 El procesamiento postrancripcional del RNA sintetizado se presenta

tanto en eucariontes como en procariontes. Las diferencias más notables

entre estos dos tipos de organismos radica en el procesamiento del
RNAm. En tanto que el RNAm procariota no requiere usualmente ningun
procesamiento, el RNAm eucariota requiere ser profundamente
procesado.
 Mientras son procesados, los transcritos de pre-RNAm, llamado RNA
heterogéneo nuclear (RNAhn), permanecen asociados con unas 20
proteínas nucleares formando partículas de ribonucleoproteína (RNPhn).
 Un poco después de que se inicia la transcripción, se realiza una
modificación del transcrito primario consistente en la adición de una
caperuza (Cap) sobre el extremo 5’. Esta caperuza, formada por la adición
de un residuo de 7’-metil guanosina enlazado a traves de un enlace
trifosfato, proteje al RNAm de la actividad de exonucleasas y
aparentemente promueve su traducción en la maquinaria ribosomal.
Un poco después de que se inició la síntesis de
RNA, el transcrito primario sufre una
modificación de su extremo 5’ que se ha llamado
“cubrir” (capping).
La estructura del casquete o cachucha (cap)
consiste en la adición de 7-metilguanosina que se
une al RNA a través de un enlace 5’ – 5’ trifosfato.
Esta estructura protege el extremo 5’ del RNA
contra la acción de exonucleasas y promueve la
traducción del RNA por los ribosomas.
POLIADENILACIÓN
 Por razones desconocidas la RNA polimerasa II continúa
transcribiendo bastante después de que se haya alcanzado el
extremo funcional del transcrito primario. Una vez que la
transcripción ha terminado, el transcrito es hidrolizado en un
sitio específico cerca de la secuencia AAUAAA.
 Inmediatamente después se le agregan en su extremo 3’,
entre 100 y 250 residuos de adenilato por la enzima Poli(A)
polimerasa.
POLIADENILACIÓN
 Se le han adscrito a esta cola de Poli-A algunas
funciones importantes, que incluyen la
amortiguación del efecto que la actividad de las
3',5'-exonucleasas podrían tener eliminando
secuencias importantes del transcrito primario,
esto mismo podría tener que ver con la vida
media activa del mensajero. También parece
participar en el mecanismo de transporte del
RNAm del núcleo al citoplasma y su traducción
por el ribosoma. Algunos RNAm como los de las
histonas no poseen cola de Poli-A.
CORTE Y EMPALME (SPLICING)
 El proceso más dramático y complejo que debe sufrir
el RNAhn, antes de ser RNAm, es la supresión de los
intrones.
 Durante este proceso, que se ha llamado ayuste o
corte y empalme (splicing), cada intron es eliminado
en una configuración desusada llamada “lariat” o
lazo.
 El splicing se realiza dentro del espliceosome. Los
componentes de estas máquinas macromoleculares
(40S-60S) son llamados RNPsn (snRNP en inglés,
small nuclear ribonucleoprotein particles,
pronunciado “snurps”). RNPsn ocurren en cinco
formas diferentes (U1, U2, U4, U5, y U6) y consisten
de numerosas proteínas y una molécula de RNAsn en
cada una.
 Las moléculas de RNA con actividad catalítica han
CORTE Y EMPALME (SPLICING)
 Para asegurar que el mensaje codificado en el
RNA no sea destruido, el proceso de splicing debe
realizarse de una manera muy precisa.
 El principio, y el final de los intrones es
reconocido por una secuencia característica
(...AGGT... en el extremo 5’ o...[C,U]AGG... en el
extremo 3’). Otra estructura importante dentro
del intrón es el llamado punto de ramificación
cuya secuencia es menos conservada que la de las
secuencias de splicing, pero que siempre contiene
un residuo de Adenosina (A).
 SPLICING
AYUSTE
CORTE Y EMPALME

