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Mecanismos de transporte y permeabilidad celular

C ada célula de tu organismo está rodeada por una mem- brana plasmática que la separa del líquido intersticial. La función principal de la membrana plasmática es permitir el intercambio selectivo de moléculas entre la

célula y el líquido intersticial, de modo que la célula pueda tomar las sustancias que necesita mientras que elimina las que no necesita. Entre estas sustancias se incluyen gases, ta- les como oxígeno y dióxido de carbono, iones y moléculas más grandes tales como glucosa, aminoácidos, ácidos grasos y vitaminas. Las moléculas se mueven a través de la membrana plas- mática pasiva o activamente. En el transporte activo, las mo- léculas se mueven a través de la membrana plasmática consu- miendo energía celular (ATP). En el transporte pasivo, las moléculas pasan a través de la membrana plasmática sin gasto de energía. Los ejemplos del transporte pasivo son la difusión simple, la ósmosis y la difusión facilitada. La difusión sim- ple es el movimiento espontáneo de moléculas a través de la bicapa lipídica de una membrana biológica desde un área con una concentración más alta hasta otra con una concentración más baja. La ósmosis es la difusión de agua a través de una membrana semipermeable. La difusión facilitada es el mo- vimiento de moléculas a través de una membrana selectiva- mente permeable con la ayuda de proteínas especializadas de transporte incrustadas dentro de la membrana. En este ejercicio, simularemos cada uno de estos meca- nismos de transporte celular. Comenzaremos examinando la difusión simple.

Difusión simple

Todas las moléculas, sean de sólidos, líquidos o gases, están en continuo movimiento o vibración. Si hay un aumento en la temperatura, las moléculas se moverán más rápidamente. Las moléculas que se mueven chocan entre sí, cambiando su di- rección. Así, el movimiento de moléculas se dice que es «al azar». Si uno vertiera una gota de colorante líquido alimenti- cio en un recipiente grande de agua, las moléculas del colo- rante se moverían aleatoriamente hasta que su concentración fuera igual en todo el recipiente. Las moléculas alcanzarían el equilibrio a través del proceso de difusión. Definimos la difu- sión como el movimiento de moléculas de un lugar a otro como resultado de su movimiento térmico al azar. La difu- sión simple es la difusión a través de la bicapa lipídica de una membrana biológica. La velocidad a la cual una molécula se mueve a través de una membrana depende en parte de la masa, o peso molecu- lar, de la molécula. Cuanto más grande es la masa, más lenta-

e j e r c i c i o 1
e j e r c i c i o
1

Objetivos

1. Entender la función de permeabilidad selectiva de la membrana plasmática.

2. Poder describir los diversos mecanismos por los cuales las moléculas pueden cruzar pasivamente la membrana plasmática.

3. Poder describir los diversos mecanismos por los cuales las moléculas son transportadas activa- mente a través de la membrana plasmática.

4. Entender las diferencias entre los mecanismos de transporte de la membrana con y sin gasto de energía metabólica.

5. Definir transporte pasivo, transporte activo, di- fusión simple, difusión facilitada, ósmosis, bomba de solutos, hipotónico, isotónico e hiper- tónico.

mente difundirá la molécula. Normalmente, la velocidad a la que una sustancia difunde a través de la membrana puede ser determinada midiendo la velocidad a la cual su concentración en un lado de la membrana se acerca a la concentración de la sustancia en el otro lado de la membrana. La magnitud del movimiento neto a través de la membrana, o flujo (F), es pro- porcional a la diferencia de concentración entre los dos lados de la membrana (C o C i ), a su área superficial (A) y a su constante de permeabilidad (k p ):

F k p A(C o C i )

Las sustancias no polares difundirán con bastante rapi- dez a través de una membrana. La razón es que estas sustan- cias se disolverán en las regiones no polares de la membrana —regiones que están ocupadas por cadenas de ácidos grasos de fosfolípidos de membrana. Los gases, tales como el oxí- geno y el dióxido de carbono, los esteroides y los ácidos gra- sos son las principales moléculas no polares que difundirán rápidamente a través de una membrana. Por el contrario, las sustancias polares tienen una solubi- lidad mucho más baja en los fosfolípidos de membrana. Cier- tos compuestos intermediarios del metabolismo, general- mente, no son capaces de atravesar la membrana, ya que a menudo están ionizados y contienen grupos tales como fos- fato. Así, una vez producidos en la célula no pueden abando- narla incluso si sus concentraciones son más altas dentro que fuera de ella. De esto podemos concluir que la porción de la bi- capa lipídica de la membrana plasmática es la responsable de su selectividad en cuanto al paso de sustancias a través de sí.

2

Ejercicio 1

Los iones, tales como Na y Cl , tienden a difundir con bastante rapidez a través de una membrana. Esto sugiere la implicación de un componente proteico de la membrana —y, de hecho, las proteínas forman los canales que permiten que estos iones pasen de un lado de la membrana al otro. Re- cuerda que los canales son selectivos. Los que permiten pasar

al sodio generalmente no permitirán el paso a otros iones, ta- les como el calcio.

