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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN


Campo Uno

QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO

LABORATORIO DE BIOQUIMICA DE SISTEMAS

PROTOCOLO: “ALTERACIONES BIOQUÍMICAS EN ANEMIA


HEMOLÍTICA INDUCIDA POR AMOXICILINA EN RATAS WISTAR MACHO”

GRUPO: 2504
EQUIPO 6:
PACHECO CORTÉS CARMEN

RAMÍREZ TORRES CLAUDIA

RODRÍGUEZ SUÁREZ VIANET

SANTAMARIA GUTIERREZ AUREA JENNY

PROFESORAS:
QFB AUREOLA MACIAS
QFB TAIS NOPAL
QFB MARTHA PATRICIA ZUÑIGA

17 DE MARZO DE 2010.

0
Índice
Introducción ................................................................................................................... 2
Justificación del tema ............................................................................................ 3
Objetivo general ....................................................................................................... 6
Objetivos particulares ............................................................................................ 6
Hipótesis ................................................................................................................... 6
Marco teórico
1. Sangre ....................................................................................................... 7
1.1 Definición y características de la sangre ............................................. 7
1.2 Composición de la sangre ..................................................................... 8
1.3 Formación de las células sanguíneas ............................................. 10
2. Función de la sangre ................................................................................ 12
2.1 Función del plasma ................................................................................ 12
2.2 Función de los elementos formes ......................................................... 13
3 Bioquimica de la sangre ................................................................................ 15
3.1 Eritropoyesis ............................................................................................ 15
3.2 Metabolismo del eritrocito ..................................................................... 17
3.3 Vía Embden–Meyerhof o Glucolisis ............................................. 17
3.4 Ciclo de las Pentosas ................................................................................ 18
3.5 Vía de la Hemoglobina Reductasa ......................................................... 20
3.6 Ciclo de Rapoport – Luebering ......................................................... 20
3.7 Hemólisis Trastornos metabólicos ......................................................... 21
3.7.1 Clasificación de las hemólisis crónicas ................................. 22
3.7.1.1 Hemólisis intravascular ..................... 22
3.7.1.2 Hemolisis de fragmentación ..................... 23
3.7.1.3 Hemolisis reticuloendoterial. ..................... 23
3.8 Función-Hemoglobina (Metahemoglobina) ................................. 24
3.8.1 Grupo Hemo: Síntesis y Degradación. ................................. 25
3.8.2 Reacciones de la hemoglobina ............................................. 28
3.8.3 Catabolismo de la Hemoglobina ............................................. 28
3.9 Glutatión ............................................................................................ 29
3.10 Metabolismo de la bilirrubina: ......................................................... 31
4 Etiología de anemias hemolíticas inmunes adquiridas por fármacos .......... 32
4.1 Definición y características. .................................................................... 32
4.2 Fármacos firmemente unidos al eritrocito. .............................................. 34
4.2.1 Tipo hapteno ................................................................................ 34
4.3 Fármacos laxamente unidos al eritrocito. ............................................. 35
4.3.1 Características y mecanismo de acción de la amoxicilina..... 36
5 Pruebas de laboratorio .................................................................................... 38
5.1 Determinación de hemoglobina ........................................................ 38
5.1.1 Fundamento .................................................................... 38
5.1.2 Procedimiento .................................................................... 38
5.1.3 Interpretación .................................................................... 39
5.1.4 Valor de Referencia en ratas ............................................ 39
5.2 Hematocrito (volumen del paquete hemático) ................................ 39
5.2.1 Fundamento ............................................................................... 39
5.2.2 Procedimiento .................................................................... 40
5.2.3 Interpretación .................................................................... 42

1
5.2.4 Valores de referencia en ratas ............................................ 42
5.3 fragilidad osmótica eritrocitaria ........................................................ 42
5.3.1 Fundamento ................................................................................ 42
5.3.2 Procedimiento .................................................................... 43
5.3.3 Interpretación .................................................................... 43
5.4 Conteo de reticulocitos. .................................................................... 44
5.4.1 Fundamento ................................................................................ 44
5.4.2 Procedimiento .................................................................... 45
5.4.3 Interpretación .................................................................... 46
Diagrama metodológico ........................................................................................... 47
1) Distribución, dosis y costo .................................................................... 48
2) Cronograma ........................................................................................... 48
3) Material, reactivos y equipo requerido ............................................ 49
Resultados y análisis
Tablas de resultados del equipo 6 .................................................................... 50
a) Lote blanco ............................................................................... 50
b) Lote Yakult® ................................................................................ 50
c) Lote amoxicilina + Yakult® ........................................................ 51
Hematocrito ...................................................................................................... 52
(Fundamento, cálculos, gráfico y análisis de resultados)
Hemoglobina ....................................................................................................... 53
(Fundamento, cálculos, gráfico y análisis de resultados)
Conteo celular ............................................................................................ 55
(Fundamento, cálculos, gráfico y análisis de resultados)
Fragilidad osmótica ........................................................................................... 57
(Fundamento, cálculos, gráfico y análisis de resultados)
Observaciones ........................................................................................... 58
(Fundamento, gráfico y análisis de resultados)
I. Características macroscópicas ................................. 59
(Tablas y análisis de resultados)
II. Variaciones de peso ......................................................... 61
(Gráfico y análisis de resultados)
III. Observaciones anatómicas ............................................. 62
(Tabla, fotografias y análisis de resultados)
Conclusiones ....................................................................................................... 66
Referencias y bibliografía ............................................................................................ 69

2
Introducción

La sangre es el único tejido que fluye por todo su cuerpo. Este líquido rojo transporta
oxígeno y nutrientes a todas las partes del cuerpo y de los productos de desecho de nuevo a los
pulmones, los riñones y el hígado para su eliminación. También es una parte esencial de su
sistema inmunológico, fundamental para el equilibrio de fluidos y la temperatura, un fluido
hidráulico para ciertas funciones y de una autopista para los mensajes hormonales.
Las células requieren del aporte de oxígeno para su correcto funcionamiento. Los
encargados de llevar oxígeno a los tejidos son los hematíes, también llamados eritrocitos o
glóbulos rojos. En su interior se halla una proteína compleja, la hemoglobina, que es la que
transporta el oxígeno y el dióxido de carbono que se intercambian en los alveolos pulmonares.
Cuando por el motivo que sea se produce una falta de hematíes en número o bien
disminuya su capacidad para realizar su función se habla de un estado de anemia. Es
precisamente la hemoglobina el parámetro analítico que se valora para determinar si existe una
anemia o no. Se indica que existe anemia cuando la hemoglobina en sangre es inferior a 13 mg/dl
en el hombre o a 12 mg/dl en la mujer.
La administración de medicamentos puede provocar la aparición de una gran variedad de
anormalidades hematológicas, entre ellas la anemia hemolítica inmune por drogas (AHIPD). Estas
anemias hemolíticas inmunes se producen cuando a los estados de hemólisis aumentada que se

3
acompañan de la presencia en la superficie eritrocitaria de inmunoglobulinas dirigidas contra los
determinantes antigénicos de los hematíes, como la producida por fármacos.
Se producen cuando un medicamento desencadena la aparición de anticuerpos dirigidos
contra determinantes antigénicos de los hematíes. Las drogas pueden producir diferentes grados
de hemólisis, que van desde leves a graves.
Los fármacos que actúan por este mecanismo se combinan débilmente con las proteínas
de la membrana eritrocitaria. Este complejo se denomina conjugado hapteno-proteína. El
inmunocomplejo fármaco-antifármaco se fija sobre los hematíes. Éstos, a su vez, fijan el factor
C3b, con lo que se activa la cascada del complemento. El cuadro clínico consiste en una anemia
hemolítica intravascular grave que provoca insuficiencia renal aguda. La anamnesis revela la toma
previa del fármaco en cuestión, que actúa como dosis sensibilizante, y basta una pequeña dosis
de recuerdo para que ocurra bruscamente la hemólisis.
Del 16 al 18 por ciento de las anemias hemolíticas adquiridas corresponden a este tipo. En
1954, Harris demostró que algunos compuestos químicos podían causar anemia hemolítica-
Coombs positiva, al observar a un paciente tratado con estibofeno, droga usada para el
tratamiento de la esquistosomiasis. Posteriormente, se fueron encontrando otros compuestos
capaces de ocasionar lo mismo, aunque mediante diferentes mecanismos.

Justificación del tema

El presente trabajo se realiza con la finalidad de adquirir el conocimiento de las diferentes


técnicas de manejo de información y de datos experimentales, además de que nos permite
aprender a manejar a los animales de experimentación (en este caso las ratas Wistar). Pues como
sabemos siendo las ratas de laboratorio una parte fundamental para la realización de este
proyecto, se llevaran a la práctica el manejo y cuidados para darles un periodo de vida adecuado
conforme dure el proyecto. Dado que estas son reconocidas como un modelo en la investigación,
elegidas por ciertas cualidades como son: el tamaño pequeño, corto tiempo de reproducción, fácil
alimentación y sobre todo, la gran similitud que tiene su metabolismo con el del humano; debido a
ello, es posible experimentar metodologías que tendrán, en un futuro, una aplicación directa en el
ser humano.
Así mismo, mediante este proyecto, se busca conocer los efectos adversos que tiene la
amoxicilina sobre el metabolismo de las ratas, siendo más específica, la aparición de anemia
hemolítica.
Económicamente este fármaco juegan un papel importante en la industria farmacéutica; la
amoxicilina es un antimicrobiano que igualmente después de su uso prolongado llega a generar

4
anemia hemolítica, ya que se adsorbe pasivamente a la membrana eritrocitaria; los anticuerpos
anti-fármaco, se unen y destruyen al eritrocito.
Al dejar de administrar el fármaco el proceso hemolítico se controla pues, aunque no
desaparezcan los anticuerpos, estos no pueden causar hemólisis en ausencia del fármaco.
Lo que se busca al realizar este proyecto es aprender a trabajar en equipo en el laboratorio
realizando pruebas que nos permitan conocer el avance de la inducción de la patología esperada,
obviamente sin la suspensión de este, para así mediante diferentes pruebas y finalmente
necropsia se observe claramente los efectos del fármaco Igualmente se aprenderá a trabajar con
los reactivos e instrumentos que más adelante serán importantes para asegurar que cualquier
prueba realizada sea correcta.

Objetivo general

Inducir anemia hemolítica en ratas Wistar macho, administrando amoxicilina, para valorar
su efecto bioquímico mediante pruebas de laboratorio (Hemoglobina, Hematocrito, Conteo
Eritrocitario, Fragilidad Osmótica).

Objetivos particulares

Evaluar la alteración metabólica sobre la membrana eritrocitaria producida por amoxicilina


en los animales problema.

Proteger a la flora bacteriana de los daños causados por la amoxicilina utilizando un


gastroprotector (Yakult®)

Realizar la prueba de hematocrito para evaluar el daño provocado por la administración de


amoxicilina en ratas problema.

Determinar la presencia de anemia hemolítica utilizando el método de conteo eritrocitario.

Analizar las variaciones en los niveles de hemoglobina que se presenten entre un lote de
ratas wistar blanco y un lote tratado con amoxicilina y Yakult®, mediante la realización de la técnica

5
para determinación de ciano meta hemoglobina, con el fin de comprobar el desarrollo de la anemia
hemolítica.

Analizar la resistencia eritrocitaria a diferentes concentraciones de NaCl (0.3%, 0.5%,


0.6%), midiendo la Fragilidad Osmótica, como un parámetro para determinar los daños producidos
por la Amoxicilina en rata Wistar macho.

Analizar las características físicas, variaciones de peso y de comportamiento durante el


tratamiento.

Evaluar el daño morfológico sobre diferentes órganos y sistemas.

Hipótesis
Si administramos Amoxicilina a dosis de 90 mg/kg/día (mayor a las dosís terapéuticas
pediátricas) por un tiempo prolongado (41 días), entonces se producirán alteraciones bioquímicas
que derivan a una anemia hemolítica.

Marco teórico
1. Sangre.

