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Definición:
La espectroscopia es el estudio del espectro de la luz que emiten los cuerpos, sustancias y
elementos.
Características de la luz:
La imagen se forma punto a punto, y muestra que la luz llega a la película fotográfica por
unidades separadas que los producen.
Colores:
Los seres humanos (y algunos animales) apreciamos una amplia gama de colores que, por lo
general, se deben a la mezcla de luces de diferentes longitudes de onda. Se conoce como
color puro al color de la luz con una única longitud de onda o una banda estrecha de ellas.
Hay varios tipos de espectros, los más comunes son los espectros continuos, espectros de
emisión y los espectros de absorción.
Todos los elementos poseen un espectro propio, que se puede medir al someterse a
temperaturas elevadas ya que producen espectros discontinuos.
Longitud de onda:
La distancia entre dos picos (o dos valles) de una onda se llama longitud de onda (λ =
lambda).
no
La luz visible: es sólo una pequeña parte del espectro
electromagnético con longitudes de onda que van
aproximadamente de 350 nanómetros hasta unos 750
nanómetros
La luz blanca está compuesta de ondas de diversas frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca
pasa por un prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la longitud de onda.
Así la luz blanca es una mezcla de todas las longitudes de onda visibles.
Frecuencia natural
Las ondas electromagnéticas de frecuencias extremadamente elevadas, como la luz o los rayos X,
suelen describirse mediante sus longitudes de onda, que frecuentemente se expresan en nanómetros.
Absorción:
A + hn A* A + calor
Dónde:
Absortividad (a)
Ley de Lambert: cuando un rayo de luz monocromática (I0) pasa a través de un medio
absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente (I) a medida que la longitud del
medio absorbente aumenta
I = I0e-ab
Ley de Beer: Cuando un rayo de luz monocromática pasa a través de un medio absorbente,
su intensidad disminuye exponencialmente a medida que la concentración del medio
absorbente aumenta
I = I0e-ac
Lo que significa que combinando ambas leyes se crea la Ley de Beer-Lambert donde la
fracción de luz incidente que es absorbida por una solución es proporcional a la
concentración de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz. La relación entre la
luz incidente (I0) y la reflejada (I) dará una idea de la cantidad de radiación que ha sido
absorbida por la muestra.
Al cociente de las intensidades se denomina Transmitancia
T = I/I0 = e-abc
Sacando logaritmos:
Convirtiendo a log10:
La Transmitancia (T) es la relación entre la intensidad de luz transmitida por una muestra problema
(I) con la intensidad de luz incidente sobre la muestra (Io):
T = I / I0
Se expresa como % T
A = a·b·c
A menudo b es dada en términos de cm. y c en gramos por litro, entonces la absortividad tiene
unidades de l·g–1·cm–1.
Absorbancia
Concentración
% Transmitancia contra concentración (pendiente con signo negativo y comportamiento
exponencial)
% Transmitancia
Concentración
Absorbancia:
De lo anterior se desprende que la Absorbancia (A) o luz que es absorbida por la muestra es igual al
logaritmo en base diez del recíproco de la transmitancia (T) o bien al -log10 de la transmitancia, en el
que el disolvente puro o (“blanco”) es el material de referencia; esto es:
Con
Obtención de transmitancia utilizando valores de absorbancia:
%T = 10-abc x 100.
Invirtiendo términos
log10 %T = 2 – abc
log10 %T = 2 – A.
ESPECTROFOTOMETRIA:
Un aparato capaz de obtener el espectro de una radiación, es decir, de separar la radiación en sus
componentes, se llama un espectroscopio.
ESPECTROSCOPIO
ESPECTOGRAFO
ESPECTROMETRO
Sin embargo, cuando una muestra a determinar no posee coloración, es necesario llevar a cabo un
tratamiento de color empleando substancias que que reaccionen de forma proporcional con
el compuesto de interés
La diferencia entre colorimetría y espectrofotometría consiste en el tipo de instrumental
empleado:
El colorímetro es un aparato en los que la longitud de onda se selecciona por medio de filtros
ópticos que son insertados en este.
Algunos de los procedimientos colorimétricos o espectrofotométricos con los que se cuenta para precisar la
concentración de una sustancia en solución son los siguientes:
– Referencia de color
– Colorímetro Klett
– Espectrofotómetro
Una solución que absorbe el rojo pero no el amarillo y el azul con la combinación de estos
dará un color verde.
