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Inotuzumab ozogamicin(Besponsa™, by Pfizer)

報告成員:B04403004 周詩耘、B04403005 陳頡、B04403013 鄭宇揚、B04403047 魏梓媛、


B04403053 薛文惠、B04B01016 吳宇涵

Introduction and Structure of Inotuzumab ozogamicin


Inotuzumab ozogamicin(CMC-544,商品名 BESPONSA)是由 Pfizer(輝瑞)的子公司,
Wyeth(惠氏)所研發出的 Antibody-drug conjugates(抗體藥物複合體,後稱 ADC)抗癌
藥物。並於 2017 年 8 月 17 日由美國食品藥品監督管理局(FDA)核可上市。用以治療患
有復發(relapsed)或難治性(refractory)前體 B 細胞急性淋巴性白血病(B-ALL,B-cell
precursor acute lymphoblastic leukemia)的患者。1,2

Inotuzumab ozogamicin(如上圖3),身為一個 ADC,其基本組成可以分為幾個部份:


1. Antibody:Humanized IgG4 單株抗體,G544,可辨識人類 B 細胞表面的跨膜蛋白
CD22(Siglec-2)4,為本藥物之所以有著 high specificity 的原因。
2. Drug:NAc ɣ-calicheamicin DMH(N-acetyl ɣ-calicheamicin 1, 2-dimethyl hydrazine
,為胞毒性抗生素 Calicheamicin 的衍生物,提供了 potent cytotoxicity。
dichloride)
其比傳統化療藥物更為強效,但也有著更強的毒性。5,6
3. Linker:Acetyl butyrate linker,並含有 hydrazone group。一端和 Antibody 的 lysine
residues 連接,另一邊連接胞毒性物質。在生理 pH 值(7.4)下穩定,進入到細胞內並
遇到 lysosomes 之後,會因 pH 值下降而被水解,釋出 NAc ɣ-calicheamicin DMH。7
通常一個 antibody 上面會以 linker 接有 2 至 4 個 NAc ɣ-calicheamicin DMH。
以上介紹的 3 個部份在藥物中各自扮演了不同的角色,也影響了 Inotuzumab ozogamicin 這
個藥物的 pharmaceutical properties。
Mechanism of Inotuzumab ozogamicin

首先 Inotuzumab ozogamicin 以其結構中的 IgG4 antibody 端與 B cell 表面的 CD22 以專一性


結合接上,兩者結合的 complex 利用胞吞作用進入到 B cell 當中(internalization)8,並形
成 endosome。而這些含有 CD22-ADC complex 的 endosome 會與目標細胞中作為清除外來
物角色的 lysosome 融合在一起,使得整體內部的 pH 值從原先的 6.5 因此而降至 4.5,使得
含有 hydrazone group 的 linker 在此偏酸性的環境下被水解9,原先和 IgG4 antibody 連接在
一起的 NAc ɣ-calicheamicin DMH 便被釋放到細胞質當中(上圖為 mechanism 圖解10)。
此時的 calicheamicin 仍未具活性,需經目標細胞內的 GSH 進行親核基取代還原 disulfide
bond,並 rearrangement 成 bi-radical 的形式才具有活性11。一旦穿透進細胞核之後,便會和
DNA 的次溝槽(minor groove,也就是雙螺旋結構中開口較小的凹槽)中的特定序列結
合,使 DNA 的雙股螺旋斷裂12,造成不可修復的損傷,並使 B 細胞凋亡。
結合前面提到的 structure,從藥物中個別結構來看整體作用可以發現造成細胞凋亡的原因
是 GSH 活化 calicheamicin 而引發的後續胞毒性反應;IgG4 antibody 則是透過專一性結合的
方式,將 NAc ɣ-calicheamicin DMH 運送到呈現腫瘤相關抗原的目標細胞裏頭,和細胞凋亡
完全沒有任何關係。故 Inotuzumab ozogamicin 雖有著 antibody,但依其 mechanism 應被歸
為標靶性的化學治療藥物而非免疫治療藥物。