1.1 Definición y características de la sangre.


La sangre es un tejido conectivo líquido, cuyas células fluyen rodeadas de una sustancia
intercelular denominada plasma, a través de un sistema cerrado de vasos sanguíneos, además de
componerse de diversos tipos de células y fragmentos celulares. Permite la nutrición,
comunicación, protección y reparación de los diversos tejidos del organismo.1
La sangre se encuentra moviéndose regularmente en un flujo unidireccional, manteniendo por
las contracciones rítmicas del corazón, se distribuye a través de las arterias (sangre arterial) y
capilares por todo el organismo y vuelve por las venas (sangre venosa) al mismo para, a través del
proceso de oxigenación en los pulmones, convertirse de nuevo en sangre arterial. 1
Cuando es removida del organismo tiende a coagular, haciéndose gelatinosa. Al adicionar
anticoagulantes, sedimenta, reconociéndose 3 capas con claridad: El plasma, los glóbulos blancos
(leucocitos) y los glóbulos rojos (eritrocitos), estos dos últimos conocidos como elementos
figurados. 1
El plasma obtenido por sedimentación es el medio líquido en el que están inmersos los
componentes de la sangre. Rico en proteínas, alberga en su interior un tercer grupo de células
sanguíneas denominadas: trombocitos o plaquetas. 1

6
Este fluido, que circula por un sistema tan complejo como el cardiovascular y puede llegar a
todas las células del cuerpo. El volumen promedio de sangre de un hombre es de 5,5 litros, y el de
una mujer de aproximadamente un litro menos. Algo más de la mitad de este volumen está
formado por el plasma, la parte líquida de la sangre. Por él circulan las células sanguíneas, que
son de diversos tipos: los eritrocitos o glóbulos rojos, los leucocitos o glóbulos blancos y las
plaquetas o trombocitos. 1
Al dejar en reposo la sangre, las células sedimentan y el plasma aparece como un líquido
sobrenadante de color amarillo claro (Figura 1). La sangre coagulada sufre modificaciones, entre
las que destaca la precipitación de fibrina, sustancia que forma la estructura fundamental del
coagulo (Figura 2).1

Figura 1: Plasma y paquete celular de una muestra completa de sangre (con anticoagulante). 12

Figura 2: Suero y coagulo. Muestra de sangre sin anticoagulante. 12

1.2 Composición de la sangre.

7
Se puede dividir en dos grandes componentes principales que son el plasma sanguíneo en
un 55% y los elementos formes en un 45%, de los elementos formes, alrededor del 99% son
glóbulos rojos, o también llamados eritrocitos o hematíes; mientras que el 1% que resta está
formado los glóbulos blancos, o leucocitos y las plaquetas. 2

Tabla 1.1. Composición de la sangre


91.5% agua
Proteínas plasmáticas:
54% albuminas
7% Proteínas 38% globulinas
Plasma 55% 7% fibrinógeno
Es salado, de color amarillento y 1% las demás
en él flotan los demás Electrolitos
componentes de la sangre Nutrientes
Gases
1.5% Soluto
Sustancias reguladoras
Vitaminas
Productos de desecho
Plaquetas
(fragmento
celular)

Neutrofilos 60-70%
Elementos formes 45% Linfocitos 20-25%
(Figura 4) Leucocitos
Monocitos 3-8%
(célula viva)
Eosinófilos 2-4%
Basófilos 0.5-1%
Hematocrito
Eritrocitos
Mujeres 42 (38-46)%
(célula viva)
Varones 47 (40-54)%
Hematocrito: porcentaje de volemia total que corresponde a los eritrocitos.

8
Figura 3: Composición de la sangre. Se observa los diferentes componentes de la sangre y
la división en sus tres grandes grupos. 12

Figura 4: Elementos formes. Se observa la vía periferia de una arteria, mostrando los
elementos formes que se transportan. 18

2 Formación de las células sanguíneas.


A través de un sistema de retroalimentación negativa se mantiene constante el número de
células sanguíneas totales. Los elementos formes se producen, desarrollan y maduran; atreves
de el proceso de hemopoyesis o hematopoyesis (Figura 5); en el que la célula madre
hematopoyética pluripotencial, ubicada en la medula ósea roja, origina células mieloides y
linfoides. Las células mieloides producen los eritrocitos, plaquetas, monocitos, neutrófilos,
eosinófilos y basófilos, estas células se desarrollan en la medula ósea, mientras que las células
madre linfoides comienzan su desarrollo en la medula ósea roja y lo terminan en tejidos linfáticos,
estas celulas madre linfoides dan origen a los linfocitos. 3
Una segunda generacion de celulas precursoras o blastos, dan origen a las celulas formes
definitivas (Figura 6), como los monoblastos, los mieloblastos, proeritroblasto, etc. Y cada uno de

9
estos va a desarrollar y producir a los diferentes elementos formes de la sangre, es decir que se
desarrollaran los eritrocitos, los linfocitos y las plaquetas, a traves del linaje de las celulas
sanguineas. 3

Figura 5: Hematopoyesis. Formación de las células que componen los elementos formes,
mostrando su origen desde una célula madre; que origina células progenitoras multi-
potenciales ; que a su vez se dividen para obtener células progenitoras comprometidas, hasta
obtener las células finales plenamente diferenciadas. 12

10
Figura 6: Morfología de la segunda generación de células precursoras. El linaje de cada célula
sanguínea, con su respectivo precursor. 12

2.1 Función de la sangre.


Dentro de las funciones principales de la sangre están el transporte, la regulación y la
protección. La sangre transporta oxigeno y dióxido de carbono, el primero con ayuda de la
hemoglobina, llevándolo de los pulmones a las células de todo el cuerpo, mientras que el CO 2 se
transporta en sentido contrario al O2; también transporta nutrimentos, hormonas, células de
diversos tejidos, iones, proteínas disueltas y productos de desecho de algunas células. Regula el
pH, mediante sustancias amortiguadoras; la temperatura corporal, mediante la absorción de calor y
el enfriamiento del agua que se encuentra presente en el plasma y la velocidad de flujo variable
por la piel; y regula la presión osmótica de las células y sobre todo si se ven implicados los iones y
las proteínas disueltas. Protege de una hemorragia, en la que se puede tener una pérdida excesiva
de este líquido; y la protección contra enfermedades o infecciones, mediante los anticuerpos. 4

2.2 Función del plasma.


El plasma no sólo transporta células sanguíneas sino que además constituye una reserva de
agua para el cuerpo, impidiendo el colapso y la alteración de los vasos sanguíneos y ayudando a
mantener la presión arterial y la circulación en todo el organismo. 4

11
Otra función, incluso más importante, es la de proteger al organismo de las sustancias
extrañas como virus, bacterias, hongos y células cancerosas. Esta función es realizada por los
anticuerpos que se encuentran en el plasma, mientras que las proteínas de la coagulación
controlan el sangrado. También el plasma refresca y calienta el cuerpo según sus necesidades,
además de transportar las hormonas y regular sus efectos. Regulación de la presión osmótica
normal de la sangre. 4

Tabla 2.1. Sustancias del plasma1


Componente Función Lugar de producción
Agua Absorbe, transporta y libera calor
Proteínas Transporte, presión osmótica coloidal, regula la volemia
Albuminas Transporte de ac. Grasos y hormonas esteroideas. Hígado
Pertenecen a los anticuerpos, atacan virus y bacterias;
Hígado y células
Globulinas las α y β transportan hierro, lípidos y vitaminas
plasmáticas
liposolubles.
Fibrinógeno En la coagulación Hígado
Otros solutos 1.5%, por peso, del plasma
Esenciales en funciones celulares y la mantención de
Electrolitos Disuelto en plasma
la presión osmótica
Nutrientes Distribución a las células de todo el cuerpo Disuelto en plasma
O2, CO2 y N2, transportado el O2 por la hemoglobina en
Gases Disuelto en plasma
el eritrocito y CO2 disuelto en el plasma.
Sustancias Hormonas (endocrinas, regulan el crecimiento y Por glándulas y
reguladoras desarrollo) y enzimas (catalizan reacciones) diversos tejidos
Abarcan urea, ácido úrico, creatina, bilirrubina y
Desechos Metabolismo
amoniaco.

2.3 Función de los elementos formes.


Los glóbulos blancos tienen funciones especializadas por lo que existen varios tipos de
leucocitos. 1

12
Tabla 2.2. Elementos formes1
Componente Función Características
Discos bicóncavos de 7 a 8
Transportar gran parte del O2, una porción
Eritrocito μm de diámetro, no poseen
deCO2, NO y SON, estos últimos ayudan a
(glóbulo rojo) núcleo y tiempo de vida de
regular la presión arterial.
120 días (aprox.).
Leucocitos
Combaten a sustancias extrañas y Tiempo de vida de 4 horas a
(glóbulos
microorganismos patógenos. varios días.
(blancos)
Granulocitos
De 10 a 12 μm de diámetro,
núcleo con dos a cinco
Fagocitosis (destrucción de bacterias con la lóbulos conectados por
Neutrófilos
lisozima, defensinas y oxidantes fuertes). cromatina de filamentos
delgados y gránulos finos lila
pálido en el citoplasma.
En reacciones alérgicas combaten los efectos De 10 a 12 μm de diámetro,
de la histamina, destruyen ciertos gusanos núcleo con dos a tres lóbulos
Eosinófilos
parasitarios y fagocitan complejos antígeno- y grandes gránulos rojo
anticuerpo. naranja en el citoplasma.
De 8 a 10 μm de diámetro,
En reacciones alérgicas intensifican la núcleo con dos lóbulos y
Basófilos respuesta inflamatoria general, por la gránulos grandes
liberación de heparina, histamina y serotonina. citoplasmático azul oscuro-
purpura
Agranulocitos
Median la respuesta inmunitaria (reacciones
antígeno-anticuerpo); las células B se De 6 a 9 μm, los pequeños,
transforman a células plasmáticas que mientras los grandes de 10 a
Linfocitos
secretan anticuerpos; las células T atacan 14μm de diámetro, con
(célula T,B y
virus invasores, células cancerosas y de núcleo redondo; el
asesinas
trasplante; mientras que las células asesinas citoplasma forma un borde
naturales)
naturales atacan a una variedad de microbios azul cielo alrededor del
infecciosos muy amplia y ciertas células núcleo.
tumorales.
De 12 a 20 μm de diámetro,
su núcleo tiene forma de
Fagocitosis, después de su transformación en
Monocitos riñón o herradura, y su
macrófagos fijos o libres.
citoplasma es azul grisáceo
de aspecto espumoso.
De 2 a 4 μm de diámetro sin
En la hemostasia forman trombo hemostático,
Plaquetas núcleo, con numerosos
además de liberar sustancias que estimulan el
(trombocitos) gránulos y un tiempo de vida
vasoespasmo y la coagulación.
de cinco a nueve días.

3 Bioquimica de la sangre

13
3.1 Eritropoyesis
Desarrollo normal del eritrocito.
Los eritrocitos se derivan de las células madre comprometidas denominadas
5
hemocitoblasto.
La eritropoyetina, una hormona de crecimiento producida en los tejidos renales, estimula a
la eritropoyesis, es decir, la formación de eritrocitos y es responsable de mantener una masa
eritrocitaria en un estado constante.5

Tabla 3.1. Función y aumento de la eritropoyetina3


Funciones de la eritropoyetina Aumento de eritropoyetina
Estimula proliferación y maduración del Anemia por hemorragia y
rubriblasto hemolisis
Reduce transito de células no proliferativas en Anemias ferro privas
medula Proceso de desarrollo.
Induce liberación de reticulocitos a circulación

Las etapas de desarrollo morfológico de la célula eritroide incluyen (en orden de madurez
creciente) (Figura 7). 5
 Proeritroblasto
 Eritroblasto basofilo
 Eritroblasto policromatofilo
 Eritroblasto ortocromatico
 Reticulocito
 Hematíe, finalmente, cuando ya carece de núcleo y mitocondrias.

Figura 7: Serie Eritrocitaria. Desarrollo de la célula eritroide, de acuerdo a su maduración en orden


creciente. 12

A medida que la célula madura, la producción de hemoglobina aumenta cambiando el color


del citoplasma en muestras de sangre tenidas con la tinción de Wright, de azul oscuro a gris rojo y
rosáceo. El núcleo paulatinamente se vuelve picnotico y es expulsado fuera de la célula en la
etapa ortocromática. 5

14
Los eritrocitos de los mamíferos no poseen núcleo cuando llegan a la madurez, es decir
que pierden su núcleo celular y por lo tanto su ADN (los anfibios y aves tienen eritrocitos con
núcleo). Los eritrocitos también pierden su mitocondria y utilizan la glucosa para producir energía
mediante el proceso de glucolisis seguido por la fermentación láctica. 5
Los eritrocitos son producidos continuamente en la medula ósea de los huesos largos. (En
el embrión, el hígado es el principal productor de glóbulos rojos.) El bazo actúa como reservorio de
eritrocitos, pero su función es algo limitada en los humanos. Sin embargo, en otros mamíferos
como los perros y los caballos, el bazo libera grandes cantidades de glóbulos rojos en momentos
de estrés. Algunos atletas han tratado de explotar esta función del bazo tratando de liberar sus
reservas de eritrocitos mediante fármacos, pero esta práctica pone en riesgo al sistema
cardiovascular dado que este no está preparado para soportar sangre cuya viscosidad sea
superior a la normal.5

Figura 8: Eritropoyesis normal y acelerada. Formación del eritrocito circulante a partir de la célula
madre, con sus respectivas divisiones y tiempo de vida. 12
3.2 Metabolismo del eritrocito
El metabolismo de los eritrocitos es limitado, debido a la ausencia de núcleo, mitocondria y
otros organelos subcelulares, ya que hay poca capacidad para metabolizar los ácidos grasos y los

15
aminoácidos. La energía se genera casi exclusivamente a través de la descomposición de la
glucosa, el metabolismo del eritrocito puede subdividirse en.3
 Vía Embden – Meyerhof mejor conocida como "glucólisis"
 Ciclo de la Hexosa – Monofosfato
 Vía de la Hemoglobina Reductasa
 Ciclo de Rapoport – Luebering