La difusión conducirá a un estado en el cual la concen-

tración de los solutos que difunden es constante en el espacio y el tiempo. La difusión a través de una membrana tiende a un equilibrio donde hay concentraciones iguales de soluto en ambos lados de la membrana. La velocidad de difusión es proporcional al área de la membrana y a la diferencia en la

concentración del soluto a ambos lados de la misma. La pri- mera ley de Fick de la difusión indica

J DA c / x

donde

J

velocidad neta de difusión (g o moles/unidad de tiempo)

D

coeficiente de difusión para el soluto que difunde

A

área de la membrana

c diferencia de concentración a través de la mem- brana x grosor de la membrana

Actividad

1:

Simulando la difusión simple

Sigue las instrucciones de la sección «Primeros pasos» al co- mienzo de este manual para iniciar PhysioEx 6.0. Del menú principal selecciona el primer ejercicio: Mecanismos de Transporte y Permeabilidad Celular (Cell Transport Me- chanisms and Permeability). Verás la pantalla de inicio de la actividad de «Difusión Simple» (Simple Diffusion), mostrada en la Figura 1.1. En esta actividad simularemos el proceso de la difusión a través de la membrana plasmática. Observa los dos recipientes de cristal en la parte superior de la pantalla. Llenarás cada re- cipiente con líquido. Imagina que el recipiente de la derecha representa el interior de una célula, mientras que el de la iz- quierda representa el fluído extracelular (intersticial). Entre los dos recipientes hay un contenedor de membranas en el cual colocarás una de las cuatro membranas de diálisis que se

colocarás una de las cuatro membranas de diálisis que se Figura 1.1 Pantalla de inicio del

Mecanismos de transporte y permeabilidad celular

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encuentran en la parte derecha de la pantalla. Cada una de ellas tiene un «MWCO» diferente que significa «límite de peso mo- lecular». Las moléculas con un peso molecular inferior a este valor pueden atravesar la membrana, mientras que las molécu- las con un peso molecular superior no pueden. Para mover una membrana al contenedor, pulsa sobre ella, arrástrala al conte- nedor de membranas y suelta el botón del ratón —la mem- brana se colocará en su lugar entre los dos recipientes. Debajo de cada uno de los recipientes hay un dosificador de soluciones. Puedes seleccionar cuántos milimoles (mM) de los diferentes solutos (Na /Cl , urea, albúmina o glucosa) deseas dosificar en cada recipiente pulsando los botones ( )

o ( ) debajo del nombre de cada soluto. También puedes do-

sificar agua desionizada en cualquier recipiente pulsando el botón Agua Desionizada (Deionized Water) debajo del reci- piente que desees llenar. Pulsando los botones de Dosificar (Dispense) debajo de cada recipiente se llenarán los recipien- tes con líquido. Pulsando los botones Limpiar (Flush) de- bajo de cada recipiente éstos se vaciarán. En la parte inferior de la pantalla hay un módulo de re- gistro de datos. Después de cada experimento debes guardar tus datos pulsando el botón Guardar Datos (Record Data). Si deseas borrar los datos de cualquier experimento, simple- mente resalta la línea de datos que deseas suprimir y pulsa Borrar Experimento (Delete Run). También puedes impri- mir tus datos pulsando Herramientas (Tools) (en la parte su- perior de la pantalla) y después seleccionando Imprimir Da- tos (Print Data).

1. Con el ratón pulsa sobre la membrana de diálisis con el

MWCO de 20 y arrástrala al contenedor de membranas.

2. Ajusta la concentración de Na /Cl del recipiente de la

izquierda a 9 mM pulsando el botón ( ). Pulsa entonces el botón de Dosificar (Dispense) debajo del recipiente de la iz- quierda para que se llene.

3. Pulsa el botón Agua Desionizada (Deionized Water) de-

bajo del recipiente de la derecha y pulsa Dosificar (Dispense)

debajo del mismo recipiente para que se llene.

4. Fija el Temporizador (Timer) a 60 minutos pulsando el

botón ( ) junto al indicador de tiempo (que estará compri- mido en 60 segundos.)

5. Pulsa el botón Iniciar (Start) para comenzar el experi-

mento. Observa que el contenedor de membranas desciende al interior del equipo. Observa también que el botón Iniciar (Start) cambia ahora a un botón de Pausa (Pause), que pue-

des pulsar para interrumpir el experimento.

6. Cuando el indicador de Tiempo Transcurrido (Elapsed

Time) llega a 60, fíjate en las lecturas de concentración de

cada uno de los recipientes en los indicadores situados junto

a

cada uno de ellos.

7.

Una vez que el indicador de Tiempo Transcurrido (Elap-

sed Time) ha llegado a 60, verás aparecer una caja de diálogo indicando si se ha alcanzado o no el equilibrio.

8. Pulsa Guardar Datos (Record Data) para guardar los

datos de este experiemento.

9. Pulsa los botones Limpiar (Flush) de ambos lados, iz-

quierdo y derecho, para vaciar los recipientes.

