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Ingeniera en acuacultura.
7 semestres
Sanidad Acucola
Unidad 2
Investigacin
Tcnicas de la investigacin sanitaria
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ndice
Introduccin ........................................................................................................................................ 3
Conclusin......................................................................................................................................... 12
Bibliografa ....................................................................................................................................... 12
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Introduccin
Los peces, al igual que todos los animales, son susceptibles a las enfermedades, dichos
padecimientos se presentan tanto en la produccin natural (ros, arroyos, lagos, etc) como en
la explotacin en cautiverio (piscigranjas). Las enfermedades tienen mayor incidencia en la
piscicultura que en las cuencas hdricas naturales, a consecuencia de la densidad a que son
sometidos los peces en la produccin. Es bien sabido que las enfermedades generan prdidas
econmicas importantes a los productores de peces, siendo responsables de mortalidades
masivas en la explotacin, ms aun considerando las fases de cra y alevinaje. Es por dicho
motivo que, dentro de la tecnologa de cultivo, la sanidad acucola ocupa un lugar
preponderante debido a la necesidad que existe de poner en prctica los procedimientos de
prevencin y control de las enfermedades que potencialmente limitan la produccin.
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2.4. Anamnesis.
A los efectos de llevar a cabo la inspeccin ictiosanitaria de un criadero, piscifactora u otro
establecimiento pisccola, se hace necesario efectuar una seleccin sistemtica de los peces
y proceder a la elaboracin de un informe detallado sobre el comportamiento de los mismos
en el ambiente en estudio, o sea: preparar una historia clnica detallada en la cual han de
anotarse todos los datos bsicos de posible inters al Ictiopatlogo. Para ello, es conveniente
utilizar un formulario nico, tal como se detalla en la table.
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identificado en el laboratorio, siendo la nica excepcin a esta regla la enfermedad bacteriana
del rin en donde el diagnstico se fundamenta en un examen de un extendido del rin y/o
de otros rganos para poner de manifiesto la presencia de numerosos diplobcilos Gram
positivos.
Se permite solamente el uso de peces vivos o moribundos, dado que al morirse los peces
stos son rpidamente invadidos por organismos saprofticos presentes en el agua y sobre la
superficie de la piel, y de esa manera se complica o se dificulta el diagnstico. El primer paso
es el de hacer un examen macroscpico del pez para detectar cualquier lesin, abceso, o
fornculo. A partir de esas anormalidades se preparan extendidos los cuales se examinan
microscpicamente para detectar la presencia de mixobacterias, bacterias mviles o
inmviles, etc. El rea de la superficie de la lesin se cauteriza cuidadosamente mediante el
uso de un cuchillo o bistur caliente, y el material se toma a partir del tejido con una tasa de
platino flameada para su posterior siembra en el medio de cultivo. En casos en los cuales no
se detecta la presencia de lesiones externas, la superficie del pez se desinfecta
cuidadosamente con un trozo de algodn empapado en un producto aprobado en base a yodo
orgnico, y una vez seca la superficie (aproximadamente un minuto) se procede a abrir la
cavidad abdominal del pez con instrumentos esterilizados para exponer rganos
internos in situ. El material para los cultivos se toma con una tasa de platino flameada de los
rganos internos, y especialmente del rin, bazo, e hgado.
Los siguientes procedimientos representan las tcnicas mnimas aceptables para fines del
diagnstico bacteriolgico de enfermedades de salmnidos y deben ser utilizados para toda
muestra tomada a partir de lotes y/o poblaciones en los cuales se experimenta una apreciable
incidencia de seales clnicas anormales y/o mortalidades. En aquellas muestras procedentes
de lotes de peces aparentemente sanos, los mismos procedimientos pueden ser aplicados
solamente a peces cuya longitud estndar es de cuatro centmetros (4 cm) o ms.
A. Estriar material tomado aspticamente a partir del rin (al ser posible de reas con
un aspecto normal) en los siguientes medios de cultivo:
a. agar forunculosis (FA);
b. agar Cytophaga (CA);
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c. agar tripticasa soya (TSA);
d. agar clera (CM);
e. agar Mueller-Hinton enriquecido con cocarboxilasa;
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hidrosoluble en placas de agar forunculosis y de agar tripticasa soya,
posiblemente sea Aeromonas salmonicida, agente etiolgico de la
forunculosis.
d. Si el organismo se desarrolla solamente en agar Mueller-Hinton enriquecido
con cocarboxilasa, y no en los dems medios de cultivo, y tiene forma de
bastn Gram negativo e inmvil, es casi seguro que se trata de Haemophilus
piscium, agente etiolgico de la enfermedad de la lcera.
