UNIVERSIDAD NACIONAL DE AGRICULTURA

DEPARTAMENTO DE PRODUCCION VEGETAL

AISLAMIENTO, MONTAJE, OBSERVACION Y REPRODUCCION DE IAS BACTERIAS

FITOPATOGENAS CON FINES DE DIAGNOSTICO

PRESENTADO A:

ING. PORFIRIO HERNANDEZ

SECCION I GRUPO #1

CATACAMAS, OLANCHO HONDURAS, CA

ENERO DEL 2018

 PRESENTADO POR

ROMERO DANIA CONSUELO

ROMERO GALEANO MARVIN FRANCISCO

SANCHEZ AMAYA LIDIA ESPERANZA

SANCHEZ GARCIA CLAUDIA ALEJANDRA

SANCHEZ GONZALEZ ANDREA LUCILA

 ÍNDICE

TABLA DE CONTENIDO

I) INTRODUCCIÓN………………………………………………..………………...…3

II) OBJETIVO…………………………….…………..…………………………………4

2.1 Objetivo General……………………………………......………….……………….…4

2.2 Objetivos Específicos………………………………….…………..…………….……4

III) MARCO TEORICO……………………………………………..……………….. 5-7

IV.PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL………………………….………………….8

4.1 Materiales………………………………………………………………………….…8

4.2 Procedimiento…………………………………………………………….……….8-10

V. RESULTADOS Y CONCLUSIONES…………………………………………..,….11

VI CONCLUSIONES……………………………………………………………… ….12

VII. ANEXOS………………………………………………….………………………..13

VIII.. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………14
 I. INTRODUCCIÓN

Las bacterias son microorganismos unicelulares, generalmente con un tamaño de 1-2 µm,
que no pueden verse a simple vista. Las bacterias asociadas a las plantas pueden ser
benéficas o dañinas. Todas las superficies vegetales tienen microbios sobre ellas
(epífitos), y algunos microbios viven dentro de las plantas (endófitos). Algunos son
residentes y otros transitorios. Las bacterias se encuentran entre los microorganismos que
colonizan a las plantas en forma sucesiva a medida que éstas maduran.

En todo el mundo, las bacterias fitopatógenas causan muchas enfermedades serias pero
en menor número que los hongos o los virus, y también ocasionan relativamente menores
daños y costos económicos La mayoría de las plantas, silvestres y cultivadas tienen
inmunidad innata o resistencia a muchos patógenos. Sin embargo, muchas plantas pueden
hospedar fitopatogenos sin desarrollar síntomas

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 II. OBJETIVOS

2.1 Objetivo General

Conocer que son los baterías fitopatógenas y cual la importancia que tienen en la
agricultura.

2.2 Objetivos Específicos

Realizar el aislamiento de una bacteria fitopatogena mediante una práctica de

laboratorio

Identificar mediante diferentes prácticas que tipo de bacteria fitopatógenica es a la que se

le realizo el aislamiento.

Observar en el laboratorio el color que tiene la bacteria que se encontró.

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 III. MARCO TEORICO

Las bacterias son organismos microscópicos sumamente pequeños. Se conocen alrededor

de 1600 especies de ellas. La mayoría de las bacterias fitopatógenas tienen forma de
bastón, las únicas excepciones son un par de especies de Stheptomyces las cuales son
filamentosas. La mayoría de las bacterias fitopatógenas se desarrollan principalmente
como organismos parásitos en las plantas hospedantes y parcialmente en el suelo como
saprófitos. (Yonis Hemández 2010)

La supervivencia de las bacterias por lo general, en condiciones naturales las bacterias

fitopatógenas sobreviven en residuos vegetales sobre la superficie del suelo, en o sobre
semillas, en el suelo, y asociadas con hospedantes perennes. Pero algunas bacterias
también pueden sobrevivir en el agua, y algunas hasta en objetos inanimados, o sobre o
dentro de insectos. Conocer la forma de supervivencia suele ser esencial para prevenir la
diseminación y para el manejo de la enfermedad. (Yonis Hemández 2010)

