de sus genes, 5 se unen para
constituir el genoma embrionario y se produce la sin-
gamia o fertilización verdadera; 4 de inmediato inicia
la división mitótica que da origen a las células madre
embrionarias totipotentes, 29 éstas son blastómeras, o
sea que, en un proceso de desarrollo normal, cada una
se divide varias veces sin diferenciarse, hasta que se
consolida la mórula, antes del estadio de blastocisto.1
Conforme las células se reproducen y migran de su

480
a coordinated way, although asymmetric in magnitude
and sense, and asynchronous because each phase,
depending on the animal species, varies in time inter-
val; 2,4 those factors are important for explantation,
migration and cell culture.
Based on the aforementioned, embryonic stem
cells, from their ontogenic development, initiate an
organization pattern of increasing complexity,16 that
by means of the expression of inductor groups leads
the undifferentiated original cell, to specialize either
in hepatic, neural, epithelial, hematic, etcetera, by the
activation of regulatory regions that suggest the exis-
tence of “master genes”.2,16,33,34
The embryonic stem cell term was introduced in
1981 by Evans and Kauffman10 with the purpose to
ubicación original, pierden la capacidad totipotencial
de generar un individuo completo29 y se tornan plu-
ripotentes; con aptitud para producir todos los tipos
celulares del organismo se abocan a la formación del
embrioblasto, 30 pero estos estadios de potencialidad
in vivo son efímeros porque desaparecen rápida-
mente con el desarrollo del cigoto (Figura 1); conti-
núa el proceso de gástrula 32 e inicia la diferenciación
en las tres capas germinales embrionarias de manera
coordinada, aunque asimétrica en magnitud y sen-
tido, y asincrónica porque cada fase, según la especie
animal, varía en intervalo de tiempo; 2,4 esos factores
son importantes para la explantación, migración y el
cultivo celular.
Con base en lo anterior, las células madre embrio-

1 2 3

4 5 6

7 8 9

10 11 12

Stage Number* Description* Post-estrus days, aprox.*

1* 1 Cell 0-2

2* 2 Cells 1-3

3* 4 Cells 2-3

4* 8 Cells 3-5

5* 16 Cells 4-5 Figura 1: Representación esque-

mática de embriones de mamífero
6*-7* Early and compact process 5-7 (búfalo de agua, Bubalus bubalis)
primeros estadios de desarrollo
8*, 9*, 10*, 11* Blastocyst stages 8-11 celular.31

12* Beginning of gastrulation process: Figure 1: Schematic representa-

tion of mammal embryos (water
mesoderm differentiation,
buffalo, Bubalus bubalis) first cellu-
ectoderm and endoderm lar development stages.31

