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Manual de Laboratorio Clinico3
Manual de Laboratorio Clinico3
Facultad Medicina
Av. 12 de Octubre 1076 y Roca
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1. DATOS INFORMATIVOS:
MATERIA O MDULO: LABORATORIO CLNICO PRCTICAS
CARRERA: MEDICINA
NIVEL: SEGUNDO
N CRDITOS: 1,5 (UNO COMA CINCO)
CRDITOS TEORA: 1
CRDITOS PRCTICA: 0,5
DATOS DEL PROFESOR:
Nombre: Celia Annabel Bowen Fernndez
Grado Acadmico o Ttulo Profesional: Dra. Bioqumica y Farmacia opcin Bioq. Clnica
Breve indicacin de la lnea de actividad acadmica: Docencia en diferentes en diferentes ramas
de la patologa clnica (Laboratorio clnico y Microbiologa), coordinadora de los laboratorios
en el rea de Destrezas Clnico Quirrgicas
Indicacin de horario de atencin a estudiantes: Martes, Mircoles y Viernes 12:00 a 13.00 horas
Correo Electrnico: bowencelia@yahoo.es
Telfono: 084678618
PROFESOR:
Grado acadmico o ttulo profesional: Dra. Bioqumica y Farmacia opcin: Bioq. Clnica/ Diploma
Superior en Pedagogas Innovadoras
2. DESCRIPCIN DE LA MATERIA:
En este nivel de la carrera se estudian los fundamentos bsicos del laboratorio clnico, su estructura y
organizacin dentro de un servicio de salud, sus funciones y se dan las primeras correlaciones de las
pruebas de laboratorio con casos clnicos. Se aprende el uso racional de las pruebas ms comunes y
se pretende incentivar al estudiante a tomar con conciencia crtica las solicitudes de laboratorio y
rescatar la interpretacin clnica como elemento fundamental de la Medicina de Laboratorio.
3. OBJETIVOS GENERAL:
Reconocer la metodologa y realizacin de las pruebas bsicas de laboratorio clnico con el fin de
corroborar la presencia y las concentraciones de los diferentes analitos en las muestras biolgicas,
con la morfologa y fisiologa del individuo normal, estudiadas en las dems reas de las ciencias
morfofuncionales del segundo nivel de la carrera.
4. ESPECFICOS:
4.1. ACTITUDINALES:
a. Compartir conocimientos y experiencias durante el proceso de aprendizaje
b. Manejar adecuadamente el manejo del microscopio segn las normas indicadas
c. Identificar y cumplir las normas de bioseguridad
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4.2. PROCEDIMENTALES:
a. Revisar el mtodo de la puncin venosa y capilar y realizar el procedimiento
b. Aprender a preparar soluciones y diluciones y su aplicacin para deducir las
unidades de medida utilizadas en el laboratorio
c. Realizar y explicar los pasos del examen elemental y microscpico de orina y
del coproparasitario y su respectiva interpretacin
d. Realizar exmenes de glucosa, colesterol, rea, transaminasas y bilirrubinas as
como relacionarlos con el respectivo diagnstico en caso de haber alteraciones
4.3. COGNITIVOS:
a. Revisar los anticoagulantes y tubos de ensayo utilizados en las pruebas ms
comunes
b. Especificar el fundamento de las pruebas bioqumicas enzimo-colorimtricas,
de la espectrofotometra y los clculos matemticos necesarios
c. Conocer la tcnica de electroforesis y las diferentes fracciones proteicas
sanguneas
5. CONTENIDOS
1. Laboratorio clnico: Normas de bioseguridad
PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin
2. Toma de muestras de sangre, anticoagulantes, tubos al vaco
PRIMERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEMANA 2 rotacin
3. Soluciones y diluciones, unidades de medida
SEGUNDA SEMANA 1 rotacin, DCIMA PRIMERA SEMANA 2 rotacin
4. Elemental y microscpico de orina
TERCERA SEMANA 1 rotacin, DCIMA TERCERA SEMANA 2 rotacin
5. Parasitologa, coprolgico-coproparasitario
CUARTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA CUARTA SEMANA 2 rotacin
6. Carbohidratos: glucosa
QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin
7. Lpidos: colesterol
QUINTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA QUINTA SEMANA 2 rotacin
8. Protenas: electroforesis y examen qumico
SEXTA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SEXTA SEMANA 2 rotacin
9. Funcin renal: urea
SPTIMA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin
10. Pruebas de funcin heptica: transaminasas, bilirrubinas
OCTAVA SEMANA 1 rotacin, DCIMA SPTIMA SEMANA 2 rotacin
6. METODOLOGA, RECURSOS:
6.1. Mtodos didcticos
a. Charla de fundamentacin terica
b. Explicacin prctica y observacin
c. Realizacin de prcticas de pruebas de laboratorio
6.2. Recursos
a. Uso de manual de prcticas de Laboratorio Clnico
b. Toma de fotos con respecto a las prcticas realizadas en clases (smartboard)
c. Uso de Atlas de sedimento urinario y parsitos
Autora: Dra. Celia Bowen
