MICROSCOPIA

I. Introduccin:

MICROS: pequeo
SCOPIOS: observar
La creacin del microscopio fue un importante avance en el mundo de la medicina.
Al descubrirse las bacterias se pudo averiguar la causa de muchas enfermedades y
as fabricar una cura. El tejido humano tambin pudo ser examinado y se pudo
descubrir como funciona nuestro cuerpo. Hoy en da, se analiza tejido enfermo en
los hospitales. Tambin se usan los microscopios en la conocida microcirugas,
cirugas muy difciles las cuales no pueden llevarse a cabo sin el microscopio. Los
microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formacin de imgenes
pticas aumentadas a travs de lentes convergentes, permiten la observacin de
pequeos detalles de una muestra dada que a simple vista no se percibiran .En el
presente informe se hablara del microscopio compuesto sus partes, su correcto uso
,cuidado y conservacin.

II. Fundamento terico:

El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin embargo, no se pueden
ver a simple vista cosas que midan menos de una dcima de milmetro. Y muchos de
los avances en qumica, biologa y medicina no se hubieran logrado si antes no se
hubiera inventado el microscopio.
El microscopio nos brinda una gran ayuda en las investigaciones de los diversos
campos biolgicos y en las ciencias agrarias sobre todo en dos grandes reas de la
CITOLOGIA Y CITOGENETICA, adems otras ciencias como fitopatologa, virologa,
Bacteriologa, etc.
El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en experimentos con lentes,
lo que sucedi de similar manera pocos aos despus con el telescopio de Hans
Lippershey (1608). Entre 1590 y 1600, el ptico holands Zacharas Janssen (1580-
1638) invent un microscopio con una especie de tubo con lentes en sus extremos,
de 8 cm de largo soportado por tres delfines de bronce; pero se obtenan imgenes
borrosas a causa de las lentes de mala calidad. Estos primeros microscopios
aumentaban la imagen 200 veces. Estos microscopios pticos no permiten agrandar
la imagen ms de 2000 veces. En la actualidad los de efecto tnel los amplan 100
millones de veces.
 Durante el siglo XVII muchos estudiosos de las lentes y los microscopios hicieron
toda clase de pruebas y ensayos para lograr un resultado de mayor precisin. Entre
los intentos fue el del italiano Marcello Malpighi (1628-1694) que en 1660 logr ver
los vasos capilares de un ala de murcilago.
El ingls Robert Hooke (1635-1701) hizo mltiples experiencias que public en el
libro "Micrographia"(1665) con dibujos de sus observaciones. Sus aparatos usaban
lentes relativamente grandes.
El holands Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), perfeccion el microscopio
usando lentes pequeas, potentes, de calidad, y su artefacto era de menor tamao.
Alrededor del 1676 logr observar la cantidad de microorganismos que contena el
agua estancada. Tambin descubri los espermatozoides del semen humano; y ms
adelante, en 1683, las bacterias. Durante las siguientes dcadas los microscopios
fueron creciendo en precisin y complejidad y fueron la base de numerosos
adelantos cientficos.
Pero recin en el Siglo XX lleg el gran cambio, con el microscopio electrnico, que
sustituy la luz por electrones; y las lentes por campos magnticos. El primer
microscopio electrnico lo construy el fsico canadiense James Hillier en 1937 y
poda ampliar las imgenes hasta 7000 veces. Se continu perfeccionando hasta
llegar a aumentar unos dos millones de veces.
En 1981 surgi el microscopio de efecto tnel (MET), que surgi aplicando la
mecnica cuntica, y logrando atrapar a los electrones que escapan en ese efecto
tnel, para lograr una imagen ultra detallada de la estructura atmica de la materia
con una espectacular resolucin, en la que cada tomo se puede distinguir de otro, y
que ha sido esencial para el avance -a su vez- de la microelectrnica moderna.

III. Objetivos :
Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus
respectivas funciones.
Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las
ciencias biolgicas.
Manejar correctamente el microscopio y reconocer sus partes, as
como observar los preparados en fresco y en seco.