Vet. Méx., 38 (4) 2007 481

distinguish cells originated from healthy zygotes,
from those obtained from embryonic carcinomas
that already had different cell stratum,9 since there
are three types of embryonic tissues from where it
has been possible to isolate pluripotent cell lines: a)
embryonic stem cells from embryonic benignant tera-
tocarcinomas (ECC); 8 b) healthy embryonic stem cells
from blastocysts inner cell mass (ESC); 10 c) primordial
germ cells from embryonic germ crests (PGC) 33,34
(Figure 2).
Non progenitor pluripotent embryonic cells
(ECC)
The ECC that propitiated in vitro cellular potentia-
lity studies35 are not considered as progenitor cells
because they have undergone epigenetic changes that
reduce cell response to differentiation and prolifera-
tion signals.8,35 Nevertheless, these epigenetic changes
are stable but reversible and, for that reason, the ECC
share morphological, biochemical and immunolo-
gical properties with the (ES cells), although all the
cellular lines derived from teratocarcinomas are cha-
racterized for presenting XX karyotype.10
The embryonic bodies from which ECC are obtai-
ned from cell cultures of mouse 129 SvE strains, that
have also given origin to normal lines of ESC.8
Another way to establish ECC lines consists of
the subcutaneous extrauterine injection of ES cells,
then surgical recovery of the teratocarcinoma and
either cell culturing and in vitro differentiation or cell
microinyection into blastocysts.8,35
Embryonic stem cells (ES cells)
These cells are derived from the inner cell mass
(ICM) of blastocysts or early blastula, during an early
Cutaneous
teratocarcinoma Blastocyst
ECC obtained from ESC obtained from
cutaneous tissue where expanded blastocysts
ESC were injected
482
narias, desde su desarrollo ontogénico, inician un
patrón de organización de complejidad creciente,16
que mediante la expresión de un conjunto de induc-
tores lleva a la célula originalmente indiferenciada, a
especializarse en hepática, neural, epitelial, etcétera,
mediante la activación de regiones regulatorias que
sugieren la existencia de “genes maestros”.2,16,33,34
El término de célula madre embrionaria fue intro-
ducido en 1981 por Evans y Kauffman10 con el pro-
pósito de distinguir las células procedentes de cigotos
sanos, de las obtenidas de carcinomas embrionarios
con diferentes estratos celulares,9 puesto que hay
tres tipos de tejidos embrionarios de donde se han
podido aislar líneas pluripotentes: a) Teratocarcino-
mas benignos embrionarios, células troncoembriona-
rias (ECC); 8 b) masa celular interna del blastocisto,
células troncoembrionarias sanas (CTE); 10 c) crestas
germinales embrionarias, células germinales primor-
diales (CGP) 33,34 (Figura 2).
Células embrionarias pluripotenciales
no progenitoras (ECC)
Las ECC que propiciaron los estudios de potenciali-
dad celular in vitro 35 no son consideradas como células
progenitoras porque han tenido cambios epigenéticos
que reducen la eficiencia de respuesta a las señales de
diferenciación y proliferación.8,35 Sin embargo, estos
cambios epigenéticos son estables pero reversibles, y
por ello las ECC comparten propiedades morfológi-
cas, bioquímicas e inmunológicas con las CTE, aunque
todas las líneas celulares provenientes de teratocarci-
noma se caracterizan por tener cariotipo XX.10
Los cuerpos embrioides de los que se obtienen las
ECC provienen de cultivos celulares de las cepas de
ratón 129 SvE, que también han dado origen a líneas
normales de CTE.8
Embryonic
epiblast
Figura 2: Esquema representativo
de la procedencia de los tres tipos
de líneas embrionarias de células
pluripotentes de ratón.
ESC obtained from Figure 2: Representative sketch
embryonic genital crest of the origin of the three types of
embryonic lines of mouse pluripo-
tent cells.
embryonic stage of differentiation.. The blastocyst
forms under the action of the Oct4 gene and through
a mechanism of cell cavitation,12,30 forming a sphere
with trophoblast cells on the periphery, which give
origin to embryonic attachments to the allantoid and
the placenta; a central cavity known as blasctocele;
and in a pole of the sphere, the inner cell mass (ICM)
or embryoblast formed by pluripotential cells, that
have the capacity to give origin to tissues from either
of the three embryonic layers, and that is why they
were named embryonic stem cells.32,36
Characteristics
Several authors reported that the ES cells are charac-
terized for: a) cells that are derived from multicellular
organisms having the natural capacity of diversifica-
tion in all the cell tissues; 2 b) they are undifferentiated
or not yet specialized; 10 c) all ES cell lines have com-
parable potentiality; 29 d) they are capable of prolife-
ration and self-renewing in in vitro culture for a long
time without differentiation; 6 e) they conserve a stable
karyotype with no chromosomal aberrations; 10,29 f ) ES
cells lines have normal XX or XY karyotype; 10 g) they
include two outstanding properties: pluripotentiality
and capability to contribute to the germ line chime-
ras; 10,29,30 h) they form colonies with a typical ES-cell-
like morphology in in vitro; 10,11 i) they have molecular
markers as the alkaline phosphatase isoenzyme, a
dominium of the Oct4 transcription factor, high
telomerase activity, and several membrane markers,
as CD34+, that can be marked by monoclonal anti-
bodies; 13,34 j) they are a valuable instrument for the
study and development of new therapeutic methods,
since they can be transfected to introduce or interrupt
genes taking advantage of the homologous recombi-
nation.10,11,29,30
Obtention
Im recent protocols, to obtain lines of ES cells empha-
mediums size in the quality of the culture mediums
and meticulous work on embryos in blastocyst stage,11
which, removed from uterine horns of pregnant mice
(3.5 days post coitus), 29 they are extracted and placed
on culture dish with modified Ringer-Krebs solution
medium or M2 medium,* which contains NaCl, KCl,
CaCl2, KH2PO4 , MgSO4 , NaHCO3, sodium lactate,
sodium piruvate, glucose, bovine serum albumin,
penicillin-streptomycin and bi distillated water, plus
HEPES buffer.29,30
By the second day of culture in vitro, the cells of the
internal cellular mass emerge on the plate surface,
as consequence of the trophoblast cells migration; 10
nevertheless, the variation among blastocysts is wide
Otra manera de establecer líneas de ECC consiste
en la inyección extrauterina subcutánea de CTE, pos-
terior cultivo y diferenciación in vitro o introducción
en blastocistos.8,35
Células troncoembrionarias (CTE)
Estas células, que también se conocen como célu-
las madre troncoembrionarias (ES, por sus siglas
en inglés, embryonic stem) surgen de la masa celular
interna (MCI) del blastocisto o blástula temprana,
primero y único evento de diferenciación del cigoto
en este estadio embrionario que prosigue a la mórula.
El blastocisto se genera bajo la acción del gen Oct4 y
del mecanismo de cavitación celular,12,30 formándose
una esfera que contiene en la periferia las células del
trofoblasto, que originan los anexos embrionarios
alantoides y placenta; un espacio central denominado
blastocele; y un polo de la esfera, embrioblasto o MCI
formado por células, que tienen la pluripotencialidad
de propiciar tejidos de cualquiera de las tres capas
embrionarias, por esto se denominan células tronco-
embrionarias.32,36
Características
Diversos autores notifican que las CTE se caracteri-
zan porque: a) las células que provienen de los orga-
nismos multicelulares tienen la capacidad natural de
diversificación en todos los linajes celulares; 2 b) son
indiferenciadas o aún no especializadas; 10 c) todas
las líneas de CTE tienen potencialidad compara-
ble; 29 d) in vitro son capaces de dividirse y renovarse,
manteniéndose en cultivo durante largo tiempo sin
diferenciación; 6 e) conservan un cariotipo estable y
no presentan aberraciones cromosómicas; 10,29 f ) las
líneas de CTE tienen cariotipo normal XX o XY,10 g)
incluyen dos notables propiedades: pluripotenciali-
dad y capacidad de contribuir a la línea germinal,
cuando se cultivan; 10,29,30 h) forman colonias que las
tipifican morfológicamente en el plato de cultivo; 10,11
i) tienen marcadores moleculares como la isoenzima
de la fosfatasa alcalina, un dominio del factor de trans-
cripción Oct4, alta actividad de la telomerasa, y varios
marcadores de membrana, como CD34+, reconocidos
por anticuerpos monoclonales; 13,34 j) son un valioso
instrumento para el estudio de nuevas formas de tera-
pia, ya que se pueden transfectar para introducir o
interrumpir genes aprovechando la recombinación
homóloga.10,11,29,30
Obtención
En los protocolos actuales, para obtener líneas de
CTE se enfatiza la calidad de los medios de cultivo
Vet. Méx., 38 (4) 2007 483
and it is necessary to constantly observe them disperse
over NSTO fibroblast monolayers in culture dish.29
They are cultivated during three days post-explan-
tation,11,29 in DMEM medium (Dulbecco´s modified
eagle´s medium) or in Whitten´s medium**29 with LIF
(leukemia inhibitory factor) 37 and over feeder cells
to which ES cells adhere; if there is proliferation and
colonies are formed carrying out several cellular divi-
sions without differentiation, then a stable immortal
cellular line can be obtained.29 Figure 3 illustrates the
process of ES cells obtainment.
Although embryonic stem cells present morpholo-
gic, biochemical and immunologic characteristics, its
functionality as pluripotent cells typifies them.30
Isolation
The first studies on isolation, production and mana-
gement of ES cells were done in mice; 10 since then,
many attempts to try to obtain ES cells from several
mammals have been made with little success,11 and
only human and mouse ES cells have been successfu-
lly maintained in culture, in an undifferentiated con-
dition after several passes and after the freezing and
thawing process.38,39,11 This success could be attribu-
ted to the rapid proliferation of ICM in these two spe-
cies, in contrast with other species whose ICMs forms
a mitotic disc; 32 and to the short lapse in number of
(few hours) occurring between blastocyst stage and
the beginning of the delamination of the primary
endoderm.30,32,40
The pluripotent cell lines with normal karyotype
can reproduce in vitro, without differentiation during
culture, in presence of LIF37 and one layer of fibro-
blasts as feeder cells, where they grow rapidly, 29 and
are able to accept exogenous genetic material by trans-
fection and can later be induce to differentiation, if
Blastocyst
Trophoblast
Internal cellular
mass ICM
Blastocyst, stage of
cellular division of
zygote
ES cell* culture to
obtain cellular lines
*Embryonic stem cells
484
y la minuciosidad para trabajar los embriones en
estado de blastocisto,11 que, removidos de los cuernos
uterinos de ratonas gestantes (3.5 días poscoito), 29 se
extraen y se colocan en caja de cultivo con medio
modificado de solución Ringer-Krebs,* compuesto
por NaCl, KCl, CaCl2, KH2PO4 , MgSO4 , NaHCO3, lac-
tato de sodio, piruvato de sodio, glucosa, albúmina de
suero bovino, penicilina-estreptomicina y agua bides-
tilada, más HEPES tampón.29,30
Al segundo día in vitro, las células de la masa celular
interna emergen a la superficie del plato, por migra-
ción del trofoblasto; 10 sin embargo, la variación entre
blastocistos es amplia y es necesario vigilarlos constan-
temente para hacer la disgregación sobre monocapa
de fibroblastos NSTO en la caja de cultivo.29
Se siembran en placa durante tres días posexplan-
tación,11,29 en medio DMEM (Dulbecco´s modified eagle´s
medium) o en medio Whitten´s**29 con LIF (leukemia
inhibitory factor) 37 y sobre células nodrizas a las cuales
se adhieren las CTE; si hay proliferación y se forman
colonias que llevan a cabo varios ciclos de división
celular sin diferenciarse, entonces se puede obtener
una línea celular inmortal estable.29 La Figura 3 recrea
el procedimiento de obtención de CTE.
Estas líneas han recibido diferentes denomina-
ciones: células madre embrionarias pluripotenciales,
del tallo embriónico o células troncoembrionarias, y
aunque presentan características morfológicas, bio-
químicas e inmunológicas, su funcionalidad como
células pluripotentes las tipifica.30
Aislamiento
Los primeros estudios sobre aislamiento, producción
y manejo de CTE se realizaron en ratones,10 desde
* M2, Sigma 5910, Estados Unidos de América.
**Sigma M1285, Estados Unidos de América.
ES cell colonies*
Figura 3: Esquema de la extrac-
ción y cultivo de células tronco-
embrionarias obtenidas de la masa
30
celular interna del blastocisto.
Figure 3: Sketch of the extraction
and culture of embryonic stem
cells obtained from internal cellu-
lar mass of the blastocyst.30
culture in absence of feeders, allowing the aggregate
formation6,29,34 (Figure 4).
Research has proven that if these aggregates adhere
to the dish surface, cells will proliferate and grow out
of the aggregates, potentiating spontaneous differen-
tiation into muscular, neural, glandular epithelial and
other cell lineages; 39,41 and if the aggregates are kept
in suspension, they form embryonic bodies equivalent
to the visceral vitelline sack, or form mesoderm deri-
vatives as cardiac muscle.32,34,40
Use
The ES cells are an invaluable biological tool that
allows to perform in vitro and in situ studies, and at
the same time, observe and analyze in vivo and in vitro
results, 29,30 this way, a new paradigm has been gene-
rated in applied and basic research,11,30,39 in which
the interdisciplinary relation –biochemistry, mole-
cular and cellular biology, genetics, bio- informatics
and the new bio-engineering–,6,21 offers a significant
contribution to the understanding of regulation of
the cell cycle, as well as the study of ligand-receptors,
development processes and bio-technology research,
modification of animal genome, whether in the pro-
tein expression pattern, over-expression and loss or
gain of function.11,14
entonces se han tratado de aislar CTE de muchas
especies de mamíferos con poco éxito,11 sólo se han
logrado mantener en cultivo, indiferenciadas por
varios pasajes y en congelación, CTE humanas y de
ratón, 38,39,11 esto último se atribuye a la rápida proli-
feración de la MCI en estas dos especies, a diferencia
de otras en las cuales la MCI forma un disco mitótico
aquiescente; 32 además del tiempo −en número de
horas−, que hay entre la fase de blastocisto y el inicio
de la delaminación del endodermo primario.30,32,40
Las líneas celulares pluripotentes con cariotipo
normal se pueden multiplicar in vitro, sin diferen-
ciación durante el cultivo, en presencia de LIF37 y de
una monocapa de fibroblastos como células alimen-
tadoras, donde crecen rápidamente, 29 aceptan mate-
rial genético exógeno por transfección y luego se
induce su diferenciación, si se cultivan en ausencia
de la monocapa, permitiendo la formación de agrega-
dos 6,29,34 (Figura 4).
Continuas investigaciones han probado que si los
agregados se adhieren al plato, las células proliferan
y salen de los agregados, potenciando su diferencia-
ción espontánea a linaje muscular, neural, glandular,
epitelial u otros; 39,41 y si los agregados se mantienen
en suspensión, forman cuerpos embrioides equiva-
lentes al saco vitelino visceral, o forman derivados del
mesodermo como músculo cardiaco.32,34,40

Use of ES cells for gene targeting Usos

Gene targeting is a technique that allows the introduc- Las CTE son una invaluable herramienta biológica

A) Colony of embrionic stem cells

E14TG2a of mouse, four days in
culture, 40X objective, inverted
microscope Leica trademark.
Arrow shows colony without stain.

Figura 4: Fotografías en microscopio invertido

B) Colonies of embrionic stem cells
E14G2a of mouse, seven days in
culture, 40X objective, inverted
microscope Leica trademark.
Arrows indicate colonies without stain.
(40X) del cultivo de células tronco-embrionarias
de ratón cepa E14, pasaje 12 (Fotografías tomadas
en el Laboratorio de Cultivo Celular del CIESA de
la FMVZ de la UAEM).
Figure 4: Photographs in inverted microscope
(40X) of embryonic stem cells of mouse E14
strain’s culture, pass 12. (Photographs taken at
the Cellular Culture Laboratory of the Center of
Research and Advanced Studies in Animal Health
[CIESA] of the Faculty of Veterinary Medicine and
Animal Husbandry [FMVZ] of the Autonomous
University of the State of Mexico [UAEM]).

