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SHIGELLA

Morfología.
Shigella es un género de bacterias con forma de bacilo Gram negativas, inmóviles, no
formadoras de esporas e incapaces de fermentar la lactosa, que pueden ocasionar diarrea en
los seres humanos. Fue descubierto hace 115 años por el científico japonés Kiyoshi Shiga, de
quien tomó su nombre.
Patogenia.
La infección por Shigella, típicamente comienza por contaminación fecal-oral. Dependiendo de
la edad y la condición del hospedador, puede que solo sea suficiente alrededor de 200
organismos para causar una infección. La Shigella causa disentería, resultando en destrucción
de las células epiteliales de la mucosa intestinal a nivel del ciego y el recto. Algunas cepas
producen una endotoxina y la toxina Shiga, similar a la verotoxina de la E. coli O157:H7.2 Tanto
la Shiga toxina, como la verotoxina están involucradas en el síndrome urémico hemolítico.

La Shigella invade su hospedador penetrando las células epiteliales del intestino delgado.
Usando un sistema de secreción específico, la bacteria inyecta una proteína llamada Ipa, en la
célula intestinal, lo que subsecuentemente causa lisis de las membranas vacuolares. Utiliza un
mecanismo que le provee de motilidad en la que se dispara una polimerización de actina en la
célula intestinal, como un chorro de propulsión lo haría en un cohete, contagiando una célula
después de la otra.
Identificación.
Una manera de identificar a la bacteria Shigella es mediante su aislamiento en medios de cultivo.
Para un aislamiento óptimo de este microorganismo, deben utilizarse dos medios selectivos
diferentes: uno de siembra para propósitos generales de baja selectividad, como el AMC (Agar
MacConkey), y otro de agar más selectivo, como es el agar DXL (Agar desoxicolato xilosa lisina).
No se debe utilizar agar SS (agar salmonella-Shigella), porque frecuentemente inhibe el
crecimiento de S. dysenteriae serotipo 1. (Bopp. Et al. 2004)
Después de obtener las muestras, los medios selectivos se pueden inocular utiliza hisopos o el
asa de siembra. Cuando se inoculan las muestras a una placa para aislamiento, la superficie
completa de la placa de agar debe ser utilizada para aumentar las oportunidades de obtener
colonias bien aisladas.
Los medios de alta selectividad (por ejemplo, DXL) requieren, cuando se estrían, más
solapamiento que los medios de baja selectividad (por ejemplo, AMC), por lo cual debe prestarse
especial atención al estriado. Después de la incubación, registre la cantidad y el tipo de
crecimiento (por ejemplo, si fermenta o no fermenta la lactosa ya que con esta bacteria no existe
fermentación). En AMC las colonias de Shigella aparecen convexas, incoloras, de
aproximadamente 2–3 mm de diámetro, aunque las colonias de S. dysenteriae 1 pueden ser más
pequeñas. Las colonias de Shigella en agar DXL son de color rosado a rojo, transparentes, lisas,
de aproximadamente 1 a 2 mm de diámetro, aunque las colonias de agar DXL de S. dysenteriae
1 son frecuentemente diminutas. Seleccione las colonias sospechosas de las placas de AMC y
agar DXL e inocúlelas en medios de pesquisaje apropiados, tales como agar hierro de Kligler
(AHK) o agar hierro triple azúcar (AHTA).
Para el AHK o el AHTA Seleccione cuidadosamente al menos una colonia bien aislada de cada
tipo en cada tipo de placa de las que fueron estriadas para aislamiento, con una aguja de
inoculación toque ligeramente solo el centro de la colonia sin tocar el resto de la colonia ni la
superficie de la placa porque si lo hace, puede tomar contaminantes que podrían estar en la
superficie del agar.

ENTEROPATOGENA E. COLI

Morfología.
Las bacterias del género E. coli son Gram-negativas, tienen forma de barra y pertenecen a la
familia Enterobacteria. Esta bacteria es un habitante común de los intestinos de todos los
animales, incluyendo el de los humanos. Escherichia coli (E. coli) es quizás el organismo
procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria unicelular que se
encuentra generalmente en los intestinos animales y por ende en las aguas negras. Ésta y otras
bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce
vitaminas B y K. Los serotipos se asocian con virulencia. Una tipificación incluye la determinación
de los antígenos somáticos (O), capsulares (K), flagelares (H) y de fimbria (F). Es un bacilo que
reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaeróbico facultativo, móvil
por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la
glucosa y la lactosa
Patogenia.
La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extra intestinales generalmente
graves, tales como infecciones del aparato excretor, vías urinarias, cistitis, Uretritis, meningitis,
peritonitis, mastitis, septicemia y neumonía Gram-negativa.
Identificación.
 Agar TSI: Es un medio de cultivo diferencial basado en la capacidad de los bacilos gram
negativos de fermentar carbohidratos, de producir H2S y producir gas.
 Se observa en el tubo el pico y el fondo ácido, hay 1% de positividad para la
producción de H2S en cepas de E. coli.
 Prueba de orto-nitrofenil-β-galactopiranósido (ONPG): Esta prueba detecta la
producción de la enzima β-galactosidasa y permite diferenciar organismos de lenta
utilización de la lactosa de aquellos que no la utilizan. La enzima β-galactosidasa es
codificada por el gen lacZ del operón lactosa, el cual es inducido en presencia de
lactosa y ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias hayan sido
crecidas en un medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey.
 E. coli es positiva para esta prueba
 Prueba de movilidad: Esta prueba determina la movilidad de los bacilos fermentadores.
 95% de positividad para cepas de E. coli.