La diseminación de las bacterias fitopatógenas es fácil, pero afortunadamente no siempre

resulta en enfermedad. Generalmente ocurre por partículas de suelo y arena llevadas por
el viento, las que causan heridas, especialmente durante o después de lluvias o tormentas.
Las heridas son esenciales para el ingreso de muchos fitopatogenos. Los aerosoles
generados por fluctuaciones diurnas de temperatura permiten la diseminación, siempre
que la temperatura y humedad están en concordancia. (Yonis Hemández 2010)

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Síntomas Producidos por Bacterias Fitopatógenas

Manchas y tizones: Las cuales pueden aparecer sobre hojas, tallos, inflorescencias y
frutos como manchas de varios tamaños o como necrosis continuas de rápido avance
(tizones). La mayoría de las manchas bacterianas son causadas por bacterias de los
géneros Xantomonas y Pseudomonas mientras que los tizones verdaderos son causados
por especies de Erwinia y Pseudomonas. (María Montelongo 2012)

Marchitamientos vasculares: Afectan plantas herbáceas como hortalizas, cultivos

mayores y a plantas tropicales y ornamentales. Entre los géneros de bacterias que
producen este tipo de enfermedad se encuentran especies de los géneros Clavibacter,
Curtobacterium (antes Corynebacterium), Erwinia, Pseudomonas y Xanthomonas.
(María Montelongo 2012)

Pudriciones blandas: Generalmente desprenden un olor desagradable por la producción

de sustancias volátiles en el tejido, cuando éste es degradado por la bacteria. Los géneros
bacterianos involucrados en este tipo de síntomas son Erwinia, Pseudomonas y
Ciostridium. (María Montelongo 2012)

Agallas y proliferación de raicillas: Las agallas se forman en los tallos y raíces de plantas
infectadas, principalmente por bacterias pertenecientes al género Agrobacterium. Además
está involucrado en esta sintomatología una bacteria del género Pseudomonas. La
proliferación de raicillas puede ser ocasionada por bacterias también del género
Agrobacterium y Rhodococcus. (María Montelongo 2012)

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El diagnóstico de las enfermedades causadas por bacterias no fastidiosas se basa en la
presencia de síntomas característicos, el aislamiento del presunto agente infeccioso, y de
pruebas fisiológicas y/o moleculares. Una forma simple de determinar si una enfermedad
es causada por una bacteria es cortar una lesión típica o zona decolorada cerca de tejidos
sanos y suspenderlo en una gota de agua en un portaobjetos. (Ana Romero 2006)

Para unas pocas bacterias comunes y económicamente importantes hay disponibles

comercialmente pruebas fisiológicas y serológicas, generalmente ligadas a enzimas. Se
están volviendo más comunes las pruebas moleculares, como la reacción en cadena dela
polimerasa (PCR), basados en secuencias genómicas específicas. (Ana Romero 2006)

La confirmación de que el patógeno causa síntomas de enfermedad requiere de un

hospedante y la realización de una prueba de patogenicidad. Un cultivo puro de la bacteria
obtenida de los tejidos enfermos se inocula artificialmente en el mismo cultivar o uno
relacionado, o en otra especie susceptible, con el fin de reproducir los mismos síntomas
de la enfermedad. (Ana Romero 2006)

La bacteria debe aislarse y compararse con el cultivo puro inoculado. Esta estrategia
puede llevar mucho tiempo (días, semanas o meses). Con alguna práctica, la mayoría de
las enfermedades bacterianas puede ser diagnosticada fácilmente. Sin embargo, las
variaciones entre diferentes cepas pueden hacer necesarias pruebas más sofisticadas. (Ana
Romero 2006)

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 IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A. MATERIALES

 Placa Petri
 Mechero
 Muestras de fruto
 Alcohol al 25%
 Pinzas
 Bisturí
 Mechero
 Cámara de aislamiento
 Beaker
 Asa bacteriana
 Lugol
 Violeta

PROCEDIMIENTO

Seleccionar una muestra de 1 cm que contenga tejido sano y tejido muerto.