10. Devuelve la membrana de diálisis a su lugar inicial pul-

sando sobre ella y arrastrándola al contenedor de membranas.

11. Ahora, repite los pasos 1-10 con cada una de las restantes

membranas de diálisis. Asegúrate de guardar los datos de cada uno de los experimentos. Después de cada experimento, limpia cada uno de los recipientes y devuelve la membrana de diálisis a su lugar.

Ayúdate de la Tabla Periódica de elementos de la pág. 4 de este libro.

¿Cuál es el peso molecular del Na ?

¿Cuál es el peso molecular del Cl ?

¿Qué límite (MWCO) de membrana de diálisis permitió el

paso de ambos iones?

12. Repite este experimento usando cada uno de los solutos

restantes (urea, albúmina y glucosa) en el recipiente de la iz- quierda y agua desionizada en el recipiente de la derecha. Asegúrate de pulsar Guardar Datos (Record Data), limpiar ambos recipientes y sustituir la membrana de diálisis después de cada experimento. Pulsa Herramientas (Tools) ! Impri- mir Datos (Print Data) para imprimir tus datos.

13. Completa la siguiente tabla con tus resultados.

Tabla 1

¿Se produjo difusión?

Membrana (MWCO)

Soluto

20

50

100

200

NaCl

       

Urea

       

Albúmina

       

Glucosa

       

¿Qué materiales difundieron del recipiente de la izquierda al recipiente de la derecha?

¿Cuáles no difundieron?

¿Por qué?

4

Ejercicio 1

Tabla Periódica de elementos

VIIIA

18

Número atómico

** Serie Actínido

* Serie Lantánido

IA

1

2

He

Helio

4.003

10

Ne

Neón

20.18

18

Ar

Argón

39.95

36

Kr

Criptón

83.80

54

Xe

Xenón

131.3

86

Rn

Radón

(222)

 
 

VIIA

17

9

F

Flúor

19.00

17

Cl

Cloro

35.45

35

Br

Bromo

79.90

53

I

Yodo

126.9

85

At

Astato

(210)

VIA

16

8

O

Oxígeno

16.00

16

S

Azufre

32.06

34

Se

Selenio

78.96

52

Te

Teluro

127.6

84

Po

Polonio

(209)

VA

15

7

N

Nitrógeno

14.01

15

P

Fósforo

30.97

33

As

Arsénico

74.92

51

Sb

Antimonio

121.8

83

Bi

Bismuto

209.0

IVA

14

6

C

Carbono

12.01

14

Si

Silicio

28.09

32

Ge

Germanio

72.59

50

Sn

Estaño

118.7

82

Pb

Plomo

207.2

IIIA

13

5

B

Boro

10.81

13

Al

Aluminio

26.98

31

Ga

Galio

69.72

49

In

Indio

114.8

81

Tl

Talio

204.4

 

IIB

12

30

Zn

Cinc

65.38

48

Cd

Cadmio

112.4

80

Hg

Mercurio

200.6

IB

11

29

Cu

Cobre

63.55

47

Ag

Plata

107.9

79

Au

Oro

197.0

10

28

Ni

Níquel

58.70

46

Pd

Paladio

106.4

78

Pt

Platinio

195.1

 

VIIIB

9

27

Co

Cobalto

58.93

45

Rh

Rodio

102.9

77

Ir

Iridio

192.2

109

Mt

Meitnerio

(266)

 

8

26

Fe

Hierro

55.85

44

Ru

Rutenio

101.1

76

Os

Osmio

190.2

108

Hs

Hassio

(265)

Símbolo

Nombre

Peso atómico

VIIB

7

25

Mn

Manganeso

54.94

43

Tc

Tecnecio

(98)

75

Re

Renio

186.2

107

Bh

Bohrio

(262)

 

VIB

6

24

Cr

Cromo

52.0

42

Mo

Molibdeno

95.94

74

W

Volframio

183.9

106

Sg

Seaborgio

(263)

VB

5

23

V

Vanadio

50.94

41

Nb

Niobio

92.91

73

Ta

Tantalio

180.9

105

Db

Dubnio

(262)

IVB

4

22

Ti

Titanio

47.88

40

Zr

Circonio

91.22

72

Hf

Hafnio

178.5

104

Rf

Rutherfordio

(261)

IIIB

3

21

Sc

Escandio

44.96

39

Y

Itrio

88.91

57

La*

Lantano

138.9

89

Ac**

Actinio

(227)

 

IIA

2

4

Be

Berilio

9.012

12

Mg

Magnesio

24.31

20

Ca

Calcio

40.08

38

Sr

Estroncio

87.62

56

Ba

Bario

137.3

88

Ra

Radio

(226)

1

H

Hidrógeno

1.008

3

Li

Litio

6.941

11

Na

Sodio

22.99

19

K

Potasio

39.10

37

Rb

Rubidio

85.47

55

Cs

Cesio

132.9

87

Fr

Francio

(223)

