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ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS CARRERA: BIOTECNOLOGÍA
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA: BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL
QUÍMICA AMBIENTAL
Recuento de Heterótrofos, hongos y bacterias en muestras en suelo
1. DATOS GENERALES:
NOMBRE:
CODIGO(S):
Pinduisaca Carolina
2625
Proaño Adriana
2624
Saigua Dennys
2626
Venlasaga Gissela
2609

1.

Objetivos

1.1 Objetivo general

Aprender

técnica

de

microorganismos viables

extensión

1.2 Objetivos específicos

en

placa

para

enumerar

los

Realizar técnica de extensión en placa según las instrucciones dadas

Cuantificar el número de microorganismos que se encuentran en ASD,

AST y ASAB e Identificar las características morfológicas

Calcular las unidades formadoras de colonias de cada caja Petri.

2. Materiales, equipo y reactivos

5 tubos de cultivo con tapa 15 cajas Petri desechables 3 Erlenmeyer de 500ml

1 Erlenmeyer de 100ml

10 pipetas (jeringas de 1 ml) 1 probeta de 250ml

1 gradilla 1 mechero de alcohol Aluminio para envolver tapón de algodón (Erlenmeyer) Autoclave Balanzas Incubadora Refrigerador Caldo Soya Tripticasa(CST) Agar Soya Tripticasa(AST) Agar estándar (ASD)

Agar Saboraud (ASAB)

3. Procedimiento

3.1 procedimiento 1

1. Lavar en forma respectiva el material de vidrio y enjuagar con abundante agua corriente.

2. Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada. Dejar escurrir el material sobre una toalla de papel.

3. Preparar en los Erlenmeyer los medios indicados anteriormente según los cálculos indicados.

5.

la balanza 10 gr de tierra en papel aluminio

6. Pesar CST, AST, ASD y ASAB según los cálculos respectivos.

7. Disolver CST, AST, ASD y ASAB en los Erlenmeyer, evitar hacer grumos

8. Llevar los respectivos preparativos a la autoclave

9. Dejar que CST, AST, ASD y ASAB se vaya enfriando hasta que el calor sea soportable por el tacto

10. Plaquear enseguida en un medio estéril, con el mechero encendido, flamear antes y después de plaquear.

3.2 procedimiento 2

1. colocar los 10 gr de tierra en el Erlenmeyer de 100 ml

2. realizar diluciones decimales empleados en los tubos, 10 -2 , 10 -3 , 10 .4 , 10 - 5 , 10 -6 , con las respectivas pipetas( jeringas de 1ml) cada cual renombrada para su dilución

3. Distribuir las cajas con el medio estéril en la mesa de trabajo de manera que la inoculación se pueda realizar cómoda y libremente.

4. Marcar las bases de las cajas con los datos pertinentes antes de inocular

10 -2 , 10 -3 , 10 .4 , 10 -5 , 10 -6 .

5. Inocular por duplicado, 0.1 mL de la dilución correspondiente en cada caja, mediante pipeta estéril

6. Para distribuir de manera homogénea, extender el inóculo utilizando una varilla de vidrio estéril haciendo movimientos giratorios de manera perpendicular al medio de cultivo, hasta lograr la completa incorporación del inóculo en el medio

7. cuidar que el inóculo se absorba antes de incubar (se recomienda un tiempo de espera aproximado de 10 minutos Incluir una caja sin inóculo por cada lote de medio y diluyente preparado como testigo de esterilidad.

8. Incubar las cajas en posición invertida, ASAB a 28ºC por 5 días y ASD, AST Y CST a 37ºC por 48 h

3.3 procedimiento 3

1.

Una vez que ya se cumplió el tiempo adecuado, realizar el conteo, si es excesivo se lo determina como incontable en la cajas Petri(véase tabla # 1)

2.

En los tubos de ensayo determinar si hubo o no presencia de nata y sedimento (véase fig # 7 y tabla # 8)

3.

Determinar, borde, elevación superficie, consistencia, color, luz reflejada y luz transparente (véase tabla # 5,6 y 7 )

4.