Vet. Méx., 38 (4) 2007 485

tion of specific genetic modifications in the genome
of an organism, by means of a mechanism for DNA
repair called homologous recombination; 11 it starts
with the construction of a transgene that carries a
fragment of DNA with the sequence of the gene of
interest, isolated from an organism or designed in the
laboratory , with the specific purpose of making chan-
ges in a predetermined place of a chromosome.42
Introducing by transfection this transgene in the
embryonic stem cell’s genome together with homology
sequence of the endogenous DNA of one specific gene
and markers of selection, the possibility of recombi-
nation and detecting a transgene is increased.42,43 If
gene targeting is achieved, embryonic stem cells can
then be incorporated in recipient blastocyst by aggre-
gation or microinjection, 29 which can be transfer to
pseudo -pregnant females.11,29 It is necessary that the
construction has been permanently integrated and
that the ES cells go to germ line; that is, that the trans-
gene is also found in germ cells in the gonads of the
chimeric animal so that the transgene is inherited.42
This methodology is used to produce animal
models that have helped to study metabolic routes
(for example, dopaminergics signalization via) 66 for
the production of ecombinant proteins (insulin, lac-
toferrin, alpha-anti-trypsine)11 to study the precise site
or way an enzymatic group acts (TGFß),64 or the site
and pathogenesis of a disease (Parkinson, Alzheimer,
diabetes, among others).11,43
ES cells for transgenic animal production
A transgenic organism is one who carries exogenous
DNA fragments in its genome and transmits these
modifications to their descendants through their
gamets.44 There are different systems to generate
gene targeted transgenic animals. With the use of the
ES cells technique transfected with exogenous DNA,
reintroduced to receptor blastocysts, it will be mana-
ged that they incorporate to the ICM of the receptor
and continue their development. In this context, those
in vivo will maintain their capacity to generate diffe-
rent cellular types of the organism, for they progres-
sively differentiate during the organism intrauterine
phase.42
It is important to highlight that no embryonic
stem cell lines of domestic animals have been produ-
ced yet from domestic animals,45 since the ICM cells
obtained from these species do not remain undiffe-
rentiated when they are reproduced in vitro,45 for this
reason, gene targeted transgenic farm animals that
actually produce recombinant proteins in milk, have
been obtained, but by means of gene targeting in mul-
tipotent adult progenitor cells, technique that takes
advantage of the natural phenomenon of homologous
486
que permite realizar estudios in vitro e in situ, y, a su
vez, observar y analizar resultados in vitro e in vivo; 29,30
de esa manera, se genera un nuevo paradigma en
investigación básica y aplicada,11,30,39 en el que la rela-
ción interdisciplinaria –bioquímica, biología mole-
cular y celular, genética, bioinformática y las nuevas
bioingenierías–,6,21 permite un significativo aporte
a la regulación del ciclo celular, así como el estudio
de receptores-ligandos, procesos del desarrollo, y
en investigación biotecnológica, modificación del
genoma animal, ya sea en el patrón de expresión de
proteínas, la sobreexpresión y la pérdida o ganancia
de función.11,14
Uso de las CTE para mutagénesis dirigida
La mutagénesis dirigida constituye un procedimiento
que permite introducir modificaciones genéticas
específicas en el genoma de un organismo, mediante
el mecanismo de recombinación homóloga para repa-
ración del ADN; 11 se inicia con la construcción de un
vector transgénico que porta un fragmento de ADN
del gen que interesa estudiar, aislado de un organismo
o diseñado en el laboratorio, con el propósito especí-
fico de efectuar cambios en un sitio determinado de
un cromosoma.42
Al introducir este transgene en el genoma de la
célula troncoembrionaria junto con una secuencia
de homología del ADN endógeno y de marcadores
de selección, se incrementa la posibilidad de recom-
binación y de detectar al transgene.42,43 Si se consi-
gue que mediante mutagénesis dirigida este último
se incorpore espacial y temporalmente en las células
troncoembrionarias por agregación o por microin-
yección, éstas se introducirán en blastocistos recep-
tores29 y se transferirán a hembras seudopreñadas.11,29
Es necesario que la construcción se haya integrado
permanentemente; es decir, que el transgene también
se encuentre en las células gonadales del animal que
se ha producido y que sea heredable.42
Esta metodología se utiliza para la generación
de modelos animales que permiten conocer las vías
metabólicas (por ejemplo, vía de señalización de
dopaminérgicos) 66 para la producción de proteínas
recombinantes (insulina, lactoferrina, alfa-antitrip-
sina),11 de manera que se conozca el sitio preciso o la
forma en que actúa un grupo enzimático (expresión
de TGFß),64 o el sitio y mecanismo de ataque de una
enfermedad (Parkinson, Alzheimer, diabetes, entre
otras).11,43
Usos de las CTE para la producción
de transgénicos
Un organismo transgénico es el que lleva en su
recombination to the endogenous gene, functional
part of the exogenous gene in question, all this is limi-
ted by the restriction sites that allow alignment with
the specific endogenous gene fragment (that produce
a “specific-tissue” protein, for instance lactoalbu-
min). The nuclei of the genetically modified cells are
microinjected to enucleated ovocytes46 that are trans-
planted into recipient females; when these offspring
come to an adult stage they express in vivo the aggre-
gated characteristics.
In this manner, using “tissue-specific” gene promo-
ters and the enzymatic machinery of tissues (udder,
blood vessels, kidney, sweat glands, lachrymal glands)
of the animals, the interference of the transgene is
avoided with the female or male metabolism that pre-
sented a change in its genic sequence, whether it be
the introduction or suppression of the gene; the inac-
tivity or function change; the production of a fusion
protein or a drug, with genome modification.11,44
Primordial germ cells
The primordial germ cells (PGC) represent the proge-
nitor cells of gametes from animals; depending on the
species, derive from the wall of the endoderm of the
vitelline sack, near the allantoid, 32,36 or a small cellu-
lar population of the embryonic epiblast in the mice
cse; 33,47 they stay there until they receive the migration
signal to the gonadal crests.48
The PGC gonadal precursors have been isolated
from the germ crest of mouse fetuses, 33 towards half
of the gastrula stage in the pre-implantation phase,
where they are still pluripotent and, maintain their
differentiation capacity to all cell lines.48 They behave
as ES cells lines and posses great capacity of in vitro
proliferation.33,34
In culture conditions, the PGC are only viable 30 to
40 passes, but they have the advantage of not forming
teratomas when they are injected in mice; therefore,
they can represent a safe source of cells for transfec-
tion and transplantation results.29,33
Another important factor in the PGC constitutes
the potential that represents the presence of homeo-
box (conserved sequences of 180 base pairs, present
in the genes involved in the development of a wide
range of organisms) and of transcription factors as
Oct4, also present in ES cells, but not in other type of
developing fetal cells.15,34,48
Although research of cellular lineages obtained
from PGC of domestic animals continue, it has not
been proven that these contribute in the successive
germ line of species other than mouse.42,44
genoma fragmentos de ADN exógeno y que trans-
mite esas modificaciones a sus descendientes por vía
germinal.44 Existen diferentes sistemas para generar
animales transgénicos. Con el uso de la técnica de
CTE transfectadas con ADN exógeno, reintroducidas
a blastocistos receptores, se logrará que se incorporen
a la MCI del receptor y continúen su desarrollo. En
este contexto, aquéllas mantendrán in vivo su capa-
cidad para generar los distintos tipos celulares del
organismo, pues se diferenciarán progresivamente
durante la fase intrauterina del organismo.42
Es importante destacar que aún no se han produ-
cido líneas celulares troncoembrionarias de animales
domésticos,45 ya que los aislamientos de MCI que se
han logrado de estas especies no mantienen sus carac-
terísticas cuando se multiplican in vitro,45 por esta
razón los animales transgénicos de granja que actual-
mente producen proteínas recombinantes en la leche,
se han logrado, pero mediante mutagénesis dirigida
en células somáticas, técnica que aprovecha el fenó-
meno natural de la recombinación homóloga al gen
endógeno, la parte funcional del gen exógeno de inte-
rés, todo esto flanqueado por los sitios de restricción
que permiten la alineación con el fragmento del gen
endógeno específico (que producen una proteína
“tejido-específica”, por ejemplo, lactoalbúmina). Pos-
teriormente, los núcleos que han adquirido el trans-
gene son microinyectados a ovocitos enucleados46 que
se implantan en hembras nodrizas; cuando estas crías
llegan a su etapa adulta, son inducidas para expresar
in vivo las características agregadas.
De esta manera, utilizando los promotores de genes
“tejido-específico” y la maquinaria enzimática de los
tejidos y secreciones (ubre, vasos sanguíneos, riñón,
glándulas sudoríparas, glándulas lagrimales, leche)
de los animales, se evita la interferencia del transgen
con el metabolismo de la hembra o macho que tuvo
un cambio en su secuencia génica, ya sea la introduc-
ción o supresión del gen; la inactividad o cambio de
función, la producción de una proteína de fusión o un
fármaco, con modificación del genoma.11,44
Células madre germinales primordiales
Las células madre germinales primordiales (CGP)
representan las células progenitoras de los gametos de
los animales en desarrollo; según la especie, derivan
del endodermo de la pared del saco vitelino, cerca de
la alantoides, 32,36 o de una pequeña población celular
del epiblasto embrionario para el caso de los rato-
nes; 33,47 permanecen ahí hasta que reciben la señal de
migrar a las crestas gonadales.48
Las CGP precursoras de las gónadas se han aislado
a partir de la cresta germinal de fetos de ratón, 33 hacia
la mitad del estadio de gástrula en la fase de preim-
Vet. Méx., 38 (4) 2007 487
Multipotent adult progenitor cells
In mammals, after birth and until maturity, the orga-
nism keeps a small cell reserve in some organs and
tissues, capable of renewing or repairing them; these
are differentiated quiescence cells,7 immature, non
primitive and, once derived from the early embryo,
they become specialized through the individual’s life,
in supplying maintenance cells for the organism; they
