= 10 - ‘TEORIA DE CULTIVO CONTINU. DEFINICION DE CRECIMIENTO HICROBIANO. fn algunos ststenas biolésleos, el crecimiento puede ser definido como un cre intento ordenado de todos los const!tuyentes quinicos to en 1a masa total no necesarlanente un organismo. Un tnerenen- 16 un reflejo del ereciniento; pero en organls ros unicelulares, el crecimiento dé cono resultado un aumento en el nimero de célu-~ les Individuals. EDION OE CRECIMIENTO HICROBLANO.. Para seguir el curto del crecimiento celular de microorganisnos, es necesarfo- hacer mediciones cuantitativas. El crecimiento puede ter medido en término de dos di. ferentes parinetros; la nase celular y el nGnero de células, anbos tipos son express dos sobre un voltnen fijo relative de medio de cultivo. ‘cunVa 9g eREEIMIENTO.~ Cuando se inocula un medio de nutrientes con una pequena canticad nisnos, éstos erecerin y se reproductrén, pudiendo distingulrse entonces una suce- cl6n de fases caracterizadas por varlactones de la velocidad de crecimiento con res= pecto al tlenpo (Fig.3) y son los sigurentes: de Adaptaclén.- En atts prinera fase Ia valocidad de erectalento es ~ ula. 2.- Fase de Aceleracién, Sucede un aumento en la velocidad de crecimfento 3. Fase Exponencial. La velocidad de crecimiento se mantiene constante. 4.= Fase de Retardacién, Disminucién de le velocidad de crecimiento. 5.> Fase Estacionarl 6.- Fase de Uective, La velocidad de crecimienty ex neyative. La velocidad de erecintento os nula. La vartectén de 1a velocidad de crectnfento se obtiene caleulando Tas pensien, tes de cada una de estas fases. F1G.3.- Fases de-~ creciniento-ta cur~ set tea ios 330 (e"Curve denis rei, al ba: Varfactén de ta £5 Jmiento. Las lfneas ~ punteadas vert eales fndican el Tinite de Densidad beetsue CINETICA DEL CRECIMIENTO CELULAR EN LA FASE EXPONENCIAL Y TIERPO Dé ooBtADo. 1d de crecimiento de un cultivo de microorsantsnos, representa 1a velocidad total de toda 1a serie de reacclones, en virtud de las cusles se sinte tlzan Yas substanctas celuleres. Cast todas las reacciones son enziniticas y pro beblenente reversibles. La veloctdad de cada reaccln consi derada por separado, depende de la concentracién de los reactantes (Hetabolites) y de 1 catallzadoras (Ensimae). ‘cantidad de ~ Durante fase exponencial, 1a velocidad de crecimiento as constante, obte nléndose razonablemente un estado estable, donde las concentrectones relatlvas de los metabolites y enzinas permanecen constantes. De hecho es la Gnica fase del ch. lo de crecimiento donde 1a propledades de las c&lules pueden constderarse) cons tontes y Ia velocicad de crecimiento exponencial, puede ter descrita por un vilor numérico que corresponde a la velocidad total del sistema en el estado estaciona~ lo. las relactones matensticas que determinan la fase exponenciel fueron deriva dos por Honod (1942) y se obtienen de una manera més fScIl algebraicanente por ~ andlisis del crecimiento en proceso Internl tente, Considerando un tempo de doblado t de 1 bblonasa Infelal Xo, en una uni== dad volundtrica de medio de cultivo y deseribtendo algebralcanente que [A tlenpo 0 1a concentracién de microorganisms es Xo A tore tg. Ieconcenractn de lervorgenianon om 20 - A tempo 2ty 12 concentractén de sicroorgantsnos es 2x0 1A. tleepo nt Ta concentractén de microorgantsnos es 2°%o. De aguf que 19 concentractén final de microorganisms X es: X= % 2" a Esta relacién solo es vél fa en la fase exponenclal de crecimiento. n repre, Senta el ninero de generaciones de! microorganisao en un tiempo Le ecunetén @ Expresa el tiempo pronedie de doblago.y. representa el tiempo de generacién ~ pronedio de cualquier cultive.Rearreglando 1a ecuacién (1) a partir ge 1a ecuactén (2) tenenos my Por conversién de 1a ecuactén (3) 9 forma logarftmica resulta: ta. nz w eo TRIS ls ecuscién (4) es 1a férmula fundanental para el céleulo