UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP

FACULTAD DE SALUD Y NUTRICIÓN

CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

BIOQUÍMICA
PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 2

DOCENTES: OMAR AMPUDIA GARCÍA – VÍCTOR LLAJA - ROSA A. MIGUEL ATO

ampudiaomaranalisis@gmail.com victorllaja@hotmail.com rmiguelato@gmail.com
 PRACTICA N°2
El pH EN LOS DIFERENTES FLUIDOS BIOLÓGICOS

EL pH (POTENCIAL DE HIDRÓGENO) ES UNA MEDIDA DE

ACIDEZ O ALCALINIDAD DE UNA DISOLUCIÓN

EL pH INDICA:

✓ LA CONCENTRACIÓN DE IONES HIDRONIO [H3O+] PRESENTES EN

DETERMINADAS SUSTANCIAS.

✓ ES EL LOGARITMO NEGATIVO EN BASE 10 DE LA ACTIVIDAD DE LOS IONES

HIDRÓGENO pH = - log [H+]

✓ LA [H+] DEFINE LA ACIDEZ O ALCALINIDAD DE UNA SOLUCIÓN

 ÁCIDOS Y BASES

DEFINICIÓN DE ARRHENIUS
Ácido es una sustancia que aumenta la concentración
del ión hidrógeno (H+) cuando se disuelve en el
agua.
HCl H+ + Cl- Ácido

Base es una sustancia que aumenta la concentración

del ión oxidrilo (OH-) o hidroxilo cuando se disuelve
en agua.
Na OH OH- + Na+ Base
GRUPO QUÍMICO RESPONSABLE DE LA ACIDEZ: H+
GRUPO QUÍMICO RESPONSABLE DE LA BASICIDAD: OH-

UNA SOLUCIÓN ES ÁCIDA CUANDO [H+] > [OH-]

UNA SOLUCIÓN ES BÁSICA CUANDO [H+] < [OH-]
UNA SOLUCIÓN ES NEUTRA CUANDO [H+] = [OH-]

POR LO TANTO:

EL pH ES UNA ESCALA QUE DEFINE LA ACIDEZ O ALCALINIDAD

DE UNA SOLUCIÓN.
La concentración de [H+] y de [OH-] de una solución
están relacionadas a través del producto iónico del
agua:  
H 2 O  H 2 O  H 3O  OH -

 
K w  H 3O  * OH - 

en agua pura H 3O    OH  
-
Kw

Kw = H3O+ · OH– = 10–14

LA ESCALA DE pH TÍPICAMENTE VA
DE 0 A 14 EN DISOLUCIÓN
ACUOSA.

SIENDO ÁCIDAS LAS DISOLUCIONES

CON pH MENORES A 7 (EL VALOR
DEL EXPONENTE DE LA
CONCENTRACIÓN ES MAYOR,
PORQUE HAY MÁS IONES EN LA
DISOLUCIÓN) Y ALCALINAS LAS QUE
TIENEN pH MAYORES A 7.

EL pH = 7 INDICA LA NEUTRALIDAD
DE LA DISOLUCIÓN (CUANDO EL
DISOLVENTE ES AGUA).
pH INDICADOR DE ACIDEZ O ALCALINIDAD DE UNA SUSTANCIA
 ECUACIÓN DE HENDERSON-HASSELBACH

La ecuación de Henderson-Hasselbach
C
se utiliza para: TOXI CIDAD
C ME

✓ Conocer la relación de las formas

ionizadas y no ionizadas de los MT
sistemas amortiguadores del
organismo. Cm E
SUBT ERAPÉUTIC O
✓ Determinar el grado de ionización t
de los fármacos en el TGI.

pH

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 MEDIDA DEL pH

MÉTODO COLORIMÉTRICO
 PAPEL INDICADOR

SE PUEDE MEDIR DE FORMA APROXIMADA EL pH DE UNA DISOLUCIÓN

EMPLEANDO PAPEL IMPREGNADO DE UNA MEZCLA DE INDICADORES
CUALITATIVOS PARA LA DETERMINACIÓN DEL pH.

PAPEL TORNASOL ES EL INDICADOR MEJOR CONOCIDO.