Factors related to pharmaceutical properties of Inotuzumab ozogamicin


Antibody 與 Cytotoxic agent 兩者共同作用分別提升藥物的 selectivity 和 potency。接著將以
SAR 及 Mechanism 為基礎討論 Inotuzumab ozogamicin 這個藥物其之所以如此設計的原因。
1. 選擇 CD22 作為藥物標靶的原因
除了成熟 B cell 之外,CD22 不存在於人體其他的細胞表面。實驗並發現在 B-ALL 患
者的惡性 B cell 上,CD22 的密度遠大於正常的 B cell13,14,故使用 IgG4 能提供良好的
selectivity,並有效減少正常 B cell 及一般組織暴露於 calicheamicin 當中,藉此降低
toxicity。惡性 B cell 表面通常以 CD19 及 CD22 兩種表面抗原最為顯著15,故都可作為
專一性結合的 antigen,有實驗就以作用於不同 antigen 的兩種免疫毒素
FMC63(Fv)-PE38(targeting CD19)和 RFB4(Fv)-PE38(BL22,targeting CD22)證實
兩者的差距16。實驗的結果發現,於多種淋巴瘤細胞系中,雖然 CD19 的表面密度為
CD22 的 4~9 倍,但在 affinity 相近的情況下,BL22 的 activity 卻比 FMC63(Fv)-PE38
還高上許多,可以知道 antigen 的表面密度不是決定 activity 的因素。進一步的研究顯
示,CD22 與受體結合後 internalization 的效率較 CD19 為高17,使其成為一個更佳的治
療 target。且當細胞膜上之 CD22 與受體結合後,會引發細胞內的 CD22 快速移動到細
胞膜上與額外的 antibody 結合18,有助於目標細胞內 ADC 濃度的累積。
Inotuzumab ozogamicin 結構裡的 G544 便是利用了 CD22 高度特定的呈現於惡性 B cell
表面以及快速 internalization 的特性,提升 selectivity、使 therapeutic index 有效提高。
2. NAc ɣ-calicheamicin DMH 結構的改進及其角色
從前面的 mechanism 中可以知道 calicheamicin 為整體 activity 的來源,本藥物進一步將
其和 amino sugar 進行 acetylation 並引進了 disulfide bond,這樣做的目的在於穩定整體
的結構並提升藥物安定性。NAc ɣ-calicheamicin DMH 雖然胞毒性較原生性的
calicheamicin 弱,但相較於傳統的胞毒性物質(如 mitomycin C、doxorubicin 等),
NAc ɣ-calicheamicin 還是較為 potent。19因此 NAc ɣ-calicheamicin 為一個 toxicity 較
低,但比起傳統化療藥物較 potent 的選擇。
3. AcBut linker 適時適地的分解及其他作用
Inotuzumab ozogamicin 的 linker 有著兩個作用(bifunctional linker),都和 functional
group 有關。其中一個是前面提到的 hydrazone group,進入到細胞內因 pH 值下降而被
hydrolysis 並釋放出主要作用的胞毒性物質;另一個則是在 disulfide bond 旁的兩個
methyl group20,用以穩定 disulfide bond 避免胞毒性物質的提前釋放,以降低對其他組
織的 side effect。在新藥開發的階段,曾有實驗用同樣可被 hydrolysis 的 amide group 來
代替 hydrazone group7,所得到的 potency 遠低於原先的結構,甚至難以對 B-ALL 有所
療效,可以看出穩定 disulfide bond 是不夠的,還得要有一個適當有效率可供 hydrolysis
的媒介。因此即使有著 antibody 的專一性結合與 potent 的胞毒性媒介,linker 的選擇與
設計對於後續的反應依舊有著重要的影響,作為 target 的細胞種類不同,linker 的選擇
也會有些許不同,linker 的設計常常也是新藥的專利所在。
4. Antibody 所攜帶的胞毒性媒介的當量數
由於一個 G544 antibody 能同時攜帶多個 NAc ɣ-calicheamicin,故能夠以較低劑量的藥
物而達到相同當量 NAc ɣ-calicheamicin 的效用。
5. Inotuzumab ozogamicin 整體的 effect 的探討
由 FDA 發布的資料中,可以見得 Inotuzumab ozogamicin 對於 B-ALL 患者症狀的緩解
能力較傳統化療藥物來的高,其總體存活率也有著顯著的差異。21也有實驗比較了單一
G544 antibody、calicheamicin、和 Inotuzumab ozogamicin(CMC-544)抑制腫瘤細胞的
能力。可以發現單一 calicheamicin 抑或是同時使用 G544 antibody 和 calicheamicin 都沒
有顯著的 activity22。可能原因在於 IgG4 antibody 雖然有著最長的 circulating half-life,
但幾乎沒有 complement fixation,以致於失去了 complement dependent cytotoxicity 和
antibody dependent cellular cytotoxicity 這兩個內生性的免疫作用23。
以上幾個設計都使得 Inotuzumab ozogamicin 更為一理想的抗 B-ALL 藥物。假如我們欲改善
藥效或設計新藥,也可以由基本結構著手。例如修飾 Antibody 結構或尋找與 CD22 親和力
更高的抗體,或是找尋比 CD22 更具代表性的 antigen;胞毒性抗生素可以由其它同樣有胞
殺作用的物質所取代24;也可以修飾或尋找針對目標細胞更有效率被 hydrolysis 釋出胞毒性
抗生素的 linker。