IV. Materiales:
Agua estancada
Laminas y laminillas
Fosforo
alcohol
gotero
Microscopio compuesto
DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
El microscopio tiene dos partes, una ptica y la otra mecnica.

PARTE OBTICA :
El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar
las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo
componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El
objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular
luego ampla.
1. OCULAR:
se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre
se debe a la cercana de la pieza con el ojo del observador.
Tiene como funcin aumentar la imagen formada por el
objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de
aumento van desde 5X ,10X ,15X. consta de un sistema de dos
lentes planos convexos, dispuestos en un tubo cilndrico de
metal, con diafragma intermedio, ambas lentes presentan las
caras planas hacia el ojo del observador .la lente inferior se le
conoce como lente de campo.
2. OBJETIVO:
Denominado as por que va cerca del objeto a observar .Esta
constituido por un tubo metlico cilndrico cnico, lleva en su
interior un sistema de lentes destinados a dar la imagen real e
invertida del objeto .La lente de la parte inferior se denomina
lente frontal .en la parte lateral del tubo metlico, lleva inscrita
una numeracin 4X, 10X, 20X, 40X, 60X, 100X, etc,que indica el
nmero de aumento propio del objetivo.
Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos:
objetivos secos y objetivos de inmersin.

OBJETIVO A SECO:
Los objetivos seco son aquellos que se emplean generalmente
para observar preparaos en fresco, aunque tambin pueden
utilizarse para observar preparados en seco, no se utiliza
ningn tipo de sustancias refractante para realizar la
observacin. El nmero de aumento son de tres clases:
_De pequeo aumento =mayor de 0X y menor de 10X
_De mediano aumento =mayor de 10X y menor de 30X
_De mayor aumento = mayor de 30X y menor de 90X
 OBJETIVO DE INMERSION:
Est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para
observar a travs de este objetivo es necesario colocar una
gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de
manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite
de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se
distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que
rodea su extremo inferior.

3. SISTEMA DE ILUMINACION:
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial
de tal manera que ilumine la preparacin u objeto que se va a
observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende
los siguientes elementos:

El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est

construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema
ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele
tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de
movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se
emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para
iluminacin natural (luz solar). Los modelos ms modernos no
poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin
que el espejo.

Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris,

que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede
emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo
que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere
aprovechar la resolucin del sistema ptico.
Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya
finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la
preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que
el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la
platina y su lente superior es generalmente planoconvexa,
quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin
cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor
ampliacin); existen condensadores de inmersin, que piden
que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la
preparacin. La abertura numrica mxima del condensador
debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se
lograr aprovechar todo su poder separador. El condensador
puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera
mediante un tornillo, bajndose para su uso con objetivos de
poca potencia.

Anillo porta filtro: permite colocar un filtro de color anexo al

condensador para destacar alguna estructura de inters en la
preparacin, y con la finalidad de facilitar la observacin.
PARTE MECANICA :

La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el

revlver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macromtrico y el
tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica
y de iluminacin; adems, permiten los desplazamientos
necesarios para el enfoque del objeto.

El pie: Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y

tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular.

La columna o brazo: llamada tambin asa, es una pieza en forma

de C, unida a la base por su parte inferior mediante una charnela,
permitidiendo la iinclinacin del tubo para mejorar la captacin
de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su
porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie.

El tubo: tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente

para evitar las molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su
extremidad superior se colocan los oculares y en extremo inferior
el revlver de objetivos. El tubo se encuentra unido a la parte
superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, las
cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos.

El tornillo macromtrico: girando este tornillo, asciende o

desciende el tubo del microscopio, deslizndose en sentido
vertical gracias a una cremallera. Estos movimientos largos
permiten el enfoque rpido de la preparacin.

El tornillo micromtrico: mediante el movimiento casi

imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra
el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva acoplado un
tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para
precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los
objetos.

La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca la

preparacin u objeto que se va a observar. Presenta un orificio,
en el eje ptico del tubo, que permite el paso de los rayos
luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir,
mediante tornillos laterales puede centrarse o producir
movimientos circulares.

Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la
preparacin. Se encuentran en la platina.