del tiempo de do- bledo a pertir de dot mediciones experiments! por. 5, del aumento de blonasa en un tien Le expresién logarteaica de le ecuscién (3) es 1a siguiente: tote © tnd tne 6) a jy es minions en dtehe Fe Substituyendo en (5) resulta 1a sigulente ecuacién: tok =Me + Inky © 2 el ines cono se observa, esta ecuactén es 1a de una Ifnea recta, que expr eremento de biomass en un cierto tempo. Graticando 10s valores de £ en 1a abelsa ¥ Ink en la ordenada, se obtiene una Ifnea recta (Fig.4). La pendiente es 1a cons tante AA que determina Ia velocidad de ereciniento de le biomasa en funclén del -~ tempo y es Iamada Velocidad Espectfica de ereciatento. ative de le Veloctdad expectticn de cree ‘tana = veloetdad espectfica de crecimiento igs her veterminacton tovee = tc!El valor 41 puede ser determinado ya sea grificanente como se muestra en la Fig. 4 0 caleulEndota como se establecté con anterioridad, saa = 0.693 ” tat o dicectanente por le ecuactén 6 = Yoh Inky Cy Donde é1 tlenpo tes el Intervalo t-to durante el cual 1a bionase aunenta = del valor de Xq 01 valor x. Ls veloc 0 mlcroorgantsno y medio de cultivo. por eJenplo de 1a capactdad de crecintento ‘externos, como el anblente en que se encuentra el microorganism. 1d espectfica de crecintento (st) es caracterfstica para cada tipo princtpalmente de'factores Internos, ~ Blcroorgantsnos y también de Taccores- «<-Honod. (1942). establecté. una relacién.que.determing 1 dependencis ée 18 velocl, dad espectfica de crecimiento, sobre Ia concentracién de un substrato Ieitante § = (uno de los nutrientes del sedio de cultivo, que actua como limitante) y propuso = = una gxpresién natendtica aproximede de ji en funcién de la concentracion e Subs svoresin es en eae 9 12 de Michael is-Henten para reacciones enzinéticas Esta ecusclén es anbloge # solo que 1a de Honod le obtuvo enpiricanente, mientras que Te ecuacién de Michaels cuacién (9) extablece que la velociad ~ spect ica de crecimiento mixine Henten tlene sus fundanentos tebricos. Le espectfica de erecialento es Igual’ Te velocié (PA nax), multtpliceda por la fracefén an cuyo nunerador est& la concentracién ée- los valores de la concentractén de subs- substrato y en el denominador Ta sume de trato y 1a constante de saturactén (ks). Una gréfica de la ecuactén (9) Fig. § nos dard una curva Jiendo 1a estotota de la curva al valor de nex. nest ea correspon be fees telecibn entre : velociaa Sgtsen i sre ceett 3 as ff = t fh Concentractén de Substrato, SCuando conparanos 1a Fig. 5 y su equivalente para reacclones enzinétices, el orfgen de 1a curva se desplaza avanzando en direcclén positiva sobre el eje que merce Ta concentracién de substrate. Le couse del desplazanlento se debe © (que se necesita solo una concentraclén minine de substrato para el menteninien, to de las eflulas . SI se alcanza clerto valor de 1a concentracién de substrato, et posible = ‘entonces el crecimiento y le reproduccién del mleroorgantseo. La constante de saturacién Ks se define con la concentracin de substrs to a la cual la velocidad espectfica de creciniento, es un medio de 1a veloc! dad espectfica mixina. COBTENCION DE LAS ECUACIONES FUNDAMENTALES PARA EL CULTIVO CONTINUO DE MICROORGA, NISHOS EN UN FERMENTADOR AGITADO DE UNA SOLA ETAPA, lor fundanentos de la teorfa matenstica que contribuye al control de los~ prosesos de Fermentacién continua fueron establecidos por Honod (1950), Novick= y S21lard (1950). las relactones matensticas determinando las condictones que gobler nan los procesos continuos homogeneos para la producctén de masa celular, parti, remot. da-las-ecuecionascinéeleasy:obteniaas para focesos lavermicentes, por'= 1o tanto, regresarenos le ecuactén (6). Consideraciones para 1a producclén de blomssa en cultive continuo: wv son yerSolanente: hay-un-nutriente: Himitante-para el: erecinlento Los otros nuteientes estén en excero. cSiviar: 2. Way mezclado perfecto en el fernentador, evitando gradlentes de con centeacién de nutrientes y de microorganismos (el volGnen pernanece constante) La merte de microorganismos et précticanente mula, debido a que se trabaja en Ia fase exponencial de creciniento. £1 medio: de cultivo-entras sstéril al fermentador.