Las principales vías están enmarcadas, los substratos y productos de cada vía están fuera del
marco. Hb, hemoglobina; MHb, metamoglobina; NAD, NADH, nicotinamida adenina dinucleotidasa;
ADP, adenosina difosfatasa; ATP, adenosina trifosfato; NADP, NADPH, nicotinamida adenina
dinucleotidasa fosfato; G-6-P, glucosa-6-fosfato; F-6-P, fructosa-6- fosfato; Ga-3-P, gliceraldehido-
3-fosfato; 2,3 DPG, 2,3-difosfoglicerato. 3

Estas vías contribuyen con energía al mantener: 3



El potasio intracelular alto, el sodio intracelular bajo y un calcio intracelular muy bajo
(Bomba de cationes)

Hemoglobina en forma reducida

Elevados niveles de glutatión reducido

Integridad y deformabilidad de la membrana

3.3 Vía Embden–Meyerhof o Glucolisis


Es responsable de aproximadamente 90% de la utilización de la glucosa por el eritrocito y
proporciona la energía esencial para el mantenimiento de la membrana. En la descomposición de
una molécula de glucosa a lactato, se consumen 2 moléculas de ATP durante la posición hexosa
de la vía, pero se genera de 3 a 4 moléculas a nivel de la triosa. En esta ganancia neta en ATP la
que proporciona fosfato de alta energía para el mantenimiento de la forma de disco y la flexibilidad
del eritrocito, para el mantenimiento de los lípidos de la membrana, para proporcionar energía a las
bombas metabólicas que controlan el flujo de sodio y potasio. El papel esencial del ATP en el
eritrocito está demostrado por lo menos en dos condiciones. (1) la muerte celular temprana
(anemia hemolítica) que ocurre cuando el ATP es deficiente debido a defectos hereditarios en la
glucolisis , y (2) la perdida de la viabilidad que acompaña a la depauperación de ATP de la sangre
conservada en vitro. La vía de Embden- Meyerhof también mantiene los nucleótidos de piridina en
un estado de reducción para permitir su función en la homeostasis oxidativa-reductora dentro de la
célula.3

16
Figura 9: Metabolismo energético del eritrocito3

3.4 Ciclo de las Pentosas


Proporciona Nicotinamida-Adenina Dinucleotido fosfato y glutatión reducido para reducir
oxidantes celulares. Aproximadamente el 5% de la glucosa celular ingresa a la vía oxidativa de las
Pentosas, un sistema auxiliar para producir coenzimas reducidas. El glutatión reducido protege a la
célula contra muchas lesiones producidas por agentes oxidantes permanentes. Los oxidantes
dentro de la célula oxidan los grupos sulfhidrilo (SH) de la hemoglobina, a menos que los oxidantes
sean reducidos por el glutatión reducido. Es por esto que es crucial en el eritrocito la función de
esta vía.3

17
Figura 10

Figura 11
Figura 10 y Figura 11. Explican los pasos en la reducción univalente del oxigeno y vías
enzimáticos que actúan sobre los metabolitos intermedios. Las vías enzimáticas mostradas sobre
la derecha son las que procesan estos metabolitos sin formación del radical hidroxilo altamente

18
reactivo. Este potente radical puede formarse por las reacciones que se ven a la izquierda si las
concentraciones de peróxido y superoxido son suficientes.3

3.5 Vía de la Hemoglobina Reductasa


Protege a la hemoglobina de la oxidación vía la NADH y metahemoglobina reductasa. Se
trata de una vía alterna a la vía Embden – Meyerhof, esencial para mantener al hierro hem en el
estado reducido Fe++. La hemoglobina con el hierro en estado férrico, Fe +++, es conocida como
metahemoglobina. Esta forma de hemoglobina no logra combinarse con el oxigeno. La
metahemoglobina reductasa en unión con el NADH producido por la vía Embden – Meyerhof
protege al hierro hem de la oxidación. Sin este sistema, el 2 % de la metahemoglobina formada
todos los días, al cabo del tiempo se elevaría a un 20 a 40%, limitando gravemente la capacidad
transportadora de oxigeno en la sangre. Los medicamentos oxidantes pueden interferir con la
metahemoglobina reductasa y producir valores aún más elevados de metahemoglobina. Esto
provoca cianosis.3

3.6 Ciclo de Rapoport – Luebering


2,3 – difosfoglicerato (DPG) el cual facilita la liberación de oxigeno a los tejidos. Este ciclo es
parte de la vía Embden – Meyerhof y tiene por finalidad evitar la formación de 3 – fosfoglicerato y
ATP. El DPG está presente en el eritrocito en una concentración de un mol BPG/mol de
hemoglobina y se une con fuerza a la desoxihemoglobina, manteniendo a la hemoglobina en
estado desoxigenado facilitándose la liberación de oxigeno. El incremento en la concentración de
difosfoglicerato facilita la liberación de oxigeno a los tejidos mediante la disminución en la afinidad
de la hemoglobina para el oxigeno. De esta manera el eritrocito cuenta con un mecanismo interno
para la regulación del aporte de oxigeno a los tejidos. Disminución de la vida eritrocitaria
determina: 3

Un aumento de la formación de glóbulos rojos a nivel medular: aumento de eritropoyesis.

Un aumento del catabolismo de la hemoglobina. La hemoglobina liberada de los glóbulos
rojos sufre metabolización y determina un aumento de la bilirrubina indirecta, que determina
clínicamente la aparición de ictericia (coloración amarillenta de piel y mucosas).1

19
Figura 12: Metabolismo del eritrocito. 3

3.7 Hemólisis Trastornos metabólicos


Proceso de destrucción de glóbulos rojos que determina una disminución de la
supervivencia de los mismos, acompañado de incapacidad de la médula ósea de realizar el
aumento compensatorio. (Una médula ósea estimulada al máximo puede aumentar la eritropoyesis
entre 6 a 8 veces su capacidad normal, y la vida media del eritrocito puede disminuir hasta 15 a 20
días sin llegar a anemia).3

20
Esta disminución de la vida eritrocitaria determina: 3

Un aumento de la formación de glóbulos rojos a nivel medular: aumento de eritropoyesis.

Un aumento del catabolismo de la hemoglobina. La hemoglobina liberada de los glóbulos
rojos sufre metabolización y determina un aumento de la bilirrubina indirecta, que determina
clínicamente la aparición de ictericia (coloración amarillenta de piel y mucosas).
El lugar de máxima remoción por fagocitosis es el bazo.
Nos encontramos frente a un caso de hemólisis crónica cuando este proceso de destrucción
acelerada de glóbulos rojos se mantiene en el tiempo, causando los síntomas y signos
características del síndrome hemolítico (véase más adelante).3

3.7.1 Clasificación de las hemólisis crónicas


 De acuerdo al sitio de hemólisis: intra o extravascular.
 Patogénica: corpusculares (intrínsecas) o extracorpusculares (extrínsecas).
 Etiológica: heredadas o adquiridas.
La mayor parte de las alteraciones intrínsecas son hereditarias, y la mayor parte de las
extrínsecas son adquiridas. Excepciones a esta regla son la hemoglobinuria paroxística nocturna*,
el déficit de G6PD y el daño térmico. En investigación, el diagnóstico diferencial de estas
patologías se hace por transfusiones cruzadas5.

3.7.1.1 Hemólisis intravascular


La hemolisis intravascular es reconocida por la presencia de cantidades visibles de
hemoglobina libre en plasma u orina. La hemoglobinuria es acompañada de hemoglobinemia
visible. El daño grave a un cierto número de eritrocitos está implícito con la demostración de
hemolisis intravascular. Pero el numero de eritrocitos destruidos no es necesariamente grande
puede producir hemoglobinuria pero poca anemia. La lesión de complemento con destrucción
extensa tanto intravascular como extra vascular es provocada por lesiones intrínsecas del el
eritrocito (hemoglobinuria nocturna paroxística), y por anticuerpos (autoanticuerpos y
aloanticuerpos fríos y valientes) que fijan el complemento a la membrana del eritrocito. Los
agentes químicos como la ursina dañan los welchii contienen una lecitinasa que actúa sobre los
complejos de lipoproteína de la membrana del eritrocito; y los granos de la planta Vicia Faba o los
medicamentos oxidativos dañan las células cuando hay un metabolismo aerobio defectuoso del
eritrocito ( deficiencia de glucosa- 6-fosfatodeshidrogenasa). La hemolisis intavascular grave
repentina sin causa a Parente es particularmente sugestiva de una hemolisis autoinmunitaria,
dependiente de complemento o, el mujer, de aborto por infección con C. welchii. La hemoglobinuria
nocturna paroxística es más probable con hemoglobinuria crónica. 5

3.7.1.2 Hemolisis de fragmentación

21
El síndrome de fragmentación representa un menor grado de destrucción intravascular: Hay
una destrucción mecánica de eritrocitos circulantes con liberación de hemoglobina suficiente para
depauperar la haptoglobina y la hemopexina, resultando esto en metahemalbuminemia y
hemosiderinuria. Sin embargo la hemoglobina libre en el plasma habitualmente no se eleva mas de
30mg % y no hay hemoglobinuria patente. La fragmentación puede ser causada por rigidez
causada por rigidez aumentada de la célula impuesta por la hemoglobina drepanositica o como el
resultado de fagocitosis de cuerpo de Heinz más a menudo , la hemolisis de fragmentación es una
debida a superficies vasculares anormales, particularmente arteritis como en hipertensión maligna
enfermedad inmunitaria o ciertas infecciones. El síndrome urémico hemolítico es el resultado de la
lesión de las ateriolas del riñón. La coagulopatia de consumo, con depósitos de fibrina en las
paredes del vaso, secundarios a lesión arterial o coagulación intravascular, puede producir
fragmentación del eritrocito. Las prótesis de válvula también pueden destruir las células. Una
complicación interesante tanto de la fragmentación como de la hemolisis intravascular, cuando
son de larga duración, es el desarrollo de deficiencia de hierro de vida a perdida de grandes
cantidades de este en la hemosiderina de la orina (hasta 20mg / día).5

3.7.1.3 Hemolisis reticuloendoterial.


La destrucción de eritrocitos por el sistema reticuloendotelial predomina virtualmente en todas
la anemias hemolíticas, inclusive las clasificadas como hemolisis intravascular o fragmentación.
Sin embargo en las anemias atribuidas a destrucción reticuloendotelial, hay relativamente poca
destrucción en el compartimento vascular. La haptoglobina frecuentemente esta depauperada,
pero las cifras de hemoglobina libre solo están ligeramente aumentadas y no hay
metahemalbuminemia o hemosiderinuria importantes. Este grupo de trastornos caracterizado por
destrucción reticuloendotelial es con mucho la categoría más grande de anemia hemolítica y a
menudo ocasiona considerable dificulta para llegar a un diagnostico especifico. 5
Ciertos agentes químicos actúan como oxidantes dañinos en individuos con alteraciones en la
glucolisis aerobia, otras sustancias químicas actúan atreves de un mecanismo inmunitario mientras
que otras tienen efectos destructivos directo sobre los eritrocitos. El crecimiento de los ganglios
linfáticos sugiere enfermedad del sistema inmunitario mientras que un vaso crecido solamente es
consistente con una destrucción aumentada del eritrocito en ese órgano. Enfermedades como el
lupus eritematoso y la leucemia linfática, así como ciertas infecciones (micoplasma, mononucleosis
infecciosa, enfermedad sitomegalica) frecuentemente están asociadas con anemia hemolítica
autoinmunitaria. 5
Defectos congénitos de la membrana y del metabolismo.