El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que

se enroscan los objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan
por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que se
nota por el ruido de un pin que lo fija.
 ILUMINACION Y ENFOQUE

La iluminacin y enfoque son dos condiciones principales para

realizar una buena observacin microscpica .la iluminacin se
consigue utilizando fuentes luminosas adecuadas, que pueden
ser natural o artificial.
Los rayos de luz son reflejados por el espejo o por la lmpara de
iluminacin, hacia el objeto o preparado cuando se examina con
grandes aumentos, la luz debe ser intensa, en cambio cuando se
hace con aumentos menores, la luz debe ser ms intensa, lo que
se consigue desplazando en sentido vertical (arriba o abajo) el
condensador y graduando la abertura del diafragma.
Obtenida la iluminacin conveniente, se efecta el enfoque del
preparado, utilizando primero el macrometrico hasta encontrar
la imagen (enfoque aproximado), y luego accionando el
micromtrico permite el enfoque perfecto (visualizacin de la
imagen).

MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO

Observacin de preparaciones en fresco:

1. Bajar la platina hasta el tope

2. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en
posicin de observacin
3. Colocar la preparacin sobre la platina
4. Acercar al mximo la lente del objetivo a la
preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente
y no a travs del ocular,
Ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparacin pudindose
Daar alguno de ellos o ambos
5. Mirar a travs de los oculares y lentamente, ir
separando el objetivo de la
preparacin con el macromtrico y, cuando se observe
algo ntido la muestra,
girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
6. Pasar al objetivo 10x La imagen debera estar ya casi
enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micromtrico para
lograr el enfoque fino. Si al
cambiar de objetivo se perdi por completo la imagen,
es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la operacin
desde el paso 4.
7. Pasar al objetivo de 40x el cual enfoca a muy poca
distancia de la preparacin y
por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparacin
si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo
con aceite de inmersin
si se observa una preparacin que ya se enfoc con el
objetivo de inmersin.

Observacin de preparaciones con objetivo de

inmersin:

1. Bajar al tope la platina.

2. Subir totalmente el condensador para ver claramente
el crculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habr que
colocarse la gota de
aceite.
3. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin
dejndolo a medio camino entre
ste y el de x40.
4. Dejar caer una gota mnima de aceite de inmersin
sobre el crculo de luz, sin
permitir que el gotero toque la preparacin
5. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la
posicin del objetivo de 100X.
6. Mirar directamente al objetivo y lentamente subir la
platina hasta que la lente
toque la gota de aceite. En ese momento se nota como si
la gota ascendiera y se
adosara a la lente.
7. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La
distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun
menor que con el de 40x
por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
8. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la
preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues
se manchara de aceite.
Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la
platina y repetir la
operacin desde el paso 3.
9. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se
baja la platina y se coloca
el objetivo de menor aumento girando el revlver. En
este momento ya se puede
retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar
con el objetivo de
inmersin en posicin de observacin.
10. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado
empleando un papel especial para
ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est
perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio

(macromtrico,
micromtrico, platina, revlver y condensador).
2. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y
dirigiendo siempre la
mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente
con la muestra.
3. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo
del mismo ni hacerlo
mientras se est observando a travs del ocular.
4. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si
se derrama sobre ella
algn lquido, secarlo con un papel suave absorbente.
5. No dejar los preparados sobre la platina, y menos an
si el microscopio est
Encendido. Tanto en la lupa como en el microscopio
ptico se destruir
6. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el
objetivo, hay que limpiarlo
con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o etanol-ter
(9:1). NUNCA utilizar
xilol para limpiar las lentes.
7. Es conveniente limpiar y revisar siempre los
microscopios al finalizar la sesin
prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico el
ajuste y revisin
general de los mismos.
8. No extraer las lentes ni tocarlas con los dedos.
9. Apagar mientras no se est utilizando

