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FORO CLINICO CIBER-BBN EN OFTALMOLOGIA

Modelos experimentales de patologías oculares.


Madrid, 27 de Junio de 2013
El ojo como modelo investigación

Estructura ideal para el estudio y terapia de enfermedades


• Fácilmente extraible para su estudio.
• Se puede cultivar fácilmente. Registros electrofisiológicos.
• Forma cámara de cultivo aislada.
• Estructuras laminadas en capas.
• La retina es una lámina de tejido nervioso perteneciente al SN.
• Tipos neuronales y circuitos neuronales conocidos.
• Núcleo de cerebro.
• Neurotransmisores, receptores, canales ect similares al SNC.
• Registos funcionales in vivo. Electrorretinogramas.
• Obtener fofografías in vivo. OCT. Tomografía óptica de coherencia.
• Estudios de agudeza visual.
• Estudios de comportamiento.
Modelos de Patología oculares

1)Terapia celular. Terapia con células madre.


2)Terapia génica en modelos animales con enfermedades hereditarias.
Terapia optogenética.
3) Nuevos de fármacos antioxidantes, antiapoptóticas, antiinflamatorias.
4) Evaluación de fármacos en cultivos en diferentes líneas celulares de neuronas
retinianas. Ensayo de nuevos fármacos.
5) Vías de administración ocular. Administración tópica, sistémicas (intraperitoneal,
intravenosa), intravitreal y subretiniana.
6) Terapia de neovascularización, corneal coroideas retiniana. anti-VEGF.

Patologías
1) Glaucoma
2) Retinopatía diabética
3) Degeneración macular
4) Miopia
5) Desprendimiento de retina
6) Patologías corneales
Instituto Universitario de Oftalmobiología Aplicada
(IOBA)
Modelos animales:
Vitreoretinopatía proliferante
Trasplante autologo de EPR-coroides
Endoftalmitis
Insuficiencia límbica
Modelos celulares:

Cultivo organotípico de retina neural


Cultivo de células de EPR
Cultivo de células madre retinianas
Línea celular de epitelio corneal humano (HCE)
Universidad de Alcalá, Madrid (Hospital General de Guadalajara)

1)Modelo de degeneración retiniana (Rd10)


2) Modelo de acromatopsia

3) Degeneración de la retina por inyección


intraocular de aminoácidos exitatórios.

30 mM NMDA + 10 mM KA
Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Óptica y Optometría
Universidad Complutense de Madrid

1) Acondroplasia (RCJ3.1C5.18 cell line)


2) Alzheimer's disease (B6C3-Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo/J)
3) Glaucoma *Glaucoma (Rabbit non-pigmented ciliary epithelium cell line)
4) Infección ocular (Inmortalized Human Corneal Limbal Epithelial Cells (HCLEC))
Infección ocular (Immortalized Human Conjunctival Epithelial Cell Lines (HCjE))
5) Células ganglionares de la retina (RGC) degeneración (DBA/2J) Glaucoma (línea
celular de ganglionares)
6) Cicatrización corneal

Glaucoma

CÉLULAS DE EPITELIO
CORNEAL HUMANO
INMORTALIZADAS
Experimental Ophthalmology, University of Murcia.

a)
a)

b) b)
16- Selective axotomy-induced RGC death by
microcrush lesion of optic nerve
15- Selective
17- Selective axotomy-induced RGC death by
motoneuron
crush lesion of optic nerve
13- Transient retinal degeneration by
18- Selective axotomy-induced RGC death by
ischemia by selective 14- Transient retinal injection of substances
intraocular transection of the optic nerve
ligature of the ischemia by increasing in oculomotor muscles
ophthalmic vessels the intraocular pressure

O
P S 21- Laser-induced ocular
N
N C hypertension
O
T

19- Regenerative responses of injured


neurons in the central nervous system
19-through peripheral
Regenerative nerve grafts
responses of injured
20- Degenerative retinal
neurons in the central nervous system
conditions by inherited retinal 22- Light-induced retinal degeneration
through peripheral nerve grafts
dystrophy (RCS and P23H-1)
MODELOS DE EXPERIMENTACIÓN DEL LABORATORIO DE
OFTALMOLOGÍA DE LA UNIVERSIDAD DE NAVARRA

Modelos en rata /ratón

•Modelo de neovascularización coroidea


inducida por laser (rata/ratón)

•Modelo de neovascularización corneal (rata/ratón)

•Modelo de ratón doble KO CFH/APOE


Factor H (CFH) y Apolipoproteina E (apoE)
deficiencia (C57BL6/J)
Grupo de Neurofisiología
Facultad de Medicina, Universitat de Barcelona Técnicas y modelos
Institut d’Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer (IDIBAPS)