22
Los trastornos congénitos del a membrana y de los sistemas metabólicos del eritrocito,
generalmente estos estados son considerados trastornos metabólicos aerobios y anomalías
autoinmunitarias. El antecedente familiar de un trastorno hemolítico sugiere una lesión intrínseca
de la membrana dele eritrocito o del metabolismo anaerobio.5

3.8Función-Hemoglobina (Metahemoglobina)
La hemoglobina (Hb), el principal componente de los glóbulos rojos sanguíneos, es una
proteína conjugada que sirve como vehículo para el transporte de oxigeno (O 2), y dióxido de
carbono (CO2). Cuando está completamente saturada, cada gramo de hemoglobina contiene
1.34ml de oxigeno. La masa de los glóbulos rojos de un adulto contiene aproximadamente 600g de
hemoglobina, capaz de transportar 800ml de oxigeno. Una molécula de hemoglobina consta en
dos pares de cadenas polipeptidicas (Globina) y cuatro grupos hemo, conteniendo cada uno un
átomo ferroso (Figura 6), cada grupo hemo se localiza de forma precisa en un hueco o pliegue de
cada una de las cadenas polipeptidicas. Localizada cerca de la superficie de la molécula, el hemo
se combina reversiblemente con una molécula de oxigeno o dióxido de carbono. 8
La hemoglobina de una persona adulta normal, es la hemoglobina A, posee 2 cadenas alfa con
141 aminoácidos y dos cadenas beta con 146 aminoácidos, se le denomina alfa2-beta2. La función
principal de la hemoglobina es transportar oxigeno desde los pulmones, donde la tensión de
oxigeno es elevada, a los tejidos, donde es baja (Figura 13). A una tensión de oxigeno de 100mm
de Hg. En los capilares pulmonares del 95% -98% de la hemoglobina esta combinada con el
oxigeno. En los tejidos, donde la tensión de oxigeno puede ser tan baja como 20mm de Hg, el
oxigeno se disocia fácilmente de la hemoglobina; en este caso menos de una 30% del oxigeno
podría permanecer combinado con la hemoglobina.8

23
Figura 13: Hemoglobina. El torrente sanguíneo transporta diferentes elementos formes dentro de
los más importantes se encuentran los eritocitos, los cuales se encargan del transporte de oxigeno
mediante la hemoglobina, una estructura cuaternaria compuesta de globina (proteína) y un grupo
Hemo. 12

La hemoglobina reducida es hemoglobina con hierro no unido al oxigeno. Cuando cada grupo
hemo está asociado a una hemoglobina con hierro no unido al oxigeno, la hemoglobina se conoce
como oxihemoglobina (HbO2). Tanto en la Hb como en el HbO2, el hierro permanece en estado
ferroso. Cuando el hierro se oxida al estado férrico, se forma metahemoglobina y la molécula
pierde su capacidad para transportar oxigeno o dióxido de carbono. 8

3.8.1 Grupo Hemo: Síntesis y Degradación.


La síntesis de Hemoglobina empieza cuando los eritrocitos aun están en estado de
proeritroblastos y continúa incluso en la fase de reticulositos, cuando estas células abandonan la
médula ósea y entran en el torrente sanguíneo. Durante la formación de la hemoglobina la
molécula hemo se combina con una cadena polipeptídica muy larga denominada globina, para
formar una subunidad de hemoglobina llamada cadena de hemoglobina. Cuatro de estas cadenas
de hemoglobina se unen débilmente entre ellas para formar así una molécula de hemoglobina.4

Figura 14: Estructura del grupo hemo. 4

La síntesis y final de la síntesis de protoporfirina, así como la incorporación del hierro a esta
para formar el heme, tiene lugar dentro de las mitocondrias (Figura 14). En cambio los pasos
intermediarios de la síntesis de protoporfirina ocurren fuera de estas, en la porción soluble del

24
citoplasma. Las mitocondrias rodean el núcleo del precursor eritroide. En ciertos trastornos en los
que hay un fallo de la incorporación del hierro al heme, se acumula dicho hierro en el interior de las
mitocondrias. La mayoría de las mitocondrias son expulsadas de la célula junto con núcleo, y
pocas que permanecen se pierden al cabo de un día o dos después de que hematíe penetra en la
circulación. Así pues, el hematíe maduro, al carecer de RNA y de mitocondrias, no pueden
sintetizar ni las cadenas de globina ni la porción heme de la hemoglobina. Las reacciones
enzimáticas que producen a la formación del heme pueden resumirse de la siguiente manera. 4
El succinil –CoA, formado en las mitocondrias durante el ciclo de Krebs, se combina con
glicina para formar acido δ-aminolevulinico (δ- ALA). La enzima que cataliza esta reacción, (δ-
ALA)- sintetasa, limita la tasa de síntesis del heme. El fosfato de piroxinal es necesario como
coenzima para esta reacción. 4
1. Dos moléculas de (δ- ALA) se combina para formar un compuesto pirrolico, el
porfobilinogeno.
2. Cuatro moléculas de porbilinogeno se une entre si para constituir una anillo tetrapirrolico,
compuesto denominado uroporfirinogeno.
3. Sucesivas descarboxilaciones de las cadenas laterales del uroporfinogeno conduce a la
formación primero, de un compuesto llamado coproporfirinogeno y, luego protoporfirina la
enzima que cataliza esta ultima reacción es una enzima mitocondrial.
4. Un átomo de hierro ferroso se añade a la protorfirina para formar heme. Esta reacción se
cataliza por la enzima ferroquelatasa (heme-sintetasa).

25
Figura 15: Síntesis del grupo Hemo. Se forma a partir del aminoácido Glicina y el Succinil CoA,
durante la síntesis de este grupo se forman diferentes pigmentos de heces y orina, cada paso se
lleva a cabo en mitocondria o citosol de acuerdo a las enzimas que requiere. 3

La destrucción de la hemoglobina en cuerpo, la globina se degrada hasta los aminoácidos


que la destruyen, los cuales se reutilizan, y el hierro del heme ingresa a la reserva del hierro
también para su reutilización. También se degrada la porción de porfiriana libre de hierro del heme,
sobre todo en las células reticuloendoteliales hepáticas, esplénicas y de la medula ósea.6
Al parecer el catabolismo del heme proviente de la totalidad de las hemoproteinas se lleva a cabo
en fracción microsomal de las células mediante un comportamiento sistema enzimático
denominado hem oxigenasa. Cuando el hem de las hemoproteinas al sistema de la heme
oxigenasa, por lo general el hierro y constituye la hemina.6
La hemina se reduce a heme con el NADPH y, con ayuda de mas NADPH, se añade
oxigeno al puente α- metenilo entre los pirroles I y II de la porfirina. El ion ferroso se oxida de
nuevo a la variante férrica. Con la adición subsecuente de oxigeno, se libera el ion férrico, se
produce monóxido de carbono y de la escisión del anillo tetrapirrolico resulta una cantidad aquí
molar de biliverdina IX- α.6
En las aves y los anfibios se excreta la biliverdina IX- α de color verde; en los mamíferos una
enzima soluble denominada biliverdina reductasa reduce el puente metenilo entre los pirroles III y
IV a un grupo metileno para producir bilirrubina IX-a, aun pigmento amarillo. Se estima que un
gramo de hemoglobina produce 35mg de bilirrubina es de alrededor de 250a 350mg, provenientes
principalmente de la hemoglobina, pero también de la eritropoyesis ineficaz y de varias
hemoproteinas adicionales como el citocromo.6

3.8.2 Reacciones de la hemoglobina6


 Oxihemoglobina: Representa la hemoglobina que se encuentra unida al oxígeno
normalmente (Hb+O2).
 Carbaminohemoglobina: se refiere a la hemoglobina unida al CO2 después del intercambio
gaseoso entre los glóbulos rojos y los tejidos (Hb+CO2).
 Carboxihemoglobina: Hemoglobina resultante de la unión con el CO. Es letal en grandes
concentraciones (40%). El CO presenta una afinidad 200 veces mayor que el Oxígeno por
la Hb desplazándolo a este fácilmente produciendo hipoxia tisular, pero con una coloración
cutánea normal (produce coloración sanguínea fuertemente roja) (Hb+CO).
 Desoxihemoglobina: Desoxigenada (Hb reducida)
 Metahemoglobina: Hb con Fe3 (oxidado), así no se une al oxígeno.
 Hemoglobina glucosilada (HbA1c): Glucosa unida a valina terminal de cadena Beta.
Aumenta en diabetes más controlada.

26
3.8.3 Catabolismo de la Hemoglobina
Cuando se destruyen los eritrocitos viejos en el sistema de macrófagos tisulares la porción
globina de la molécula de hemoglobina se separa y el Hem se convierte en biliverdina. La enzima
participante en un subtipo de oxigenasa del hem y se forma monóxido de carbono en el proceso.
El CO puede ser un mensajero intercelular como el Óxido nítrico. En los humanos la mayor parte
de biliverdina se convierte en bilirrubina y se excreta en la bilis. El hierro del Hem se utiliza
nuevamente para síntesis de hemoglobina.6

Figura 16: Degradación del grupo Hemo y formación de pigmentos biliares. Los diferentes
órganos usados para la degradación del grupo hemo incluyen al hígado, riñón, intestino, vesícula
biliar y arterias. 6

3.9 Glutatión
El glutatión existe en los estados reducido (GSH) y oxidado (GSSG). En el estado reducido, el
grupo tiol de la cisteína es capaz de donar un equivalente de reducción (H+ + e-) a otras moléculas
inestables, como las especies reactivas de oxígeno. En la donación de un electrón, el glutatión se
convierte en reactivo, pero reacciona rápidamente con otro glutatión reactivo para formar disulfuro
de glutatión (GSSG). Esta reacción es posible debido a la concentración relativamente alta de

27
glutatión en las células (de hasta 5 mm en el hígado). El GSH puede regenerarse a partir de GSSG
por la enzima glutatión reductasa.9
En las células y tejidos sanos, más del 90% de glutatión total está en la forma reducida (GSH)
y menos del 10% que existe en la forma disulfuro (GSSG). Un aumento de la proporción entre
GSSG y GSH se considera un indicativo de estrés oxidativo.9

Tabla 3.10 Múltiples funciones del glutatión2


Es el mayor antioxidante endógeno producido por las células, participando
directamente en la neutralización de radicales libres y compuestos de oxígeno
reactivo, así como el mantenimiento de los antioxidantes exógenos, como las
vitaminas C y E en sus formas reducidas (activas).
A través de la conjugación directa, desintoxica muchos xenobióticos (compuestos
extraños) y los agentes carcinógenos, tanto orgánicos como inorgánicos.
Es esencial en el sistema inmunológico para ejercer todo su potencial, por
ejemplo, la modulación de la presentación de antígenos a los linfocitos, lo que
Funciones influye en la producción de citoquinas y el tipo de respuesta (celular o humoral)
del glutatión que se desarrolla, aumentar la proliferación de los linfocitos, lo que aumenta la
magnitud de la respuesta, aumentar la actividad de eliminación de las células T
citotóxicas y las células NK, y la regulación de la apoptosis, manteniendo así el
control de la respuesta inmune.
Desempeña un papel fundamental en numerosas reacciones metabólicas y
bioquímicas como la síntesis y reparación del ADN, la síntesis de proteínas, la
síntesis de prostaglandinas, el transporte de aminoácidos y la activación de la
enzima. Por lo tanto, todos los sistemas del cuerpo pueden ser afectados por el
estado del sistema de glutatión, especialmente el sistema inmunitario, el sistema
nervioso, el sistema gastrointestinal y los pulmones.

28
Figura 17: Síntesis y regeneración de glutatión. Este requiere de enzimas oxidasas que se
encuentran en la mitocondria. 5

3.10 Metabolismo de la bilirrubina


La bilirrubina es un compuesto potencialmente tóxico especialmente en recién nacidos. A partir
del grupo HEM, que está en un 80% en los eritrocitos senescentes y en un 20% en citocromo
P450, mioglobina y otros; se genera la mayor parte de la bilirrubina (pigmento). Un glóbulo rojo
tiene una vida del orden de 120 días. En los recién nacidos, la bilirrubina es un compuesto tóxico,
que puede impregnar y dañar ciertas estructuras del SNC. La bilirrubina ataca ciertas estructuras
del cerebro, pero no la corteza (provoca movimientos descoordinados, pero inteligencia normal). El
organismo tiende a deshacerse de este pigmento, por su potencial daño. La bilirrubina se utiliza en
el diagnóstico de muchas enfermedades. La bilirrubina se forma en macrófagos (por fagocitosis de
glóbulos rojos) de bazo, médula ósea e hígado (células de Kupffer). Los eritrocitos se transforman
en biliverdina, de corta existencia, y otra enzima la transforma en bilirrubina indirecta. La
producción diaria de bilirrubina es de 250 – 300 mg. al día en adultos. La bilirrubina no conjugada
(indirecta) es extremadamente poco soluble en agua. En el plasma va ligada a albúmina. El
hepatocito solubiliza a la bilirrubina insoluble (mediante la enzima hemooxigenasa _ transforma el

29
grupo HEM de otras proteínas [no hemoglobina] en bilirrubina), transformándola en bilirrubina
directa que pasa a la bilis.8
El grupo HEM de la hemoglobina es un anillo que tiene fierro en su interior. La hemooxigenasa
rompe el anillo, apareciendo biliverdina. Esta tiene aparición bastante fugaz, ya que la enzima
biliverdin-reductasa transforma a la biliverdina en bilirrubina. Ésta enzima tiene múltiples otras
acciones: metabolismo de la glucosa, estrés oxidativo, crecimiento celular, apoptosis y regulación
de algunos genes. La estructura química de la bilirrubina contiene subgrupos polares (con
hidrógeno), que se encuentran más hacia el interior de la molécula. Por esto la molécula de la
bilirrubina inicial es extremadamente poco hidrosoluble. Para poder circular en el plasma, debe ir
unida a albúmina (proteína). Para poder ser eliminada, debe ser solubilizada. Una parte muy
pequeña de bilirrubina no hidrosoluble entra a la célula hepática por difusión pasiva. La mayor
parte se separa de la albúmina, e ingresa a la célula por el transportador OATP (organic anión
transporter protein). Dentro del hepatocito existe una sustancia (ligandina A _ glutatión-s-
transferasa), a la cual la bilirrubina se une. Así impide que la bilirrubina vuelva al plasma. La
bilirrubina es solubilizada por unión a un ácido glucurónico (por glucuronil transferasa). Así, la
bilirrubina mono o diglucuronido es soluble. Es capaz de salir al plasma, como bilirrubina
conjugada. La mayor parte de la bilirrubina es transportada hacia el canalículo biliar, a través del
transportador MRP2 (miltidrug resistance-related protein).8

Figura 18: Metabolismo de la bilirrubina. Se lleva a cabo en el musculo, y requiere del torrente
circulatorio para llevar el combustible a la mitocondria para producir ATP u obtener la energía
reducida. 8