H 1 Hidrógeno 1.008
H 1
Hidrógeno
1.008

71

Lu

Lutecio

175.0

103

Lr

Laurencio

(262)

70

Yb

Iterbio

173.0

102

No

Nobelio

(259)

69

Tm

Tulio

168.9

101

Md

Mendelevio

(258)

68

Er

Erbio

167.3

100

Fm

Fermio

(257)

67

Ho

Holmio

164.9

99

Es

Einstenio

(252)

66

Dy

Disprosio

162.5

98

Cf

Californio

(251)

65

Tb

Terbio

158.9

97

Bk

Berkelio

(247)

64

Gd

Gadolinio

157.3

96

Cm

Curio

(247)

63

Eu

Europio

152.0

95

Am

Americio

(243)

62

Sm

Samario

150.4

94

Pu

Plutonio

(244)

61

Pm

Promecio

(145)

93

Np

Neptunio

(237)

60

Nd

Neodimio

144.2

92

U

Uranio

238.0

59

Pr

Praseodimio

140.9

91

Pa

Protactinio

(231)

58

Ce

Cerio

140.1

90

Th

Torio

232.0

Mecanismo de transporte y permeabilidad celular

5

Actividad

2:

Simulando la diálisis

Ahora, vamos simular un experimento en la máquina de diá- lisis. Estas máquinas se utilizan en los pacientes que han per- dido la función renal. La urea, un producto de degradación de los aminoácidos, debe eliminarse de la sangre del paciente o llegará a ser tóxica para el organismo causando su muerte. Las máquinas de diálisis toman la sangre del paciente y la pa- san a través de una membrana selectivamente permeable para eliminar la urea de la sangre. En un lado de la membrana está la sangre del paciente; en el otro están las soluciones selec- cionados cuidadosamente para mimetizar las concentracio- nes de sustancias tales como Na , K , Ca y HCO 3 que se encuentran en el organismo. Para simular este proceso:

1. Coloca la membrana de diálisis de 200 MWCO en el

contenedor de membranas.

2. Ajusta el recipiente de la izquierda a 10 mM para cada

uno de los cuatro solutos y dosifica. Este recipiente represen- tará la sangre del paciente sometido a diálisis.

3. Ajusta el recipiente de la derecha de la misma manera,

con excepción de la urea que se ajusta a 0 mM —es decir, el recipiente de la derecha no contendrá urea.

4. Ajusta el Temporizador (Timer) a 60 minutos, después

pulsa Iniciar (Start) y espera a que se complete el experi- mento.

¿Qué sucede con la concentración de urea en el recipiente de la izquierda (el paciente)?

¿Por qué ocurre esto?

Normalmente, las máquinas de diálisis se ajustan de forma que la sangre se somete dos veces a difusión y la urea se reduce un 75% en vez del 50%. Además se extrae el exceso de agua del paciente, que no tiene ninguna otra manera de eliminar el ex- ceso de líquido. Los pacientes sometidos a diálisis necesitan hacerse pruebas analíticas para asegurarse de que las concen- traciones de iones se mantienen en los niveles normales.

Difusión facilitada

La difusión simple solo considera para el transporte a través de la membrana algunos iones, pero no todos. Algunas molé- culas, que son demasiado polares para difundir, pueden conseguir atravesar la bicapa lipídica de la membrana plas- mática. Igualmente, algunas moléculas que son demasiado grandes para pasar a través de los canales proteicos consiguen cruzar la membrana. ¿Cómo? El paso de tales moléculas y el

movimiento sin difusión de iones a través de una membrana está mediado por proteínas integrales conocidas como trans- portadores. Los transportadores están incrustados dentro de la membrana plasmática y experimentan un cambio confor- macional que permite que se produzca el transporte. Primero, se une una molécula al sitio receptor de un transportador. Cuando está unida, el transportador cambia de conformación de modo que el sitio de unión se mueve de un lado de la mem- brana al otro. Entonces, la molécula se disocia del transporta- dor y se libera en el otro lado de la membrana. Este tipo de transporte se denomina difusión facilitada. Se considera una forma de transporte pasivo porque no se consume energía ce- lular en el proceso. El término difusión facilitada es un poco engañoso puesto que el proceso realmente no implica difusión (que, como recordarás, es el movimiento de moléculas de un lugar a otro siguiendo un gradiente de concentración, como resul- tado del movimiento térmico al azar). En la difusión facili- tada las moléculas también se mueven de un lugar a otro si- guiendo un gradiente de concentración, pero son las proteínas transportadoras las que dan lugar a este movimiento —no el movimiento térmico al azar. Los resultados finales de la difu- sión y de la difusión facilitada son los mismos. El flujo neto se produce de un área de alta concentración a otra de baja concentración hasta que estas se igualan a ambos lados de la membrana. Entre los sistemas de difusión facilitada más importantes del organismo están los que mueven la glucosa a través de la membrana. Sin los transportadores, esta molécula polar rela- tivamente grande nunca podría pasar a la célula. Sin em- bargo, el número de proteínas de transporte en una membrana celular dada es finito, de forma que solo cierta cantidad de glucosa puede transportarse por unidad de tiempo. El trans- porte de glucosa dentro de la célula es especialmente intere- sante, ya que es convertida a glucosa-6-fosfato tan pronto como se incorpora a la célula, de modo que siempre hay una baja concentración de glucosa en su interior, lo que favorece el transporte hacia el interior celular.

