UNIVERSIDAD CATLICA DE CUENCA

Comunidad Educativa al servicio del pueblo

UNIDAD ACADMICA DE: INGENIERA, INDUSTRIA Y CONSTRUCCIN

CARRERA: INGENIERA AMBIENTAL / Sede Matriz

ASIGNATURA MICROBIOLOGA AMBIENTAL

DOCENTE BLGA. PAULA CORDERO

ESTUDIANTE JESSICA VALVERDE

CURSO O CICLO 6to

LABORATORIO BIOFARMACIA FECHA 23/11/2017

BLOQUE 3 TITULO MICROBIOLOGA DE AIRE, AGUA Y

TEMTICO N SUELO

TEMA DE LA 4. DETERMINACIN DE LA CALIDAD MICROBIOLGICA DE AGUA

PRACTICA MEDIANTE EL NUMERO MAS PROBABLE DE BACTERIAS COLIFORMES

INTRODUCCIN

La calidad del agua es el conjunto de caracteres fsicos qumicos y biolgicos que deben satisfacerse con el fin de que el
agua que se suministra sea segura para el fin destinado. Para que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos
factores como fsicos, qumicos y biolgicos. El mtodo microbiolgico para detectar la presencia de microorganismos
coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba presuntiva, confirmativa, y afirmativa. La contaminacin del agua por
materia fecal es un factor de importancia sanitaria debido a que las heces contienen una gran variedad de microorganismos.
En la prueba presuntiva: Se inocula una cantidad especfica de agua en una serie de nueve a doce tubos conteniendo
caldo-lactosa para determinar bacterias fermentadoras de lactosa que produzcan gas. Si despus de la incubacin se observa
fermentacin y gas en cualquiera de los tubos se presume que hay coliformes presentes en la muestra de agua. Esta prueba
se utiliza tambin para determinar el nmero ms probable (NMP) de coliformes presentes en cada 100 ml de agua.

En la prueba confirmatoria: Los tubos positivos (con fermentacin de lactosa y produccin de gas) son resembrados en
placas de agar EMB para confirmar si estos contienen bacilos Gram-negativos. Este medio de cultivo inhibe el desarrollo
de organismos Gram-positivos y ayuda a diferenciar las colonias de los coliformes de aquellas que no lo son. En el agar
EMB la E. coli produce colonias pequeas con centros obscuros y brillo verde metlico.

En la prueba complementaria: La principal preocupacin es determinar si las colonias aisladas de las placas de agar
verdaderamente entran en la definicin de un coliformes. Los medios utilizados para este propsito incluyen un tubo de
agar nutritivo y un tubo de Durham con caldo de lactosa. Si se produce gas en el tubo de Durham, y una tincin de las
colonias tomadas del agar nutritivo revelan que se trata de un bacilo Gram-negativo, no formador de esporas. Entonces se
tiene ya la seguridad de que se trata de un coliformes.

Al llevar a cabo estos tres exmenes con resultados positivos se establece que hay coliformes presentes en la muestra de
agua. E. coli es el mejor indicador de contaminacin fecal.

OBJETIVOS

Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua mediante la bsqueda de microorganismos coliformes totales,
coliformes fecales y Escherichia coli.
Diferenciar los organismos coliformes totales de los microorganismos coliformes fecales.
Organizar e interpretar los resultados.

METODOLOGA

Para determinar la calidad microbiologa del agua del Ro Machangara se procedi a la bsqueda de microorganismos de
coliformes totales, fecales y Escherichia coli mediante tres pruebas como la presuntiva, confirmativa y complementaria que
se realizaron en varias prcticas.

Inicialmente se procedi a preparar los medios de cultivo. Con el agar EMB y el caldo de sulfato de Lauril.

,
= ,

1. Se llen el matraz Erlenmeyer con 200 ml. de agua destilada, luego con el medio de cultivo Agar EMB
se agreg lo necesario para dicha cantidad de agua.
2. Se procedi a pesar en la balanza electrnica el Agar hasta obtener 7,192 gr
3. Se agreg los 7,192 gr. de Agar EMB en la matraz Enlenmeyer con 200 ml. de agua destilada, se mezcl
hasta que este se disuelva.
4. Se puso a calentar a la estufa de gas durante 6 min. As mismo se puso el caldo de sulfato de Lauril
 5. Se llev a colocar en la autoclave envuelto con papel peridico con otros materiales como son las tres
cajas Petri de vidrio y la probeta.
6. Una vez estn todos los materiales y el medio de cultivo esterilizados se retir el papel peridico, para
consiguiente preparar los cultivos.
7. Se coloc en las cajas Petri 3 cm. del medio de cultivo Agar EMB con la ayuda de una pipeta y un
pipeteador.

En la segunda prctica que era la prueba presuntiva que se realiza para saber el nmero ms probable de
coliformes, se toma 15 tubos de ensayo 5 para cada grupo en donde se procedi a realizar lo siguiente:

En 5 tubos de ensayo se llen 3 mm de caldo de sulfato de Lauril en 10 mm de la muestra de agua.

En 5 tubos de ensayo se llen 2 mm de caldo de sulfato de Lauril en 0,5 mm de la muestra de agua.
En 5 tubos de ensayo se llen 7 mm de caldo de sulfato de Lauril en 0,1 mm de la muestra agua.

En seguida se coloc en cada uno de los tubos de ensayo una campana Durham pues las coliformes son
fermentadoras de lactosa y el caldo de sulfato de Lauril tiene Lactobacillus. Se agito 25 veces los tubos de ensayo
para que se homogenice la muestra. Una vez realizado todo esto se llev a la estufa. Para sabes si existen
coliformes en las muestras se tiene que observar si existen como una especie de burbujas en cada tubo.
 Nuevamente en la siguiente prctica se procedi a realizar la prueba confirmativa para saber si existen
coliformes fecales.
1. Se utilizaron las cajas Petri con el Agar EMB que se haba realizado anteriormente.
2. Se coloc la mitad del agar en las cajas Petri.
3. Se resembro los cultivos que crecieron en el Agar EMB en el nuevo medio de cultivo
4. Se colocaron las nuevas cajas Petri en la estufa a 35 C

MATERIALES

Papel peridico Un embudo

6 cajas Petri de vidrio Un asa de siembra
Una pipeta Cinta
Una pera Agar EMB
Una probeta Caldo de sulfato de Lauril

Una Matraz Erlendeyer de 500ml Agua destilada

Mechero Fisher 1 litro de agua de Ri

campanas Durham
EQUIPOS

Autoclave
Estufa de gas
Balanza Electrnica
Estufa
RESULTADOS

Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3

1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

24 h - - - - - x - - - - - - - - x
- x x x x x x - - - - x x x x
48h

En la primera en el grupo 2 en el primer da dieron positivo un tubo y en el segundo da dieron dos positivos

CONCLUSIONES

Finalmente con esta prctica se cumpli con el objetivo planteado pues se aprendi a como determinar la calidad
microbiolgica del agua del rio Machangara. Con base a las pruebas presuntiva, confirmativa y completa realizadas se
informa que el agua que abastece no rene las condiciones microbiolgicas para considerarse potable, ya que todas presentan
un NMP importante de coliformes totales, fecales y Escherichia coli lo que indica que el agua est contaminada con materia
fecal.

RECOMENDACIONES

Se recomienda manipular los materiales con precaucin y cuidado, cuando se esterilizan los medios de cultivo se deben
seguir las instrucciones. Usar el mandil, guantes y el cubre boca para evitar inconvenientes. Manejar con cuidado las
bacterias ya que algunas son contaminantes.