4 Etiología de anemias hemolíticas inmunes adquiridas por fármacos

30
4.1 Definición y características.
Las anemias hemolíticas inmunes son un grupo variado de trastornos caracterizados por la
presencia de anticuerpos contra las células rojas que provocan el acortamiento de su vida. 9
Es un trastorno sanguíneo que ocurre cuando un medicamento activa el sistema de
defensa del cuerpo (sistema inmunitario) para atacar a sus propios glóbulos rojos. Esto hace que
los glóbulos rojos se descompongan más temprano de lo normal. 9
En algunos casos, un medicamento puede hacer que el sistema inmunitario piense
erróneamente que los glóbulos rojos son sustancias extrañas y peligrosas. En consecuencia, se
forman anticuerpos contra los glóbulos rojos. Dichos anticuerpos se adhieren a estos glóbulos
rojos y hacen que se descompongan demasiado temprano. 9
Ocurre raramente, se ha estimado su incidencia en 1 caso por millón con respecto a la población.
Los mecanismos implicados son los siguientes: 9
Dentro de los fármacos que pueden causar este tipo de anemia hemolítica están: 9
 Cefalosporinas (un tipo de antibióticos)
 Levodopa
 Penicilinas y sus derivados
 Quinidina
 Algunos antiinflamatorios no esteroides (AINES)
Existen muchas otras causas raras de anemia hemolítica inducida por medicamentos. Este tipo
de anemia está asociada con la deficiencia de glucosa -6 fosfato deshidrogenasa (G-6-PD). Sin
embargo, en este caso, la descomposición de los glóbulos rojos se debe a cierto tipo de estrés en
la célula y no al sistema inmunitario del cuerpo. 9
Síntomas9
 Orina oscura
 Fatiga
 Palidez de la piel
 Frecuencia cardiaca para respirar
 Piel amarillenta (ictericia)
Existen varios tipos de anemia hemolítica según el sitio en que se ubica el defecto, el cual
puede ser en el interior del glóbulo rojo o al exterior. Esta anemia se debe en ocasiones a una
enfermedad autoinmune9
Aproximadamente un 15% de las anemias hemolíticas inmunes adquiridas están relacionadas
con la administración de fármacos. Algunos de ellos provocan una verdadera anemia hemolítica
autoinmune al causar el desarrollo de anticuerpos con especialidad por lo antígenos de las células
rojas. Otros fármacos provocan el desarrollo de anticuerpos dependientes de fármaco que
reaccionan con las células rojas solo en presencia del mismo. Estos anticuerpos pueden

31
reaccionar, al menos en parte, con un fármaco absorbido por la membrana de la célula roja.
Algunos fármacos son muy susceptibles de unirse al eritrocito, sin embargo, y en este caso parece
posible que el anticuerpo forme un complejo con el fármaco en el plasma. Este complejo ataca
entonces la célula roja comprobando la hemolisis; esta reacción frecuentemente esta aumentada
por la activación del complemento. Es conveniente clasificar los fármacos que provocan anemia
hemolítica inmune de acuerdo al mecanismo propuesto por el que provocan el desarrollo de los
anticuerpos contra células rojas. Las correlaciones clínicas y de laboratorio se presentan en la
Figura 23: Tabla 4. 10
Sin embargo, los mecanismos por los cuales diversos fármacos provocan el desarrollo de
anticuerpos que reaccionan con las células rojas primero se unen a la célula. Incluso aunque la
unión sea bastante floja, provoca una alteración de las proteínas de membrana de la célula roja.
Los anticuerpos resultantes pueden dirigirse contra complejos fármaco – célula (anticuerpos
dependientes de fármaco) o solo contra antígenos celulares (auto anticuerpos) o ambos tipos de
anticuerpos pueden desarrollarse en el mismo paciente. 10

Tabla 4. Hemolisis inmune inducida por fármacos. 2


Detección de
Tipo de reacción Gravedad de la anticuerpos
Fármacos prototipo
serologica hemolisis inducidos por
fármacos
Grave, a menudo
Anticuerpo
con hemolisis Suero + fármaco +
dependiente de Quinidina, Quinina
intravascular y fallo eritrocitos
fármaco
renal
Gravedad
Suero+eritrocitos
Aglutinación moderada, Penicilinas,
cubiertos de
pasiva normalmente sin cefalosporinas
fármaco
hemolisis
Gravedad
moderada,
Metildopa,
autianticuerpos normalmente sin Suero+ eritrocitos
procainamida
hemolisis
intravascular

4.2 Fármacos firmemente unidos al eritrocito.


Diversos fármacos están firmemente unidos al eritrocito, en cuyo caso los métodos óptimos
de detección del anticuerpo dependiente del fármaco en el laboratorio incluyen el uso de eritrocitos
cubiertos del fármaco. Los datos disponibles sugieren que el fármaco se une a la superficie de la
célula roja sanguínea como primer paso y el anticuerpo circulante anti – fármaco se une al fármaco

32
unido a la célula de forma secundaria. Este mecanismo de sensibilización celular que provoca la
hemolisis ha sido denominado mecanismo de absorción del fármaco11

4.2.1 Tipo hapteno


Los fármacos prototipo son las penicilinas y las cefalosporinas; otros de ellos son el cisplatino,
la eritromicina, la tetracina y la tolbutamida. 12
Los medicamentos que producen principalmente esta reacción son los Betaláctamicos, siendo
la penicilina el prototipo. Las moléculas referidas se unen fuertemente a la membrana del eritrocito,
sobre todo a dosis altas, y en el 3% de los individuos producen IgG (inmunoglobulina G), contra
proteínas de su membrana. Dichos anticuerpos pueden permanecer unidos a la membrana celular
por algún tiempo luego de la suspensión de la droga. Se produce hemólisis extravasculares al ser
reconocidas y destruidas por los macrófagos del sistema retículo-endotelial principalmente en el
bazo. 12
La prueba de Coombs directa es positiva debido a la IgG pegada a los eritrocitos. El suero del
paciente o los anticuerpos eluidos de los eritrocitos reaccionan in vitro solo con glóbulos rojos que
han sido pretratados con la droga y células no tratadas. 12
Se sabe que las cefalosporinas de primera generación raramente producen anemia hemolítica.
Por este mecanismo actúan drogas como: cisplatino, eritromicina, tetraciclina, estreptomicina, y
tolbutamida.(2,3,4). 12
 El anticuerpo, que normalmente es del tipo inmunoglobulina IgG, reacciona con las células
cubiertas de fármaco in vitro para producir una prueba indirecta de anti globulinas positiva.
Clínicamente, la hemolisis normalmente aunque no siempre, es moderada en gravedad sin
signos de hemolisis intravascular.

4.3 Fármacos laxamente unidos al eritrocito.


Inmuno-complejos:
En este caso las drogas o sus metabolitos se unen a proteínas séricas para formar un antígeno
complejo, éste origina anticuerpos usualmente IgM, o IgG que al unirse al antígeno, forma
complejos circulantes. Cuando los complejos circulantes se unen a las membranas de los glóbulos
rojos, se activa el complemento. La célula es lisada y el inmuno-complejo que posee baja afinidad
por la membrana se disocia y va a un segundo eritrocito para repetir el proceso. Este “reciclado”
del complejo droga-anticuerpo implica que solo pequeñas cantidades de dosis de la droga
desencadenan una hemólisis a gran escala, en individuos previamente sensibilizados.
Las cefalosporinas de segunda (cefotetan), tercera (cefotaxime, ceftazidime, ceftriaxone) y cuarta
generación han sido asociadas con numerosos episodios de anemia hemolítica por este

33
mecanismo. Además de AINES, (diclofenac, sulindac), rifampicina, nitrofurantoína, clorpropamida,
hidroclorotiazida y quinidina. 13
Los fármacos que están débilmente unidos a la célula roja in vitro provocan el desarrollo de un
anticuerpo dependiente de fármaco, que es un anticuerpo que solo puede ser detectado en
presencia del fármaco in vitro. Los métodos óptimos para la detección incluyen la adición de una
solución del fármaco al suero del paciente, añadir células rojas a la bulina o la lisis. Los fármacos
frecuentemente provocan una anemia hemolítica grave con manifestaciones de hemolisis
intravascular aguda, como son la hemoglobinemia y la hemoglobinuria. La insuficiencia renal es de
aparición frecuente. 13
Generalmente se ha pensado que la formación de anticuerpos sucede como consecuencia de
la reacción del fármaco con la membrana celular, elemento que actúa como un hapteno
(mecanismo de hapteno). El anticuerpo resultante tiene especificidad por el complejo fármaco –
célula. Pr otra parte, se ha propuesto que el anticuerpo dependiente de fármaco tiene especificad
por el fármaco y que los complejos inmunes se desarrollan como resultado de la interacción del
anticuerpo con el fármaco en el plasma. Estos complejos, que son absorbidos sobre la membrana
de la célula roja, provocan la activación del complemento y la hemolisis (mecanismo mediante
complejos inmunes). Estos fármacos incluyen acetaminofeno, cefofaxima, ceftriaxona,
clorpromacina, clorpropamida, fenacetina, quinidina y quinina. 13

34
4.3.1 Características y mecanismo de acción de la Amoxicilina18
Las anemias hemolíticas inducidas por fármacos son resultado del mecanismo de acción
que ejercen las penicilinas sobre la célula (en este caso amoxicilina sobre el eritrocito). 14
La amoxicilina, siendo parte del grupo de las penicilinas, tiene el mismo mecanismo de
acción. 14
Este se basa en que el fármaco se absorbe pasivamente a la membrana eritrocitaria; los
anticuerpos anti – fármaco, se unen y destruyen al eritrocito. 14
Las penicilinas, así como todos los antibióticos β lactamicos, inhiben el crecimiento
bacteriano por inferir con un o paso especifico en la síntesis de la pared celular. La pared celular
es una capa externa que no se encuentra en las células animales. Rodea completamente a la
membrana citoplásmica, manteniendo la forma de la célula y previniendo la lisis por una presión
osmótica alta. 14
La pared celular está compuesta de un polímero complejo entrecruzado, peptidoglucano
consistente de polisacáridos y polipéptidos. 14

35
Fugura 19: Complejo formado con la amoxicilina y la membrana eritrocitaria. 14

La amoxicilina es capaz de causar hemólisis inmune en pacientes a los que se les


administra altas dosis por vía intravenosa. Sin embargo, también es efectiva cuando es
administrada por vía oral; el inconveniente de esta vía es que resulta perjudicial ya que el acido
gástrico destruye gran parte del fármaco por lo que el tratamiento para la inducción resulta ser mas
largo. 2
En este mecanismo. La droga actúa como un hapteno.2
Se une covalentemente a algunas proteínas de la membrana del glóbulo rojo y entonces
adquiere la antigenicidad necesaria para que se sintetice IgG dirigidas contra los glóbulos rojos
recubiertos de penicilina. En algunos casos puede participar la IgM; sin embargo este anticuerpo
contra la penicilina es por lo común inocuo. 2

Figura 20: Comparación de la acción de un antígeno y amoxicilina sobre el eritrocito. 2

Es importante señalar que el término “auto inmune” es inapropiado para designar ambos
modelos hapténicos de mecanismo de hemólisis por el hecho de que los anticuerpos producidos

36
son específicos contra un componente exógeno (en este caso amoxicilina) y no contra
componentes propios del glóbulo: así pues, el mecanismo es un proceso inmune.3

5 Pruebas de laboratorio
5.1 Determinación de hemoglobina
El método de la cianometahemoglobina (hemiglobincianuro, HiCN) tiene la ventaja de la
conveniencia y una solución estándar estable fácilmente disponible. 15

5.1.1 Fundamento:
La sangre se diluye en una solución de ferrocianuro potásico y cianuro potásico
(Reactivo de Drabkin). El ferrocianuro potásico oxida la hemoglobina a hemoglobina (Hi,
metahemoglobina) y el cianuro potásico convierte iones cianuro a la forma HiCN, que tiene una
absorción máxima amplia a una longitud de onda de 540nm. La capacidad de absorción de la
solución se mide en un espectrofotómetro a 540nm y se compara con una estándar de HiCN. La
intensidad de color de este compuesto se mide foto colorimétricamente. Los resultados se llevan a
una curva estándar realizada con soluciones de cianometahemoglobina comercial, de donde se
extrapolan las concentraciones de hemoglobina de las muestras problema. 15

5.1.2 Procedimiento:
1.- Desinfectar la parte a puncionar con alcohol, secándola posteriormente con algodón. Utilizar
siempre guantes y lancetas estériles.
2.- Punzar con la lanceta y presionar el mismo para que salga sangre.
3.- Se obtiene la sangre por punción capilar, de la que se toman directamente 0,02 ml con una
pipeta de hemoglobina.
4.- Se llevan los 20 µl de sangre a un tubo de ensayo que contiene 5ml de reactivo Drabkins.
Agitar por inversión varias veces y dejarlo reposar durante 10 minutos.
6.- Ajustar el fotocolorímetro a 540nm en absorbancias y presionar "auto cero", para que las
absorbancias marquen "0.000".
7.- Posteriormente ajustando el 100 por ciento de transmisión con otro tubo de ensayo que solo
contenga 5ml de reactivo Drabkins (tubo de la derecha de la foto adjunta).
8.- Construcción de la curva a estándar.- De un estándar comercial de cianometahemoglobina
(que contiene 20g/100ml) tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml y ponerlos respectivamente en 5 tubos de ensayo.
Añadir a cada tubo reactivo de Drabkins hasta completar un volumen total de 5ml. Los tubos
estándar así preparados representan 4, 8, 12, 16 y 20g de hemoglobina/100ml de sangre
respectivamente. Se leen a 540 nm frente a un tubo que solo contenga reactivo Drabkins. Se