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7. EVALUACIN:
7.1. CRONOGRAMA DE EVALUACIONES:
1era. Evaluacin (promedio de lecciones): Cada semana
2da. Evaluacin (terica): Octava semana
3ra. Evaluacin (prctica + carpeta): Novena semana
SISTEMA DE CALIFICACIN:
EVALUACIONES PARCIALES PRCTICA Y TERICA: 30 puntos
10 puntos de cada una de las evaluaciones ms trabajos o promedios de
lecciones indicadas en el cronograma
Nota final: 20 puntos
Primera parte: 10 puntos con un examen final del rea de Prcticas en la
semana 8 y 18 de la rotacin
Segunda parte (examen integrador de la Macrorea de Morfofuncin):
semana 9 y 18 de la rotacin
8. BIBLIOGRAFA:
TEXTOS DE REFERENCIA:
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin,
Editorial Mdica Panamericana, Bogot, 2.001
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
TEXTOS RECOMENDADOS:
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin,
Editorial Salvat Mdica, Mxico, 1.993
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra,
1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial
Mdica Panamericana, Mxico, 2.001
PRCTICA No. 1
Autora: Dra. Celia Bowen
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PRECAUCIONES UNIVERSALES:
1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas
2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cualquier
objeto de uso personal dentro del laboratorio.
3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de ltex) la
misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio. Botas y gorra en
casos de exposicin a microorganismos de alta peligrosidad.
4. Antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio asegurarse de que en la
mano no existan escoriaciones. En caso contrario cubrir las mismas de manera
adecuada.
5. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.
6. No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas
7. Evitar la formacin de aerosoles y gotas.
8. Manejo adecuados de los objetos corto punzantes. Una vez utilizados se deben
almacenar en recipientes rgidos y eliminarse luego de ser decontaminados.
9. Terminantemente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizarse los
pipeteadores automticos.
10. Decontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo diario.Se
recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10%
11. Evitar conductas inseguras y de riesgo.
12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar tratamiento
adecuado especialmente de los infecciosos.
13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las caerias
habituales una vez que hayan sido decontaminados.
14. Lavarse las manos con abundante agua y jabn luego de haber terminado el
trabajo diario.
15. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio
TRABAJO EN CLASE:
Poner en prctica las normas anteriores durante cada sesin de laboratorio
PRACTICA No. 2
Autora: Dra. Celia Bowen
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Objetivos:
1. Conocer la tcnica para la obtencin de muestras de sangre como medio para
mantener la integridad del profesional de salud y la del paciente
2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma
de muestras sanguneas
3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio con
respecto al manejo de lquidos biolgicos y material infeccioso
4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el laboratorio
Fundamento terico:
La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta tcnica el
principal mtodo de obtencin de sangre en los laboratorios de anlisis clnicos. A partir
de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene anticoagulante, se
obtiene plasma. Del plasma forma parte el fibringeno, sustancia de la que carece el
suero.
Materiales:
-Torniquete
-Algodn
-Alcohol antisptico (isoproplico al 70%)
-Jeringuillas
-Sistema vacutainer: capsula, tubos alvaco, agujas de toma mltiple
- Lancetas
-Tubos capilares heparinizados
-Plastilina
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Puncin capilar:
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EDTA (tapn lila): Tubo estril con anticoagulante EDTA: sal de cido etileno
diamina tetractico di o tripotasica o di sdica, concentracin: 1,2 a 2,0mg/ml de
sangre(4,1 a 6,8mmol/l de sangre) basado en EDTA anhidro. Para uso en hematologa
Citrato de sodio (tapn azul 1/9 y tapn negro 1/4): citrato trisdico con 0,100 a
0,136 mol/l de cido ctrico. Se recomienda 0,105 mol/l para lograr la estandarizacin
recomendada por la WHO para que quede a 3,2%. Se usa para pruebas de coagulacin
(TP, TTP, fibringeno), utilizar l parte de citrato y 9 de sangre entera.