 INDICADORES DE pH

Color forma Color forma Zona de

Indicador
ácida básica viraje (pH)
Violeta de
Amarillo Violeta 0-2
metilo

Rojo Congo Azul Rojo 3-5

Rojo de
Rojo Amarillo 4-6
metilo

Tornasol Rojo Azul 6-8

Rojo
Fenolftaleína Incoloro 8-10
grosella
 MEDIDA DEL pH

MÉTODO POTENCIÓMETRO
 POTENCIÓMETRO

EL VALOR DEL pH SE PUEDE MEDIR DE FORMA PRECISA MEDIANTE UN

POTENCIÓMETRO TAMBIÉN CONOCIDO COMO pH-METRO, UN INSTRUMENTO
QUE MIDE LA DIFERENCIA DE POTENCIAL ENTRE DOS ELECTRODOS: UN
ELECTRODO DE REFERENCIA (GENERALMENTE DE PLATA/CLORURO DE PLATA)
Y UN ELECTRODO DE VIDRIO QUE ES SENSIBLE AL ION DE HIDRÓGENO.
 Bicarbonato sódico

Lago Ontario

Orina humana
EQUILIBRIO ACIDO-BASE
ALCALINO
Saliva, pH 5,7-7,1
Zumo de tomate

¿Cuál es la relación entre la concentración de

pH medio del agua de lluvia
Toronto, febrero 1979
Lejía

Amoniaco
un amortiguador y el pH?
Manzanas
Lechada de magnesia
Zumo de limón
Agua de mar
ÁCIDO
Sangre humana
Ecuación de Henderson-Hasselbach:
pH NEUTRO
Leche

Agua de lluvia teóricamente “pura”, pH 5,6

pH letal para la mayoría de los peces, pH 4,5-5,0

Base
Vinagre
Ácido
La lluvia más ácida registrada en USA

Ácido de una batería

pH SUSTANCIAS BIOLÓGICAS
 pH DE LOS LÍQUIDOS DEL SER HUMANO

LÍQUIDOS BIOLÓGICOS pH
Sangre venosa 7,35
Sangre arterial 7,45
Saliva 6,0-7,0
Saliva (pacientes con cáncer) 4,5-5,7

Orina 6,0-8,0
Lagrima 7,5

Duodeno (Luz) 3

Duodeno (superficie de vellosidades) 5,5

Yeyuno (luz) 6-7
Jugo gástrico 1,5-2,0

Lagrima 7,5
Sudor humano 5,5
Líquido amniótico 7,0-7,5
Semen 7,2-8,0

Vómito 3,8
ALTERACIONES DEL pH
 EQUILIBRIO ÁCIDO BASE

AMORTIGUADORES FISIOLÓGICOS

IMPLICA QUE SE MANTENGA UN pH EN SANGRE DE 7,35

✓ POR DEBAJO DE ESTE VALOR: ACIDEMIA

✓ POR ENCIMA DE ESTE VALOR: ALCALEMIA

ACIDOSIS METABÓLICA: pH H HCO-3

ALCALOSIS METABÓLICA: pH H HCO-3

ACIDOSIS RESPIRATORIA: pH H PCO2

ALCALOSIS RESPIRATORIA: pH H PCO2

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 SISTEMA AMORTIGUADOR
MECANISMOS DE COMPENSACIÓN

Sistema Amortiguador: Sistema que tiene las condiciones de compensar cualquier

déficit o exceso de H+
Para mantener este pH el organismo tiene mecanismos de compensación que
hacen que las variaciones de pH derivadas de las variaciones metabólicas se
compensen para volver a la situación de pH adecuado.

Que es el más inmediato:

✓ Sistema carbónico bicarbonato (H2CO3/HCO-3)
✓ Sistema fosfatos (H2PO4/HPO=4)
Proteínas plasmáticas:
✓ Las proteínas se comportan como anfolitos, que suelen captar prótones,
frente a un incremento de H+
Un amortiguador disminuye los cambios de pH de una solución en respuesta a cambios
en las concentraciones de ácidos o álcalis.
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 SOLUCIÓN “BUFFER”