37
construye la curva estándar como se indica en la página siguiente. Esta curva nos servirá mientras
estamos utilizando los mismos reactivos. 15

5.1.3 Interpretación:
La disminución de la hemoglobina indica anemia, que puede deberse a deficiencia en las
sustancias que intervienen en su formación, alteraciones en los órganos que la sintetizan y
disminución en la producción o destrucción excesiva de los eritrocitos. 15
5.1.4 Valor de Referencia en ratas: hemoglobina: 14.8%15. 15

5.2 Hematocrito (volumen del paquete hemático)


El hematocrito venoso mide el tanto por ciento del volumen total de una muestra de sangre
venosa ocupado por los hematíes o, dicho de otro modo, es la relación entre volumen de eritrocitos
y el de sangre total. Se expresa como porcentaje o como fracción decimal. 16

5.2.1 Fundamento:
El HCT puede determinarse por métodos manuales o por métodos automáticos.
Los métodos manuales consisten en la centrifugación de la sangre, aplicándola una fuerza de
2.000 a 5.000 g (macro método) o de 12.000 a 15.000 g (micro método). 16
Los métodos automáticos pueden basarse en 2 principios: 16
 El cálculo matemático del HCT a partir de los valores de RBC y de volumen corpuscular
medio, obtenidos electrónicamente con anterioridad.
 El análisis de la sombra que produce la población eritrocitaria, al reflejarse en un campo
oscuro.
Con los métodos manuales también se cuentan, junto con el volumen de los hematíes, el
de los leucocitos, el de las plaquetas y el del plasma que queda atrapado entre los hematíes. Por
ello, el valor de HCT conseguido con métodos automáticos es más exacto y suele ser 1 o 2
unidades más bajo que el logrado con métodos manuales. El hematocrito se determina por
centrifugación de una muestra de sangre anti coagulada bajo condiciones normalizadas. El
anticoagulante puede ser heparina seca, EDTA u oxalato ajustado. 16

38
Figura 21: Ejemplo de un tubo de hematocrito. 17

5.2.2 Procedimiento: 16
1. La determinación ha de hacerse por duplicado.

2. Llenar cada tubo capilar con la sangre, hasta las 3/4 partes de su longitud. El Llenado se
efectúa por capilaridad y se realiza poniendo en contacto uno de los extremos del tubo
capilar con la gota de sangre, o introduciéndolo en el tubo de sangre e inclinando este,
posteriormente, para facilitar el proceso.
3. Limpiar el exterior de cada tubo con un trozo de algodón o con una gasa.

4. Sellar el extremo de cada tubo por el que ha entrado la sangre con plastilina. Para ello, se
hace penetrar el tubo en la plastilina, o incluso se atraviesa esta con aquel.

5. Colocar, debidamente equilibrados, los tubos en la centrifuga. En ella los tubos se sitúan
con su extremo tapado hacia afuera, ajustados al borde exterior y adecuadamente encajados
en sus surcos.
6. Centrifugar los tubos a unas 12.000 g durante 5 minutos.

Resultados:

Puede realizarse de 2 maneras: 16


 Midiendo las columnas formadas en el interior de cada tubo con una simple regla
milimetrada y calculando, seguidamente, el porcentaje que le corresponde a la columna de
eritrocitos, mediante una sencilla regla de tres
 Mediante un lector de microhematocrito.

39
Figura 22: microhematocitometro. Lector de microhematocrito. 317

Un valor bajo del HCT suele ser signo del padecimiento de una anemia. Sin embargo, hay
falsos descensos del HCT ocasionados por hemodilución. 16
Paradójicamente, el HCT suele ser normal en la fase más temprana de las hemorragias
agudas, pues en estas se pierden células y plasma en la misma proporción. 16
Un valor alto del HCT suele ser signo del padecimiento de una poli globulina. Sin embargo,
también hay engañosos ascensos del HCT producidos por hemoconcentración (por ejemplo, el
de la deshidratación). 16

Se puede hacer un cálculo aproximado del n° de hematíes por mm3 de sangre, silos
hematíes son de forma, tamaño y contenido en hemoglobina normal. La relación entre el n° de
hematíes y el hematocrito es una constante K

Hematocrito x K = N° hematíes / mm 3 siendo K = 110.000 16

Resultados obtenidos:

Hemos obtenido un hematocrito de 44, por tanto la concentración de hematíes será

44 x 110.000= 440.000 hematíes/ mm 3

Para saber si se ha procedido correctamente, tendremos que comparar nuestro resultado


con el obtenido en la cámara de recuento. 16

5.2.3 Interpretación:

40
Al mismo tiempo que se determina el hematocrito se debe examinar el plasma para poner en
evidencia la ictericia (color amarillo) o hemolisis (color rojo). También se debe observar el espesor
de la capa cremosa. 16
Hematocrito aumentado: El hematocrito esta aumentado en la hemoconcentracion, tal como se
observa en casos de shock asociado con operaciones, traumas, quemaduras y en policitemia.
Hematocrito disminuido: el hematocrito esta disminuido en condiciones asociadas con
sobrecarga de líquidos, por ejemplo, descompensación cardiaca, embarazo, y excesiva
administración de fluidos. En la fase de convalecencia después de la pérdida de sangre el volumen
sanguíneo se restablece por un incremento del volumen del plasma, por lo que el hematocrito
puede disminuir en la fase inicial de la terapia con transfusión. 16
5.2.4 Valores de referencia en ratas: Hto: 46%1716

5.3 Fragilidad osmótica eritrocitaria

5.3.1 Fundamento:
La fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) es una técnica realizada para el estudio de las
membranopatias eritrocitarias. La membrana eritrocitaria es semipermeable, es decir, permite el
libre paso de agua a su través, restringiendo el paso de ciertos solutos iónicos como el cloruro,
sodio y potasio. Por ello, si el eritrocito se incuba en un medio hipertónico, el eritrocito pierde agua
y se deshidrata. Por el contrario, si el eritrocito se incuba en un medio hipotónico, entra agua y el
eritrocito se hidrata. Si la hipotonía del medio supera cierto límite, se altera la membrana del
eritrocito produciéndose una salida masiva de la hemoglobina hacia el medio, dando lugar a la
hemolisis. La intensidad de la hemolisis es directamente proporcional al grado de hipotonía del
medio (esto es, a mayor hipotonía mayor hemolisis). 15
Llamamos FOE a la medida realizada para determinar la capacidad de una población de
eritrocitos para resistir el efecto hipotónico del medio, y se expresa como aquella concentración de
NaCl (en g/L) necesaria para producir el 50% de hemolisis (H50). 15
Para cada eritrocito, la FOE depende de la relación que existe entre su superficie (S) y su
volumen (V). Debido a su forma bicóncava, los eritrocitos pueden aceptar, sin producir hemolisis,
una entrada de agua capaz de aumentar su volumen hasta un 70%. Una vez rebasado este limite,
sobreviene la hemolisis. Cuando existe un defecto en la forma del eritrocito que disminuye la
relación S/V, como ocurre en la esferocitosis hereditaria, este límite disminuye, y la hemolisis
comienza en presencia de soluciones menos hipotónicas, aumentando la FOE (o lo que es lo
mismo, aumenta el valor de H50). 15
5.3.2 Procedimiento:

41
Partiendo del sodio cloruro al 1% preparamos las siguientes diluciones: 10 ml a10,85%,
10ml al 0,75%..., es decir diluciones cada vez mas hipotónicas. 15
Para ello se puede aplicar C1.V1= C2.V2
Se pipetea en 13 tubos de hemólisis 2ml de cada dilución en cada uno de ellos, a cada
tubo añadimos 0,02 ml=20 micro litros de sangre. Mezclamos por inversión e incubamos a
15
temperatura ambiente durante 30 minutos.
Se homogenizan suavemente y se centrifugan durante 5 minutos a 2000 r.p.m. LECTURA:
Se anota la concentración del primer tubo donde comienza la hemólisis, que se percibe
par la aparici6n de una tonalidad roja en la solua6n y la concentración primera del tubo
donde se produce la hemólisis total, que se percibe por un intenso color rojo en la solución y
escasa o ningún sedimento de hematíes. 15

Figura 23: Tubos de fragilidad osmótica en reposo y centrifugación y cuando se obtendrá su


lectura en el espectrofotómetro. Se muestran los tubos según la concentración de iones Na+
(hipotónicos a hipertónicos). 11

A la hora de la lectura, según avanzamos en el número de tubos el depósito de hematíes es


menor, llegando al número 13 donde no hay número de hematíes. La hemólisis va aumentando
según disminuye la concentración. 15
Hayamos la resistencia mínima en torno al 0,42-0,46 % y la resistencia máxima en torno al 0,30-0,34
%.15
5.3.3 Interpretación:
La esferocitosis hereditaria es un trastorno relativamente común que se caracteriza por
glóbulos rojos sanguíneos intrínsecamente defectuosos, debido a su forma esférica. Estos
glóbulos presentan un aumento en la fragilidad osmótica: son más frágiles que lo normales las

42
personas que sufren de talasemia, algunos glóbulos rojos son más frágiles que lo normal, pero una
porción mayor de los mismos es menos frágil que lo normal. 15

5.4 Conteo de reticulocitos.

5.4.1 Fundamento:
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen restos de rRNA.
Cuando son sometidos a colorantes llamados supravitales, como el azul de cresilo brillante,
este precipita sobre los restos de rRNA permitiendo observarlo en forma de “cuenta de rosario”,
que los eritrocitos maduros no contienen. 17
El otro método para el recuento en cámara de glóbulos rojos, consta en diluir sangre problema
en un líquido apropiado y posteriormente se depositar en la cámara de recuento, donde se
cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los retículos. 17

Figura 24: Cámara de Neubauer. Uso para el conteo de eritrocitos. 11


5.4.2 Procedimiento: 17

43
1. Situar un cubreobjetos sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión a esta, se
ejerce una ligera presión al tiempo que se desliza el cubre sobre las bandas laterales,
previamente humedecidas con H2O, de su porción central.
2. Aspirar la sangre con la pipeta hasta llenarle al tope.
3. Limpiar cuidadosamente el exterior de la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de
sangre.
4. Se echa la sangre en el unoppete y se diluye con el líquido de Hayen.
5. Una vez disuelta se aspira con la pipeta el líquido necesario para la cámara.
6. Desechar las 3 primeras gotas emitidas por la pipeta. Estas corresponden al líquido presente
en el tubo capilar largo de la pipeta de Thoma, que no está mezclado con la sangre.
7. Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre. Esto se realiza ubicándola en uno de
los bordes no adheridos del cubre y dejándola que penetre por capilaridad, en el espacio
existente entre ambas estructuras. Durante esta operación hay que evitar que se formen
burbujas y que rebose la sangre diluida por fuera de los bordes del cubre. Para ello, se coloca
la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta de la pipeta en el borde apropiado, se
disminuye algo la presión ejercida por el dedo índice sobre el otro extremo de la pipeta y se
retira esta justo antes de que se llene completamente el espacio comprendido entre el cubre y
la cámara.
1. Dejar reposar la sangre diluida, contenida en la cámara, durante unos minutos, para que las
células presentes en ella puedan sedimentarse.
2. Enfocar el retículo con el objetivo de 40 x y con el condensador a baja altura, y verificar que
la distribución de los hematíes es homogénea.
3. Contar los hematíes presentes en 80 cuadrados pequeños del cuadrado grande central. Esto
se logra, por ejemplo, contando los hematíes que hay en los 4 cuadrados medianos de las
esquinas y en el del centro.

44
Figura 25: Distribución de aéreas para el conteo de glóbulos blancos y eritrocitos en la cámara de
Neubauer. 11

5.4.3 Interpretación:
El valor de referencia es de 5-20 reticulocitos/1.000 eritrocitos o 0.5-2.0%.
Cuando se presenta la destrucción acelerada de eritrocitos (anemia hemolítica, sangrado
excesivo, hemorragias), el número de eritrocitos aumenta. 17
Una cantidad elevada de reticulositos, indica una gran actividad eritropoyetica de medula ósea;
una cantidad disminuida indica lo contrario; así, la cantidad de reticulocitos presentes en una
muestra de sangre permite conocer la actividad eritropoyetica de la medula ósea. 17

45
Alteraciones bioquímicas en
Diagrama metodológico anemia hemolítica inducida
por amoxicilina en ratas wistar
macho

Se marco, y peso 40 ratas Wistar macho, a través


de una distribución japonesa se crearon 3 lotes.