Summary
做為一個典型的 ADC 抗癌藥物,Inotuzumab ozogamicin 有著 antibody 中最長 half life 的
IgG4 antibody 以延長藥物在體內的時間,減少投藥次數,而且藉由此方法提升 specificity。
並結合胞毒性抗生素以彌補 IgG4 antibody 在免疫層面的不足,只利用其作為傳遞胞毒性物
質 NAc ɣ-calicheamicin 的媒介。除了不需經層層活化免疫機制這個過程,不走一般免疫反
應機制也可提高藥物作用的 selectivity,降低對於其他細胞之傷害。雖然仍有些因 NAc ɣ-
calicheamicin 帶來的 side effect,但透過單一 antibody 結合多個胞毒性物質以降低用藥劑量
及前文不斷提及的 specificity、high potency 的藥理性質,其 side effect 已經遠小於非標靶性
的傳統化療抗癌藥物。整體來看,Inotuzumab ozogamicin 可說是汲取了各個結構的長處以
有著比傳統藥物更高的 therapeutic index 與更為顯著的 effect。未來關於 ADC 的相關研究與
發展想必也會越來越多。
References

1
Advani A, Coiffier B, Czuczman MS, et al:Safety, pharmacokinetics, and preliminary clinicalactivity of inotuzumab ozogamicin,
a novel immunoconjugate for the treatment of B-cell non-Hodgkin’s lymphoma: Results of a phase I study. J Clin Oncol 28:2085-
2093, 2010
2
Di Joseph JF, Dougher MM, Kalyandrug LB,et al: Antitumor efficacy of a combination of CMC-544 (inotuzumab ozogamicin), a
CD22-targeted cytotoxic immunoconjugate of calicheamicin, and rituximab against non-Hodgkin’s B-cell lymphoma.Clin Cancer
Res 12:242-249, 2006
3
BorisShor, Hans-Peter Gerber, PujaSapra, et al:Preclinical and clinical development of inotuzumab-ozogamicin in hematological
malignancies, Molecular Immunology, Volume 67, Issue 2, Part A, October 2015, Pages 107-116
4
O';Reilly MK, Paulson JC. Siglecs as targets for therapy in immune-cell-mediated disease. Trends Pharmacol Sci 2009;30:240–8
5
Thorson JS, Sievers EL, Ahlert J, et al: Understanding and exploiting nature’s chemical arsenal:The past, present and future of
calicheamicin research.Cur Pharm Des 6:1841-1879, 2000
6
Ricart AD: Antibody-drug conjugates of calicheamicin derivative: Gemtuzumab ozogamicin and inotuzumab ozogamicin. Clin
Cancer Res 17:6417-6427, 2011
7
P.R. Hamann, L.M. Hinman, I. Hollander, C.F. Beyer, D. Lindh, R. Holcomb, W. Hallett, H.R. Tsou, J. Upeslacis, D. Shochat, et
al. Gemtuzumab ozogamicin, a potent and selective anti-CD33 antibody-calicheamicin conjugate for treatment of acute myeloid
leukemia Bioconjug. Chem., 13 (2002), pp. 47-58
8
Pastan I, Hassan R, FitzGerald DJ, Kreitman RJ. Immunotoxin treatment of cancer. Annu Rev Med. 2007;58:221–37.
9
Hamann PR, Hinman LM, Hollander I, Beyer CF, Lindh D, Holcomb R, et al. Gemtuzumab ozogamicin, a potent and selective
anti-CD33 antibody-calicheamicin conjugate for treatment of acute myeloid leukemia. Bioconjug Chem 2002;13:47–58.
10
Zein N, Sinha AM, McGahren WJ, Ellestad GA. Calicheamicin gamma 1I: an antitumor antibiotic that cleaves double-stranded
DNA site specifically. Science 1988;240:1198–201.
11
G. Bellomo, M. Vairetti, L. Stivala, F. Mirabelli, P. Richelmi, S. Orrenius, Demonstration of nuclear compartmentalization of
glutathione in hepatocytes, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 89 (1992), pp. 4412-4416
12
J. Drak, N. Iwasawa, S. Danishefsky, D.M. Crothers, The carbohydrate domain of calicheamicin gamma I1 determines its
