DINÁMICA DE LA POLIMERASA EN LA HORQUILLA DE

REPLICACIÓN DE ADN EUCARIOTA

Lecciones aprendidas de los estudios de replicación SV40

Las tres principales polimerasas de ADN replicativas en el núcleo son Pol α, Pol δ y
Pol ε.
Los estudios de replicación de la molécula viral de ADN SV40 proporcionaron
información acerca de la elongación celular porque solo el iniciador de replicación y
las funciones helicasa están codificadas por el antígeno tumoral viral grande y para
todos los demás factores de elongación como el ADN polimerasa, depende de la
célula huésped.
Surgió un modelo donde la actividad de la primasa del complejo Pol α-primasa inicia
la síntesis de ADN con el iniciador ARN ~ 10 nt alargándose por su actividad de
polimerasa por otro ~ 20 nt.
La carga de PCNA hace un cambio a Pol δ para mayor elongación del fragmento de
Okasaki, esta misma Pol continua la elongación hasta que el ADN viral quede
replicado y en la cadena rezagada un cambio entre Pol α y Pol δ asegura la
iniciación y elongación de los fragmentos de Okazaki.
En este sistema no hubo necesidad de una tercera ADN polimerasa.
Más adelante en 1990, la Pol ε se identificó en levadura como una proteína de
replicación esencial, junto con la Pol δ, como una segunda ADN polimerasa de
corrección de pruebas y presentaron un reclamo legítimo de ser una polimerasa
replicativa.

División del trabajo en el tenedor

Para la maquinaria de filamentos rezagados, la colocación de hebra de Pol δ se ha
deducido de las interacciones genéticas entre mutantes de polimerasa y otros genes
de replicación de cadena rezagada pero no ha funcionado para la cadena principal
debido a la falta de conocimiento firme sobre las proteínas que ocupan
específicamente esta cadena.
Una nueva clase de mutantes de polimerasa del sitio activo tienen una actividad
normal por lo que llevan a cabo la corrección de pruebas y no muestran defectos de
replicación in vitro.
Por lo tanto, el Pol2 mutante pol2-M644G se mostró en un análisis de fidelidad en
el que las plantillas de ADN monocatenario se replicaron in vitro y se puntuaron en
Escherichia coli para tener una tasa de mutación AT → TA incrementada que resultó
completamente de una mayor tasa de plantilla dT -incorporación errónea de dTMP
y no de la plantilla errónea dA-dAMP de plantilla recíproca.
Y lo que quedaba por hacer era repetir este análisis in vitro en la cepa pol2-M644G.
El gen URA3, se clocó en dirección hacia delante o hacia atrás cerca del origen
ARS306. La cual es inequívocamente conocida. Y al final se determinaron los
espectros de mutación, interpretando que las mutaciones AT → TA tenían como
resultado incorporaciones erróneas de plantilla dT-dTMP basadas en el análisis in
vitro previo.
Aunque una interpretación de este estudio corrobora a Pol ε como la principal
enzima de cadena, también es consistente con un modelo en el que Pol ε lleva a
cabo una síntesis de cadena líder mucho más limitada y aún no hay una síntesis de
cadena rezagada.

Se realizó un análisis con un mutante mutador asimétrico pol3-L612M que aumentó

específicamente la velocidad del emparejamiento erróneo de dT-dGMP pero no el
desapareamiento dA-dCMP complementario en un análisis de fidelidad in vitro.
Este fue totalmente coherente donde Pol δ llevó a cabo retraso y no la replicación
de la cadena principal, sugiriendo el modelo de horquilla de consenso simple que
se muestra en la figura 1

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