Tapn rojo: Tubo estril sin anticoagulantes ni aditivos ni geles separadores. Para
obtener suero.
Los tapones de colores con una banda Gris agregada indican que el tubo corresponde
a uno los anteriores y que adems contiene gel separador de suero o plasma
TRABAJO EN CLASE:
Estudiar bien las instrucciones anteriores para ponerlo en prctica con algn compaero
de clase
PRACTICA No. 3
Objetivos:
- Conocer lo que es un soluto y un solvente para preparar soluciones a diferentes
concentraciones
- Conocer dos formas de expresar matemticamente la proporcin de soluto a
solvente dentro de una solucin (p/v y v/v)
Autora: Dra. Celia Bowen
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Fundamento terico:
Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms substancias, que pueden
separarse por mtodos fsicos en sus diversas substancias componentes. En una
solucin, aquella substancia que se encuentra en mayor proporcin se conoce como
Solvente y las dems como Solutos.
El porcentaje Peso a Volumen es una relacin que expresa los gramos de soluto que se
hallan contenidos en cada 100 mililitros de solucin.
Materiales y reactivos:
Materiales:
- Probeta graduada de 50 ml
- Vaso de precipitacin de 50 ml
- Matraz aforado de 50 ml
- Pipetas graduadas de : 1, 2, 5 y 10 ml.
- Peras de seguridad
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Balanza
- Varilla de vidrio
Reactivos:
- Safranina en polvo
- Cloruro de sodio en polvo
- Agua destilada
Procedimiento:
1. Mtodo para preparar soluciones:
Unidades de medidas:
p/v = peso de soluto sobre volumen de solvente expresado en gr/ 100ml
v/v = volumen de soluto sobre volumen de solvente expresado en ml/100 ml.
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Concentrac. Solucin= 0.85% (pesar 0.85 gramos de NaCl y aforar con agua
destilada hasta obtener 100 ml de solucin)
0.85 gr. NaCl 100 ml agua destilada
X 50 ml agua destilada
Fd = Volumen mayor = 50 = 20
Volumen menor (alcuota) 2,5
PRACTICA No. 4
Objetivos:
Autora: Dra. Celia Bowen
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OBSERVACIN: Para el siguiente literal por favor revisar el atlas para segundo
nivel ubicado en el internet cuya pgina es ftp.puce.edu.ec
3.1. Elementos que se observan en el examen microscpico:
TAREA EN CLASE:
Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las instrucciones anteriores,
realizar el anlisis clnico durante la prctica y realizar el reporte de la misma para
archivar en la carpeta.
PRACTICA No. 5
Objetivos:
1. Observacin macroscpica y microscpica de las heces para aprender a
reconocer diferentes patologas gastrointestinales
2. Aprender a realizar la tcnica para la preparacin de un coproparasitario
Materiales y rectivos:
A. Materiales
-Placa portaobjetos
-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-Palillos de dientes
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B. Reactivos
-Solucin fisiolgica al 0.85%
-Solucin de lugol (dilucin 1:5 de lugol)
-Muestra de heces
Procedimiento:
Recoleccin de la muestra:
Debe recogerse en un recipiente limpio, debe tenerse cuidado de no mezclarse con
orina, descartar los provenientes de pacientes tratados con bismuto y bario. Las
muestras obtenidas deben enviarse rpidamente al laboratorio especialmente si son
lquidas o semilquidas ya que las formas trofozoicas de los protozoos pierden
movilidad y mueren poco despus de enfriarse.
Procesar la muestra antes de dos (2) horas. Si esto no es posible, mantener las muestras
en refrigeracin o temperatura de 4 Centgrados.
Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este color se
debe a la presencia de urobilina, varia de acuerdo a la ingestin de alimentos y
medicamentos.