sequence specificity for DNA cleavage, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 88 (1991), pp. 7464-7468
13
Raponi S, De Propris MS, Intoppa S, et al: Flow cytometric study of potential target antigens (CD19, CD20, CD22, CD33) for
antibody-based immunotherapy in acute lymphoblastic leukemia: Analysis of 52 cases. Leuk Lymphoma 52:1098-1107,2011
14
Wayne AS, Kreitman RJ, Findley HW, et al:Anti-CD22 immunotoxin RFB4 (dsFv)-PE38 (BL22) for CD22-positive
hematologic malignancies of childhood: Preclinical studies and phase I clinical trial. Clin Cancer Res 16:1894-1903, 2010
15
Du X, Beers R, Fitzgerald DJ, et al: Differential cellular internalization of anti-CD19 and -CD22 immunotoxins results in
different cytotoxic activity.Cancer Res 68:6300-6305, 2008
16
Xing Du, Richard Beers, David J. FitzGerald and Ira Pastan, Differential Cellular Internalization of Anti-CD19 and -CD22
Immunotoxins Results in Different Cytotoxic Activity, Experimental Therapeutics, Molecular Targets, and Chemical Biology,
(2008), Volume 68, Issue 15
17
J.F. de Vries, C.M. Zwaan, M. De Bie, J.S. Voerman, M.L. den Boer, J.J. van Dongen, V.H. van der Velden, The novel
calicheamicin-conjugated CD22 antibody inotuzumab ozogamicin (CMC-544) effectively kills primary pediatric acute
lymphoblastic leukemia cells Leukemia, 26 (2012), pp. 255-264
18
Shan D, Constitutive endocytosis and degradation of CD22 by human B cells, Press OW (1995) J Immunol, May 1;
154(9):4466-75.
19
J.F. Di Joseph, M.M. Dougher, D.Y. Evans, B.B. Zhou, N.K. Damle, Preclinical anti-tumor activity of antibody-targeted
chemotherapy with CMC-544 (inotuzumab ozogamicin), a CD22-specific immunoconjugate of calicheamicin, compared with non-
targeted combination chemotherapy with CVP or CHOP, Cancer Chemother. Pharmacol., 67 (2011), pp. 741-749
20
P.R. Hamann, L.M. Hinman, C.F. Beyer, D. Lindh, J. Upeslacis, D.A. Flowers, I. Bernstein, An anti-CD33 antibody-
calicheamicin conjugate for treatment of acute myeloid leukemia. Choice of linker, Bioconjug. Chem., 13 (2002), pp. 40-46
21
From FDA Professional Drug Information of Inotuzumab ozogamicin
22
John F. Di Joseph, Douglas C. Armellino, Erwin R. Boghaert, Kiran Khandke, et al:Antibody-targeted chemotherapy with
CMC-544: a CD22-targeted immunoconjugate of calicheamicin for the treatment of B-lymphoid malignancies, Blood 2004, pp.
1807-1814
23
Haining WN, Cardoso AA, Keczkemethy HL,et al: Failure to define window of time for autologous tumor vaccination in
patients with newly diagnosedor relapsed acute lymphoblastic leukemia.Exp Hematol 33:286-294, 2005
24
M. Beeram, I.E. Krop, H.A. Burris, S.R. Girish, W. Yu, M.W. Lu, S.N. Holden, S. Modi, A phase 1 study of weekly dosing of
trastuzumab emtansine (T-DM1) in patients with advanced human epidermal growth factor 2-positive breast cancer, Cancer, 118
(2012), pp. 5733-5740