C6-Sensores biolgicos 1

6. SENSORES BIOLGICOS

6.1 Clasificacin y principios de operacin.

Estructura jerrquica de sistemas biolgicos:
Molculas pequeas: Aminocidos, cidos nucleicos, agua, lpidos, iones.
Procesos importantes: polimerizacin de cidos nucleicos para formar RNA y
DNA, polimerizacin de aminocidos para formar protenas.
Virus: escala de 20-200 nm, infecciosos pero no se reproducen a s mismos.
Bacterias (clulas procariontes): escala de 1-10 m, unicelulares, pueden
reproducirse a s mismos (organismos vivientes).
Clulas eucariontes: clulas animales y vegetales, escala de 10-100 m,
estructura compleja, pueden reproducirse a s mismas y son capaces de
ensamblarse para formar tejido.

Construccin jerrquica de organismos vivientes:

Clulas.
Tejido: generado por diferenciacin y asociacin de clulas.
rganos: generado a partir de la organizacin para realizar una funcin
especfica.
Organismos: generado a partir de la integracin de varias funciones.

Definicin de sensores biolgicos: dispositivos analticos que pueden detectar especies

qumicas o biolgicas o tambin microorganismos (nivel molecular).
Modos de empleo:
a) Monitoreo in vivo de concentraciones de una especie endgena en funcin de
cambios fisiolgicos inducidos internamente o por una invasin de un microbio.
b) Deteccin de toxinas, bacterias y virus (desarrollo reciente e inters muy grande
por guerras biolgicas).
Aplicaciones:
Diagnstico clnico
Desarrollo de frmacos

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 2

Monitoreo ambiental (aire, agua y tierra)

Control de calidad en alimentos

Esquema general para biosensado: en general, se utiliza un elemento biolgico de

reconocimiento que detecta la presencia de la especie a detectar (analyte) y genera una
respuesta fsica o qumica que es convertida a una seal por medio de un transductor.

Muestreo Bioreconocimiento Transduccin Deteccin

Estimulacin

El funcionamiento general se basa en las siguientes etapas (ver diagrama):

Muestreo: esta unidad introduce la especie a medir en el detector y puede ser tan
simple como un circulador de lquido.
Bioreconocimiento: liga o reacciona nicamente con la especie a detectar, lo que
provee al sensor con especificidad.
Estimulacin: de manera general, puede ser proporcionada por campos pticos,
elctricos u otra clase de campos que extraigan una respuesta como resultado del
bioreconocimiento.
Transduccin: en presencia de la estimulacin, transforma la respuesta fsica o
qumica del bioreconocimiento en una seal elctrica u ptica para ser detectada
posteriormente por la unidad o etapa de deteccin.
Deteccin: puede incluir reconocimiento de patrones para identificacin de la
especie a detectar (e.g., red neuronal).

Biosensor ptico: en su forma ms comn, la estimulacin utiliza una onda ptica. El

proceso de transduccin induce un cambio en la fase, amplitud, polarizacin o
frecuencia de la onda ptica como respuesta a los cambios fsicos o qumicos
producidos por el proceso de bioreconocimiento.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 3

Otros tipos: algunos pueden utilizar estimulacin elctrica para producir transduccin
ptica (e.g., sensor electro-luminiscente), o estimulacin ptica para producir
transduccin elctrica (e.g., sensor foto-voltico).

Los primeros biosensores se basaban en respuestas electroqumicas, y en la actualidad

son los que dominan el mercado. Sin embargo, los progresos en fibras pticas y
dispositivos de ptica integrada, en conjunto con el desarrollo de sistemas lser
semiconductores, han hecho de los biosensores pticos una opcin muy atractiva para
muchas aplicaciones. La sensibilidad en este tipo de biosensores se incrementa gracias a
la inmovilizacin del elemento de bioreconocimiento en un elemento ptico tal como
una fibra, una gua de onda o en dispositivos para propagacin de plasmones
superficiales.