are called multipotent adult progenitor cells.14
According to the aforementioned, for a cell popu-
lation to be considered stem or progenitor it must have
the following characteristics: a) give rise to several
cellular types, without losing its generic state of poten-
tiality; b) must divide and originate more progenitor
cells or differentiate into determined cell lineages; c)
they must have auto- renewing capacity; d) adhesion
and migration capacity; e) persistent implantation
capacities in healthy and sick tissues; f ) they must be
maintained in culture during several divisions without
chromosomal abnormalities.49,50
Epithelial progenitor cells
There are embryonic development reminiscent pro-
cesses that take place in adult multicellular organisms
which are necessary for self maintenance and repair,
for example permanent epithelial renewal; 2,51 howe-
ver, alterations in these processes may induce tumors
development.4,52
It is important to consider that, while repair and
regeneration potentiality of the progenitor cells,
like the one occurring in the pigmentary cells of the
ocular retina,40 the human liver which has the capacity
to regenerate up to 50% of its mass and bone marrow
where the 350 million erythrocytes are replaced every
minute, 36 in other organs where stem cells also exist
this process is uncommon.53,54
In contrast, it has been found that some progenitor
cells are able to cross the germinal cell layers’ barrier,
this is attributed to the cellular transdifferentiation
and redetermination,14,15,38 such processes somehow
explain the regeneration of extremities and complex
tissues, considered as the particular propriety of some
vertebrates, as the salamanders.5
In epithelial research, it was observed that the per-
foration in the mouse ear rarely follows a complete
regeneration process, and instead, follows a repara-
tion process.23
Nevertheless, in a work with transgenic mice expre-
ssing the E6 and E7 oncogenes of the human papi-
lloma virus in stratified epithelia, an increment was
observed in the proliferative capacity (maybe from
the epidermis stem cells), that increased the regene-
ration capacity in such a degree that the auricle was
488
plantación, donde aún son pluripotentes, mantienen
su capacidad de diferenciación a todas las líneas celu-
lares,48 se comportan como líneas celulares de CTE y
poseen gran capacidad de proliferación in vitro.33,34
En condiciones de cultivo, las CGP se mantienen
viables sólo de 30 a 40 pases, pero tienen la ventaja de
no formar teratomas cuando se inyectan en ratones,
por ello pueden representar una fuente más segura
para los resultados de transfección y transplantes.29,33
Otro factor importante en las CGP lo constituye
el potencial que representa la presencia de los home-
obox (secuencias conservadas de 180 pares de bases,
presentes en los genes involucrados en el desarrollo
de un amplio rango de organismos) y de factores de
transcripción como Oct4, también presente en CTE,
pero no en otros tipos de células del feto en desarro-
llo.15,34,48
Aunque las investigaciones de los linajes celulares
obtenidos de las CGP de animales domésticos conti-
núan, no se ha verificado que éstas contribuyan en la
línea germinal sucesiva de especies diferentes a los
murinos.42,44
Células progenitoras adultas o somáticas
multipotentes
En los mamíferos, después del nacimiento y hasta la
madurez, el organismo mantiene una pequeña reserva
de células en algunos órganos y tejidos, capaces de
renovarlos o repararlos; éstas son células diferencia-
das quiescentes,7 inmaduras, no primitivas y, una vez
derivadas del embrión temprano a lo largo de la vida
del individuo, se especializan en suministrar células
de mantenimiento para el organismo; se denominan
células progenitoras multipotentes (MAPC, multipo-
tencial adult progenitor cells) o células somáticas tron-
cales.14
De acuerdo con lo anterior, para que una población
celular sea considerada troncal o progenitora debe
reunir las siguientes características: a) dar origen a
varios tipos celulares, sin perder su estado genérico
de potencialidad; b) deben dividirse y originar más
células progenitoras o diferenciarse hacia linajes o
estirpes celulares determinadas; c) deben tener capa-
cidad de autorrenovación; d) capacidad de adhesión y
migración; e) capacidades de implantación persistente
tanto en tejidos sanos como enfermos; f ) deben man-
tenerse en cultivo durante varias divisiones celulares
sin anormalidades cromosómicas.49,50
Células progenitoras epiteliales
En los organismos multicelulares adultos ocurren
procesos reminiscentes del desarrollo embrionario
que son necesarios para mantener al organismo fun-
regenerated, including the cartilage and skin, leaving
almost no signs of damage.49
Osteoprogenitor cells
The extremities are the classic biological model to
study morphogenetic processes; osteoprogenitor cells
are located in the endosteum and in the internal
cellular layer of the periosteum, where they cover the
haversian canals; 40 they are elongated, with a small
cytoplasm. They arise from primitive mesenchymal
cells and form a population of stem cells capable of
dividing and give rise to cells that will differentiate
into osteoblasts.55
These cells are derived from mesenchyma
(mesoderm), proliferates by mitosis and have the
potential to differentiate into osteoblasts (bone) and
in low oxygen conditions can also differentiate into
chondrogenic cells (cartilage). 56,57
Mesenchymal and stroma stem cells are also found
in the bone marrow and they produce adipocytes and
osteoblasts that can be precursors of multipotent adult
progenitor cells (MAPC) (Figure 5).
Usefulness of osteoprogenitor cells’ culture
Approximately, one in every 10 000 cells in bone
marrow corresponds to an osteoprogenitor; 27 for this
reason, they are difficult to locate; nevertheless, they
constitute a field of research on: a) in vitro cultures of
bone cells (osteoblasts) with their osteoinduction cha-
racteristics, and biocompatibility; 27 b) generation of
recombinant human bone morphogenetic protein-2
(rhBMP-2), useful for reconstructing large bone seg-
ments; c) generation of demineralized bone to freeze,
that diminishes the immune response but favors oste-
oinduction; 55 d) autologous spongy bone generation,
it is considered the ideal graft, because it supplies
osteoprogenitor cells (osteoblasts) with adequate bio-
mechanical properties, despite its limited availability;
e) generation of cytokines (IL-1, IL-6) produced by
osteoblasts which participate in bone formation and
resorption; and cytokines produced by osteoclasts
(TNF-α, IL-1b, IFN-γ and annexin II), that maintain
normal hematopoiesis and immune response. 55
The osteoprogenitor cells respond to localization
signals insuline-like growth factors (IGF I and II) that
stimulates cell proliferation, the transforming growth
factor (TGF-β), which, at the same time, acts as regu-
lator of the fibroblastic growth factor (FGFαβ of the
germ cells-derived growth factor (PDGF) and the
bone morphogenetic factor (BMP); these polypeptide
super-families intervene in the development, in the
homeostasis of adult tissues and are potential formers
of bone.58
cional y repararlo cuando hay daño; es el caso de la
renovación epitelial permanente; 2,51 sin embargo, las
alteraciones en estos procesos pueden conducir a la
aparición de tumores.4,52
Es de notar que mientras el potencial de repara-
ción y regeneración de las células progenitoras, como
las pigmentarias de la retina del ojo,40 las células del
hígado humano que tienen capacidad para regenerar
hasta 50% de su masa y los 350 millones de eritroci-
tos que se reemplazan por minuto, 36 en otros órganos
donde también existen células madre este proceso no
es común.53,54
En contraparte, se ha hallado que algunas células
pueden atravesar la barrera de las capas germinales,
esto se atribuye a la transdiferenciación y redetermina-
ción celular; 14,15,38 dichos procesos explican, en parte,
la regeneración de extremidades y tejidos complejos,
considerada como propiedad particular de algunos
vertebrados, como las salamandras.5
En investigaciones acerca del epitelio, se observó
que una perforación de la oreja del ratón rara vez
lleva a cabo un proceso de regeneración completo,
más bien ocurre un proceso de reparación.23
Sin embargo, en un trabajo con ratones transgé-
nicos que expresan los oncogenes E6 y E7 del virus
del papiloma humano en epitelios estratificados, se
observó que un aumento en la capacidad proliferativa
(quizá de las células troncales de la epidermis), incre-
mentó la capacidad de regeneración a tal grado que
la oreja pudo formar todos sus componentes, inclu-
yendo el cartílago, sin dejar casi rastros del daño pro-
vocado.49
Células osteoprogenitoras
Las extremidades son el modelo biológico clásico para
estudiar procesos morfogenéticos; en ellas se encuen-
tran las células osteoprogenitoras localizadas en el
endostio y en la capa celular interna del periostio,
recubren los canales haversianos; 40 son alargadas, con
citoplasma poco prominente, proceden de las células
mesenquimáticas primitivas y forman una población
de células troncales capaces de dividirse y dar origen
a células que se diferencian a osteoblastos.55
Como derivan del mesénquima embrionario
(mesodermo que migra), pueden dividirse por mitosis
y tienen el potencial de diferenciarse en osteoblastos
(hueso) y en condiciones de tensión baja de oxígeno
pueden diferenciarse como células condrogénicas
(cartílago).56,57
En la médula ósea también se hallan las células
madre mesenquimáticas y del estroma que producen
adipositos y osteoblastos que pueden ser precurso-
ras de las células progenitoras adultas multipotentes
(MAPC) (Figura 5).
Vet. Méx., 38 (4) 2007 489
 - Mesenchymal stem
cells
Stroma´s stem
cells than can -Multipotent adult
originate bone progenitor
and adipose
cells -Osteblasts
Bone marrow
- Adipocytes
Myeloid
stem cells
Multipotent
stem cells
Hematopietic that originate
stem cells all the blood
and inmunolo-
gical system
cells
Limphoid
stem cells
Although the general role of these molecular series
is known, their specific role on bone remodeling and
their capacity to increase mineral density is unknown.
Besides, they can originate neoplasms if they lose con-
trol and the information is not on time.23
Blood progenitor cells
Hematopoietic progenitor cells (HSC; hematopoietic
stem cells) generate all types of blood cells; they are
found in bone marrow –although in fetal stage they
are found in liver and spleen–,4 they have the ability
to produce all the cells that form blood: erythrocytes,
leukocytes and platelets and others within the same
tissue; although recently, it was achieved to generate
these cells from other lineages, for this reason they
are cataloged as progenitor cells.14,23
It was initially thought that hematopoietic cells, for
their natural multipotentiality, were the only progeni-