Olor: Las sustancias aromticas provenientes de la desaminacin y descarboxilacin del
triptofano por las bacterias son las que le dan a la materia fecal el olor caracterstico.
Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se observan heces
extremadamente duras en el estreimiento y lquidas por accin de purgantes, o por
causas que originen diarrea. Esta consistencia puede ser : Lquida, blanda o dura.
Aspecto: Hay diferentes aspectos como son : Diarreico, cremoso, mucoide, granuloso,
pastosa,caprino.
Reaccin: La reaccin y el pH de la materia fecal depende del rgimen alimenticio.
En una lmina portaobjetos se colocan dos gotas, en la parte izquierda solucin salina y
en la derecha lugol, luego se toma con un palillo la muestra de materia fecal, se debe
escoger la parte que tenga elementos anormales como sangre, moco, etc. y de otra parte
para que as quede una muestra representativa, se homogeniza en la lmina primero en
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2. Exmen parasitolgico
Ascaris lumbricoides: Se observan huevos miden aprox. 45-75 x 30-50 mm, presenta
una clula rodeada por tres capas, producen una patologa de dolor de estmago y
desnutricin.
-Taenia: Los huevos miden 20-30 x 30-40 mm, son ovoides con membrana gruesa,
amarillenta que se encuentra estriada en forma de empalizada y encierra un embrin de
seis ganchos poco visibles. Produce trastornos nerviosos.
PROTOZOARIOS:
Entamoeba coli: Son quistes ms grandes que los de histoltica, tiene ms de cuatro
ncleos. Es considerada como no patgena.
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TAREA EN CLASE
Cada estudiante debe realizar un examen coproparasitario y hacer el reporte para
archivarlo en la carpeta
PRACTICA No. 6
1. Objetivos:
2. Fundamento terico:
Principio de la reaccin:
Punto final de una reaccin: Las reacciones catalizadas por enzimas son nicas en el
sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad en relacin a las
reacciones no catalizadas y muestran una cintica de saturacin, es decir la velocidad de
la reaccin alcanza un valor mximo a una concentracin determinada de sustrato, no
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Espectofotmetro:
Registrador: Mide la seal del detector, la compara y genera una medida en una escala
determinada.
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3. Parte experimental:
3.1. Procedimiento:
Ensayo:
Esquema de pipeteo:
Microdeterminacin
STD muestra 5 ul
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Materiales y reactivos:
Materiales Reactivos
Pipetas automtica
Reloj
TRABAJO EN CLASE:
PRCTICA No 7
1. Objetivos:
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2. Fundamento terico:
Los principales lpidos del plasma humano son el colesterol, los steres del colesterol,
los triglicridos, los fosfolpidos y los cidos grasos no esterificados. El colesterol es un
importante componente estructural de las membranas celulares y un precursor para la
biosntesis de los cidos biliares y las hormonas esteroideas.
Principio de la reaccin:
2. Parte experimental:
2.1. Procedimiento:
Ensayo:
Esquema de pipeteo:
Microdeterminacin
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STD muestra 5 ul
Materiales y reactivos:
Materiales Reactivos
Pipetas automtica
Reloj
TRABAJO EN CLASE:
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CONSULTA:
Criterios de la OMS para:
- Sndromes metablicos
- Factores de riesgo cardiovascular
Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial
PRCTICA No. 8
Objetivo:
Aplicar la tcnica de electroforesis para separar las diversas fracciones protecas del
suero humano
Fundamento terico:
La electroforesis es una tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un
campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y
nodo), este movimiento denominado electroforesis da nombre a la tcnica. En el
transporte electrofortico, a la fuerza del campo elctrico se opone la resistencia viscosa
del medio, producindose, cuando se igualan una velocidad constante de
desplazamiento de las partculas.
En resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un campo
elctrico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga elctrica, 2)
su tamao, 3) la intensidad del campo elctrico y 4) la temperatura del medio.
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--globulinas9-15%
--globulinas14-19%
--globulinas14-19%
TRABAJO EN CLASE:
CONSULTA:
Patologas que se presentan cuando hay aumento disminucin de cada una de las
proteinas (albmina, alfa1 y alfa2 globulina, beta1 y beta globulina, gamma globulina)
Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial
PRCTICA No. 9
Autora: Dra. Celia Bowen
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Fundamento terico:
La urea es el principal compuesto nitrogenado no proteico ms imporatnte en la mayora
de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo
proteco. Se produce en el hgado y es excretada en la orina a travs de los riones.