PRACTICA DE PREPARACION EN FRESCO

Procedimiento:
Colocar sobre un porta objetos una gota de la preparacin
en fresco y cubrir con una laminilla.
Conectar el microscopio
- Prender la fuente de luz
- Revisar que las siguientes partes del microscopio estn en
posicin.
- La platina en su tope inferior
- Objetivo 10X abajo
- El carro de transporte centrado
- El condensador en su tope inferior
- El diagrama casi cerrado
- Observar que el campo del microscopio se encuentre
uniformemente iluminado.
- Colocar la preparacin en fresco, sobre la platina del
microscopio.
- Sujetar la lmina con la palanca del carro de transporte.
- Centrar la preparacin sobre la fuente de luz en la apertura
circular de la platina.
- Mirar la platina por el lado y mover el botn de ajuste, subir,
hasta llegar al tope.
- La distancia que queda del objetivo 10X es de aprox 0.5 cm.
- Mirar ahora por el ocular y bajar suavemente la platina hasta
lograr captar la imagen del objeto en observacion .
- Hacer el ajuste de las lentes oculares a su distancia
interpupilar desplazando los tubos oculares con ambas
manos hasta que en el campo microscpico aparezca
solamente una imagen .

Ajustar la nitidez de la imagen moviendo lentamente el

tornillo micromtrico de
ajuste.
NOTA: En algunos microscopios antiguos se mueve el tubo
del ocular hasta colocar el objeto a esta distancia en la
platina
Obtener el contraste ptimo de la imagen regulando:
- La intensidad de la lmpara
- La posicin del condensador y la apertura del diafragma.
- Podemos afirmar que a menos luz, mayor contraste de tal
modo que este se obtiene bsicamente cerrado el diafragma
y colocando el condensador en su tope inferior.
Con el diafragma podemos graduar la magnitud del cono de luz
que sale del condensador, aumentando la profundidad
de foco de la imagen.
CUESTIONARIO:

Cul es la diferencia entre un microscopio ptico y un

microscopio electrnico?
El microscopio ptico usa las partculas de luz (fotones) como
vehculo para obtener una imagen, haciendo que la luz incida
sobre una muestra y que sta refleje las partculas para poder
ser "vista". Usa lentes convexas para lograr el aumento de la
imagen.

El microscopio electrnico electrones para lograr la reflexin en

la muestra, ya que la longitud de onda de los electrones es
mucho menor que la de los fotones de luz visible. Eso quiere
decir que es capaz de producir muchos ms aumentos que un
microscopio ptico.
Por qu se utiliza el aceite de cedro en la observacin
con los objetivos de inmersin?
Porque la funcin del aceite de inmersin es restringir el
movimiento de la muestra, adems de evitar el rozamiento
entre el cubre objetos y el objetivo, generalmente se lo utiliza
cuando vamos a observar con el objetivo 100x. Otra funcin del
aceite de inmersin es evitar que la luz se desve; al contrario lo
que se pretende es que la luz llegue concentrada hacia la
muestra
Qu tipo de imagen da el ocular y el objetivo?
Ocular: virtual derecha aumentada
objetivo: real invertida aumentada
imagen final: virtual invertida aumentada
Cmo se calcula el nmero de aumentos de una
muestra?
Para calcular el aumento que experimenta una preparacin al
ser observada a travs de un microscopio, se realiza el siguiente
clculo:
Se multiplica el aumento que seala el ocular por el aumento
del objetivo dando como resultado el aumento total de la
muestra. Este aumento total representa el nmero de veces en
que el objeto se encuentra ampliado con respecto a su tamao
original.

At: Aumento total

Aoc: Aumento del ocular
Aob: Aumento del objetivo
Por ejemplo si el objetivo es de 40 X y el ocular de 10 X = la
muestra esta aumentada 400 veces.
Esquematice comparativamente la formacin de
imagen del microscopio ptico con el microscopio
electrnico?

MO: microscopio ptico

SEM: microscopio electrnico barrido
TEM: microscopio electrnica de transmisin
Qu pasos se siguen para realizar una coloracin de
Gram?
Los pasos que se han de seguir para realizar la coloracin son
los siguientes:
1) Se fija la muestra mediante calor.
2) Cristal Violeta (tie todas las bacterias, gram positivas y gram
negativas) durante 1 minuto.
3) Se fija con Lugol, 1 minuto.
4) Se decolora con una mezcla de alcohol y cetona (los gram
negativos se decoloran).
5) Safranina (colorante de contraste, que tie a los gram
negativos), 1 minuto.
Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativos. En la
tincin, las gram positivas se observarn de color azul-violeta, y
las gram negativas de color rosa.