tor cells in the bone marrow with capacity to generate
different types of cells; however, it has been shown
that bone marrow is more complex, for another hete-
rogeneous group of adult stem cells has been identi-
fied, called mesenchymal or stromal cells, cataloged
as multipotent adult progenitor cells.21,59
A key factor in the hematopoietic tissue is the
volume and morphology of progenitor cells, besides
being scarce, they can easily be mistaken for leuko-
cytes for their morphologic likeness.26
In a study on bone marrow transplants,60,61 donor
cells were found in different receptor tissues and it was
concluded that by appropriate conditions, progenitor
cells of bone marrow contribute to the regeneration
of many tissues of the organism, these same characte-
ristics are attributed to fetal stem cells from the umbi-
lical cord blood.62
490
Monocytes
Erythrocytes
Baspphils
Neutrophils
Megakaryocyte
Platelets
- Dendritic cells Figura 5: Diagrama del origen y reservorio de las células
- B Limphocytes madre hematopoyéticas y del estroma en los mamíferos.16
- K Cells
- T Limphocytes
Figure 5: Diagram of the origin and reservoir of hemato-
poietic stem cells and stroma in mammals.16
Utilidad del cultivo de las células
osteoprogenitoras
En la médula ósea de los mamíferos por cada 10 000
células aproximadamente, sólo una corresponde a
osteoprogenitora, 27 por ello es difícil e impredecible
su localización; sin embargo, su estudio constituye
un campo de investigación en: a) Cultivos in vitro de
células óseas (osteoblastos) con sus características de
osteoinducción y biocompatibilidad; 27 b) generación
de proteína morfogenética recombinante humana-2
(rhMBP-2), útil para reconstruir grandes segmentos
de hueso; c) generación de hueso desmineralizado
para congelar, que disminuye la respuesta inmune
pero favorece la osteoinducción; 55 d) generación de
hueso esponjoso autólogo, se considera el injerto ideal,
pues proporciona células osteoprogenitoras (osteo-
blastos) con propiedades biomecánicas adecuadas, no
obstante su limitada disponibilidad; e) generación de
citocinas producidas por osteoblastos interleucinas 1
y 6 (IL-1, IL-6) que participan en la formación y resor-
ción ósea; y citocinas producidas por osteoclastos
(TNF-α, IL-1b, IFN-γ y anexina II), que mantienen la
hematopoyesis y respuesta inmune normales.55
Las células osteoprogenitoras acuden a las señales
de ubicación del factor de crecimiento similar a insu-
lina (IGF I y II) que estimula la proliferación celular
y el factor de crecimiento transformante (TGF-β),
que, a su vez, actúa como regulador del factor de cre-
cimiento fibroblástico (FGFαβ) del factor de creci-
miento derivado de células germinales (PDGF) y del
factor morfogenético de hueso (BMP); estas superfa-
milias de polipéptidos intervienen en el desarrollo, en
la homeostasis de los tejidos adultos y son formadores
potenciales de hueso.58
Se sabe de estas series moleculares, pero se des-
Hematopoietic progenitor cells
of the umbilical cord
Many of the progenitor cells that circulate in fetuses’
blood, remain in the umbilical cord and placenta at
birth,63 umbilical cord blood carries, among other
components, erythrocytes and an immature group
of leukocytes (macrophages, lymphocytes and neu-
trophils) that have surface recognition proteins and
form part of the immunological system.40
This property of immaturity of the immune system
takes advantage to collect cells that assist in the treat-
ment of diseases that require blood cell transplants; 63
because since a decade ago, only the progenitor cells
preceding from a highly compatible donor could help
to correct deficiencies in the blood system of an indivi-
dual; otherwise, the possibility of this to develop graft
vs host disease was very high.23
Like the human leukocytes associated antigen
(HLA), the donor and receptor patients involved in
the transplants must be very similar, the use of umbi-
lical cord blood reduces the risk of rejection if a tissue
containing minimum three HLA similar to those of
the receptor is used.21
The HLA belongs to an histocompatibility antigen
family, genetically codified by the major histocom-
patibility complex (MHC), and are expressed in any
nucleated cell of the body, and if the immune system
does not recognize the protein as their own or the
HLA antigen of any cell, they destroy it.23
Since the cells of umbilical cord blood do not
express the HLA in full, when it is use for a transplant,
the probability of rejection decreases and the success
of treatment for genetic diseases and some types of
leukemia improves.63
Neural progenitor cells
From the embryonic stem cell lines that maintain the
potential to differentiate into all cellular types of the
adult organism and the ones produced as develop-
ment advances, other lineage of stem cells more com-
promised with certain tissues arise, that will propitiate
specific tissue cells,64 neural precursor cells, able to
differentiate into main cellular types of the central
nervous system: neurons, astrocytes and oligodendro-
cytes.20
Several research groups have cultivated cells that,
in vitro behave as neural stem cells; nevertheless, their
real potential of differentiation has been difficult to
establish, since the molecules that promote specific
differentiation are still unknown.65,66
In some cases it has been found that cellular
identity patterns do not correspond to the tissues of
origin.67 To evaluate stem cells potential, and particu-
conoce su papel específico en la remodelación ósea
y su capacidad para incrementar la densidad mine-
ral. Además, pueden llegar a formar neoplasias si se
pierde el control y la información no llega oportuna-
mente.23
Células progenitoras sanguíneas
Las células progenitoras hematopoyéticas (HSC;
hematopoietic stem cells) generan todos los tipos de célu-
las sanguíneas y del sistema inmune; se hallan en la
médula ósea –aunque en la fase fetal se encuentran
en el hígado y en el bazo–,4 conservan la capacidad de
producir todas las células que forman el tejido vascu-
lar: eritrocitos, leucocitos, plaquetas y otras dentro del
mismo tejido; aunque recientemente se logró generar
a partir de estas células otros linajes, por ello se cata-
logan como células progenitoras.14,23
Así, las células hematopoyéticas, por su multipoten-
cialidad natural, se consideraban como las únicas en
la médula ósea con capacidad para generar diferentes
tipos celulares; pero se ha mostrado que la composi-
ción de la médula ósea es más compleja, pues en ella
se ha identificado otro grupo heterogéneo de células
madre adultas, denominadas células mesenquimales
o estromales, catalogadas como progenitoras adultas
multipotentes.21,59
Un factor clave en el tejido hematopoyético es el
volumen y la morfología de células progenitoras, pues
además de ser escasas, por su parecido morfológico
pueden confundirse fácilmente con los leucocitos.26
En un estudio sobre transplantes de médula
ósea,60,61 se encontraron células del donante en dife-
rentes tejidos del receptor y se concluyó que bajo
condiciones apropiadas, las células progenitoras de
la médula ósea contribuyen en la regeneración de
muchos tejidos del organismo, estas mismas caracte-
rísticas se atribuyen a las células madre fetales de la
sangre del cordón umbilical.62
Células progenitoras hematopoyéticas del cordón
umbilical
De las células progenitoras que circulan por la sangre
de los neonatos, muchas quedan en el cordón umbi-
lical y la placenta,63 la sangre del cordón lleva, entre
otros componentes, eritrocitos y un grupo inmaduro
de leucocitos (macrófagos, linfocitos y neutrófilos) que
tienen en la superficie proteínas de reconocimiento y
forman parte del sistema inmunológico.40
Esta propiedad de inmadurez del sistema inmune
se aprovecha para recolectar células que coadyuvan
al tratamiento de enfermedades que requieren trans-
plante de células sanguíneas,63 porque hasta hace una
década sólo las células progenitoras provenientes de
Vet. Méx., 38 (4) 2007 491
larly of neuronal precursors in mammals, an implan-
tation system of in vitro cells was designed which allows
evaluation of potential differentiation of neural stem
cells, without knowledge of the specific molecules
involved in the surrounding.67,68
In this system it has been shown that the neuros-
pheres, one of the most frequent ways the neural stem
cells grow, are mainly formed by cells that will not give
rise to neurons in natural differentiation environ-
ments.20 However, adult-derived embryonic stem cells
and stem cells can give rise to neurons in this differen-
tiation environment.66,67
Activation, regulation and identification of ES
cells and MAPC
Each eukaryotic cell expresses and utilizes informa-
tion correspondening to its function, but they also
have stored information about how some other cells
of the organism should work, are constituted, and how
the other organism cells from which they belong to
should function, 3,7 since all the cells of an organism
are derived from an initial cell, the unicellular embryo
or zygote that successively divides, giving rise to daug-
hter cells, making in each division identical copies of
its DNA, that contains the information of the indivi-
dual as a whole; temporarily and spatially activating
and deactivating the regulation and control mecha-
nisms that correspond to each cellular lineage.7,14
Internal mechanisms of control
Internal mechanisms of cells determine the number
of times they must divide before becoming comple-
tely differentiated; a complex group of short and long
range between cells, their pluripotent daughters and
neighbor cells controls, activation and regulation30 for
stage changes from morula to blastula, to gastrula and
the successive, coadjuvanted by cytokines, proteins
that direct cellular maturation; 3 promoter and inhibi-
tor proteins of the cell cycle such as mitosis promoter
factors, conformed by cyclins and kinases dependent
on cyclin CDK2; cellular interactions with the extra-
cellular matrix through membrane receptors such as
integrins3 and by genetic factors. At the first cell diffe-
rentiation that generates the blastula, the nanog gene
intervenes, which only activates in the ES cells; it has
been demonstrated that its nullification leads to uns-
pecified blastocyst pluripotent cells.38
External mechanisms of control
When the external signals that reach the membrane
receptors are transduced inside the cell by a series of
biochemical reactions of phosphorylation and dephos-
492
un donador altamente compatible con el receptor
podían ayudar a corregir deficiencias en el sistema
sanguíneo de un individuo; de otra forma, la posibi-
lidad de que éste desarrollara la enfermedad injerto
contra portador era muy alta.23
Como los antígenos leucocitarios asociados (HLA,
human leukocytes associated antigen) de donador y recep-
tor involucrados en los transplantes deben ser muy