 Durante el splicing, el 2’-OH de

la adenosina en el punto de
ramificación del intrón, ataca el
enlace fosfodiéster en el extremo
5’ del intrón y lo hidroliza.
 Simultánemente se forma un
enlace 2’ – 5’ dentro del intrón,
el cual forma una especie de
lazo, llamado “lariat”.
 Finalmente, el grupo 3’-OH
libre, en el extremo 5’ del exón,
ataca el enlace A-G en el
extremo 3’ del intrón, resultando
en el empalme de los exones y la
eliminación del intrón, aún en
SPLICING
 El mecanismo de splicing del
RNAm se inicia con el
ataque nucleofílico del 2'-OH
de una adenosina específica
sobre un 5’ fosfato en el sitio
donde se realizará el corte.
 Se constituye un lariat o lazo
por la formación de un
enlace 2',5' fosfodiéster.
 Enseguida el extremo 3'-OH
del exón 1 (actuando como
un nucleófilo) ataca un
fosfato adyacente al lariat.
Esta reacción libera el intrón
y re-enlaza los dos exones.
 Antes que la RNA polimerasa II
pueda iniciar la transcripción de
un gene, algunos factores de
transcripción deben ser
ensamblados formando un
complejo de iniciación.
 Este proceso se inicia cuando
TFIID se une a la secuencia
TATA.
 TFIID, que consiste de una
proteína fijadora, TBP (Tata
Binding Protein), y varias
proteínas asociadas, se fija y
desenrolla el DNA en la región
de TATA del promotor.
 Enseguida se fija TFIIB y
después TFIIE, TFIIH, y TFIIJ.
 El factor TFIIF se fija
directamente a la RNA
polimerasa II.
 A causa de las fosforilaciones
catalizadas por TFIIH, la RNA
polimerasa II se vuelve activa e
 Procesamiento del RNAm en Células
Eucariotas
 El ARN mensajero obtenido después de la transcripción se
conoce como transcrito primario o ARN precursor (pre-RNA),
que en la mayoría de los casos no se libera del complejo de
transcripción en forma totalmente activa, sino que ha de sufrir
modificaciones antes de ejercer su función (procesamiento o
maduración del RNA). Concretamente, el procesamiento del
ARN en eucariotas comprende diferentes fases:
 Adición al extremo 5' de la estructura denominada caperuza
o casquete (o CAP, su nombre en inglés) que es un nucleótido
modificado de guanina, la 7-metilguanosina, que se añade al
extremo 5' de la cadena del RNAm transcrito primario (ubicado
aún en el núcleo celular) mediante un enlace 5'-fosfato → 5'-
fosfato en lugar del habitual enlace 3',5'-fosfodiéster. Esta
caperuza es necesaria para el proceso normal de traducción del
RNA y para mantener su estabilidad; esto es crítico para el
reconocimiento y el acceso apropiado del ribosoma.
 Procesamiento del RNAm en Células
Eucariotas
 Poliadenilación: es la adición al extremo
3' de una cola poli-A, una secuencia larga
de poliadenilato, es decir, un tramo de RNA
cuyas bases son todas adenina. Su adición
está mediada por una secuencia o señal de
poliadenilación (AAUAAA), situada unos
20-30 nucleótidos antes del extremo 3'
original. Esta cola protege al ARNm frente
a la degradación, aumentando su vida
media en el citosol, de modo que se puede
sintetizar mayor cantidad de proteína.
 Procesamiento del RNAm en Células
Eucariotas
 En la mayoría de los casos, el RNA mensajero sufre
la eliminación de secuencias internas, no
codificantes, llamadas intrones. Esto no ocurre en
células procariontes, ya que estas no poseen
intrones en su DNA. El proceso de retirada de los
intrones y conexión o empalme de los exones se
llama ayuste, o corte y empalme (en inglés,
splicing). A veces un mismo transcrito primario o
pre-ARNm se puede ayustar de diversas maneras,
permitiendo que con un solo gen se obtengan varias
proteínas diferentes; a este fenómeno se le llama
ayuste alternativo.
 Ciertas enzimas parecen estar involucrados en editar
el RNA antes de su exportación fuera del núcleo,
intercambiando o eliminando nucleótidos erróneos.
 El tamaño de algunos RNAm citoplásmicos, aún después de que
se les ha suprimido la cola de Poli-A, es considerablemente mayor
(en ocasiones 2 o 3 veces mayor) que el necesario para codificar
por la proteína específica para la cual sirve como templado.
 Los nucleótidos restantes se encuentran en amplias regiones
tanto en el extremo 5’ terminal, como en el 3’terminal de la región
codificante, que no codifican por ningún aminoácido y que por lo
tanto no serán traducidas. Estas regiones no codificantes ocurren
con mayor frecuencia en el extremo 3’ terminal del RNAm.
 No se conoce con certeza la función o funciones que dichas
regiones desempeñan, pero parece ser que están implicadas en el
procesamiento, transporte, degradación y traducción del RNAm y
constituyen niveles adicionales de control de la expresión
genética.
Modificación Postranscripcional
 El código transcrito en el RNAm final puede ser todavía
editado por modificaciones estructurales
postranscripcionales en la secuencia de bases del
RNAm.
 En estos casos la secuencia de bases del RNAm diferirá
de la secuencia de bases presentes en el templado
genético del DNA.
 Por ejemplo a nivel intestinal la actividad de una citidina
deaminasa específica, convierte un codón CAA
(glutamina) del RNAm que codifica en el hígado para la
síntesis de la proteína apoB100, en un codón UAA que
indica el término de la elongación de manera que la
proteína sintetizada es más corta y diferente en este
nicho fisiológico (apoB48).
 En la actualidad se estima que < 0.01% del RNAm es
editado postranscripcionalmente de esta manera.
 Procesamiento del RNAm en células
eucariotas
 En el caso de los organismos eucariontes, el RNA
mensajero maduro es trasladado al citosol de la
célula a través de poros de la membrana nuclear.
 Una vez en el citoplasma, los RNAm se acoplan
los ribosomas, que son la maquinaria encargada
de la síntesis proteica. En procariontes, la unión
de los ribosomas ocurre mientras la cadena de
RNAm esta siendo sintetizada, o inmediatamente
después de terminar su síntesis.
 Después de cierta cantidad de tiempo el RNAm
se degrada en sus nucleótidos componentes,
generalmente con la ayuda de ribonucleasas.