Actividad

3:

Difusión facilitada

Usando el ratón, pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla. Aparecerá un menú desplegable. Se- lecciona Difusión Facilitada (Facilited Diffusion). Apa- recerá una nueva pantalla (Figura 1.2). Notarás dos cambios fundamentales respecto a la primera pantalla. Primero, en lu- gar de las membranas de diálisis a la derecha de la pantalla, ahora hay un «Constructor de Membranas» (Membrane Buil- der). Será utilizado para «fabricar» membranas que transpor- tarán las moléculas de un recipiente a otro. El segundo cam- bio es que, en este experimento, trabajaremos sólamente con glucosa, Na y Cl .

1. Observa que el indicador de Transportadores de Glu-

cosa (Glucose Carriers) en este momento está fijado a 500.

Pulsa Construir Membrana (Build Membrane) para crear una membrana con 500 transportadores.

2. Pulsa y arrastra esta membrana al contenedor de mem-

branas situado entre los dos recipientes.

6

Ejercicio 1

6 Ejercicio 1 Figura 1.2 Pantalla de inicio del experimento de Difusión facilitada. 3. En el

Figura 1.2

Pantalla de inicio del experimento de Difusión facilitada.

3. En el recipiente de la izquierda fija el Na /Cl a 9 mM y

la glucosa a 9 mM pulsando los botones ( ) correspondien- tes. Entonces pulsa Dosificar (Dispense) para llenar el reci-

piente de la izquierda.

4. En el recipiente de la derecha pulsa el botón Agua De-

sionizada (Deionized Water) debajo del mismo y después Dosificar (Dispense).

5. Fija el Temporizador (Timer) a 60 minutos y pulsa Ini-

ciar (Start).

6. Deja que termine experimento. Cuando el indicador de

Tiempo Transcurrido (Elapsed Time) llega a 60, pulsa Guar- dar Datos (Record Data) para guardar tus datos. Anota tam- bién tus datos en la Tabla 2.

7. Pulsa el botón Limpiar (Flush) debajo de cada reci-

piente para vaciarlos y devuelve la membrana al constructor

de membranas.

8. Construye una nueva membrana con 300 transportadores

de glucosa y repite este experimento. Asegúrate de guardar tus resultados, limpiar los recipientes y reemplazar la mem- brana después de cada experimento.

9. Construye una membrana con 700 transportadores de

glucosa y repite este experimento.

10. Construye una membrana con 900 transportadores de

glucosa y repite este experimento.

11. Para comparar, disminuye la concentración de glucosa

a 3 mM y repite los pasos 1-10 del experimento. Guarda tus resultados después de cada experimento pulsando Guardar Datos (Record Data) y completa la Tabla 2.

Tabla 2

Resultados de Difusión facilitada

Concentración

N. o de proteínas transportadas de glucosa

de glucosa

(mM)

300

500

700

900

3

       

9

       

12. Pulsa Herramientas (Tools) ! Imprimir Datos (Print

Data) para imprimir tus datos.

Mecanismo de transporte y permeabilidad celular

7

A una concentración dada de glucosa, ¿cómo varía el tiempo

necesario para alcanzar el equilibrio en función del número

de transportadores empleados «para construir» la membrana?

¿Varía la velocidad de difusión del Na /Cl con el número de receptores?

¿Cuál es el mecanismo de transporte del Na /Cl ?

Si pones la misma cantidad de glucosa en el recipiente de la

derecha y en el de la izquierda, ¿se observaría difusión?

El hecho de no observar difusión, ¿significa necesariamente que no está ocurriendo la difusión?

compartimento a otro aumentará la cantidad de agua en el se- gundo. Si los límites del recipiente no pueden ampliarse, la presión dentro del segundo recipiente aumentará, impidiendo la entrada adicional de agua. La presión que necesita ser apli- cada al segundo recipiente para impedir la entrada adicional de agua desde el primero se denomina presión osmótica. La presión osmótica es otra característica que depende de la con- centración de agua de la solución. Si las soluciones en los recipientes tienen la misma con- centración de solutos que no atraviesan de un lado a otro de la membrana, las dos soluciones se dice que son isotónicas (iso iguales). Los solutos que «atraviesan» la membrana no con- tribuyen a la tonicidad de una solución ya que pasan de un lado a otro de la membrana sin problemas. Cuando se comparan dos soluciones y una tiene una concentración más baja de solutos, esa solución se dice que es hipotónica (hipo menos). La otra solución, la que tiene la concentración más alta, se dice que es hipertónica (hiper más). Esto es importante al hablar de cé- lulas. Si una célula es hipertónica con respecto a su medio cir- cundante, el agua fluirá a su interior para diluir la solución hi- pertónica. A menudo entra tanta agua que la célula estalla.