Componentes principales de un biosensor ptico:

Fuente de luz
Medio de transmisin ptico (fibra, gua de onda)
Elemento de bioreconocimiento inmovilizado (enzimas, anticuerpos o microbios)
Sondas pticas para transduccin (e.g., marcadores fluorescentes).
Sistema de deteccin ptico

Ventajas ofrecidas por biosensores pticos:

Alta selectividad y especificidad
Sensado remoto
Aislamiento de interferencia electromagntica
Mediciones rpidas (tiempo real)
Deteccin multicanal/multiparmetro
Invasin mnima (til para mediciones in vivo)
Eleccin de componentes pticos para bio-compatibilidad
Informacin qumica detallada sobre la especie a detectar.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 4

3.2 Elementos fundamentales: principio de biosensado ptico.

Principios fundamentales: bioreconocimiento y transduccin ptica.
3.2.1 Reconocimiento biolgico.
Los elementos de bioreconocimiento son sustancias biolgicas tales como enzimas,
anticuerpos e inclusive clulas y microorganismos, que reconocen selectivamente a una
especie biolgica en particular. Estos elementos son frecuentemente inmovilizados en
la vecindad de un elemento ptico con el fin de incrementar su concentracin local y
tambin para permitir su reciclaje.
Enzimas. Se utiliza como bioreconocedor por su selectividad para ligarse con
reactivos especficos (sustrato) y catalizar su conversin a un producto.
Adems de selectividad, ciertas reacciones pueden proveer de transduccin
ptica a travs de un producto que absorba a una longitud de onda diferente
(cambio en absorcin), o bien produzca fluorescencia. Alternativamente, la
reaccin puede interactuar con un tinte orgnico para producir una respuesta
ptica.
Anticuerpos. Son protenas que se ligan de manera selectiva con un antgeno
gracias a su compatibilidad geomtrica. Generalmente esta asociacin selectiva
se representa como la combinacin de un candado (anticuerpo) y una llave
(antgeno). Esta asociacin fsica puede tambin producir una respuesta ptica
que puede ser intrnseca como el cambio de una propiedad ptica del anticuerpo
o del antgeno como resultado de la asociacin. Alternativamente, pueden
utilizarse tambin marcadores fluorescentes.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 5

Lecitinas. Son protenas que se ligan con residuos de azcares o tambin con
otros tipos de protenas. Han sido las ms utilizadas para el desarrollo de
sensores de glucosa en los que generalmente se utilizan marcadores
fluorescentes para producir una respuesta ptica.

Neuroreceptores. Estos son compuestos que son neurolgicamente activos como

la insulina, hormonas y neurotransmisores que actan como mensajeros a
travs de interacciones entre las ligas. Se etiquetan con marcadores
fluorescentes para producir una respuesta ptica a travs de la reaccin qumica.

DNA/PNA. La paridad complementaria que proporciona la estructura del DNA

puede ser utilizada para reconocimiento de una secuencia para ciertas bases de
cidos nucleicos. El PNA es otro tipo de cido nucleico que presenta tambin
una estructura ordenada y que se liga con su secuencia complementaria con
gran afinidad y especificidad.

3.2.2 Transduccin ptica.

Existen diversas manifestaciones de tipo ptico que puede crear la etapa de
bioreconocimiento bajo la presencia de una especie a detectar (analyte) cuando esta se
excita con una onda de luz. Algunos de los principios de transduccin pticos utilizados
para biosensado se listan a continuacin.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 6

Cambios de fase: producidos por el cambio en la parte real del ndice de refraccin.
Pueden manifestarse como:
i) Cambio en la polarizacin de un haz polarizado linealmente
ii) Cambio en las caractersticas de propagacin de una gua de onda (fibra o
plana)
iii) Cambio en la distribucin del campo ptico, particularmente en una interfaz
(onda evanescente).

Cambios en amplitud: son los cambios en la intensidad del haz de luz que pueden
producirse por absorcin, reflexin u otros mecanismos de prdidas de transmisin.

Cambios en frecuencia: se puede utilizar fluorescencia generada por luz absorbida (la
fluorescencia generalmente se presenta desplazada a longitudes de onda mayores por el
efecto de Stokes), o bien utilizar dispersin de Raman (excitacin por vibraciones).
Tambin puede utilizarse algn efecto no lineal.

3.2.3 Mediciones fluorescentes.

Las mediciones fluorescentes pueden realizarse de manera directa o indirecta.
Sensado directo: registra directamente el cambio en las propiedades fluorescentes debido
a la liga entre la especia a detectar y el elemento de bioreconocimiento (anticuerpo o
enzima), o bien, registra la produccin de alguna propiedad fluorescente generada por la
reaccin de una enzima especfica catalizada.

Sensado indirecto: se utiliza como etiqueta fluorescente un tinte externo cuyas

propiedades de fluorescencia cambian en respuesta al bioreconocimiento de una especie.

