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METODOLOGÍA Y MATERIALES:

MEDIO LAURIL SULFATO TRIPTOSA: Medio recomendado por A.P.H.A. para


detección y recuento de coliformes en aguas, aguas residuales y alimentos. Medio rico en
nutrientes, que permite un rápido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la
lactosa, aún de los fermentadores lentos. La triptosa es la fuente de nitrógeno, vitaminas,
minerales y aminoácidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, las sales de
fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Es
un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora
acompañante. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, éste último se
evidencia al utilizar las campanas Durham.

MÉTODO NORTEAMERICANO: Comprende tres etapas analíticas: presuntiva,


confirmatoria y complementaria. Por medio de este método es posible determinar la
presencia de coliformes y coliformes termotolerantes.
CALDO SOYA TRIPTICASA: La tripteína y la peptona de soya aportan nutrientes ricos
en péptidos, aminoácidos libres, bases púricas y pirimídicas, minerales y vitaminas. La
peptona de soya aporta carbohidratos que estimulan el crecimiento de muchos
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El fosfato dipotásico
otorga capacidad buffer y la glucosa es la fuente de energía.

1. Homogeneizado de la muestra:
La muestra utilizada fue agua embotellada, al tratarse de un producto líquido se
homogeniza previo a realizar la disolución, y con la ayuda de una pipeta estéril se tomó
una alícuota de 10 ml de la muestra. Luego se transfiere a los 90 mL de diluyente que se
encuentran en el Erlenmeyer (en este caso soya tripticasa) obteniendo la dilución 10-1 y
se homogeniza durante cinco minutos.
2. Realizar las diluciones:
Para realizar las diluciones se utilizan 4 tubos con 9 mL de diluyente cada uno (soya
tripticasa), se procede a transferir 1 ml de la solución 10-1 a un tubo rotulado como
dilución 10-2, se agita el tubo y se procede a tomar 1 ml de este tubo transfiriendo a un
tubo rotulado obteniendo la disolución 10-3.
Siembra:
Se utiliza la técnica del NMP (Número Más Probable). Se tienen 9 tubos en total con 10
ml de caldo LAURIL SULFATO TRIPTOSA en cada uno de ellos, se dividen en tres
series y con ayuda de las pipetas utilizadas con anterioridad, se coloca 1 ml de la solución
10-1 en cada uno de los tres tubos de la primera serie, luego se coloca 1 ml de la solución
10-2 en cada uno de los tres tubos de la segunda serie y al final 1 ml de la solución 10-3 en
cada uno de los tres tubos de la tercera serie. Se debe considerar que se homogeneizó cada
tubo luego de cada transferencia.

3. Incubación:
Incubar los tubos a 35C por un lapso de 24 horas, si no hay presencia de gas se procede
a incubar los tubos nuevamente 24 horas, terminando la prueba presuntiva a las 48 horas.
Si el resultado es negativo se termina el análisis sin la necesidad de realizar la prueba
confirmatoria y complementaria.

4. Resultados:
- Prueba presuntiva: positiva o negativa
- Prueba confirmatoria: los presuntivamente positivos se siembran en caldo lactosa
bilis al 2% verde brillante, y se incuban los tubos a 35OC por 48 horas. Se tiene
prueba confirmatoria para coliformes y coliformes termotolerantes.
- Prueba complementaria: se puede realizar la siembra en el agar MacConkey.