Cultivos celulares:
Marcaje y cultivo de neuronas sensoriales corneales (TG, DRG)
Otras células oculares: línea TM5 y HTM3 cel. trabeculares, cultivos primarios céulas TM

Modelos animales de patología ocular (cobaya, rata, ratón)

Modelo de ojo seco


Modelo de lesión corneal
Modelo de conjuntivitis alérgica

Exorbital
lacrimal
gland
Retrograde 24 h
22 days
labeling with
6 days Culture Patch clamp
FM1-43 recording

Nerve terminals
recording

Medidas de presión intraocular en rata, ratón (tonometría)

Test de comportamiento en modelos animales:

Blinking test: respuestas a estímulos dolorosos en la superficie corneal


Sensibilidad mecánica corneal: Von Frey
Sensibilidad dolorosa a estímulos térmicos y químicos (calor, frio, ácido)
HIPERTENSIÓN OCULAR

•Roedores: Fotocoagulación venas limbares - epiesclerales


•Roedores: inyección microesférulas en cámara anterior
•Conejos: Inyección alfa-quimotripsina en cámara anterior
•Modelo experimental GLAUCOMA Valores en mgr/ml
Grupo 0
CONTROL
Grupo 1
HIPERLIPÉMICOS

Colesterol 43 ± 15.8 1753 ± 303

ISQUEMIA CORIO-RETINIANA INDUCIDA POR Triglicéridos 167 ± 46.4 352 ± 109.6

HIPERCOLESTEROLEMIA Fosfolípidos

Colesterol VLDL
68 ± 18

16 ± 18
576 ± 84.6

1130 ± 310

Triglicéridos VLDL 97 ± 23.1 274 ± 104.1

• Conejos: 8 meses dieta estándar enriquecida con colesterol (0,5%


Fosfolípidos VLDL 20.3 ± 7 332 ± 84.9

Colesterol HDL 10 ± 2.1 28.6 ± 4.8

• Estudios patología isqúemica retiniana Fosfolípidos HDL 30 ± 2 42 ± 4.8

Colesterol LDL 6.3 ± 2 259 ± 27.2

Fosfolípidos LDL 7.3 ± 1.4 100 ± 8.3

CULTIVOS ORGANOTÍPICOS

• Explantes RETINA ratas albinas


• Estudios enfermedades / estudios de toxicidad

RETINOPATIA DIABÉTICA

• Ratas diábeticas con streptozotocina (STZ) (60 mg/kg, i.p.)


• Estudios de retinopatía diabética
UNIVERSIDAD DE VALENCIA y HOSP. UNIV. Y POLITÉCNICO LA
FE, VALENCIA

1) Modelo Experimental de Glaucoma Primario de


ángulo abierto en la rata (inyección intracamerular
seriada de Ácido Hialurónico).Morfología,
Inmunohistoquímica (Junto a la U. de Murcia y U.
de Alicante), y metabolómica mediante
espectometría por Resonancia Magnética Nuclear
(U. de Valencia) y elecctrofisiología (U. de
Valencia)

2) Estudio de las características de la lágrima en los


DELFINES. Análisis Redox, Metabolómica y Lipidómica
Junto al Prof. Jose M Benítez del Castillo (HCUSC)

3) Modelo experimental de ratón transgénico que


sobre-expresa el gen p53. Estudio del ciclo celular.
Proliferacion, Apoptosis, Angiogénesis Junto al
Prof. Manuel Serrano (CNIO). En colaboración
José M Ramírez Sebastián (IIORC)
MODELOS EXPERIMENTALES DE LA UNIVERSIDAD DE ALICANTE

 Modelos animales de degeneración retiniana:


Modelos genéticos: Terapia celular y genética
• Rata RCS mutación en el epitelio pigmentario
• Rata P23H y S334 mutación en Fotorreceptores
• Ratón rd10 mutación en Fotorreceptores

Glaucoma:
• Ratón DBA/2J
• Inyección intraocular
Retinopatía diabética:
• Inducido por Streptozotocina.
• Knockout para el factor de crecimiento de la insulina (IGF-1)
• Knockout para el receptor del glucagón (Gcgr)
Dry eye

Cornea
-Ojo seco- Inervación.
-Neovascularización corneal Líneas celulares disponibles:
Anti-VEGF 661W: Línea celular de conos.
R28: Línea celular retiniana.
RGC5: Línea celular ganglionares
FORO CLINICO CIBER-BBN EN OFTALMOLOGIA

Gracias por su atención