3.3 Elementos para inmovilizacin.

Los elementos de bioreconocimiento se inmovilizan generalmente sobre un soporte
slido, por ejemplo, membranas, polmeros o vidrios fabricados con el proceso de sol-gel.
Los mtodos para inmovilizar pueden ser de carcter fsico, qumico y, en algunos casos,

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 7

pueden tambin basarse en la confinacin de bioreconocedores en el volumen de una

matriz con porosidad controlada (el tamao del poro proporciona tambin especificidad).

Mtodos de inmovilizacin.

Membranas semipermeables. Utilizadas en muchos sensores de fibra ptica; es el

mtodo ms simple.
Adsorcin. Se basa en la atraccin de la biomolcula por medio de fuerzas inicas,
hidrofbicas o de van der Waal (depende de la naturaleza de la molcula). Se utiliza
mucho en sensores de pH y es un mtodo muy simple aunque carece de especificidad.
Otras desventajas: variacin en la densidad de material adherido y prdida de
bioreconocedores por desorcin.
Ligado inico. Se basa en interacciones electrostticas entre el soporte slido y el
bioreconocedor. La polaridad o la carga del bioreconocedor puede ajustarse mediante
el pH, mientras que en el soporte se utiliza un polmero con cargas generalmente
negativas.
Trampas fsicas. El bioreconocedor queda atrapado en una matriz porosa. Este
mtodo es de los ms flexibles y permite disear sensores para diversas molculas
gracias al control del tamao de los poros. La desventaja ms importante de este
mtodo es que no puede controlarse la orientacin de los bioreconocedores y algunos
quedan atrapados en la matriz sin ejercer accin alguna sobre la molcula.
Inmovilizacin qumica. Se basa en la formacin de un enlace covalente entre el
soporte slido y el bioreconocedor. Se utiliza mucho en sensores de fibra ptica, en
sensores SPR.

3.4 Tipos de sensores.

Los biosensores pueden clasificarse de acuerdo a la tcnica ptica utilizada para medir, o
bien, de acuerdo al dispositivo utilizado para confinar la luz. En algunos casos, el
dispositivo utilizado como gua de onda puede incluir al elemento sensor, o tambin
pueden presentarse combinaciones de tcnicas especiales con alguna gua de onda en
particular (e.g., sensores de fibra ptica utilizando SPR).

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 8

3.4.1 Sensores de fibra ptica.

Han sido los ms estudiados debido a la madurez alcanzada por la tecnologa de fibras
pticas gracias a los desarrollos en sistemas de comunicaciones. Existen diversos tipos
de fibras y dispositivos de fibra ptica que pueden ser utilizados para implementar
sensores con topologas diversas. Algunas caractersticas atractivas incluyen:
Pueden utilizarse grandes longitudes de fibra; esto permite incrementar la longitud
de interaccin adems de la superficie disponible para realizar deteccin de
molculas mltiples.
Compatibilidad con catteres y/o endoscopios para sensado in vivo. Esto ofrece la
posibilidad de realizar mediciones de flujo sanguneo, contenido de glucosa y
otras.
Algunas clasificaciones de estos sensores:
Extrnsecos o intrnsecos.
Modulados en intensidad, modulados en fase (generalmente interferomtricos):
mientras que los primeros pueden utilizar fuentes de luz no coherentes, los
sensores interferomtricos requieren muchas veces de sistemas lser
monomodales y de alta coherencia.
Sensores modulados en intensidad: al igual que los sensores basados en fluorescencia,
estos elementos utilizan fibras pticas de varios tipos y en las puntas se inmovilizan los
elementos de reconocimiento biolgico (e.g., enzimas o anticuerpos). Algunas
configuraciones se muestran en las siguientes figuras. Los sistemas de deteccin pueden
ser tan simples como un fotodetector, hasta basarse en tcnicas espectroscpicas (sobre
todo de absorcin). Pueden utilizar tambin sistemas de deteccin balanceados (i.e., con
sistemas de referencia) u otras tcnicas de supresin de ruido.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 9

Sensores modulados en fase: Adems de utilizar tcnicas interferomtricas, pueden

usarse tambin tcnicas polarimtricas.