parecidos, el uso de sangre de cordón umbilical reduce
el riesgo de rechazo si se utiliza tejido que contenga
como mínimo tres HLA similares a los del receptor.21
Debido a que los HLA son una familia de antí-
genos de histocompatibilidad, codificados genética-
mente por el complejo mayor de histocompatibilidad
(MHC, major histocompatibility complex), se expresan en
cualquier célula nucleada del cuerpo, y como forman
parte del sistema inmune, si no reconocen como suya
la proteína o el antígeno HLA de cualquier célula, la
destruyen.23
Si la sangre del cordón umbilical no ha desarro-
llado este sistema, cuando se usa para un transplante,
la probabilidad de rechazo disminuye y da oportuni-
dad para el tratamiento de enfermedades genéticas y
algunos tipos de leucemias.63
Células progenitoras neurales
De las líneas celulares troncales embrionarias que
mantienen el potencial para diferenciar hacia todos
los tipos celulares del organismo adulto y de las que
se producen conforme avanza el desarrollo, surgen
otras células troncales más comprometidas con deter-
minados tejidos, que propiciarán células de tejidos
específicos,64 entre ellas se encuentran las células pre-
cursoras neurales, células capaces de diferenciar hacia
los tipos celulares principales del sistema nervioso
central: neuronas, astrocitos y oligodendrocitos.20
Diversos grupos de investigación han cultivado
células que in vitro se comportan como células tron-
cales neurales; no obstante, su potencial real de dife-
renciación ha sido difícil de establecer, pues aún se
desconocen las moléculas que promueven la diferen-
ciación específica.65,66
En algunos casos se ha hallado que los patrones
de identidad celular no corresponden a los del tejido
de origen.67 Para valorar el potencial de células tron-
cales, y en particular de los precursores neurales en
mamíferos, se diseñó un sistema de implantación de
células in vitro que permite la valoración del potencial
de diferenciación de células troncales neurales, sin
conocimiento de las moléculas específicas involucra-
das del entorno.67,68
Con este sistema se muestra que las neuroesferas,
una de las formas más frecuentes para crecer células
troncales neurales, tienen en su mayoría células que
phorylation of proteins, an order to activate and deac-
tivate gene groups is originated and there is where the
cell can control or change its expression pattern.3
Chromosomal factors
The capacity of progenitor cells to transcribe telome-
rase protein, that is a ribonucleoprotein whose func-
tion is to add telomeric repetitions to the extremities
of chromosomes, is correlated with the life span of
cellular lineages.69 The length of the telomeres of
cromatides are related with the specialization degree
of the cell, for this reason the more specialized cells
posses shorter telomeres.70
It has been observed that stem cells posses long
telomeres and permanent constitutive telomerase
activity; 69 nevertheless, one particularity of human
diploid cells is that they do not express telomerase
enzyme in their phenotype, for this reason its expec-
tations as a molecular indicator is not very relevant,
in contrast with other species where they are directly
related with activity of the cellular cycle and age.70
Regulation of the differentiation of
EScells and MAPC
A primary control mechanism to guarantee that gene-
tically damaged cells do not divide and do not trans-
mit genetic alterations, is the redundant recognition
and verification during cellular proliferation given by
protein P53, that is also used to keep genetic stability
in embryonic cells.58
The P53 is activated by DNA damage, and in embr-
yonic cells directly suppresses the nanog gene expres-
sion, which is essential for regeneration of those cells.
Suppression of nanog promotes the differentiation of
stem cells in different types. P53 also contributes to the
eventual damage elimination in the DNA of cells.38
Molecular markers
The specific identification of embryonic progenitor
or stem cells through molecular markers allows fre-
quency and distribution recognition; how they proli-
ferate in colonies, most of the experiments with stem
cells will not start with individual cells but with large
numbers of cells where several lineages can be pre-
sent, each one with a unique potential; therefore, the
importance of molecular markers to characterize the
population composition.13
The surface markers are membrane surface pro-
tein that are expressed on cell type specific manner.
In progenitor cells at membrane level, 58 although the
references of findings of new markers is broad (cells
CD34+, CD34−, as well as CD133+ CD38− have been
no originan neuronas en ambientes naturales de dife-
renciación.20 Sin embargo, células troncoembriona-
rias y troncales derivadas del adulto pueden generar
neuronas en este ambiente de diferenciación.66,67
Activación, regulación e identificación de las CTE
y de las MAPC
Cada célula eucariota expresa y utiliza la información
correspondiente a su función, pero tiene igualmente
almacenados los datos sobre cómo son y cómo deben
funcionar las otras células del organismo al que per-
tenecen, 3,7 porque al derivar de una célula inicial, el
embrión unicelular o cigoto se divide sucesivamente,
propiciando más células, haciendo en cada división
copias idénticas de su ADN, con información de cómo
es todo el individuo; activando y desactivando tempo-
ral y espacialmente los mecanismos de regulación y
control que atañen a cada linaje celular.7,14
Mecanismos internos de control
Mediante mecanismos internos, las células determi-
nan las veces que deben dividirse antes de diferen-
ciarse totalmente; mediante un complejo grupo de
señales de corto y largo alcance entre células madre,
sus hijas y las células vecinas pluripotentes realizan el
control, activación y regulación30 necesarios para los
cambios de estadio de mórula a blástula, a gástrula
y los sucesivos, coadyuvadas por citoquinas, proteínas
que dirigen la maduración celular; 3 proteínas pro-
motoras e inhibidoras del ciclo celular, factor promo-
tor de la mitosis, conformado por ciclinas y cinasas
dependiente de ciclina CDK2; interacciones de las
células con la matriz extracelular mediante recepto-
res de membrana como las integrinas3 y por factores
genéticos. Al ocurrir la primera diferenciación celular
que genera la blástula, interviene el gen nanog, que
sólo se activa en las CTE; se ha demostrado que su
anulación lleva a la inespecificidad de las células plu-
ripotenciales del blastocisto.38
Mecanismos externos de control
Cuando las señales externas que llegan al receptor de
membrana se reemiten dentro de la célula mediante
una serie de reacciones bioquímicas de fosforilacio-
nes y desfosforilaciones de proteínas, se origina una
orden para activar o desactivar grupos de genes y
es ahí donde la célula puede controlar o cambiar su
patrón de expresión.3
Factores cromosomales
La capacidad de las células progenitoras para trans-
Vet. Méx., 38 (4) 2007 493
found) and it is considered immunophenotype cha-
racteristic of immature stage CD133+; nevertheless,
in Table 2, only information on the most utilized for
identifying progenitor cells is presented.12,38
Promiscuity of progenitor and embryonic stem
cells
The new era of biology and biotechnology has
prompted to the knowledge of cellular characteristics
that were thought restricted to few animal species; for
instance, epigenetic nuclear reprogram in stem cells,
transdifferentiation (change of cellular destiny, that
gives place to other reminiscent tissues) and transde-
termination (similar process to cellular cloning, in
which the nucleus of a stem cell is subjected to genetic
reprogram) in virtue of cellular fusion, they are attri-
buted to the flexibility of adult cells.71
Likewise, the development of new ways of therapy
has been possible because despite cellular determi-
nation, such as the stromal cells, has been identified,
adding the intrinsic and extrinsic mechanisms of
asymmetric division proper to embryogenesis, the cas-
cade signalization and the cellular microenvironment
accept the fusion.7,14
Bioartificial tissues and cellular therapy
Recently, if it is needed to do in vitro a replica of a
modified organism (for example, bacteria), only to
resort to any of its cells and obtain that its informa-
tion expresses and multiplies, entire colonies may be
generated, using the appropriate technology; in the
same way it happens with eukaryotic cells, because the
protocols to make cells live and grow out of the orga-
nism are available, by means of advanced techniques
of molecular biology, cellular culture and embryonic
management.11
Thus, to restore a specific functional deficit in a
tissue implies to maintain in culture, cell lines that
proliferate indefinitely such as ESC or pluripotent,
and obtain isolated cells from adult tissues that can be
reprogramed by proliferation and proper differentia-
tion factors, into desired cellular phenotypes by cellu-
lar fusion; this technology is called cellular therapy or
cellulomic.41
Thus, the same intra and intercellular principles
that the organism uses in natural way for its self-
repair,17 and the subcellular elements of tissue engi-
neering, could be used for protocols searching for
gradual change from sick to healthy cells, this is appli-
cable, until now, only to certain body areas.7,11
In 2001, Orlic et al.19 managed to repair the coro-
nary damage experimentally provoked in female mice
494
cribir la proteína telomerasa, que es una ribonu-
cleoproteína cuya función es adicionar repeticiones
teloméricas a los extremos de los cromosomas, se
correlaciona con las expectativas de vida de los lina-
jes celulares; 69 según lo anterior, la longitud de los
telómeros de las cromátides se relaciona con el grado
de especialidad de la célula, por ello las células más
especializadas poseen telómeros más cortos.70
Se ha observado que las células madre poseen
telómeros largos y actividad telomerasa constitutiva
permanente; 69 sin embargo, una particularidad de
las células diploides humanas es que no expresan la
enzima telomerasa en su fenotipo, por ello sus expec-
tativas como indicador molecular no es muy relevante,
a diferencia de otras especies donde se relaciona
directamente con la actividad del ciclo celular y con
la edad.70
Regulación de la diferenciación de las CTE
y de las MAPC
Un mecanismo primario de control para garantizar
que las células dañadas genéticamente no se dividan
y no transmitan alteraciones, es el reconocimiento y
verificación redundante durante la proliferación celu-
lar dada por la proteína P53, que también se utiliza
para mantener la estabilidad genética en las células
embrionarias.58
La P53 activada por el daño en el ADN de las célu-
las embrionarias suprime directamente la expresión
del gen nanog, que es imprescindible para la regenera-
ción de esas células. La supresión del nanog promueve