• DIVERSAS REACCIONES QUÍMICAS QUE SE PRODUCEN EN SOLUCIÓN ACUOSA NECESITAN

QUE EL pH DEL SISTEMA SE MANTENGA CONSTANTE, PARA EVITAR QUE OCURRAN OTRAS
REACCIONES NO DESEADAS. LAS SOLUCIONES REGULADORAS O "BUFFER" SON CAPACES DE
MANTENER LA ACIDEZ O BASICIDAD DE UN SISTEMA DENTRO DE UN INTERVALO REDUCIDO
DE pH. ESTAS SOLUCIONES CONTIENEN COMO ESPECIES PREDOMINANTES, UN PAR
ÁCIDO/BASE CONJUGADO EN CONCENTRACIONES APRECIABLES. LA REACCIÓN DE
NEUTRALIZACIÓN: ES UNA REACCIÓN ENTRE UN ÁCIDO Y UNA BASE, GENERALMENTE EN
LAS REACCIONES ACUOSAS ÁCIDO-BASE SE FORMA AGUA Y UNA SAL.
EL ORGANISMO POSEE TRES MECANISMOS PARA MANTENER EL pH EN VALORES COMPATIBLES
CON LA VIDA:
• LOS AMORTIGUADORES.
• LA REGULACIÓN PULMONAR DE LA PCO2.
• LA RESORCIÓN Y ELIMINACIÓN RENAL DE BICARBONATO Y LA EXCRECIÓN DE ÁCIDOS
 EQUILIBRIO ACIDO-BASE

SISTEMAS AMORTIGUADORES EN EL ORGANISMO

➢ Bicarbonato-Bióxido de carbono
➢ Hemoglobina
➢ Proteínas plasmáticas e intracelulares
➢ Fosfato disódico-fosfato monosódico
➢ El sistema HCO3-/CO2 provee el 75% de la
capacidad amortiguadora total del organismo
 ALTERACIONES DEL
EQUILIBRIO ACIDO-BASE

pH normal 7.35-7.45
➢ Acidosis pH < 7.35
➢ Alcalosis pH > 7.45

Alteraciones primarias de la pCO2

➢ Alteraciones respiratorias
➢ Acidosis y alcalosis y respiratoria

Alteraciones primarias de la [HCO3-]

➢ Alteraciones metabólicas
➢ Acidosis y alcalosis metabólica
ALTERACIONES DEL
EQUILIBRIO ACIDO-BASE
Trastorno Alteración pH Respuesta
primaria compensatoria
Acidosis HCO3- Disminuye pCO2
metabólica Disminuye Disminuye
Alcalosis HCO3- Aumenta pCO2
metabólica Aumenta Aumenta
Acidosis CO2 Disminuye HCO3-
respiratoria Aumenta Aumenta
Alcalosis CO2 Aumenta HCO3-
respiratoria Disminuye Disminuye
 BIOQUÍMICA DE ÁCIDOS Y BASES

Origen del pH :
La principal fuente de H+ es el dióxido de carbono (CO2), producto final del
catabolismo oxidativo de la glucosa y ácidos grasos:
CO2 + H2O  H2CO3  HCO3- + H+

En los capilares pulmonares: Este proceso se revierte, el CO2 diluido en sangre

pasa la barrera alveolo-capilar y se elimina mediante la ventilación alveolar. El
ácidoc arbónico pasa entonces a gas (ácido volátil) y es eliminado por los pulmones

Ácidos no volátiles: Representan sólo un 0.2% del total de ácidos producidos

Ejemplos: ácido sulfúrico (metabolismo cisteína), ácido fosfórico
(fosfolipoproteínas), ácido láctico (metabolismo anaeróbico glucosa) → CO2,
ingesta accidental ó farmacológica, ácidos derivados de procesos patológicos
(cetoacidosis diabética). Eliminación este tipo ácidos: Tracto digestivo  Riñón
 BIOQUÍMICA DE ÁCIDOS Y BASES

Definiciones :
En el cuerpo humano:
Rango de pH oscila entre 1 (ácido gástrico) y 7.5 (páncreas)
Sangre arterial: 7.4, normalidad: 7.35-7.45

Según fórmula: pH = - log [H+]