(Vibre de mlcroorga~ nlsmes)5.+ La energie necesaria pare el anteniniento de microorganisnos es baja. 6 ho hay formetén de product Convirtiendo 1a Ecusctén (6) a Ia forma exponencial obtenenos: xe ae (10) La eevactén en esta forma s¢ conoce como Ta ecuacién de crecimiento natu- ral, St la derivanos con respecto al tlenpo, obtendrenos Ie relacién determinan- do el increnento Instanténeo de aleroorganisnos durante el cultivo. ox. Baw an Como se mencioné anterlormente, 1a velocidad espectfice de crecintento se rsantien en un nivel constante cerca de J max , © una concentractén sufictente- ‘meite alte del substrate Meltante: Estar puede ser obtentda, haciendo une ~~ curva de erecinlento curva te observerd » auf tiempo de haberse Infciado el creciniento, jes constan- 1 microorgantsno, previa al cultivo continuo. De dtche Si se desea establecer un proceso contindo, se trabaja primero con culttvo Interaftente y una vez que se alcanza el tlempo en que # es igual une cons tante, en este preciso monento se empleza a agregar al fermentador medio de cul~ tive fresco, Ibre de microorgantsme y de una manera continua y se drena un Tl, Jo Igual al de entrada y el cual Mevaré biomasa y nutrientes. La siguiente figure (Fig.6), muestra un dlagrana de flujo del proceso en ~ continuo, con todas sus varlables. e x0 x s 8 oo ‘vevet constante Fig.6.- Diagrana ge flujo de medio: XeConcentractén celular; SoeConcentr Taictal?’seconcentracién de substrate limitante en el femen snen de nedio.en el fermentador. jn de Substrato Vimitante or; Ve VoleUn balance de materia sobre las eélulas dentro del fermentedor serfa el Sig: Entrada de | -| sattde ae] + vetoctded de | Vetoctdad de] = | Acumutactén del (12) elutes Celular | | -Reproducclér | muerte de C8| —| de células deéluias | | Tolar Si expresemos tenenos esta ecuacién (12) en una forme matendtica % a Donde: F = Veloctdad de Flujo X= Concentracién de Células a 1a entrada X= Concentracign de células en el fernentador = Veloctdad espectfica de creciatento ee Velocidad espectfice de muerte V = Vollnen de Ifquido en el fernentador De tes coneideraciones anteriores formal De aqut que sieplificando ta ecuacién queda: Pepa ow 7 Ef Png siper ¥ DB se Te conoce como velocidad ‘Al lvctén y tlene unldades de hy por 10 tanto cenerot que aap as) 2 Va velocidad de di lucia. Este simple postulado stenpre debe ser respetado en cultivo continuo de ~ una etapa. Otro témmino importante es la velocidad de dilucién, que es Ia velocidad de canbio del medio de cultivo dentro del fermentador. 1 conocer Ta relacién entre ereciniente rare une teorta completa, es necese celular y-t0 uti Iizach6n-del.substrato-linftante. Ordinarianente 1a relacién se.~ ‘express como “constante de productividaé" deftnida como:Ys "28% = Peso de eélulas formadas (16) “Ge” Peso de Substrate utTTTe6¢o Le constderactén mis siaple es.Yq Igual 2 una constante, permaneciendo asf en la fase exponencial de un cultive Intermitente, De las ecuaciones (11) y. (16) oe an stance de materla sobre el substrate Hsitante dentro del fernentador: (ses ae) ~ [sartda do )= [consumo de\- fubstrato - Substrato\=(Reumtacts (stud Suoserato ) | Substrator | /requerido \ [para for-| \se Substrat pera. creel bento Expresendo Ta ecuactén (18) en forna matenitica tenemos: Foo - fs = Ax v oma - ym = gv (19) oe fond $0 = Concentracién Infclal de substrate 5 = Concentracién de substrato en el fermentodor m= Conficiente de ranteninfento “tg X= Espresién para Ye formacién de producto ractones (5 y 6) y en