la diferenciación de las células madre embrionarias en
diversos tipos. La P53 también contribuye a la elimina-
ción eventual del daño en el ADN en las células.38
Marcadores moleculares
La identificación concreta de las células progenitoras
embrionarias o somáticas mediante marcadores mole-
culares permite reconocer su distribución y frecuen-
cia; como proliferan en colonias, la mayoría de los
experimentos con células madre inicia con una pobla-
ción no con células individuales; esto posibilita que
estén presentes varios linajes, cada uno con un poten-
cial único, de ahí la importancia de los marcadores
para definir la composición de la población.13
Los marcadores de superficie son un tipo de pro-
teína que se expresa en las células progenitoras a nivel
de membrana, 58 aunque las referencias de hallazgos
de nuevos marcadores es amplia (se han encontrado
células CD34+, CD34–, así como CD38+ CD38–) y se
considera inmunofenotipo característico de estadio
inmaduro CD133+; sin embargo, en el Cuadro 2 sólo
 Cuadro 2
MARCADORES MOLECULARES PARA CÉLULAS PROGENITORAS
Y TRONCOEMBRIONARIAS DE RATÓN 11, 12
MOLECULAR MARKERS FOR PROGENITOR AND EMBRYONIC STEM CELLS OF MOUSE 11, 12
Marker Activity
Oct4 Transcription factor
STAT3 Transcription factor
Nanog Transcription factor
CD34+ Surface protein
SSEA1 Embryonic antigen
Alkaline Enzymatic protein
phospatese
by cardiac infarction; these sick animals were injected
near the zone damaged by the infarct with radioacti-
vely marked stem cells derived from bone marrow of
adult mice; one week later it was proved that a proli-
feration of the inoculated cells along with a transfor-
mation of these into cardiac muscle cells and blood
vessels forming cells was produced. In this study it was
observed that newly differentiated cells were begin-
ning to move towards the dead zone; 19,72 other studies
have notified chimerism of stem cells with cardiac
cells.73,74
In lymphoid organs like the thymus, that during
infancy suffers a regression process until converted
in islets49 and which function is to intervene in T
lymphocyte production,1,40 the sites that control the
capacity for these to detect foreign invasions and the
mechanisms which detain them in order not to attack
tissues of the proper organism were studied; during
the research it was found that stem cells were part of
the immune system and thus propagated, in mice, the
cells that give origin to thymus epithelium, generating
a bioartificial tissue.26
In other study, it was proposed to produce pluripo-
tent stem cells that contribute to the modified nuclear
genoma and induce its differentiation into cells that
replace sick cells: myocardiocytes that substitute myo-
cardium after a stroke; or beta cells producers of insu-
lin in the case of diabetic patients.75
Another tendency is the obtainment of patient’s
own cells, donor of a cell type (that is programed)
and a cellular receptor in another body area that it is
affected and needed of therapy; the analogous trans-
plant alternative presents some advantages for the
complete immunotolerance in the same individual
receptor-donor complex.18
In vitro function
Coadyuvates in cell renewal
Present in LIF activation
Maintains pluripotent stage
Present in ES cells
Specific stage of pluripotency
Phosphate hydrolysis
se presenta la información de los más utilizados para
identificar células progenitoras.12,38
Promiscuidad de las células progenitoras
y de las células troncoembrionarias
La nueva era de la biología y la biotecnología ha per-
mitido conocer cualidades celulares que se creían
restringidas a pocas especies animales; así, la repro-
gramación nuclear epigenética en células somáticas,
la transdiferenciación (cambio de destino celular, que
da lugar a otros tejidos reminiscentes) y la transde-
terminación (proceso similar a la clonación celular,
en el que el núcleo de una célula somática se somete a
reprogramación genética) en virtud de la fusión celu-
lar, se atribuyen a la flexibilidad de las células adul-
tas.71
Asimismo, el desarrollo de nuevas formas de tera-
pia ha sido posible porque se ha identificado el com-
portamiento de determinación de células como las
estromales, que sumando los mecanismos intrín-
seco y extrínseco de división asimétrica propios de la
embriogénesis, las vías de señalización en cascada y la
influencia del microambiente celular aceptan el pro-
ceso de fusión.7,14
Tejidos bioartificiales y terapia celular
Actualmente, si se necesita hacer in vitro una réplica
de un organismo modificado (bacterias, por ejem-
plo), sólo con recurrir a cualquiera de sus células y
conseguir que su información se exprese y se mul-
tiplique, se pueden generar colonias enteras, usando
la tecnología apropiada; de manera análoga ocurre
con las células eucarióticas, porque se dispone de los
protocolos para conseguir que las células vivan y crez-
Vet. Méx., 38 (4) 2007 495
Progenitor cells and cloning
Cloning concept and its application possibilities has
had an enormous change since Briggs and King,76 in
a today’s classic experiment, they performed the first
cloning of animal from the skin cell of a frog –that is
specialized adult type cell–, where all cells have DNA
in their nucleus.
While perforating the cellular membrane with a
micropipette, its nucleus (donor nucleus) was extrac-
ted by suction and, parallelly, the nucleus was remo-
ved from a fecundated oocyte of the same species;
with this, the future receptor cell was deprived of the
genetic information that, in natural conditions, con-
tains the message that conduces to the development of
a normal individual, and the donor nucleus was intro-
duced in the enucleated receptor oocyte.
After incubation, that hybrid ovocyte developed
into a tadpole and after the metamorphosis process
an adult frog emerged; that is, the production of a
copy almost identical of an individual.
From this moment on, similar experiments were
done, but only later, with the cloning of Dolly77 the
sheep, did those types of works had any relevance.
Now the combination of tools of molecular and
cellular bioengineering are a promising alternative
in the diagnosis, with techniques of polymerase chain
reaction (PCR) in real time and autologous cloning
therapeutic, the critical problem of immunological
incompatibility can be eliminated, opening the door
to a new challenge: organ and tissue engineering.71
For reprograming that occurs during cloning of an
adult stem cell nucleus, that contains the precise infor-
mation of its species, how it is and how it is structured,
it is necessary to recreate the reminiscent microenvi-
ronment which allows to carry out the process.7,14,71
Nevertheless, there is absence of cloning experi-
ments that prove that it is a unique cell and not an
heterogenous population the cause of differential
potential; therefore, it is a proof that experiments are
still missing to ratify or discard this isolation.50
Discussion
As highlighted in the text, the enormous potential that
represents the use of adult and embryonic progenitor
cells, as well as its differential function is clear to see,
for which it is recommended to continue its study.
Likewise, it is observed that, according to the pre-
liminary results of researches, it is viable the use of
embryonic stem cells for experimental models, and
for multipotent adult progenitor cells for therapy in
transplanted tissues, reprograming and cloning.11,71
Researches from the last two decades44 show the
importance of these cells in human health for treat-
496
can fuera del organismo, mediante técnicas avanza-
das de biología molecular, cultivo celular y manejo de
embriones.11
Así, restaurar un déficit funcional específico en
un tejido implica mantener en cultivo por periodos
prolongados, líneas celulares que proliferen indefini-
damente como CTE o pluripotentes, y obtener células
aisladas de tejidos adultos que puedan ser reprogra-
madas mediante factores de crecimiento y de diferen-
ciación apropiados, hacia fenotipos celulares deseados
por fusión celular; esta tecnología se denomina tera-
pia celular o celulómica.41
Así, se aprovechan los mismos principios intra e
intercelulares que el organismo usa de manera natu-
ral para su autorreparación,17 y los elementos subcelu-
lares de la ingeniería de tejidos, empleando protocolos
idóneos para el cambio paulatino de células enfermas
por células sanas, esto es aplicable, hasta ahora, sólo a
determinadas áreas corporales.7,11
Orlic et al., en 2001,19 lograron reparar el daño
coronario provocado experimentalmente en rato-
nas por un infarto cardiaco; estos animales enfermos
fueron inyectados en una región cercana a la zona
lesionada por el infarto con células madre marcadas
radiactivamente y procedentes de la médula ósea de
ratones adultos; una semana después se comprobó
que se producía una proliferación de las células ino-
culadas junto con una transformación de ellas hacia
células musculares cardiacas y células formadoras de
vasos sanguíneos. En este trabajo se observó que estas
nuevas células miocárdicas y vasculares comenzaban
a desplazarse hacia la zona muerta; 19,72 otros trabajos
han notificado quimerismo de las células madre con
las células cardiacas.73,74
En órganos linfoides como el timo, que durante la
infancia sufre un proceso de regresión hasta quedar
convertido en islotes49 y cuya función es intervenir
en la producción de los linfocitos T,1,40 se estudiaron
los sitios que controlan la capacidad de éstos para
detectar invasores foráneos y el mecanismo que los
detiene para que no ataquen a los tejidos del propio
organismo; durante la investigación se encontró que
las células madre formaban parte del sistema inmu-
nitario y así propagaron en ratones las células que
dan origen al epitelio del timo, generando un tejido
bioartificial.26
En otro estudio24 se propuso producir células tron-
cales pluripotentes que aporten el genoma nuclear
modificado e inducir su diferenciación a células que
reemplacen a otras enfermas: miocardiocitos que sus-
tituyan tejido del miocardio lesionado tras un infarto;
o bien a células beta productoras de insulina en el
caso de pacientes diabéticos.75
Otra tendencia es la obtención de células del
propio paciente, donante de un tipo celular (que se
ment and prevention of diseases, and in animal pro-
duction, as in bioreactors for recombinant protein
production, that generate animals of high aggrega-
ted value; 24,45,46 in this context, it is observed that the
potentiality of these cellular populations, their ability
to derived into different cellular lines and their in
vitro survival, are useful advantages.41,44,71
Nevertheless, the generated research is not
enough because each study opens new doors to the
unknown, so the use of stem cells’ technology is still
limited because the answers depend on not yet pon-
derable variables; 6,15,18 therefore, the knowledge of
the mechanisms through which these cells achieve to