Las principales tcnicas utilizadas en la identificacin de las bacterias asociadas con las ms
importantes enfermedades infecto-contagiosas de los peces son las que se detallan a
continuacin:
i. Prueba de movilidad: se remueve una colonia juvenil de la superficie de una placa del
medio de cultivo debidamente sembrado, y se efecta su emulsin en una gota de
agua sobre un portaobjeto; la suspensin bacteriana se cubre cuidadosamente con un
cubreobjeto, asegurando que no queden atrapadas burbujas de aire; la suspensin se
examina microscpicamente con un aumento de 40 y de 100; los organismos
mviles muestran un movimiento activo en el campo microscpico, el cual no debe
confundirse con el movimiento browniano; la presencia de bastones delgados y largos
que muestran un deslizamiento evidencia la presencia de mixobacterias en el material
en estudio.
ii. Coloracin de Gram: se prepara un extendido del material a ser examinado sobre un
portaobjeto, fijndolo por el calor; se agrega una solucin acuosa al 1% de violeta de
genciana durante treinta (30) segundos; se lava con agua y se agrega yodo de Lugol
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durante treinta (30) segundos como mordiente; se elimina el yodo de Lugol y se lava
el extendido con agua; se agrega alcohol etlico al 95% hasta que el extendido est
decolorado, y se lava bien con agua; se contracolorea con fucsina de Ziehl diluida con
agua 1:10 durante treinta (30) segundos; se lava con agua, se seca con papel secante
o de filtro, y se examina microscpicamente usando un objetivo de inmersin en
aceite. Las bacterias Gram positivas se colorean de un azul purpurado profundo,
mientras que las bacterias Gram negativas se colorean de un rojo rosado. La fuscina
de Ziehl tiene la siguiente composicin:
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eso indica que no ha tenido lugar reaccin alguna. Es importante detectar la presencia
de cido con gas o de cido sin gas en los tubos, dado que eso indica si la fermentacin
es aerognica o anaerognica respectivamente. Para ello se procede a la inoculacin
de agua peptonada con glucosa en un recipiente que contenga una campanita de
Durham. En casos donde se sospecha que el agente etiolgico aislado es un vibrio,
debe emplearse el agar clera para su diagnstico presuntivo.
En trminos generales se recomienda para tinciones de rutina, que las muestras deben haber
sido fijadas con formalina al 10% (apndice) por 24 h para evitar su deterioro y porque est
solucin no endurece los tejidos. La formalina penetra 2 mm en 4 h y 10 mm en 24 h, por lo
que se recomienda que para una buena fijacin las muestras no excedan los 3 mm de espesor
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y que la muestra tenga la proporcin adecuada de formol (5 a 1). Una segunda opcin es el
uso del fijador de Davidson, el cual contiene cido actico, sin embargo, esta causa
descalcificacin y cierta hinchazn de los tejidos y no debe ser usado si se pretende analizar
la morfologa de las clulas rojas de la sangre.
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Las muestras se pasan por una serie de mezclas de alcohol/agua, para acabar solo en alcohol.
Posteriormente se pasan por un aclarador, que es el Xileno o algn otro substituto, para
finalmente ser incluidos en parafina derretida. El colado de bloques se realiza en un centro
de inclusin de Leica modelo EG1140H o similar acoplado a una placa de enfriamiento
(Leica modelo EG1140C) para que la parafina solidifique.
Los cortes obtenidos y que se encuentran en el bao de flotacin o en el STT son levantados
con ayuda de un portaobjetos en el cual permanecern por el resto del procedimiento. El corte
deber colocarse de manera centrada cuidando que el portaobjetos lo cubra adecuadamente,
si el corte quedo mal orientado este se puede mover con ayuda de un pincel fino o de unas
pinzas, teniendo cuidado de no daarlo.
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Conclusin
En la recopilacin de informaciones es importante elaborar un historial lo ms completo
posible de la finca y de la produccin, ya que esto nos ser de mucha ayuda para poder
identificar cual es el problema, por lo que el encargado o propietario de la granja debera
contar con una bitcora o libro de registro donde anote todas las actividades fuera de rutina,
situaciones anmalas (descensos bruscos de temperatura, lluvias prolongadas, floraciones de
algas anormales, datos del clima, ingreso de nuevos organismos a la granja, comportamiento
anormal de los organismos, etc). Esto permitir, en conjunto con la descripcin de las
actividades de manejo, con un panorama claro de eventos ambientales o de rutina, que
pudiesen estar relacionados con la aparicin de una enfermedad.
Bibliografa
http://www.fao.org/3/a-as830s.pdf
http://www.parasitosypatogenos.com.ar/parasitosDePeces/Archivos/Tecnicas/Histopatologi
a.pdf
http://www.fao.org/docrep/field/003/AB469S/AB469S06.htm#ch6.1
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