estado estactonario 0 F Gyr 8) = Aa Xe Eis (°9) be tas ecuactones (14) ¥ (15) Ke Wl -8) () Substltuyendo 1a ecuactén (15) en ta ecueetén (9) ke 0 Foard an fApoyndonos en las ecuaciones (20) y (21), nos es posible predecir las concentractones de células y de substrate para un clerto valor experimental de la velocidad de dituctén Dy a una concentracién de substrate Sp entr do al Fermentador. Lot MConstantes de Crecintento” 1 mleroorganisne Mans Ke Y que pueden determinar experinentalmente en cultives Intermitentet, para nuestro eno on perticuler ae suponen conoct dos. Es evidente de 1a ecuactén (21) que Ta concentractén del substrato 1 rnitante en el fernentador en el estado estacionario, es Independiente de 1a con centracién de entrada So y de Te concentracién de células. Pare un tipo dado de atcroorgantmos y un medio de cultivo en particu lar el valor de $ se determina Gnicanente por la velocidad de dilucién D. Esto~ explice la establlidad y las propiedades autorreguladoras de ta célula. La velo, cldad de é'luctén D determina 1a concentractén de substrate Sy tanblén fia Ja velocidad de erecintento en un valor Igual, stendo ésta una condicién Indis~ pensable para operar en el estado estable, La Ecusctén (21) expresada en la Fig. 7, indice que en east todo el = rrango posible de velocidades de dilucién, el valor de $ es muy bajo en el est do estable, (puesto que el substrato So que entra al fernentador se consune ~ ‘casi totalmente); Unicanente 2 velocidades de diluctén préxinas a le velocidad de dllucién erftica, el substrato no utilizado aparece en le corrlente de 5: da del fernentador. [Al punto en el cuat Ta veloctdad de diluctén es Igual la veloc espectfice de crectnlento méxino, se le denonina Velocidad de diluctén erftica- be Por consigulente, 1a concentractén de células, permanece @ altos nive, les, sobre todo el rango de veloct dades de diluctén, decayendo repent inanente ~ cerca de 1a velocidad de dilucién erftlee (Esto lo predice 1e ecuactén (20) y ~ se observe en la Fig. 7. Lo que sucede es que las células estén siendo "Lave cerca de Dc, 1a concentractén decrece en el medio de cultivo, y por lo tanto, ~ ‘endo utlIlzado, entonces tlende o ausentar el Substrato 5 no es1 a & + 4 Concentracién de microorcent sos Concentracién de Substrate = estado estable; 9/1 Fig.7.- La Fig. tracién de eélulas por 1a veloct Esta curva tlene un mixing a 1a velocids ey 4 4 5 > e 4 2 3! ‘ u ft tk Da De Relactones de estado estacionario en un cultivo continuo de una = etapa (teorfa =). Los dg las concantracinnes de subst tos eélulas y productividad a diferentes velocidades de dlluctons lados de les ecuactones (20) y (21) para.un microorsents nem Thy Concentractén de Células Productividad Celular cross Concentracién de Substrate (7) muestra adenis 1 rendiniento celular (el producto de ta concen, sé de dIluctén DX) como una funcién de la velo- de attuctén Dy , te cual seré ~ 4a velocidad de at1ueién éptina para 1a produccién de eélulas. OBTENCION DE LAS ECUACIONES FUNDAMENTALES PARA CULTIVO CONTIHUO EN UN FERE EWTADOR BF UNA ETAPA CON RECIRCULACION, Durante el cultivo continuo en el Fernentador agitado « veces, une parte ~ ‘de: 1os mlcroorganisnos saliendo del fermentador ex recireulada- (feed back), pare ‘auentar Ta concentracién de células, dentro del recipiente y elevar ta produc~ tlvidad bajo 1s concentrac' reas condiciones. En este Sistema (Fig. 8), el medio de cultivo- substrate HInitente $2 ent 4} fermentedor @ un flujo estables 6n de cBlulas y substrato Vimitante dentro del tanque son Xy $ respectIvanente, Le corrlente de sallda pasa a une centrifuga continua, la cual= retorne al fermentador, una suspensién de eélulas concentradas (Concentractén ~ (x1) @ une velocidad de flujostF, slendo € el factor de concentractén - (Ce stempre>) y of ( stenpre4t) 1a razéo volunétries de rectreulectén (razéo