↑ pH   [H+], alcalinización del medio
 pH  ↑ [H+], acidificación del medio

En el ser humano: Los H+ son cationes fuertes que interaccionan especialmente con
proteínas, de carga negativa (aniones débiles)  cambios estructurales +
funcionales
Ejemplos:
• Hemoglobina pierde afinidad por el Oxígeno en condiciones de pH bajo
(Fenómeno de Bohr)
• Extremos de pH: pH > 7.8 ó pH < 6.9 Incompatibles con la vida
 BIOQUÍMICA DE ÁCIDOS Y BASES
Sistemas de Defensa contra los cambios de [H+]:
- Sistemas tampón ácido-base
- Centro respiratorio: regula la eliminación de CO2 (H2CO3)
- Riñones: excretan orina ácida o alcalina
Puesta en marcha:
• Cuando se produce una modificación en la [H+], los sistemas tampón reaccionan
en
fracciones de segundo para minimizar estos cambios
• Los sistemas tampón NO eliminan ni añaden H+ al organismo, sólo los mantienen
“controlados” hasta el restablecimiento del equilibrio
• El sistema respiratorio actúa en pocos minutos para eliminar el CO2
-Estos 2 sistemas mantienen “controlados” los niveles de H+ hasta que actúan los:

• Riñones: más lentos en actuar, pero eliminan el exceso de ácido o base del
cuerpo
• A pesar de su lentitud en actuar, al cabo de unas pocas horas y días, los riñones
constituyen el sistema regulador del equilibrio ácido-base más potente
 BIOQUÍMICA DE ÁCIDOS Y BASES

SISTEMAS TAMPÓN :
En el rango fisiológico: bicarbonato, fosfatos, y proteínas actúan como tampones
de forma permanente

Valor tampón: Cantidad de H+ (mEq/L) que pueden añadirse ó eliminarse de una

solución resultando en un cambio de pH de 1

pK de un ácido: K constante de disociación: K = [H+] [base] / [ácido]

pH = pK + log [base] / [ácido] Ecuación de Henderson-Hasselbach

 BIOQUÍMICA DE ÁCIDOS Y BASES

1.- Sistema Bicarbonato :

Consta de una pareja de tampones de ácido débil (ácido carbónico) y su base
conjugada (bicarbonato)
Su capacidad de actuar como tampón de ácidos se debe en gran parte a la
capacidad de los pulmones de eliminar CO2
A 37ºC: 0.03 mmol de CO2 por mmHg se disuelve en 1L de plasma, [CO2] disuelto:
0.03 x PaCO2 mmol/L, CO2 + H2O  H2CO3  HCO3- + H+
En plasma: - equilibrio de esta reacción desplazado hacia la izquierda
- 1000 veces más CO2 disuelto en plasma que en forma de ácido
carbónico
- CO2 disuelto en equilibrio con el ácido carbónico no disociado de la
ecuación de H-H para el sistema bicarbonato:
pH = pK + log [ HCO3-] / [CO2 + H2CO3]
dado que [H2CO3] insignificante → pH = pK + log [HCO3-] / 0.03 x PaCO2
Según el diagrama de Henderson-Hasselbach: para cada valor de pH y [ HCO3-]
existe un valor correspondiente de PaCO2
 BIOQUÍMICA DE ÁCIDOS Y BASES
2.- Sistema Fosfatos :
- Sistema tampón que consta de 2 pares de aniones: mono y dihidrógeno de
fosfato,
equilibrio: H2PO4-  H+ + HPO42-
- El pK de la forma ácida: 6.8, cercano a 7
- Ejercen su acción sobre todo en el medio intracelular
3.- Proteínas:
- Varios grupos de proteínas pueden actuar como potenciales tampones
- Pero sólo el grupo de los imidazoles posee un pK situado en el rango del pH
sangre
- Grupo imidazol sito en el residuo histidina de las cadenas peptídicas
- pK oscilan: 5.5-8.5, amplio rango de tampón
- Hemoglobina: rango pK 7-8
- Hemoglobina en forma desoxi-Hb ácido más débil que Hb en forma oxi-Hb
- A medida que oxígeno liberado de la Hb en capilares tisulares, los grupos imidazol
Hb
eliminan H+ del interior hematíes  CO2 se transporte en forma de bicarbonato
- Este mismo proceso se revierte en capilares pulmonares