Lote Amoxicilina + Yakult®


Lote blanco Lote Yakult®

PdCo Mi
MiLoCo LoPdPi
LoCo Co
CaLoMi LoPd
CaMiPiMiCo
MiPi MiPd
Ca MiPiCo
CaMi MiLoPd
CaPi Pi
Pd MiLo
PiCo MdMi
CaMdLo CaMiCo
PdPi MdLo
CaLoCo Md
CaMd LoMi
CaLo PdPiCo
LoPi Lo
CaMiLoCo CaMd
CaPiCo CaLo
MdCo

Administradas vía oral: 2mL/día de Yakult®


y 90mg/Kg/día de amoxicilina, durante 41 días.

Punción cardíaca los días miércoles y


viernes (obteniendo 3mL de sangre aprox.)

Realización de las pruebas

Hematocrito Hemoglobina Conteo eritrocitario Fragilidad osmótica Observaciones

46
a) Distribución, dosis y costo

Dosis
Distribución
Lote Administración Dosis* Costo terapéutica
(ratas)
pediátrica
$50
Amoxicilina +
20 90mg/Kg/día (Penticlox* 65mg/Kg
Yakult®
Suspensión)
oral
10 Yakult® 2mL $4.50 -----

10 Blanco Tendrá la misma dieta solamente sin administración de fármacos


*Dosis adecuada a las características de la rata, de acuerdo a la posología

b) Cronograma

Fecha Días de Días de Actividad


trabajo inducción
Marzo
19 Viernes 1 Marcado, distribución, toma de muestra sangre a 20 ratas, por
punción cardíaca, y realización de las pruebas de laboratorio.
24 Miércoles 6 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca, y
realización de las pruebas de laboratorio.
26 Viernes 8 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca, y
realización de las pruebas de laboratorio.
31 Miércoles 13 Días de asueto
Abril
2 Viernes 15 Días de asueto
7 Miércoles 20 No se realizaron las actividades por falta de éter en el laboratorio.
9 Viernes 22 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca, y
realización de las pruebas de laboratorio.
14 Miércoles 27 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca, y
realización de las pruebas de laboratorio.
16 Viernes 29 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca, y
realización de las pruebas de laboratorio.
21 Miércoles 34 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca, y
realización de las pruebas de laboratorio.
23 Viernes 36 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca,
realización de las pruebas de laboratorio y aplicación de
eutanasia por intoxicación con éter

47
28 Miércoles 41 Toma de muestras sangre a 20 ratas, por punción cardíaca,
realización de las pruebas de laboratorio y aplicación de
eutanasia por intoxicacion con etèr

c) Material, reactivos y equipo requerido


Biológico Químico Instrumental
40 Ratas Wistar macho Reactivo de Drabkin Espectrofotómetro
3 mL de Sangre con
EDTA 5% Centrifuga clínica
anticoagulante (EDTA)
Amoxicilina NaCl 0.9% Cámara de Neubauer
Yakult® Reactivo de Hayem Microscopio óptico
Agua destilada Balanza de dos platos
Éter etílico Balanza granataria con canasta
Acido pícrico Agujas 25 x 16
Jeringas 1 y 3 ml
Vasos pp 100 y 250 ml
Cámara de anestesia
Tubos de ensaye
Gradilla
Pipetas graduadas 0.1, 1,
2, 5 y 10 ml
Pipeta Salim
Portaobjetosy cubreobjetos
Capilares
Propipeta
Vidrio de reloj

Resultados y análisis
Tablas de resultados del equipo 6
a) Lote blanco
Nombre: CaMdLo Tratamiento: Ninguno
Hb
# de Conteo
Fecha Peso (g/100mL Hto (%) FO
muestra (Cel/mm^3)
sangre)
19 de 1 285,3 19,57 44 - - - - - -

48
marzo
26 de
2 305,2 20,09 50 100 96 93,53 85,25 0 -
marzo
16 de
3 332,8 8,97 53,44 100 98,8 97,03 75,96 0 3470000
abril
21 de
4 380,8 12,84 62,29 - - - - - 2740000
abril
23 de
5 338,4 9,82 56,43 100 97,1 72,84 7,284 0 3740000
abril

b) Lote Yakult®
Nombre: MiLo Tratamiento: Yakult®
Hb
# de (g/100m Hto Conteo
Fecha Peso FO
muestra L (%) (Cel/mm^3)
sangre)
24 de 88,9 55,0 41,1
1 314 13,54 51,3 100 0 4770000
marzo 6 4 2
9 de 95,4 69,4 25,9
2 326 8,05 60 100 0 5120000
abril 1 6 5
14 de 333, 96,2 89,4 10,5
3 19,61 49,54 100 0 4260000
abril 5 5 5 4

Nota: Murió el 24 de marzo y se repuso con otra el 9 de abril y murió el 14 de abril por
mala punción cardíaca

c) Lote amoxicilina + Yakult®


Nombre: MdMi Tratamiento: amoxicilina + Yakult®
Fecha # de Peso Hb Hto FO Conteo
muestra (g/100mL (%) (cel/mm^3)
sangre)
19 de 1 322,7 19,28 51 - - - - - -
marzo
26 de 2 309 16,59 47,05 100 92,02 78,22 51,53 0 4070000
marzo
9 de 3 326 5,483 52,02 100 95,41 69,46 25,95 0 5850000
abril
16 de 4 330 11,66 50,9 100 98,8 97,03 75,96 0 2830000

49
abril

Nota: murió el 16 de abril por mala punción cardíaca

Nombre: PiCo Tratamiento: amoxicilina + Yakult®


Fecha # de Peso Hb Hto FO Conteo
muestra (g/100mL (%) (Cel/mm^3)
sangre)
24 de 1 345,5 14,02 49,8 100 50,45 21,12 4,55 0 4370000
marzo
9 de 2 371,5 5,29 58,33 100 92,11 86,92 2,07 0 2910000
abril
14 de 3 372,2 8,86 40,32 - - - - - 2410000
abril
21 de 4 380,8 16,15 62,29 - - - - - 2740000
abril
28 de 5 394,3 13,02 47,36 100 42,95 26,17 18,2 0 1670000
abril

Cabe mencionar que los intervalos que aparecen en cada gráfico corresponden al valor
más alto y al más bajo por cada técnica de la rata blanco utilizada, ya que al ser la única que no
fue administrada los intervalos serian de una rata sana.
Para realizar los gráficos correspondientes se realizo el tratamiento correspondiente para
así ser iguales a los referenciados en la bibliografía.

Hematocrito
Fundamento: El micro hematocrito, es la prueba diagnóstica hemática, que mide el volumen
que ocupan los eritrocitos al someterse a centrifugación, un volumen de sangre completa a
velocidad y tiempo constante; colocada dentro de un capilar heparinizado.

Cálculos:

50
Si se obtiene un 505 de plasma y un 45% de paquete
eritriode, siendo la parte importantye para el proyecto la segunda
se realiza una regla de tres

3.9cm
% PE  x100  45.88% De Paquete Eritroide
8.5cm

Figura 26: Micro hematocrito.18


Así mismo se realizo con los demás datos para esta prueba.
Grafico 1:

Análisis de resultados:
La prueba de hematocrito se realizo con la finalidad de aportar información determinante
acerca de la disminución eritrocitaria, siendo un parámetro determinante para indicar anemia
hemolítica
En el lote de la rata administrada con Yakult® (línea azul) se observa una tendencia
decreciente, pero por arriba de la línea del lote problema, indicando así, que los volúmenes en

51
porcentaje (%) de eritrocitos fueron disminuyendo en ambos lotes, pero como en el caso del lote
problema este no fue determinante, es decir, se planteo desde un principio que estos valores
disminuirían debido a la destrucción de eritrocitos provocada por amoxicilina, quedando muy por
debajo de los intervalos de la rata blanco.
Las rectas no concuerdan con lo esperado en esta prueba, ya que en vez de disminuir, hay
incrementos en el volumen eritrocitario. Esto pudo leerse a una mala realización de la prueba, o
bien que algunos componentes del Yakult® disminuyeron el efecto del fármaco administrado.

Hemoglobina
Fundamento: El ferricianuro de potasio la reduce a metahemoglobina, que se estabiliza por la
unión de los iones CN- (cedidos por el KCN) formando cianometahemoglobina, que tiene una
absorbancia máxima a 540nm.
La disminución de hemoglobina indica anemia, que puede deberse a deficiencia en las
sustancias que interviene en su formación, alteraciones en los órganos que sintetizan y
disminución en la producción o destrucción excesiva de los eritrocitos.

Cálculos:
Al realizar esta prueba, los resultados se obtenían en absorbancia así que para convertirlos
en g de hemoglobina/dL por cada eritrocito, se multiplico por el siguiente factor de conversión:

Ejemplo abs= 0.428 x 36.8= 15.7504g/dL o bien g/100ml

Así mismo esto se realizo para todos los valores obtenidos para esta prueba.

Gráfico 2:

52
Análisis de resultados
Esta prueba se realizo con la finalidad de cuantificar gradualmente la disminución de
hemoglobina por la destrucción excesiva de eritrocitos, ya que al destruirse el eritrocito se libera
hemoglobina, pero al ser esta destrucción excesiva, el numero de eritrocitos seria menor haciendo
que el sistema hematopoyetico fuese estimulado para generar más; sin embargo, debido a la
acción del fármaco provoco que esta demanda fuese excesiva , a tal grado de que se liberaran
reticulocitos (células inmaduras de los eritrocitos) a torrente sanguíneo. Y como estos no contienen
hemoglobina, se esperaba que al disminuir los niveles de eritrocitos en sangre y aumentar los
niveles de reticulocitos en esta misma, los niveles de hemoglobina disminuirían gradualmente.
Resulta incierto, el hecho que los niveles de hemoglobina (línea verde) disminuyeran en la
rata administrada con Yakult® a tal grado de estar por debajo de los intervalos de la rata blanco,
cuando no se le administro el fármaco. Sin embargo, puede deberse a que al ser solo un valor que
disminuye, tal vez se realizo de manera incorrecta la prueba, tal vez se agrego mayor cantidad de
reactivo o bien no se tomo correctamente la muestra de sangre, ocasionando que la muestra
estuviese diluida y por tanto obtener n valor menor a comparación del resultado siguiente.
Los resultados de hemoglobina obtenidos en el lote problema, no muestran una tendencia
lineal que pueda tomarse como referencia, esto pudo deberse a la incorrecta realización de la
prueba y al mal manejo de la muestra y reactivos utilizados.

53
Solo durante tres sesiones se puede observar una disminución determinante, ya que se
muestran valores por debajo de los intervalos de referencia, por lo que pudo deberse a que se
suspendió la administración del fármaco, haciendo que los niveles de hemoglobina se
normalizaran al concluir el proyecto

Conteo eritocitario
Fundamento: Esta prueba se basa en el número de células por mm 3 determinado por un factor
de dilución por la pipeta de Thoma para fórmula roja y el conteo de eritrocitos en la cámara de
Neubauer en 5 de las cámaras secundarias de la misma. Las células serán contadas con un
objetivo de 40X una vez tratadas con el diluyente de Hayem que permite la lisis de leucocitos y
mantienen a los eritrocitos en un ambiente isotónico.

Cálculos:

Para esta prueba se debía contar cada cuadricula como se observa en el fundamento. Así que
por cada valor se debía multiplicar por un factor de corrección que nos permite conocer la
cantidad de eritrocitos contenidos en un milímetro cúbico, que es lo que mide la cámara de
Neubauer.
Ejemplo. Se realizo un conteo de 423 eritrocitos, ahora esos se debe multiplicar por 10000
Obteniéndose 4, 230 000eritrocitos /mm3

Gráfico 3:

54
Análisis de resultados
El conteo eritrocitario, nos ayudo durante la realización de la práctica a poder realizar el
conteo directo de los hematíes.
Utilizando un dispositivo llamado “Camara de Neubauer” se logro determinar la cantidad de estas
por milímetro cúbico.
Ahora bien, en la rata administrada con Yakult® se observan valores muy por arriba de los
intervalos de la rata blanco, que pudiesen estar dados por un conteo erróneo de las células, ya que
al ser la primera vez que se realizaba esta prueba sin tener la certeza de la realización de la
técnica, no se manejaron bien tanto el reactivo como la toma de muestra utilizando la pipeta de
Thoma.
En el caso del lote de las ratas administradas con amoxicilina y Yakult®, si se observa el
grafico, los valores si corresponden a la tendencia esperad, ya que estos van disminuyendo
respecto al tiempo de inducción.
Esta resulto ser la técnica más adecuada para poder ver por nosotras mismas la
destrucción de los hematíes y poder así comprobar el efecto del fármaco, ya que se observaban a
los eritrocitos rotos, o bien el conteo de células enteras cada vez fue disminuyendo, lo cual
correspondió al proceso de inducción de anemia hemolítica.

55
Fragilidad osmótica
Fundamento: La fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE), es una técnica realizada para el estudio
de las membranopatias eritrocitarias. Determina la capacidad de una población de eritrocitos para
resistir el efecto hipotónico del medio. Se expresa como aquella concentración de NaCl (en g/L)
necesaria para producir el 50% de hemolisis (H50).