maintain their characteristics, will contribute to make
appropriate use of them.71 In regard to, recent stu-
dies indicate that biochemical environment of cellu-
lar surrounding is important in the behavior of these
cells, 2,14,17 because in vivo cellular nidus’ surrounding
and the signalization routes orient the biodistribution
and changes in these cells.12,14
Likewise, it is important to highlight that, since
now, it has been possible to isolate human and mice
embryonic stem cell lines, with the advantage of being
pluripotent, but with the characteristic limitations of
the species; 16 in the case of multipotent adult proge-
nitor cells, studies are still insipid, because these cells
are difficult to find in tissues and culture is complex;
nevertheless, they adhere very well to tissues and in
vivo rapidly migrate.17,30
More recent researches on obtainment and main-
tenance of progenitor cells are directed to improve
complete protocols and to develop better culture
media that will allow to obtain consistent results on
derivation.15
The future of the method’s development for mani-
pulation of pluripotent embryonic stem cells and mul-
tipotent adult progenitor cells, will depend on the
obtainment of more basic information about action
mechanisms and precise biochemical changes, of mar-
kers and the ligand-receptor complexes that induce to
differentiation, dedifferentiation, transdifferentiation
and non differentiation.43,71
This cellular and molecular technology, in medi-
cal field, represents an alternative for treatment of
diseases of difficult prognosis and management disea-
ses, while in farm animals it is another alternative of
production.45,46
The value of progenitor cells lies in its versatility as
intermediates in diagnosis and therapy, as well as in
the recombinant production of high value protein.44
Implications
The embryonic progenitor cells and multipotent adult
progenitor cells, for their properties and characteris-
reprograma) y un receptor celular en otra área de su
cuerpo que esté afectada y necesite terapia; la alter-
nativa del transplante autólogo presenta algunas ven-
tajas por la completa inmunotolerancia dentro del
complejo receptor-donador en un mismo individuo.18
Células progenitoras y clonación
El concepto de clonación y sus posibles aplicaciones ha
tenido un enorme cambio desde que Briggs y King,76
en un experimento que hoy es clásico, realizaron la
primera clonación de un animal de la célula cutánea
de una rana –que es un tipo celular adulto especia-
lizado–, donde todas las células tienen ADN en sus
núcleos.
Al perforar la membrana celular con una micro-
pipeta, se extrajo por succión su núcleo (núcleo
donante) y paralelamente se removió el núcleo de
un oocito fecundado de la misma especie, con ello se
privó a la futura célula receptora de la información
genética que, en condiciones naturales, contiene el
mensaje que conduce al desarrollo de un individuo
normal, y se introdujo el núcleo donante en el oocito
receptor enucleado.
Luego de incubado, ese ovocito híbrido se desarro-
lló en un renacuajo y tras el proceso de metamorfosis
surgió una rana adulta normal; es decir, la producción
de una copia casi idéntica de un individuo.
A partir de entonces se realizaron experimentos
similares, pero sólo después, con la clonación de la
oveja Dolly,77 ese tipo de trabajos tuvieron trascenden-
cia.
Ahora la combinación de herramientas de bioinge-
niería molecular y celular son una promisoria alter-
nativa en el diagnóstico, con las técnicas de reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real y
la terapéutica del clonaje autólogo, se puede eliminar
el problema crítico de la incompatibilidad inmunoló-
gica, abriendo la puerta a un nuevo reto: la ingeniería
de órganos y de tejidos.71
Para la reprogramación que ocurre en la clona-
ción de un núcleo somático adulto, que contiene la
información precisa de su especie, cómo es y cómo
se estructura, es necesario recrear el microambiente
resminiscente que permita llevar a término el pro-
ceso.7,14,71
Sin embargo, hay ausencia de experimentos clo-
nales que prueben que es una única célula y no una
población heterogénea la causante del potencial dife-
renciador; por lo tanto, es una prueba de que aún
faltan experimentos para ratificar o descartar este
aislamiento.50
Vet. Méx., 38 (4) 2007 497
tics, facilitate their use in a wide range of applications,
whose implications would be: a) greater availability of
therapeutic resources; b) technology usefulness and
of the natural mechanisms of cellular functioning, for
artificial reprograming; c) treatment possibility for a
greater number of patients with difficult management
diseases; d) implicitly generates greater dependence
of high technology.
It can not be left out mentioning the teratogenic
potentiality of these processes, because conditions
needed for specific cellular differentiation have not
been established with clarity.11,71
Besides, high cost of investments in time, money
and human capital implicate limitations in this area
of knowledge.
Not withstanding the vertiginous development in
this research field and the great number of studies
that have been done, technology validity associated
with progenitor cells in many incidence areas is still
missing, but it is worth the effort, possible benefits are
not in the medical area, but in animal production.
Acknowledgements
Special thanks for the invaluable and generous support
from the Library of the Biotechnology Institute from
the National Autonomous University of Mexico, in
Cuernavaca, Morelos, Mexico; especially to bibliote-
cologist Zaida Penton, for her help in the localization
and acquisition of great part of the hemerographic
material in this study.
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498
Discusión
Según los aspectos tratados en el texto, es claro el
enorme potencial que representa el uso de las célu-
las progenitoras adultas y embrionarias, así como su
función diferencial, por lo que es recomendable se
continúe estudiando.
De igual manera, se observa que, de acuerdo con
los resultados preliminares de las investigaciones,
es viable el uso de células troncoembrionarias para
modelos experimentales, y de las células multipoten-
tes somáticas para terapéutica en el transplante de
tejidos , reprogramación y clonación de células somá-
ticas.11,71
Las investigaciones de las dos últimas décadas44
muestran la importancia de estas células en la salud
humana para el tratamiento y prevención de enfer-
medades, y en la producción animal, como biorreac-
tores para la producción de proteína recombinante,
que genera animales de alto valor agregado; 24,45,46 en
este contexto, se observa que la potencialidad de estas
poblaciones celulares, su habilidad para derivar en
diferentes líneas celulares y su supervivencia in vitro,
son ventajas aprovechables.41,44,71
No obstante, la investigación que se genera no es
suficiente porque cada estudio abre nuevas incóg-
nitas, de manera que el uso de la tecnología de las
células madre aún es limitado porque las respuestas
dependen de variables aún no ponderadas; 6,15,18 por
lo tanto, el conocimiento de los mecanismos a través
de los cuales estas células logran mantener sus carac-
terísticas, contribuirá a hacer un uso apropiado de
ellas.71 Al respecto, estudios recientes indican que el
ambiente bioquímico del entorno celular es impor-
tante en el comportamiento de estas células, 2,14,17
porque in vivo el entorno del nicho celular y las vías de
señalización orientan la biodistribución y los cambios
en estas células.12,14
Asimismo, es importante notar que hasta ahora
sólo se ha logrado aislar líneas celulares troncoem-
brionarias humanas y de ratón, con la ventaja de ser
pluripotentes, pero con las consecuentes limitaciones
de especie; 16 en el caso de las células somáticas multi-
potentes, los estudios son aún más incipientes, porque
estas células son difíciles de encontrar en los tejidos y
el cultivo es complejo; sin embargo, se adhieren muy
bien a los tejidos y migran rápidamente in vivo.17,30
Las investigaciones más recientes sobre la obten-
ción y mantenimiento de las células progenitoras se
encaminan al mejoramiento en los protocolos com-
pletos y en los medios de cultivo que permitirán tener
resultados consistentes en derivación.15
El futuro en el desarrollo de métodos para la
manipulación de las células troncoembrionarias plu-
ripotentes y de las células somáticas multipotentes,
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25. Kramer J, Hegert C, Guan K, Wobus AM, Muller PK,
dependerá de la obtención de más información básica
acerca de los mecanismos de acción y cambios bioquí-
micos precisos, de los marcadores y de los complejos
ligando-receptor que inducen a la diferenciación, des-
diferenciación, transdiferenciación y no diferencia-
ción.43,71
Esta tecnología celular y molecular en el ámbito
médico representa una alternativa para el tratamiento
de enfermedades de difícil pronóstico y manejo, mien-
tras que para los animales de granja es otra alternativa
de producción.45,46
El valor de las células progenitoras radica en su
versatilidad como intermediarias en diagnóstico y
terapia, así como en la producción de recombinantes
de alto valor proteínico.44
Implicaciones
Las células progenitoras embrionarias y somáticas,
por sus características y propiedades, posibilitan su
uso en un amplio rango de aplicaciones, cuyas impli-
caciones serían: a) mayor disponibilidad de recursos
terapéuticos; b) aprovechamiento de la tecnología y de
los mecanismos naturales del funcionamiento celular,
para hacer reprogramación artificial; c) posibilidad
de tratamiento para un mayor número de enfermos
con padecimientos difíciles de manejar; d) implíci-
tamente se genera mayor dependencia de la alta tec-
nología.
No se puede dejar de mencionar la potencialidad
teratogénica de estos procesos, porque aún no se han
establecido con claridad las condiciones necesarias
para la diferenciación celular específica.11,71
Además, el alto costo de las inversiones en tiempo,
dinero y capital humano implican una limitante para
el avance en esta área del conocimiento.
No obstante el vertiginoso desarrollo en este campo
de investigación y el gran número de estudios que se
realizan, aún falta la validación de la tecnología que
se asocia con las células progenitoras en muchas áreas
de incidencia, pero amerita el esfuerzo, los posibles
beneficios no sólo en el área médica, sino en el área
de producción animal.
Agradecimientos
Se agradece el invaluable y generoso apoyo de la
Biblioteca del Instituto de Biotecnología de la Univer-
sidad Nacional Autónoma de México, en Cuernavaca,
Morelos, México; en especial a la bibliotecóloga Zaida
Penton, por su ayuda en la localización y adquisición
de gran parte del material hemerográfico de este tra-
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