de Flujo recireulado @ flujo de medio entrande). A través de $ uw otra sallda, ~ 1a centrifuga de $ carga a una velocidad de flujo F , el efluente final, en el ~ cual 1a concentractén de cElulas X es més beja que en el fermentador. Fig, 8. Fermentador de una etaps con recireviactén fe células. Fe Velocidad de flujo de entrada de medion (A), Ge AF) = Velocidad de flujo sa- = Nendo del fementador; afe Velocidad de~ Flujo de recireulactén dela centrifuge al Fementadors Le velocidad de flujo entrando al fermentador, por To tanto es (1 +a) F y la Fracctén de e6lulas recirculadas es célules rect reul - Fementedor = £0) =_C. (22) endo del Fermentador — (Wa)FX 14Considerando as concentr 1s centrffuga podenos escribir: Tones y velocidedes de flujo dentro y fuera de Soncentracién de Célules en el efluente = "2. (1% 4- ac) (23) Concentractén de Células en et Fermentador Ky Balance de material de las célylas dentro del fermentador: fect reutactén)-(satida }+/Vetoctded de)-/Vetoct | de células (de cé-/'| Renraduectn) (morse de estates, Iutas / (de'cétutes/ \Tutes Expresindolo en forma matendtica tenenos: Fhe + AFEX) = FTE DK) HK -eOHY = VaR, ry cas Asuniendo es mismas consideraciones que se hicieron para rectrculacién y en estado estacionario 1 balance sin =~ E1760 = 0, 19 ecuacin (28 queda: aro = FC 4) X= 0 x 2 (iea~ ae) (5) onde om F v De ta ecuacién 25 se concluye que (1+ a= elckiy M0 y en el Fermentador == sin rectreulactén =D. Sustituyendo el valor de j4 por la ecuaciéa de Honod Mrax (s_)« (4 «-#0) Ses (ie ws ve (26) 8 el substratolinitante dentro del fermentador. heci reutactn\-f satida | /consuno \ (Requerimiente\- (subst £0 /Acumutactén ‘ée substrate |] de subsl/ de suns \|ze substrate: |) para For: \ (de susscee trato | trato = |loara mantent=|/eacién de para cre lntento producto siento Expresindole en forma matenstica resulta: FS0 40S - FCIseC)S = ALY =MMH,V = OK Ve V de an Ts we 7 Asumlendo las mismas consideraciones que se hicieron pot el substrate 1 2ae ftante en el fermentador sin rectreula 16n y que en estado estable ¢s/dt =0, He ono ae Substituyendo 1a ecuactén (25) en 1a ecuactén (28) + Ye (50 +5) (2s) (1a-a0) Be tas ecuactones (28) y (28) obtenenos ' % <¥8 (50-5) (0 Estes ecuactones son graftcagas en 1a Fig, 9, Junto con la productivided = e células x2 5 para comparacién se gratican tanblén las curvas de concentra clén de eélulas y de productivided de células del sistema sin rectrculactn, ~ (1ieas punteadas) Fig. 9 .- Relaclones de estado estable en un cuitivo continuo de una con reeireulactén (teértca). tse curves aon gréficas de ins ecuactones (26)-(28) py ‘iemo con tes siguientes constantes de cresintencor e'0.5; Kew 0.2 9/1; y Som 10 g/l. Curves continua cireulactén volunétries d= 0.5; factor de concentrs lulas G92.0) . Curvas punteedas! sin recireulacién: Curva A= Concentracién de Célules en el fermentador Curva B = Rendimlento Ci Curva € = Concentracién Curva D = Concantracién cen el efluente Stn recireulactén én. Curva E = Rendistento sin rectreutae Conparando el conportentento de lor dos sistenss, se ve que 1a adiclén de ‘ca (a) permite user velocidedes de flujo més altas, y (6) que incre onte tromendanente Ta productivided de eélulas. Estos efectos de recireulactén de explican por la nés alta concentracién de células que se eantlenen dentro de! fermentador, cuyo contentdo puede uttTIzar més répido el substrato y asf entrar un flujo nis alto de medio de cultivo # éste.[BALANCE DE MICROORGANISHOS INDESEABLES DURANTE EL PROCESO OE CULTIVO ovr. Existen dos postbIlidades Ja presencia de mlcroorganisnos Indeseables en el fermentador durante los procesos continuos. Uno es por contaminactén con = CCONTAMINACION DEL CULTIVO CONTINUO POR OTROS MICROORCANISHOS.