Calculos:

Siendo esta prueba algo complicada el tratamiento de datos es el siguiente:


Se tenían 5 tubos que contenían muestra de paquete eritroide y NaCl 0.9%, cada uno en
proporciones diferentes. Estos se leían al espectrofotómetro. Así pues, teniendo 5 valores de
absorbancia.

Ejemplo:
Tubo 1: 0.458 TUBO AL 100%
Tubo 2. 0.425
Tubo 3: 0.362
Tubo 4: 0.244
Tubo 5. 0.198 TUBO (BCO)

ABS  ABS ( BCO )


% HEMOLISIS  X 100 
ABS (100%)  ABS ( BCO )

TUBO 2
0.425  0.198
% HEMOLISIS  X 100  87.30% HEMOLISIS
0.0.458  0.198

Así para todos los resultados de esta prueba.

Gráfico 4:

56
Análisis de resultados:
La gráfica obtenida para esta prueba indica que no hubo cambios en la estructura de la
membrana del eritrocito, ya que esta se encarga de evaluar la resistencia que tiene la membrana
cuando es sometida a diferentes concentraciones de NaCl, la cual indica el porcentaje de
hemólisis de los hematíes, por esta razón la fragilidad osmótica no fue una prueba contundente
para diagnosticar anemia hemolítica.

Observaciones

57
I. Características macroscópicas

Tabla I a) Características macroscópicas del lote blanco (CaMdLo)


Características macroscópicas. Observaciones
Comportamiento Pasivo (normal)
Heces Firmes y constantes (normal)
Pelo Liso y sin caída (normal)
Orina Olor (normal)
Suficiente agua
Ingesta
≈5 nutricubos (normal)
Fotoperiodo 12 x 12 Hrs (normal)

Tabla II b) Características macroscópicas del lote Yakult® (MiLo)


Características
Observaciones
macroscópicas.
Comportamiento Inquieto (periodo de adaptación)
Heces Diarrea (periodo de adaptación)
Pelo Erizado sin caída
Orina Olor poco penetrante
Suficiente agua
Ingesta
≈5 nutricubos (normal)
Durante el periodo de adaptación se mantuvo alerta, posteriormente
Fotoperiodo
fue cambiando a periodos de casi 12 x 12 Hrs

Tabla III c) Características macroscópicas del lote amoxicilina + Yakult ® (MdMi y PiCo)
Características
Observaciones
macroscópicas.
Comportamiento Inquieto (periodo de adaptación) y posteriormente dócil
Diarrea al inicio del tratamiento posteriormente blandas, obscuras y
Heces
abundantes.
Pelo Erizo, crespo y abundante caída
Orina Olor penetrante (+++)

58
Poco agua en el periodo de adaptación y posteriormente suficiente
Ingesta agua
Aumento en la ingesta de nutricubos (6 a 8)
Durante el periodo de adaptación se mantuvo alerta, posteriormente
Fotoperiodo
fue cambiando a periodos prolongados de descanso.

Análisis de resultados

Como podemos observar se muestra claramente que se provoco un daño fisiológico con la
amoxicilina a las ratas problema comparando las 2 tablas de la blanco y problemas, una de las
características de la anemia hemolítica es la caída de pelo y las ratas administradas con
amoxicilina + Yakult® lo presentan, el comportamiento inquieto se puede deber a el aumento de
glucosa por la suspensión y el Yakult® ya que a este último no se le administraba en las dosis que
trataron al principio del proyecto, así como el fotoperiodo varía en cada rata debido a que la dieta
era diferente en las blanco como las problemas, y la diarrea en las administradas se puede deber a
los componentes que tiene el Yakult®, recordando que este debía de actuar como un protector
gastrointestinal, del daño que provoca la amoxicilina al sistema digestivo.

II. Variaciones de peso

Gráfico 5:

59
Análisis de resultados
De acuerdo al grafico, se observa que la línea del lote administrado con Yakult® tiene desde
el segundo día de inducción una tendencia creciente respecto al peso; esto es debido a que el
Yakult® contiene gran cantidad de azucares que hicieron incrementar su peso, ya que siendo
animales pasivos, no realizan ejercicio por lo que dio como resultado el incremento gradual de
peso. Sin embargo, se ve que desde el sexto día de inducción, ya no había resultados respecto a
este lote. Esto es porque la rata murió debido a una mala punción cardiaca, por lo que no se pudo
seguir con el tratamiento.
Igualmente, la línea roja, que es indicativa del lote de ratas administradas con amoxicilina y
Yakult® no tiene una tendencia definida, ya que disminuye en el tercer día de inducción. Esto se
debe a que la rata control fue cambiada, ya que la primera murió por una mala punción cardiaca,
ocasionando así, que el peso fuese menor. Sin embargo, después de que se comenzó a dosificarle
Yakult® el peso fue incrementando significativamente, hasta que disminuyo, cuando no se
realizaron las pruebas por días de asueto. El incremento de pesos de este lote no corresponde a
los esperados, ya que al finalizar el proyecto los pesos del lote problema rebasan los intervalos del
lote blanco. Esto es debido igualmente a los componentes del Yakult®, o bien a que no se tuvo un
control para su administración, es decir que se administro libremente sin respetar la dosificación
planteada desde el principio, dando esto como resultado

III. Observaciones anatómicas

Tabla III Observaciones anatómicas de los lotes manejados

60
Estomago e
Lote Hígado Bazo Corazón
intestino
Blanco
Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
(CaMdLo)
Graso Estómago duro.
Yakult® Con algunas porciones
(puntos Intestino
(MiLo) de grasa.
blancos) inflamado.
Amoxicilina + Graso Estómago duro.
Graso. Con algunas porciones
Yakult® (puntos Intestino
Reducido de grasa.
(MdMi y PiCo) blancos) inflamado.

Fotografías

Pelo
erizo y
crespo.

Fotografía 1: anestesia con éter a ratas Wistar macho.

61
Intestino
inflamado

Fotografía 2: intestino inflamado de una rata Wistar macho administrada con amoxicilina + Yakult®

62
Intestino

Fotografía 3: intestino de una rata Wistar macho del lote


blanco

Hígado
graso

Fotografía 4: hígado de una rata Wistar macho administrada con amoxicilina + Yakult®

63
Gras
a

Bazo de Rata
administrada con
amoxicilina + Yakult®

Bazo de Rata blanco

Fotografía 5: bazo de rata Wistar macho


administrada con amoxicilina + Yakult® en comparación con el bazo de una rata Wistar del lote
blanco.

Fotografía 6: bazo de rata Wistar macho administrada con amoxicilina +


Yakult®.

64
Hígado
graso

Absceso de
grasa

Estomago duro

Fotografía 7: absceso de grasa, hígado graso y estomago duro; de una rata Wistar macho
administrada con amoxicilina + Yakult®.

Hígado
graso

Estomago duro

Absceso de
grasa

Intestino
inflamado

Fotografía 8: absceso de grasa,


hígado graso, estomago duro e inflamación del intestino; de una rata Wistar macho administrada
con amoxicilina + Yakult®.

65
Análisis de resultados
Como se puede observar en los resultados de observaciones anatómicas, el lote
amoxicilina + Yakult® presenta una gran cantidad de grasa en órganos como el bazo, el hígado y
corazón, se le puede atribuir al poco cuidado en la dieta de los lotes, además de no tomarse en
cuenta la cantidad de glucosa que aportaba el Yakult® y la cantidad de azúcar de la amoxicilina
(que se encuentra en suspensión pediátrica).
Se observa un daño hepático, por la presencia de puntillos blancos que cubría todo el
hígado, el cual se explica por el uso del fármaco, y la inhalación de éter para la anestesia. En lo
que respecta al intestino se observa muy inflamado, se puede atribuir a que el intestino se hizo
perezoso por los componentes del Yakult®, lo cual podría explicar igualmente la rigidez del
estomago.
Con respecto al bazo además de encontrarse cubierto de tejido adiposo, se puede decir
que se presento un daño, puesto que es evidente la diferencia de tamaño entre el bazo del lote
blanco y el bazo del lote amoxicilina + Yakult®, siendo este último más pequeño, pues hay que recordad
que el bazo es el cementerio de los eritrocitos, y habiendo en este caso una gran cantidad de eritrocitos
deformes, o inmaduros, el vaso trabaja en exceso.

Conclusiones
La prueba de hematocrito no resulto ser determinante para comprobar la presencia de
anemia hemolítica en las ratas problema, ya que como se explico anteriormente, los gráficos no
presentan la tendencia esperada siendo así un parámetro no adecuado para tomarse como
referencia en la aparición de la patología.
En el caso de los resultados del equipo, la prueba de hemoglobina si fue un parámetro
determinante, aunque no constante, por errores que se mencionaron anteriormente para la
determinación de anemia hemolítica, ya que estos fueron disminuyendo gradualmente, pero al
suspender la administración del fármaco se normalizaron.
Esta técnica, como conclusión del equipo resulto ser la mejor para la determinación de la
patología esperada, además de que nos mostraba el desarrollo gradual de la misma, al realizar
cada vez conteos más bajos de las células enteras, corroborando de manera visual (es decir su
morfología) como se encontraban las células destruidas,
Así mismo nos permitió comprobar el efecto del fármaco sobre los eritrocitos.
Las pruebas clínicas, hemoglobina y conteo eritrocitario durante la inducción de la anemia
hemolítica reflejan una tendencia decreciente, indicativo de la alteración metabólica en la
membrana eritrocitaria; al mantenerse estos datos dentro del rango del lote blanco la anemia

66
inducida se determina entonces como moderada, ésta además se ve reflejada en las
observaciones físicas y morfológicas de los sujetos de estudio y sus sistemas.
Los resultados de la prueba de fragilidad osmótica así como hematocrito no son
satisfactorios debido a la mala implementación de la técnica, motivo por el cual no nos sirven
como parámetros determinantes en la evaluación de alteraciones bioquímicas presentes en la
anemia hemolítica inducida.
Se puede concluir que los resultados obtenidos respecto al control de los pesos de las ratas
utilizadas para este proyecto no resultaron ser como se esperaba desde un principio, pues se creía
que en el caso del lote administrado con amoxicilina y Yakult®, con el transcurso del proyecto, los
pesos irían disminuyendo, lo cual resulto ser totalmente contrario a los resultados expuestos, pues
estos fueron incrementando hasta sobrepasar los intervalos del lote de las ratas blanco.
Así que puede decirse que el peso no resulto ser un parámetro confiable para la
determinación de anemia hemolítica, es decir que se creía que iría disminuyendo conforme se iba
presentando la anemia, como uno de los síntomas determinantes de la patología inducida
El registro del peso en todos los lotes no fue representativo debido a que la cantidad de
alimento ingerido y la concentración de azúcares tanto en la suspensión como en el Yakult® no
fueron controlados adecuadamente.
El uso del Yakult® como protector de la flora bacteriana así como la amoxicilina en
suspensión pediátrica no fueron la mejor opción ya que no se contemplo la cantidad de
carbohidratos que estos podrían aportar.
El efecto gastroprotector esperado del Yakult® no se evidenció en las observaciones
morfológicas ya que se observó una inflamación intestinal, atribuida quizás a los componentes del
Yakult®.
La presencia de tejido graso puede tener su origen en la alta concentración de azúcares
(Yakult® y antibiótico en suspensión) y el poco control en el consumo del mismo.
El fármaco empleado tiene un efecto hepatotóxico severo y en general en el sistema
digestivo.
Se logró la inducción de anemia hemolítica utilizando amoxicilina como agente inductor en
ratas Wistar macho.
La prueba de hematocrito no resulto ser determinante para comprobar la presencia de
anemia hemolítica en las ratas problema, ya que como se explico anteriormente, los gráficos no
presentan la tendencia esperada siendo así un parámetro no adecuado para tomarse como
referencia en la aparición de la patología.

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En el caso de los resultados del equipo, la prueba de hemoglobina si fue un parametro
determinante, aunque no constante, por errores que se mencionaron anteriormente para la
determinación de anemia hemolitica, ya que estos fueron disminuyendo gradualmente, pero al
suspender la administración del fármaco se normalizaron.
Esta técnica, como conclusión del equipo resulto ser la mejor para la determinación de la
patología esperada, además de que nos mostraba el desarrollo gradual de la misma, al realizar
cada vez conteos más bajos de las células enteras, corroborando de manera visual (es decir su
morfología) como se encontraban las células destruidas.
Así mismo nos permitió comprobar el efecto del fármaco sobre los eritrocitos.
Se puede concluir que los resultados obtenidos respecto al control de los pesos de las ratas
utilizadas para este proyecto no resultaron ser como se esperaba desde un principio, pues se creía
que en el caso del lote administrado con amoxicilina y yakult, con el transcurso del proyecto, los
pesos irían disminuyendo, lo cual resulto ser totalmente contrario a los resultados expuestos, pues
estos fueron incrementando hasta sobrepasar los intervalos del lote de las ratas blanco.
Así que puede decirse que el peso no resulto ser un parámetro confiable para la
determinación de anemia hemolítica, es decir que se creía que iría disminuyendo conforme se iba
presentando la anemia, como uno de los síntomas determinantes de la patología inducida

Referencias y bibliografía:

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content/uploads/2008/10/103008132350.jpg&imgrefurl=http://capazos.com/tag/globulos/&usg=__Q
H-
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