Realizar los respectivos cálculos UFC (véase tabla # 2,3 y 4)

4. Datos y cálculos

Tabla # 1

 

NÙMERO DE COLONIAS

 
Agar
Agar

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

AGAR SABORAUD

Incontable

129

43

4

Ninguno

AGAR ESTÀNDAR

Incontable

42

Mala

2

1

siembra

AGAR SOYA TRIPTICASA

Incontable

26

21

12

3

UFC 10 x =nxFx1/UFC= unidades formadoras de colonias n= número de UFC en placa F=factor de dilución inverso ml de inoculo= 0.1 ml porque es el segundo método llamado extensión en placa

Tabla # 2

 

AGAR SABOURAUD

 

Muestras

10

-2

 

10

-3

 

10

-4

   

10

-5

 

10

-6

n

Incontable

   

129

   

43

 

4

 

F

10

2

 

10

3

 

10

4

 

10

5

0.1 ml

   

0.1 ml

   

0.1 ml

   

0.1 ml

 

Ningún tipo

   

UFC 10 x =nxFx1/

 

UFC 10 x =nxFx1/

 

UFC 10 x =nxFx1/

 

Cálculos

de colonia

UFC 10 -3 =129x10 3 x10

 

UFC 10 -4 =43x10 4 x10

UFC 10 -5 =4x10 5 x10

 

Resultados

Incontable

 

129x10 5

   

43x10 6

   

4x10 7

 

UFC

     
 

Tabla # 3

 
 

AGAR ESTÁNDAR

 

Muestras

 

10

-2

 

10

-3

   

10

-4

10

-5

 

10

-6

 

n

Incontable

   

42

Mala siembra

 

2

 

1

F

 

10

2

 

10

3

 

10

4

10

5

 

10

6

 

0.1 ml

   

0.1 ml

 

0.1 ml

 

0.1 ml

   

0.1 ml

 
   

UFC 10 x =nxFx1/

   

UFC 10 x =nxFx1/

UFC 10 x =nxFx1/

 

Cálculos

UFC 10 -3 =42x10 3 x10

UFC 10 -5 =2x10 5 x10

UFC 10 -6 =1x10 6 x10

Resultados

Incontable

   

42x10 5

 

No resultado

 

2x10 7

   

1x10 8

 
 

Tabla # 4

 

AGAR SOYA TRIPTICASA

 

Muestras

 

10

-2

   

10

-3

   

10

-4

10

-5

 

10

-6

 

n

Incontable

   

26

   

21

12

   

3

F

 

10

2

 

10

3

 

10

4

10

5

 

10

6

0.1 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.1 ml

   

UFC 10 x =nxFx1/

UFC 10 x =nxFx1/

UFC 10 x =nxFx1/

UFC 10 x =nxFx1/

Cálculos

UFC 10 -3 =26x10 3 x10

UFC 10 -4 =21x10 4 x10

UFC 10 -5 =12x10 5 x10

UFC 10 -6 =3x10 6 x10

Resultados

Incontable

26x10 5

21x10 6

12x10 7

3x10 8

 

AGAR SABOURAUD

 
características muestras
características
muestras

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

Forma

Irregular,

Irregular,

Irregular,

Circular,

 

Circular,

Circular,

Puntiforme.

Puntiforme.

Puntiforme,

Rizoide

Rizoide

Borde

Ondulada,

Filamentosa,

Ondulada,

Ondulada,

Lobulada

Lobulada

Lobulada

Elevación

Convexa y

convexa

convexa

plana

NO HUBO

elevada

CRECIMIENTO

Superficie

rugosa

 

rugosa

 

rugosa

 

lisa

MICROBIANO

consistencia

Cremosa,

Cremosa,

Cremosa y

Cremosa, y

membranosa

membranosa

membranosa

membranosa

 

Color

Verde, rosa,

Amarillo,

Verde y

Amarilla y

naranja,

blanco, verde

amarillo, blanco

blanca

amarillo, beige,

oscuro, rosa,

blanco

naranja

Luz transparente

translucida

translucida

translucida

transparente

Luz reflejada

Opaca

opaca

opaca

brillante

5.

Observaciones

Tabla # 5

 

AGAR ESTÁNDAR

 
características muestras
características
muestras

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

Forma

Irregular,

Irregular,

 

Circular,

irregular

Circular,

Circular,

Puntiforme.