3.4.2 Sensores de guas de onda planas.

Al igual que en los sensores de fibra ptica, las guas de onda planas utilizan elementos
de inmovilizacin en la superficie. La mayora de estos sensores se basan en la
interaccin con la onda evanescente. Ofrecen tambin la posibilidad de realizar anlisis
de molculas mltiples por medio de tcnicas de generacin de patrones al inmovilizar
diversos bioreconocedores en un arreglo ordenado.
De acuerdo a las dimensiones de la gua pueden clasificarse como:
Sensor de ptica integrada: las dimensiones de la gua son comparables a la
longitud de onda; se utiliza la ptica de ondas para describir la propagacin de la
luz en la gua. Se considera adems que los dispositivos de ptica integrada
incorporan diversas funciones en un solo sustrato, por lo cual, estos pueden
contener ya la etapa de deteccin del biosensor o bien, un arreglo interferomtrico
que permita detectar cambios de fase en la onda ptica.
Sensor de reflexin total interna: las dimensiones son mucho mayores a la
longitud de onda y la propagacin se puede describir mediante ptica de rayos.

Algunas configuraciones demostradas para deteccin de molculas mltiples con guas de

onda planas se muestran en las siguientes figuras.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 10

3.4.3 Sensores de onda evanescente.

Estos sensores se basan en la interaccin de las molculas con la luz que no queda
confinada en la gua de onda y que penetra la regin de ndice de refraccin menor que
rodea al ncleo de la gua (revestimiento, aire o elemento bioreconocedor inmovilizado
en la superficie). Algunos de los mecanismos de transduccin que pueden utilizarse con
estos sensores son:
Conversin de frecuencia (excitacin de fluorescencia, SHG).
Acoplamiento de onda evanescente en acopladores direccionales.
Espectroscopa con onda evanescente.

Un ejemplo de un arreglo para sensado de fluorescencia se muestra en la figura anterior.

Se trata de excitar el campo evanescente adems de recolectar la fluorescencia emitida en
la regin que se deja expuesta para colocar los bioreconocedores y fluorforos.

El sensado utilizando acopladores direccionales se basa en alterar el acoplamiento entre

las dos fibras o guas que forman el acoplador. Esto se logra inmovilizando el

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 11

bioreconocedor en la regin de acoplamiento del dispositivo. Cuando la molcula es

atrapada en la regin de sensado, se genera un cambio local de ndice de refraccin que, a
su vez, genera cambios en el coeficiente de acoplamiento. Pueden monitorearse cambios
en la cantidad de potencia ptica transferida de una gua a otra, la longitud de onda u
otros parmetros.

Los sensores de espectroscopa con onda evanescente utilizan la interaccin de esta

onda con la capa de sensado para obtener informacin espectroscpica del ligado de las
molculas. La informacin puede ser en las bandas de absorcin en el IR (vibracional) o
en las regiones UV-visible (electrnicas); puede tambin utilizarse transiciones
espectroscpicas de Raman.

3.4.4 Otros tipos: interferomtricos, resonancia superficial de plasmones.

Los sensores interferomtricos ms utilizados se basan en el interfermetro de Mach-
Zehnder. En estos casos, uno de los brazos del interfermetro se utiliza para inmovilizar
el bioreconocedor. El cambio de fase generado por la liga entre la molcula y el
bioreconocedor se registra en el interferograma.

Los sensores SPR son quizs los ms utilizados para aplicaciones biolgicas y existen
diversos dispositivos comerciales basados en este principio que pueden encontrarse en el
mercado. En principio, esta tcnica es una extensin del sensado por onda evanescente,
con la diferencia de que la gua de onda plana se reemplaza por una interfaz metal-
dielctrico.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II

C6-Sensores biolgicos 12

Plasmones superficiales: ondas electromagnticas que se propagan a lo largo de

la interfaz entre un material metlico y uno dielctrico (e.g., una pelcula
orgnica). La manera ms comn de excitar estas ondas es mediante reflexin
total atenuada.

Principio de operacin: el arreglo ms comn utiliza un prisma para generar la

excitacin de los plasmones. El ngulo al que se presenta la reflexin total entre
la interfaz cambia cuando la molcula se liga con el bioreconocedor. La
informacin que se mide de la curva obtenida es el ngulo SPR, el valor mnimo
de reflectividad y el ancho de las curvas de resonancia. Con esto puede obtenerse
la parte real y la imaginaria del ndice de refraccin, as como el espesor de la
capa sensora. Los experimentos con estos arreglos involucran medir el
desplazamiento del ngulo SPR en funcin del ligado de las molculas.

Algunas ventajas de SPR: no requieren etiquetas fluorescentes, anlisis en tiempo

real, requieren cantidades pequeas para realizar el anlisis.

Aplicaciones de Optoelectrnica en Medicina Semestre 2010-II