Para observar plasmodium falciparum que tipo de

preparado empleara?
PREPARACIN DE LA MUESTRA
Se pueden realizar dos tipos de preparaciones para el
Diagnstico de esta enfermedad:
Gota gruesa. La gota gruesa es hasta 20 veces ms
densa que la extensin y, por ello, ms sensible (varias
capas de clulas sanguneas depositadas sobre un
porta objetos). Los parsitos se observan libres,
extracelulares ya que los hemates se rompen durante el
procesamiento.
Extensin de sangre: Consiste en una extensin fina de
la sangre sobre un portaobjetos (una sola capa de
clulas). En ella, los parsitos (Plasmodium) se observan
en el interior de los hemates

PREPARACIN DE LA GOTA GRUESA

Como se ha mencionado anteriormente, consiste en la
visualizacin microscpica de una gruesa capa de
sangre que se teir pero que NO SE FIJA
PREVIAMENTE.
Dispensar una gota de sangre sobre un portaobjetos
 limpio y extenderla ligeramente sobre la superficie
del mismo para que no quede excesivamente
gruesa (lo suficiente para que pueda leerse a su
travs la letra impresa de un peridico).
Realizar movimientos circulares sobre la gota
utilizando la esquina de otro portaobjetos para
desfibrinar la gota de sangre como muestra la
imagen.
Dejar secar completamente a temperatura ambiente.
En situaciones de urgencia puede acelerarse el secado por
agitacin o calor suave, pero evitando que la preparacin
quede fijada por el exceso de calor.
Una vez preparada la gota, puede teirse mediante tincin
de Giemsa o mediante tincin de Field.

PREPARACIN DE LA EXTENSIN DE SANGRE

Es una tcnica ms rpida que la gota gruesa y con la que se
altera menos la
morfologa del parsito.
Depositar una pequea gota de sangre en un extremo de un
portaobjetos limpio.
Extender la gota inmediatamente con la ayuda de otro
portaobjetos
(manteniendo entre ambos un ngulo de unos 45).
Secar rpidamente la preparacin agitndola manualmente
para obtener una
distribucin homognea de los hemates.
Una vez preparada la extensin, puede teirse mediante
tincin de Giemsa o
mediante tincin de Field .
Morfologa de los parsitos que, adems, nos permitir
determinar el estadio del
ciclo vital en el que se encuentran (trofozoto, esquizonte..).
Tamao de los hemates parasitados (en relacin a los no
parasitados).
 Presencia de punteado, granulaciones y pigmento malrico
en el interior de los
hemates.
La deteccin de estos parsitos debe acompaarse de un
recuento semicuantitativo
de los mismos (parasitemia), en el que se informa el nmero
de hemates para sitados por cada 100 glbulos rojos:
% parasitemia = promedio hemates parasitados por campo
totales por campo) X 100.
Se pueden observarse imgenes de las diferentes especies de
Plasmodium falciparum.

V. CONCLUSION:
En esta practica se aprendi a utilizar el microscopio
compuesto, desde las partes que lo conforman hasta la forma
de realizar un enfoque con los diferentes objetivos y preparar
una muestra. Para familiarizarnos con este, para su utilizacin
en practicas posteriores.

VI. BIBLIOGRAFIA:
Enciclopedia Encarta 2009. Microsoft Corporation
Enciclopedia Hispnica Millennium. (2009). Volumen 10. Caracas.
Mundo Cientfico N 27-50. Editorial Fontalba. Barcelona.
http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen_virtual
http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_%C3%B3ptico
http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_compuesto
http://es.wikipedia.org/wiki/Imagen_(%C3%B3ptica)
http://www.monografias.com/trabajos12/micros/micros.shtml
http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_compuesto
http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%8Dndice_de_refracci%C3%B3n
http://www.wordreference.com/definicion/imagen
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp1/microscopio.html
http://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio#Tipos_de_microscopios.