Puntiforme,

Borde

Entero y

Entero, ondulado

NO HUBO

Entera, ondulada

Ondulado

ondulado

Lobulada

RESULTADOS

         

Elevación

palana

plana

POR MALA

plana

plano

Superficie

lisa

lisa

SIEMBRA

Lisa

Liso

consistencia

Cremosa

Cremosa

Cremosa

Cremoso

Color

amarillo, beige,

Amarillo, blanco

Amarilla y

Blando

blanco

blanca

Luz transparente

translucida

translucida

translucida

Translucido

Luz reflejada

Opaca

opaca

opaca

opaco

Tabla # 6

Tabla # 7

 

AGAR SOYA TRIPTICASA

 
características muestras
características
muestras

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

Forma

Irregular,

Irregular,

Irregular,

irregular

Puntiforme

Puntiforme,

Circular,

Puntiforme.

Rizoide

Borde

filamentosa

Entero ,

Ondulado,

Ondulada,

Ondulado

ondulado

lobulado

Elevación

plana

plana

plana

plana

Plano

Superficie

Lisa

Lisa

Lisa

Lisa

Lisa

consistencia

Cremosa

Cremosa,

Cremosa

Cremosa

cremosa

Color

amarillo, crema,

Amarillo, blanco

amarillo, blanco

amarilla y blanca

Amarillento

blanco

Luz transparente

translucida

translucida

translucida

Translucida

Translucido

Luz reflejada

Opaca

opaca

opaca

opaca

Opaco

Tabla # 8

Tubos

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

Turbidez

opaca

Menos opaca

densa

Menos densa

Poco densa

Película

No

no

Casi continuo

Casi continuo

no

Sedimento

abundante

abundante

poco

Muy poco

Bajo

Tabla # 9

 

NÙMERO DE COLONIAS

 
Agar
Agar

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

AGAR SABORAUD

Incontable

129

43

4

Ninguno

AGAR ESTÀNDAR

Incontable

42

Mala

2

1

siembra

AGAR SOYA TRIPTICASA

Incontable

26

21

12

3

6.

Discusión

La técnica de extensión en placa, es una técnica cuantitativa que permite cuantificar

los microrganismos que están presentes en las placas, es muy utilizado en diferentes

industrias como dice:

Anon (2017) que realizan este estudio con el fin de identificar ventajas, desventaja y oportunidades de mejora que presentan las placas Petrifim, elaboradas por la empresa 3M frente a la competencia actual en el mercado, se llevó a cabo un análisis comparativo entre seis productos para la cuantificación de microorganismos indicadores en muestras de alimentos. Esta comparación se realizó desde el área comercial, técnica y de aprobaciones nacionales e internacionales.

Entonces por ende Se trata de conocer el número total de microorganismos

presentes en el alimento. Este número no guarda relación con el de microorganismos

patógenos por lo que no puede usarse como índice de su presencia y sólo debe

considerarse un indicador de las características higiénicas generales del alimento.

7.

Conclusión

Se realizó la técnica de extensión en placa conociendo que es una técnica cuantitativa, siguiendo las respectivas indicaciones que se dieron en el laboratorio y la información dada en clases.

Se cuantificó el número de microorganismos que se encuentran ASD, AST y ASAB y se Identificó los diferentes tipos de características morfológicas que se encontraron en cada caja Petri.

Se calculó las unidades formadoras de colonias de cada caja Petri, utilizando la formula UFC 10 x =nxFx1/, necesitando el número de colonias en placa, su factor de dilución y ml de inoculo.

8.

Bibliografía

Unavarra.es. (2017). METODOS GENERALES DE ANALISIS. [online]

Available

at:

http://www.unavarra.es/genmic/recuento%20microorganismos.htm

[Accessed 5 Feb. 2017].

 

Anon,

(2017).

[online]

Available

at:

http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis230.pdf [Accessed 5 Feb. 2017].

9.

Anexos

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 1

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 4

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 7

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 2

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 5

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 8

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 3

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 6

9. Anexos Fig # 1 Fig # 4 Fig # 7 Fig # 2 Fig #

Fig # 9