 Prueba de gelatinasa: Determina la producción de la enzima gelatinasa, la cual produce


la hidrólisis de la gelatina.
 E. coli es negativa para esta prueba

 Prueba de rojo de metilo (RM): Identifica especies de bacterias que producen ácidos a
partir de glucosa.
 99% de positividad para cepas de E. coli.
 Prueba de Voges – Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la producción de acetil-
metilcarbinol (acetoína), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2
atmosférico. El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia
de α-naftol y creatinina. La producción de acetoína es una vía alternativa del metabolismo
del ácido pirúvico, donde se producen cantidades pequeñas de ácidos mixtos que pueden
ser insuficientes para dar una prueba RM positiva. Por este motivo, la mayoría de las
especies de la familia Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa.
 esta prueba es negativa para cepas de E. coli.
 Prueba de fenilalanina desaminasa: La determinación de la enzima fenilalanina
desaminasa es útil para diferenciar inicialmente a las especies
de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gram negativos.
 0% de positividad para cepas de E. coli.
• Producción de descarboxilasas y dehidrolasas de aminoácidos: Muchas especies
bacterianas poseen enzimas que tienen la capacidad de descarboxilar o de hidrolizar
aminoácidos específicos entre ellos la arginina, lisina, ornitina en pruebas específicas, liberando
animas de reacción alcalina y CO2.
• 17% de positividad para Arginina.
• 90% de positividad para Lisina.
• 65% de positividad para Ornitina.
• Prueba de Ureasa: Los microorganismos que hidrolizan la urea a través de la enzima
ureasa, liberan amoníaco lo cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea de
Christensen permite la detección de menores cantidades de amoníaco para aquellos
microorganismos que producen menores cantidades de ureasa se evalúan con este método.
• 1% de positividad para esta prueba en E. coli.
• Producción de Indol: El indol es uno de los productos de la degradación del aminoácido
triptofano. Para su detección la bacteria es cultivada en caldo triptona y posteriormente se utiliza
el reactivo de Ehrlich, el cual es más sensible que el reactivo de Kovacs cuando se estudian
bacilos no fermentadores o anaerobios cuya producción de indol es mínima.
• 98% de positividad para esta prueba en E. coli.

 Utilización de citrato: Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo de


utilizar el citrato de sodio como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento.
 1% de positividad para cepas de E. coli.
 Utilización de malonato: Esta prueba determina la capacidad de algunas bacterias de
utilizar el malonato como fuente de carbono y energía.
 95% de positividad para cepas de E. coli.
 Prueba de reducción de nitratos: Determina la capacidad de reducir el nitrato a nitrito o
gas. Es útil en la identificación de la familia Enterobacteriaceae y en la diferenciación de
especies de muchos otros grupos de microorganismos.
 E. coli es negativa para esta prueba
 Prueba de fermentación de carbohidratos: Se recomienda el uso del caldo de base
púrpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una concentración del 1%
para la determinación de la fermentación de carbohidratos y alcoholes para especies de
la familia Enterobacteriaceae.
 D-Sorbitol 94% de positividad.

 Lactosa 95% de positividad.

 Sacarosa 50% de positividad.

 D-Manitol 98% de positividad.


PRUEBA DEL ROJO DE METILO
FUNDAMENTO.- Comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los
productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa, y vencer la capacidad
amortiguadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la producción de ácido (determinación
del ph); algunos organismos producen más ácidos que otros.
La prueba del rojo de metilo (RM) se basa en el empleo de un indicador del pH, rojo de metilo,
para determinar la concentración de iones hidrogeno (pH) presente cuando un organismo
fermenta la glucosa. La concentración de hidrogeniones depende de la relación gaseosa (CO2
y H2), que a su vez es un índice de los diferentes ciclos del metabolismo de la glucosa que
muestran diversos organismos. Las diferentes formas de fermentación se deben a las
variaciones en las enzimas vinculadas con el metabolismo del ácido pirúvico que se encuentran
en el organismo.

IDENTIFICACIÓN.- A) Ayuda a la diferenciación entre los géneros


1. Escherichis coli (+) del enterobacter aerogenes (-)
Enterobacter clocae (-) y klebsiella (-).
2. Especies de yersinia (+) de otros bacilos no entéricos Gramnegativos (-).
B) Ayuda a la diferenciación de la listeria monocytogenes (+).

PROCEDIMIENTO.
Se utiliza caldo rojo de metilo voges-proskauer.
1. Inocular los tubos de caldo rojo de metilo voges-proskauer previamente preparado por
rotación, con cultivo puro de 18 a 24 hrs.
2. Incubar a 37° C por 24 hrs o 48 hrs prolongar si es necesario.
3. Después de la incubación añadir 5 gotas de la solución de rojo de metilo. Anotar
observaciones.
INTERPRETACION.
POSITIVA. El cultivo es lo suficientemente acido como para permitir que el reactivo rojo de
metilo mantenga un definido color rojo (pH 4.4) en la superficie del medio.

NEGATIVA. Color amarillo (pH 6) en la superficie del medio

RETARDADA. Color anaranjado, continuar la incubación hasta 4 días y repetir la prueba.

SOLUCION ROJO DE METILO.

1. Disolver 0.1 g de rojo de metilo en 300 ml de alcohol etílico 95°.


2. Agregar 200 ml de agua destilada a la mezcla alcohol-indicador.