~ Un proceso a largo plazo, estaré sujetoa mucho mayor grado de Infecctén que un proceso intermitente de corta duractén. La prevencién de la Infeccién es par= te de Ia técnica del proceso y de 1a utilizectén del equipo adecuado para tal =~ propstlto, Sin enbargo e1 cultivo continuo en algunos catos es capaz de elininar 1a = ‘steroflora contaminante, una vez que est dentro del fermentador. __ Las condiciones para pueden ser derivados de rele hve Womogeneo de una etapa. Viminar tor microorge Ism0$ contaninantes del tanque nes matensticas, hacléndose 2 un culelve conth, Se considera que los alcroorganisnos contaminantes penetran al fermentador fen un cierto tiempo, stendo X 1a concentracién de lat células ortginales y su ve Tocided espectfice de crecimiento/s 0, La concentracin de contaminante es K, = su velocidad espectfica de crecimiento Je. La penetracién de éstos, précti mente representa la Inoculaclén del fernentador con un nuevo microorganismo. De= ‘gut se concluye que se esté trabajando con un proceso continuo, pudléndose en: tonces hacer un balance total de microorganisms en el tanque aplicande 1a ecua- lén (13) € tnpontendo 135 mtsnas restricciones que para el cultivo de una sol ‘etapa, nos queda Ia siguiente ecuacién: © He Xe ~ Me Gn A uns velo 16 de dilucién 0 '>Mmax, 10s microorgantsmos conteminantes = son Mlavados" © eliminados fuera del fermentador. EI proceto continuo en este caso elimina por sf mismo a los microorgantsmos contaninantes.- 3 - A Me max>D los mlcroorganismos. contaninantes son retenidos en el fermen tador y su concentractén crece hasta que se obtlene un estado estacionarto donde Me =D, £1 establecimiento de este equllibrio dinéaico se sigue de Ta capacidad ‘autoreguladora del proceso continuo. Supontendo que los microorgan!smos contan!~ nantes uttltcen el mismo substrato como Tas eélulas originales y $1 Me max>Hmax yy esd Ks entomcas Ta concentracién de substrato disminute con un aumento de concentractén de ey Ie velocidad de crecimiento de 1a poblectén orlginal seré menor de ~ acuerdo 2 Tas ecuactones (21) y (9). £1 equtt ‘quena que D. foM= De al yee ngs pe= Lo anterior ye se ha deductdo, 0 se8 que hay un completo lavado de ateroor- @ gentomos en el tengue, en tal caso Gnicemente los mlcroorganienoe contantnantas= permanecen en el fermentador por clerto tlempo. FORHACION DE MUTANTES EN CULTIVO CONTINUO. EI segundo cambio del estado estable en un culttvo continuo es debido a 1a formacién de autantes. La mutacién se considera que ocurre en un cultlvo continue Womogeneo de = = una etapa. Le veloel dat de mutectén g , es In fraccién de Ta poblactén total = de eélulas sujetes @ sutactén durante una generaclén. El ninero de generaciones or hora es deéa por Te relaclén B/In2. Dos procesos ocurren en el fernentedor. gy ror un lado nuevas mutantes son formndas 2 la velocidad g_y por otro lado Tas reutantes fornadas se multiplican a una velocidad de crecinlento Hx. Le concent clén de mutentes en el fermentador se designs cone Ym. Por lo tanto se puede anunir el estableciniento dinéaico del siguiente equl brio en el fermentador. (‘seme 9 + (erectatento de) =(satta “)- rosmlscib 60 rutanter ssutantes (rutantes, J ( mutantes +m kon - + 0 vox, Pom ¥ PX ta. co) Rearreglando podemos escribir:+ 26 : SI Integranos y si la cantidad original de mutantes se designe como_tin ~ ex gine Xm m=) + “We = co) He Hae DO) +. OK an De Ta ecuacién (33) se concluye que el cultivo original es reemplazado por rutante st la veloctdad de crecimiento Mm D, de aqul quem -D>0, y X tlende 2 Infinito, slmultsneanente con crecimiento de @ . SI Mn ef Igual que a Ia velocidad de diluctén D , entonces 1a concentracién de mutantes Xm au-~ rrenta a la velocidad IIneal DX. Sippqes més pequeta que Ta velocldad= de ailuctén, entonces Xm se "acerca al velor ITmite de 1a exprestén dee aR ay Esta relacln puede explearse para calcular la concentracién de mutantes fen el tanque, slempre y cuando se conozea el valor constante de So