Parte experimental:
1.Procedimiento (en suero o plasma):
1.1. En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muestra
1) y M2 (muestra 2) agregar:
B S M1 M2
Standard - 10 ul
Suero o plasma - - 10 ul 10 ul
Reactivo 1 1000 ul 1000 ul 1000 ul 1000 ul
Enzima ureasa 5 ul 5 ul 5 ul 5 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 3 minutos a 37C
Reactivo 2 1000 ul 1000 ul 1000 ul 1000 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 5 minutos a 37C.
Leer la absorbancia de la muestra (A muestra) y del estndar (A Estndar) en
espectrofotmetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos
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2.Materiales y reactivos:
2.1. Materiales:
-Gradilla
-Cuatro tubos de ensayo
-Espectrofotmetro
-Pipetas automticas
-Puntas de plstico para pipeta automtica
-Cubetas de plstico para espectrofotmetro
-Reloj
2.2.Reactivos:
-Reactivo 1: Buffer fosfatos (pH 7.0), Salicilato de sodio, Nitroprusiato de sodio,
EDTA
-Reactivo 2: Buffer fosfato (pH 13), hipoclorito
-Standard: solucin de urea 80 mg/dl
-Ureasa (enzima): Solucin estabilizada y tamponada de alta potencia
-Suero sanguneo
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de urea en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la
carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
PRCTICA No. 10
Para realizar el examen en sangre, previamente es necesario que el paciente, unos das
antes, haga una dieta en la que no sobrecargue el hgado, no tomando alcohol, escasas
protenas y grasas y tambin es necasrio no realizar esfuerzos fsicos importantes
Parte experimental:
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1.Procedimiento (en suero o plasma) tanto para TGO como para TGP:
Parmetros a considerar:
- Espectrofotmetro encender 20 minutos antes de realizar las lecturas de las muestras
2.Materiales y reactivos:
2.1. Materiales:
Espectrofotmetro, pipetas automticas, puntas de plsticos para pipeta, cubetas, reloj
2.2.Reactivos:
TGO y TGP
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de TGO TGP en un suero sanguneo y luego reportar los clculos
en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
Autora: Dra. Celia Bowen
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PRCTICA No. 11
Si hay una obstruccin de las vas biliares, la bilirrubina directa se acumular, escapar
del hgado y terminar en la sangre. Si los niveles son lo suficientemente altos, una
parte de ella aparecer en la orina. Slo la bilirrubina directa aparece en la orina. El
aumento de la bilirrubina directa generalmente significa que las vas biliares (secrecin
heptica) estn obstruidas.
Sndrome de Crigler-Najjar
Eritoblastosis fetal
Enfermedad de Gilbert
Cicatrizacin de un hematoma grande (moretn o sangrado bajo la piel)
Anemia hemoltica
Enfermedad hemoltica del recin nacido
Hepatitis
Ictericia fisiolgica (normal en los recin nacidos)
Anemia drepanoctica
Reaccin a una transfusin
Anemia perniciosa
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En presencia del acelerador cafena, la bilirrubina total se acopla con el cido sulfnico
para formar un complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es proporcional a
la concentracin de la bilirrubina. La determinacin de la bilirrubina directa es
desarrollada sin aditivo de cafena. La adicin de tartrato alcalino causa una
transformacin del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturas
de las absorvancias son entre 546-578 nm.
Bilirrubina total:
Acido sulfanlico + NaNO2 cido sulfnico diazotizado
1. Esquema de pipeteo:
Bilirrubina total
Microdeterminacin
Reactivo 2 ------ 25 ul
Bilirrubina directa
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Facultad Medicina
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Reactivo 2 ------ 25 ul
2. Clculos:
3. Materiales y reactivos:
Materiales Reactivos
Gradilla
Pipetas automtica
Reloj
Valores de referencia:
Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dl
Bilirrubina directa: hasta 0.25 mg/dl
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TRABAJO EN CLASE:
BIBLIOGRAFIA:
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Editorial
Mdica Panamericana, Bogot, 2.001
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Editorial
Salvat Mdica, Mxico, 1.993
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Mdica
Panamericana, Mxico, 2.001
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