Actividad

Ósmosis

4:

Ósmosis

Una membrana semipermeable es una membrana que es per- meable al agua pero no a los solutos. La ósmosis se define como el flujo de agua a través de una membrana semipermea-

ble desde un área con una mayor concentración de agua (una concentración más baja de solutos) hasta otra con una menor concentración de agua (una concentración más alta de solu- tos). Cuanto mayor es la concentración de solutos, menor es

la concentración de agua. La ósmosis se define también como

una «propiedad coligativa» porque depende de la concentra-

ción del soluto más que de sus propiedades químicas. El agua

es una pequeña molécula polar que difunde muy rápidamente

a través de las membranas celulares. Debido a su naturaleza polar, es de esperar que el agua no penetre en las regiones li- pídicas no polares de la membrana celular. Proteínas de membrana, denominadas acuaporinas, forman canales a tra- vés de los cuales puede difundir el agua. La concentración de estas acuaporinas varía con el tipo de tejido. Es esencial entender que el grado hasta el cual disminuye

la concentración de agua por la adición de solutos depende del

número de las partículas de soluto agregadas. Por ejemplo, 1 mol de glucosa disminuye la concentración de agua aproxima-

damente lo mismo que una solución de 1 mol de aminoácido o 1 mol de urea. Una molécula que se ioniza disminuye la con- centración de agua en proporción al número de iones que se forman. Por lo tanto, una solución de 1 mol de Na /Cl pro- duce una solución de Na de 1 mol más una solución de Cl de 1 mol. Por tanto, básicamente es una solución de 2 moles. Dos recipientes separados por una membrana de diálisis (tales como con los que hemos estado trabajando) no son in- finitamente distensibles. La transferencia de agua desde un

Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y selecciona Ósmosis. Aparecerá una nueva pantalla (Figura 1.3). Esta es similar a la que vimos para el experi- mento de Difusión Simple (Simple Diffusion). El principal cambio es que en la parte superior de cada recipiente hay un indicador de presión, que veremos durante el transcurso de los experimentos.

1. Arrastra una membrana de 20 MWCO y colócala entre

los dos recipientes.

2. Fija la concentración de Na /Cl del recipiente de la iz-

quierda a 9 mM y pulsa Dosificar (Dispense).

3. Llena el recipiente de la derecha con Agua Desionizada

(Deionized Water) y pulsa Dosificar (Dispense).

4. Fija el Temporizador (Timer) a 60 minutos.

5. Pulsa Iniciar (Start) y deja que transcurra el experi-

mento. Presta atención a los indicadores de «presión» (Pres- sure) en la parte superior de cada recipiente.

6. Una vez detenido el Tiempo Transcurrido (Elapsed

Time) pulsa Guardar Datos (Record Data). Anota también los datos en la Tabla 3 de la pág. 8.

7. Pulsa Limpiar (Flush) debajo de ambos recipientes para

vaciarlos.

8. Devuelve la membrana a su lugar original.

9. Repite el experimento usando las tres membranas restan-

tes. Asegúrate de guardar todos tus datos y limpiar los reci- pientes entre cada experimento.

¿Observaste cambios de presión durante este experimento? Si es así ¿en qué recipiente(s) y con qué membranas?

8

Ejercicio 1

8 Ejercicio 1 Figura 1.3 Pantalla de inicio del experimento de Ósmosis. ¿Por qué? 10. Repite

Figura 1.3

Pantalla de inicio del experimento de Ósmosis.

¿Por qué?

10. Repite el experimento usando primero albúmina 9 mM

en el recipiente de la izquierda y después glucosa 9 mM. Pulsa Guardar Datos (Record Data) después de cada expe- rimento; anota también tus datos en la Tabla 3.

¿Difundieron el Na /Cl desde el recipiente de la izquierda al de la derecha? Si
¿Difundieron el Na /Cl desde el recipiente de la izquierda
al de la derecha? Si es así, ¿con qué membrana(s)?
Tabla 3 Resultads de Ósmosis
(presión en mm Hg)
Membrana (MWCO)
Soluto
20
50
100
200
¿Por qué?
Na /Cl
Albúmina
Glucosa

Mecanismo de transporte y permeabilidad celular

9

11. Pulsa Herramientas (Tools) ! Imprimir Datos (Print

Data) para imprimir tus datos.

Explica la relación entre la concentración de solutos y la pre- sión osmótica.

¿La difusión permite que se genere presión osmótica?

¿Se generaría presión si las concentraciones de solutos fueran iguales a ambos lados de la membrana?

¿Por qué o por qué no?

¿Se generaría presión si tuvieras glucosa 9 mM en un lado de

la

membrana de 200 MWCO y NaCl 9 mM en el otro lado?

Si

es así, ¿qué solución generaría la presión?

¿Se generaría presión si tuvieras albúmina 9 mM en un lado de la membrana de 200 MWCO y NaCl 9 mM en el otro lado? Si es así, ¿qué solución generaría la presión?