Por lo anterior podemos aplicar un sencillo método para precisar con cual filtro podríamos
leer una solución dependiendo el color de esta
Cuando la solución sea roja no se deberá utilizar un filtro de color rojo porque justamente
ese es el color que no absorbe.
En relación a esto, en el manual del fotocolorimetro Klett aparece la siguiente tabla que se
puede utilizar para determinar que filtro se debe emplear de acuerdo al color de la solución a
estudiar:
A menudo se hace referencia a la “estrella de colores” para facilitar el recordar la elección del
color de filtro para lectura colorimétrica. Para soluciones de color azul verde y amarilla
correspondería un filtro rojo. Para soluciones de color rojo, naranja o amarrillo
seleccionaríamos un filtro color azul. Finalmente para soluciones con color verde, azul o
amarilla elegiríamos un filtro rojo.
Manejo del Fotocolorímetro
1. Confirmar, que el filtro (A) adecuado se encuentre dentro del portafiltros (B) y este
en su lugar (C)
2. Compruebe que la aguja indicadora (D) este en el centro, en cero; si no es así ajuste a
cero con la perilla (E) que se localiza en la parte superior; siempre y cuando la
lámpara se encuentre apagada
D E C
M.C.
3. La lámpara (F) se enciende con el apagador (G), deje calentar entre 5 y 10 minutos.
4. Ajuste la escala del potenciómetro (H) con la perilla correspondiente (I) a cero
5. Coloque la cubeta (limpia) (J) con el “blanco”, en su sitio (K) y encienda con el
interruptor (L)
6. Mediante la perilla (M) del galvanómetro , se acopla la lectura a cero , lo que implica
que la aguja (D) y la escala (H) deben estar en cero.
7. Para leer las soluciones problema : Hay que retirar de la cubeta el “blanco” y colocar
la solución problema, la aguja (D) se desviará de su posición , es necesario
nuevamente ajustar (con I) a cero, la lectura que proporcione la escala (H) es la
correspondiente al “problema “
Las lecturas que se mayores a 500 U.K y las menores a 25 U.K., no se usaran para calcular
concentraciones
– El volumen de la muestra no debe ser excesivo para evitar que se desborde, en caso de
que sucediera, se debe limpiar con un paño limpio o papel absorbente suave, para
evitar rayarla.
– No se deben derramar líquidos, sobre todo solventes, ácidos o álcalis; dentro del
contenedor de la cubeta, se puede dañar parte del mecanismo
¿Qué es espectrofotómetro?
Mecanismo interno:
¿Porque leer a diferentes l (longitudes de onda) compuestos parecidos pero diferentes?
Absorbancia
– Las longitudes de onda con mayor absorción (picos) corresponderán de forma
general a aquellas con las que se leerá la muestra para determinar su
concentración.
Absorbancia
– La relación entre la absorbancia por una sustancia a una l determinada y su
concentración es directamente proporcional es decir: a mayor concentración
mayor proporción de luz absorbida.
Absorbancia
Conc.
Imagines relacionadas:
Se asume que el tubo, celda o “cubeta” en la cual se vierte la solución a leer no debe desviar
la trayectoria de la luz como requisito para el cumplimiento de la ley de Beer
Como el cuarzo aparte de ser muy transparente presenta un comportamiento constante ante
la variación de la longitud de onda es común que las celdas del espectrofotómetro o
colorímetro sean de este material
Cuarzo patrón:
CURVA PATRÓN
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12
Concentración mg/lt
Con base en que la Absorbancia guarda una relación lineal con la concentración, se
comprende la existencia de una relación de proporcionalidad entre la Absorbancia y la
concentración:
A1 / A2 = C1 / C2
Donde:
Compuesto 1 (blanco) 2 3 4 5 6 7
Glucosa 0,1 mg/ml (mL) 0.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
Agua destilada (mL) 1.0 0.4 0.9 0.8 0.2 0.6 0.0
Ácido sulfúrico (mL) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
Resultado de la curva patrón anterior
Tubos Absorbancia
1 0
2 0.135
3 0.253
4 0.417
5 0.658
6 0.574
7 0.768
Así, los grupos carbonilo presentes en los aldehídos (RCHO), cetonas (RCOR), ácidos
carboxílicos (RCOOH), l ésteres (RCOOR´) y amidas (RCONHR´) dan lugar a absorciones
intensas en la región del espectro de infrarrojo situada entre 1780-1640 cm-1.
Manejo de espectrofotómetro:
– La aguja (d) del lector se deslizará sobre la escala (f) , se lee en % de transmitancia ó
en unidades de absorbancia