ANALIZORUL DE BIOCHIMIE

SL. DR. ANDRA SUCEVEANU

CURS 1

Studierea compozitiei chimice a sangelui, urinii, LCR si a altor fluide fiziologice si

patologice este importanta pentru evaluarea starii de sanatate a pacientilor. Prezenta,
concentratia si activitatea substantelor chimice sunt indicatori ai functionarii
variatelor organe. Concentratii mai mari sau mai mici decat limitele valorilor normale
ale acestor substante indica prezenta unor patologii.

Analiza compozitiei chimice a fluidelor organismului este necesara pt

-screeningul unei populatii aparent sanatoase pentru depistarea unor patologii
neasteptate, in stadiul incipient
-confirmarea/infirmarea diagnosticului unei boli
-monitorizarea tratamentului unei patologii
-detectarea sau monitorizarea nivelelor serice ale unor medicamenteutile pt.
diagnostic sau pt mentinerea unor nivele optime d. p. v terapeutic
Pentru acuratetea testelor biochimice este necesara o pregatire corespunzatoare a
pacientilor (ex. pt determinarea corecta a glicemiei, trigliceridelor colesterolului
determinarea se realizeaza a jeun) colectarea si manipularea corespunzatoare a probei.

Erorile comune ce afecteaza determinarile biochimice ale probelor includ

-instruirea incorecta a pacientului inaintea recoltarii
-recipient neadecvat
-etichetarea incorecta a probei
-cantitate insuficienta de proba
-scurgerea probei din recipient in timpul transportului
Tehnicile de flebotomie pt recoltarea probelor de sange sa imbunatatit prin folosirea
vacumtinerelor. Recipientele au culori diferite functie de analiza solocitata. In interval de
2 ore de la recoltare proba trebuie centrifugata pt separarea celulelor de plasma . Probele
hemolizate afecteaza acuratetea unor teste biochimice. Daca celulele nu sunt indepartate
din plasma ele metabolizeaza glucoza din ser si induc o scadere falsa a concentratiei
acesteia
Colectarea incorecta a urinii poate induce erori in determinarile biochimice si anume
contaminarea probei, efectuarea de determinari biochimice ce ar trebui calculate din
urina pe 24 ore (proba Addis).
Dupa ce probele au fost corect recoltate si transportate in laboratorul clinic urmeaza
procesarea lor ce include codificarea probelor (coduri de bare), centrifugarea, testarea
propriu zisa si printarea rezultatelor.
Analizorul de biochimie
In prezent, in laboratoarele clinice, exista o mare varietate de analizoare biochimice
clasificate in functie de tipul de tehnologie, meniul de taste, firmele producatoare,
aplicatii.
In functie de marimea laboratorului, nivelul de automatizare variaza. Acestea variaza
si in functie de numarul si diversitatea testelor efectuatem, cum ar fi analizoare ce
pentru teste imunologice, ale gazelor sangvine, sisteme de analiza a urinii.
Analizorul automat de biochimie este un sistem complet automat, destinat efectuarii
analizelor biochimice, cu o mare varietate de aplicatii, teste de rutina, teste speciale,
urgente, proteine specifice, monitorizarea consumului de medicamente.

Ideal trebuie sa fie un sistem programabil, total deschis, care sa dea operatorului
posibilitatea alegerii reactivilor de la orice firma doreste.