Llevar a la cámara de aislamiento.

Desinfectar manos y brazos

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Depositar la muestra para desinfectarla.

En la cámara de flujo laminar agregar a una placa Petri hipoclorito de sodio al 1 %. En

otra placa agregar agua estéril

Realizar un medio de cultivo con Papa Dextrosa Agar

La muestra dejar en hipoclorito de sodio por 2 minutos, la pinza la pasamos por el

mechero para desinfectarla

Luego de desinfectada tomamos la muestra con la pinza y la pasamos a la placa que

contiene agua estéril y la dejamos por 1 minuto se pasa otra vez la pinza por el mechero.

Tomamos la muestra con la pinza y la colocamos en el papel toalla para que este absorba
el agua que tiene la muestra Se lleva la pinza al mechero y se desinfecta.

Luego con la pinza desintegramos la muestra en el centro de la placa petri y se depositan

tres gotas de alcohol en los extremos de la placa.

Pruebas químicas en el porta objeto

Prueba de catalasa: Se esteriliza en el mechero la asa bacteriana, con el asa bacteriana

pasar sobre la placa Petri que tiene la colonia de bacterias, extraer cierta cantidad,
depositarla sobre el porta objeto, después agregar una gota de peróxido de hidrogeno y
esperar a ver si se da una reacción de efervescencia.

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Prueba de KOH: Esterilizar el asa bacteriana en el mechero, extraer bacterias de la placa
para depositarlas en el portaobjetos y se agrega una gota de KOH y se mezcla, se observa
si hay viscosidad.

Prueba de tinción de gram Se frota una colonia de bacterias sobre un porta objetos
haciendo un pequeño cuadro, acercar la parte inferior a la llama para secar y fijar las
bacterias, colocar violeta sobre la muestra , mantenerlo por 1 minuto, lavar con agua y
absorber el exceso de agua con papel, agregar 1 gota de lugol mantenerlo por 1 minuto
lavar con agua y secar, agregar 1 gota de alcohol , mantenerlo 20 segundos, lavar y secar
,agregar 2 gotas de safranina mantenerlo por 15 segundos, agregar una gota de aceite para
después pasarlo al microscopio.

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 V. RESULTADOS Y DISCUSIÓNES

En la prueba de catalasa se obtuvo una reacción positiva porque se observó que hubo
efervescencia lo que quiere decir que la bacteria es aeróbica.

En la prueba de KOH se obtuvo una reacción positiva ya que se observó viscosidad al

mezclar la masa de bacterias con el KOH.

En el microscopio se pudo observar las bacterias de un color rojo.

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 VI. CONCLUSIONES

Se realizó el aislamiento de una batería encontrada en un fruto de chile dulce, la colonia

de bacteria era de un color blanco crema.

Se observo con la prueba de tinción de gram utilizando el microscopio el color de la

bacteria el cual es de color que va de rosado a purpura.

Se idéntico que tipo de bacteria fitopatogena es la que se encontró en el fruto de chile de

acuerdo a los resultados obtenidos es una Pseudomona.

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VII. ANEXOS

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 VIII. BIBLIOGRAFIAS

María Montelongo (2012) Diagnóstico de Bacterias fitopatógenas Citado el: 05 de Enero

del año 2018 Disponible en:
http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursos/Diag_Met/Diagn_Bacterias%20MJM.pdf

Yonis Hemández (2010) Bacterias Fitopatógenas Citado el: 05 de Enero del año 2018
Disponible en: https://www.scribd.com/document_downloads/direct/122708777

Ana Romero (2006). Las Bacterias como Patógenos Vegetales Citado el: 05 de Enero
del año 2018 Disponible en:https://www. PathogenGroups/Pages/BacteriaEspanol.aspx
apsnet.org/edcenter/intropp/

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