Filtración

A la vez que la difusión permite que las células tomen oxí-

geno y alimentos mientras eliminan el dióxido de carbono y los desechos metabólicos, también está ocurriendo otro pro- ceso. Este proceso se produce principalmente en los capilares del organismo (tales como los renales) donde la presión del fluido sanguíneo —denominada presión hidrostática— fuerza a los materiales a atravesar la pared capilar. Tanto la sangre como el fluido intersticial contienen solutos disueltos. Gene- ralmente, la presión osmótica del fluido intersticial no es tan grande como la presión hidrostática de la sangre, por lo que hay un movimiento neto de fluidos y/o solutos hacia fuera de los capilares —un proceso denominado filtración. Lo que se filtra hacia fuera depende solamente del tamaño molecular del soluto y del tamaño de los «poros» de la membrana. La filtración se considera un proceso pasivo, puesto que ocurre sin gasto de energía metabólica.

Actividad

Filtración

Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y selecciona Filtración (Filtration). Verás una pan- talla de inicio bastante diferente a las de las actividades

5:

anteriores (Figura 1.4). Observa los dos recipientes situados en el lado izquierdo de la pantalla, uno encima del otro. Ob- serva también que el recipiente superior contiene un indica- dor de presión. A diferencia del experimento de ósmosis, en el cual el indicador de presión medía la presión desarrollada debido al movimiento del agua, este indicador de presión mide la presión hidrostática que filtrará el líquido del reci- piente superior al recipiente inferior. Finalmente, observa el módulo de «Análisis de Residuos de Membrana» (Membrana Residue Análisis). Éste se utilizará para detectar si queda al- gún soluto en la membrana después de cada experimento.

1. Pulsa y arrastra la membrana de 20 MWCO al contene-

dor de membranas situado entre los dos recipientes.

2. Fija el Na /Cl a 9 mM, la urea (Urea) y la glucosa

(Glucose) a 5 mM y el carbón vegetal en polvo (Powdered Charcoal) a 5 mg/ml pulsando el botón ( ) junto a cada so- luto. Entonces pulsa Dosificar (Dispense) para verterlo en el recipiente superior.

3. Deja la presión en 50 mm Hg y el Temporizador (Timer)

en 60 minutos, los ajustes por defecto. Pulsa Iniciar (Start). Verás como el líquido es filtrado al recipiente inferior.

4. Mira el módulo Unidad de Análisis del Filtrado al lado

del recipiente inferior para cualquier actividad. Ello te indi- cará qué solutos están pasando a través de la membrana.

5. Cuando hayan pasado los 60 minutos, arrastra la mem-

brana al módulo de Análisis de Residuos de Membrana (Membrana Residue Analysis) y suelta el ratón. La membrana se colocará en su lugar. Pulsa Iniciar Análisis (Start Analy- sis). En el módulo de datos inferior, verás qué soluto(s) fue-

ron detectados en la membrana usada para la filtración.

6. Guarda tus datos pulsando Guardar Datos (Record

Data).

¿Cuáles fueron los resultados del análisis inicial de la mem- brana?

7. Pulsa Limpiar (Flush) y devuelve la membrana a su lu-

gar original.

8. Arrastra la membrana de 50 MWCO al contenedor de

membranas situado entre los dos recipientes.

9. Mantén la presión en 50 y repite el experimento. Cuando

el Temporizador (Timer) haya alcanzado los 60 minutos, rea- liza un análisis de la membrana y pulsa Guardar Datos (Re- cord Data).

10.

Pulsa Limpiar (Flush) y devuelve la membrana a su

lugar.

11.

Repite los pasos 8-10 con las dos membranas restantes.

Asegúrate de guardar tus datos para cada experimento.

12. Aumenta la presión a 100 mm Hg y repite el experi-

mento completo. Una vez más, guarda todos los datos experi- mentales.

13. Pulsa Herramientas (Tools) ! Imprimir Datos (Print

Data) para imprimir tus datos.

10

Ejercicio 1

10 Ejercicio 1 Figura 1.4 Pantalla de inicio del experimento de Filtración. ¿Afecta el límite de

Figura 1.4

Pantalla de inicio del experimento de Filtración.

¿Afecta el límite de la membrana (MWCO) a la velocidad de filtración (Filtration Rate)?

¿Afecta la presión aplicada a la velocidad de filtración (Fil- tration Rate)?

¿Pasaron todos los solutos a través de todas las membranas?

Si no, ¿cuál o cuáles no lo hicieron?

¿Por qué?

¿Cómo puede el organismo aumentar selectivamente la veloci- dad de filtración (Filtration Rate) de un órgano o sistema dado?