Analizorul pentru biochimie trebuie sa fie proiectat astfel incat sa poata fi integrat in
orice laborator, nu numai din punctul de vedere al performantelor si flexibilitatii, dar,
si al dimensiunilor.
Este prevazut cu mai multe sisteme de detectie: absorbanta, turbidimetrie.
Permite utilizatorului programarea unui numar mare de teste diferite.
Meniul de teste include:
Biochimie generala: albumina, bilirubina ( totala si directa ), colesterol (total, HDL,
LDL), calciu, creatinina, glucoza, fier, magneziu, fosfor, proteine totale, trigliceride,
urea (BUN), acid uric, electroliti ( Na, K, Cl, CO2), fosfataza acida si alcalina,
amilaza, ALT (GPT), AST (GOT), colinesteraza, CK, CK-MB, g-GT, LDH, lipaza.
Proteine serice: CRP, RF, ASLO, Ig (A,G,M,E), C3, C4, a-1-acid glycoprotein, b-2-
microglobulina, feritina, transferina, microalbumina, mioglobina, APO (A1, B),
Medicamente terapeutice: teofilina, digoxina, carbamepazina, gentamicina,
fenobarbital, fenitoina, pirimidona, acid valproic
Functie tiroidiana: T3, T4, TSH
Abuz de medicamente: amfetamina, barbiturat, benzodiazepina, cannabinoid,
cocaina metabolit, alcool etilic, methadona, fenciclidina, propoxifena, etc.
Toxicologie serica: acetaminofen, serum barbiturate, serum benzodiazepine,
salicilate.
TEHNICA
Incarcarea probelor se face de obicei pe un carusel pentru probe circular.
Se pot incarca pana la 45 probe simultan pentru testele de rutina.
Probele pot fi incarcate in aparat in tuburi primare, cupe sau microcupe pediatrice
pentru probe.
Oricare din cele 45 pozitii pentru probe pot fi definite ca pozitii pentru urgente.
Poate efectua pana la 24 teste simultan pentru o proba.
Analizorul poate efectua teste din: ser, plasma, urina sau LCR.
Dilutia probelor si calibrarea se realizeaza in mod automat.
Cantitatea de proba folosita: 2 100 ml selectabila in incremente de 1 ml.
Viteza de lucru a analizorului este de pana la 230 teste / ora.
Analizorul este un sistem complet deschis, operatorul poate defini propriile aplicatii.
 Pe parcursul programarii, operatorul este ghidat de catre analizor care genereaza
atentionari in situatia introducerii unor date gresite.
Programele pot fi revazute de catre operator in orice moment.
De asemenea, aplicatiile pot fi tiparite sau exportate pe dischete.

Rezultatele testelor sunt tiparite automat pe imprimanta externa.

Buletinul de analize cuprinde: numele laboratorului, datele pasaportale ale
pacientului, data efectuarii testelor, data in care a fost recoltata proba, tipul probei,
rezultatele, domeniile de normalitate si un camp pentru semnatura si parafa medicului
de laborator.
Rezultatele pot fi verificate in timpul lucrului prin vizualizarea lor pe monitor.
Pentru toate testele se pot vizualiza curbele de reactie.
Rezultatele pot fi arhivate, capacitatea arhivei fiind practic nelimitata.

