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Reactivos
Marcadoresdepesomolecular
Tampndecarga
TampndeelectroforesisTAE(40mMTrisacetato,1mMEDTA)
Agarosa
Bromurodeetidio
Materiales
Micropipetasypuntas
TubosEppendorfde1,5mL
MatrazErlenmeyerde200mL
Probetade50mL
Equipamiento
Equipodeelectroforesis(cubeta,molde,peine,fuentedealimentacin)
Microcentrfuga
Balanza
Microondas
Transiluminador
Agitador
Objetivos
Protocolo
1.Preparacindelasmuestras
1.1.Semezcla1Ldetampndecargacon1LdelmarcadordeADN(0,5g)ocon
1 L de la muestra de ADN y se lleva hasta un volumen final de 5 L con agua
destilada.
1.2. Se centrifugan las muestras en una microcentrfuga para bajar la muestra al
fondodeltubo.
2.Preparacindeungeldeagarosaal0,8%
2.1.Semideenunaprobeta50mLdeltampndeelectroforesisTAE1xyseaadena
unmatrazErlenmeyer.
2.2.Sepesan0,4gdeagarosaenunabalanzayseaadenalmatrazErlenmeyer.
2.3.Sellevaaebullicinlasolucindeagarosaenunmicroondasysedejaenfriarla
suspensinhastaquealcanceunos50Caproximadamente.
2.4.Sevierteenelmoldeysedejagelificarduranteunos30minutos.
3.Electroforesis
3.1.Seretiraelgeldeagarosadelmolde.
3.2.Secolocaelgeldeagarosaenlacubetadeelectroforesis.
4.Tincindelgeldeagarosaconbromurodeetidio
4.1. Una vez finalizada la electroforesis se retira el gel de agarosa y se tie en una
solucinconbromurodeetidioa1g/mL.
4.2.Seponeenagitacindurante20minutos.
5.Visualizacindelgel
5.1.Secolocaelgeldeagarosasobrelabandejadeltransiluminador.
5.2.Sevisualizaelgeldeagarosaconluzultravioleta.
5.3.Seobtieneunafotografa.
6.Interpretacindelosresultados
6.1.SedeterminasielADNgenmicodeguisanteesmayorquelasbandasdelADN
marcadorysuintegridad.