Transporte Activo

El transporte activo difiere del transporte pasivo en que se utiliza energía metabólica para mover solutos a través de la membrana. También se diferencia en que los solutos se mue- ven desde un área de menor concentración a otra de mayor concentración —al contrario de lo que ocurre en la difusión facilitada. Como en la difusión facilitada, se requiere la unión de una sustancia a un transportador. Puesto que la sustancia unida se está moviendo «cuesta arriba» hasta un área de mayor concentración, los transportadores se denominan, a

Mecanismo de transporte y permeabilidad celular

11

menudo, bombas. El movimiento neto desde una concentra- ción menor a otra mayor y el mantenimiento de una concen- tración elevada estable en un lado de la membrana solo puede alcanzarse mediante la aportación continua de energía al me- canismo de transporte activo. El aporte de energía puede alte- rar la afinidad del lugar de unión del transportador de modo que haya una afinidad más alta a un lado que al otro, o la energía puede alterar la velocidad a la que el transportador mueve el sitio de unión de un lado de la membrana al otro. Como en la difusión facilitada, el número de las moléculas transportadoras por la célula es finito. La energía para el transporte activo deriva del metabo- lismo celular. La inhibición del ATP bloquea el mecanismo de transporte activo. Para que los solutos se muevan desde un área de menor concentración a otra de mayor concentración,

el transporte debe estar acoplado con el flujo de energía desde

un nivel energético mayor hasta otro menor. Si el ATP se uti- liza directamente en el transporte, el mecanismo de trans- porte se conoce como transporte activo primario. La energía se produce mediante la hidrólisis de ATP por un transportador que es un ATPasa que cataliza la rotura del ATP

y su autofosforilación. Esta fosforilación del transportador

alterará la afinidad del sitio de unión o bien la velocidad del cambio conformacional. Se han identificado cuatro proteínas de transporte activo primario. En todas las membranas plas- máticas hay una sodio-potasio ATPasa, responsable del flujo hacia el exterior de sodio y del flujo hacia el interior de pota- sio. El sodio es el principal ión encontrado en el fluido extra- celular, mientras que el potasio es más abundante en el inte- rior de las células. Otras proteínas de transporte están implicadas en el transporte de calcio, transporte de hidrógeno y en el transporte de hidrógeno-potasio.

Actividad

6:

Transporte activo

Pulsa Experimento (Experiment) en la parte superior de la pantalla y selecciona Transporte Activo (Active Transport). Aparecerá una nueva pantalla que se asemeja a la pantalla de la difusión facilitada (Figura 1.5). El principal cambio es la adición de un dosificador de ATP encima de los recipientes. Recuerda que, puesto que el ATP es necesario para que el sis- tema funcione, debe ser agregado en cada experimento.

sis- tema funcione, debe ser agregado en cada experimento. Figura 1.5 Pantalla de inicio del experimento

12

Ejercicio 1

1. Asegúrate que en el Constructor de Membranas (Mem-

brane Builder) el número de transportadores de glucosa está fijado en 500 y el número de bombas Na /K también está fi- jado en 500.

2. Pulsa Construir Membrana (Build Membrane).

3. Arrastra la membrana «construida» al contenedor de

membranas situado entre los dos recipientes.

4.

En el recipiente de la izquierda, fija a 9 mM el

Na

/Cl pulsando el botón ( ) y pulsa Dosificar (Dispense).

5.

En el recipiente de la derecha, pulsa Agua Desionizada

(Deionized Water) y después Dosificar (Dispense).

6. Fija el ATP a 1 mM y después pulsa Dosificar ATP (Dis-

pense ATP).

7. Asegúrate de que el Temporizador (Timer) está fijado a

60 minutos y pulsa Iniciar (Start).

Al final de este experimento, ¿se movieron el Na /Cl desde

el recipiente de la izquierda al recipiente de la derecha?

¿Por qué?

8. Pulsa Limpiar (Flush) debajo de ambos recipientes.

9. Añade 9 mM de Na /Cl al recipiente de la izquierda y

9 mM de KCl al recipiente de la derecha. Pulsa Dosificar

(Dispense).

10. Fija el ATP a 1 mM, pulsa Dosificar ATP (Dispense

ATP) y después Iniciar (Start).

11. Al final del experimento pulsa Guardar Datos (Record

Data).

A medida que el experimento progresa, las concentraciones

de los solutos cambiarán en las ventanas situadas al lado de los recipientes. La velocidad disminuirá notablemente, para pararse antes de completarse el experimento. ¿Por qué?

Ahora que has realizado el experimento básico, vamos a lle- var a cabo dos variaciones.

12. Repite el experimento sin incrementar la cantidad de

ATP añadida al sistema.

¿Varía la cantidad de NaCl/KCl transportados?

13. Repite el experimento sin cambiar el número de trans-

portadores y bombas cuando construyas la membrana.

La cantidad de solutos transportada a través de la membrana ¿varía con el aumento de transportadores o de bombas?

¿Algún soluto se ve más afectado que otro?

La membrana que has «construido», ¿permite la difusión simple?

Si colocaras NaCl 9 mM en un lado de la membrana y 15 mM en el otro, ¿habría movimiento del NaCl?

¿Por qué?

¿Produce alguna diferencia la cantidad de ATP agregada?

14. Pulsa Herramientas (Tools) ! Imprimir Datos (Print

Data) para imprimir tus datos guardados.