DOTARI
Pachetul soft pentru controlul de calitate permite calcule statistice, revederea
rezultatelor selectate dupa anumite criterii grafice.
Domeniul de citire este intre 340 750 nm.
Selectia lungimilor de unda se realizeaza cu ajutorul a 9 filtre interferentiale de
banda ingusta (340, 405, 450, 505, 550, 590, 650, 700, 750 nm) si un filtru de
blocare.
Sistem fotometric: fotometrie directa, unitate fotometrica stationara, cuvete mobile
cu drum optic de 10 mm (80 cuvete din plastic reutilizabile).
Sursa de lumina: lampa cu halogen (12 V / 20 W)
Consum de putere: variabil ( ex. 300 W )
Sistem de detectie: fotomultiplicator
Nu necesita conectarea la o sursa continua de apa distilata.
Soft aparatului este extrem de simplu de operat, informatiile afisate pe ecran
ghideaza operatorul in timpul lucrului
CONDITII TEHNICE:
Tensiune de alimentare: 220 V, 50 Hz
Incubator cu aer cald; temperatura de lucru: ambient, 30, 37 oC
Sistemul este alcatuit din: autoanalizor cu termostat (cuvetele de reactie la
temperatura ambientului, 30 sau 37 oC), sistem de pipetare cu o seringa, computer
extern (cel putin 486 compatibil IBM), monitorm tastatura (101 taste), mouse,
imprimanta.
Analizorul este dotat cu o interfata seriala care sa permita comunicarea bidirectionala
intr-o retea de computere
Principiu de functionare: metoda spectrofotometriei (colorimetriei).
Analizoarele de biochimie folosesc metoda spectrofotometriei (colorimetriei).
Metoda spectrofotometriei in ultraviolet se aplica pt subtante in stare lichida, lichide
pure, amestecuri si in special solutii.
Metoda foloseste radiatia UV vizibila care reprezinta o fractiune a spectrului
electromagnetic.
 La trecerea unui fascicul de lumina de o anumita intensitate printrun mediu absorbant
are loc un proces de atenuare a intensitatii fascicolului incident, atenuare ce depinde
de grosimea substantei absorbante si de natura acesteia.
METODA SPECTROFOTOMETRIEI (COLORIMETRIEI).
Proprietatile de absorbtie ale mediului pot fi caracterizarte prin
-transmitanta
-absorbanta
-extinctie.
Curbele care dau dependenta acestor caracteristici fata de lungimea de unda se numesc
spectru de absorbtie.
Factorii care pot influenta spectrul de absorbtie al unei substante sunt
-natura solventului
-concentratia solutiei si temperatura
-valoarea pH ului solutiei
-fenomene de oxidare
-procese de hidroliza
-iradierea substantelor
-formarea de complecsi
-fluorescenta
-dizolvarea totala sau precipitarea ulterioara a probelor
Tipuri de spectrofotometre
-cu dublu fascicul
-cu monofascicul
-Spectrofotometrele cu dublu fascicul sunt de 2 tipuri
SF cu dublu fascicul in timp. In acest dispozitiv fascicolul de lumina emis este
focalizat alternativ catre compartimentul probei si catre compartimentul de
referinta ( ce contine blankul solvent sau amestecul de solventi folositi la
prepararea probei, la care se adauga toti reactivii mai putin proba de analizat
sange, urina, LCR). Cele 2 fascicule transmise alternativ sunt captate de
acelasi detector ce genereaza un semnal alternativ cu o amplitudine direct
proportionala cu diferenta dintre intensitatile fasciculelor de lumina transmise
de proba si de blank.
SF cu dublu fascicul in spatiu.In acestdispozitiv sunt creeate 2 fascicule de
lumina, unul traverseaza compartmentul probei, celalat traverseaza
compartimentul de referinta. Fasciculele transmise sunt captate de 2
detectoare ce masoara intensitatea acestora.
Spectrofotometrele cu monofascicul absorbtia solventului este determinata separat si
memorata de un microcomputer.
Cateva precautii generale trebuiesc luate in considerare in cazul masuratorilor
spectrofotometrice:
Prepararea probei. Majoritatea probelor contin mai multe substante de care trebuie
tinut cont. Datorita instabilitatii anumitor substante de analizatm probele trebuie
analizate imediatdupa recoltare, nu poate fi depozitata. De asemeni, turbiditatea
probei poate afecta masuratorile spectrofotometricem aceasta problema putand fi
eliminata prin centrifugare, filtrare.
 Se lucreaza la temperaturi de 19 21 gr Cm iar diferentele de temperatura intre solutii
nu trebuie sa depaseasca 0.5 gr.
Trebue evitate interactiunile speciei chimice absorbante cu solventul sau cu solutiile
tampon folosite
Masuratorile spectrofotometrice (colorimetrice) sunt:
Cantitative
a. Directe sunt limitate numai la substantele care au o aborbtie intensa si care nu
interfereaza cu absorbtia altor substante din amestecul de studiat
b. Indirecte
formarea de complexe (ex determinerea proteinelor
totale, FE seric)
modificarea chimica cu formarea de produsi colorati
(ex determinerea bilirubinei)
conversie enzimatica
Kinetice folosite in general pt a determine activitatea enzimelor