Ao de la consolidacin del mar de Grau

Microbiologa General

INFORME: AISLAMIENTO DE LOS HONGOS

DOCENTE:
Mblga. MERCY ROJAS MORENO

INTEGRANTES:

AGUILAR ESTEBAN, Paola

ALLPAS NONALAYA, Kevin
DE LA CRUZ GMEZ, Nerida
MADUEO GONZALES, Beruv
PANDO HUERTA, Dennis

ESPECIALIDAD:
Ingeniera Ambiental

SECCIN:
AI XXXX

FECHA: 18/06/16

2016 I

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INTRODUCCIN

Los hongos son organismos que se encuentran normalmente en diferentes

hbitats (suelo, agua, aire o en sustancias orgnicas en descomposicin), de
acuerdo a sus exigencias nutricionales y ambientales muchos de ellos se
adaptan a la vida parasitaria, causando enfermedades a las plantas, animales o
al hombre.

Los hongos son organismos sedentarios que se encuentran fijos en un sustrato

y, mientras estn vivos, no cesan de crecer, las clulas de los hongos poseen
pared al igual que las plantas, las paredes celulares fngicas son ricas en quitina,
la misma sustancia que hace dura el esqueleto de los insectos.

Existen hongos que tienen un hbitat especfico, a ellos se les puede clasificar
como geoflicos, acuticos, zooflicos, fitoflicos o antropofilicos.

Hay diversidad de tcnicas que permiten aislar diferentes especies de hongos a

partir de variados substratos. En algunos casos es necesario utilizar medios
especiales que faciliten el aislamiento y mantenimiento de dichos hongos.

Algunos factores importantes para el xito de la prctica son: la observacin de

la morfologa de los tipos de hongos, seguir los procedimientos adecuados para
cada prctica, la habilidad del manejo de cada material y reactivo.

En la presente prctica de laboratorio se detallarn el:

Aislamiento de zigomycetes acuticos.

Aislamiento de zigomycetes terrestres.
Aislamiento de ascomicetes.
Aislamiento de deuteromicetes.
Aislamiento de basidiomicetes.

LOS AUTORES

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OBJETIVOS

GENERAL

Identificar los distintos tipos de hongos que se pueden encontrar en muestra

biolgicas

I. MATERIALES Y MTODOS

1.1. MATERIALES

1.1.1. MUESTRAS:

MUESTRAS CAPACIDAD
CANTIDAD
Agua de charco o acequia -

tierra de campo agrcola -

estircol de vacuno -

vegetales con elevado contenido de -

almidn contaminados

plantas con carbones -

frutas contaminadas

jugos de fruta fermentados y bebidas

alcohlicas (chicha de jora. vino).

1.1.2. CARNADAS

CANTIDAD CARNADAS
Celofan -
Moscas -
Pelos o uas -
Manzana -

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1.1.3 MATERIALES DE LABORATORIO

MATERIALES
CANTIDAD
1 Esptulas Drigalsky -

4 Lminas y laminillas -

1 Pipetas graduadas de 1 ml al 0.01 -

1 Pipetas graduadas de 5 ml al 0.1 -

3 Placas Petri 15x100 mm -

3 Tubos de prueba 16x150 mm -

2 Asas de siembra -

1 Bistur -

2 Hisopos estriles -

1 Pinzas de punta roma -

1.1.4 MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO
Agar papa dextrosa -

Agar extracto de levadura-malta -

Agar Sabouraud glucosado. -

1.1.5 SOLUCIONES

SOLUCIONES
Suero fisiolgico estril -

agua destilada estril -

solucin de antibiticos -

1.1.6 COLORANTES

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COLORANTES
Azul de Lactofenol -

1.2. METODOS

1.2.1. AISLAMIENTO DE ZIGOMYCETES

1.2.1.1. Aislamiento de Zigomycetes Acuticos

Los zigomycetes acuticos son hongos que normalmente viven en el agua y que se
reproducen asexualmente por esporangiosporas. Varan de tamao, desde unicelulares
microscpicas hasta aquellos con micelio fcil de observar.

PROCEDIMIENTO

Depositar aproximadamente 15 ml de agua de charco o acequia en una placa

Petri estril.
Con ayuda de una pinza depositar 2 a 3 carnadas ( moscas, cabellos, uas),
previamente cortadas en trozos pequeos y sometidos a una sumersin rpida
en agua hirviendo, sobre la superficie del agua.
Dejar en incubacin por 3 a 4 das, a temperatura ambiente.
Para la observacin microscpica recoger con ayuda del asa de siembra y
pinzas, la carnada (moscas, cabellos, uas, etc) que se encuentra recubierta
por hifas y depositarlas sobre una gota de azul de Lactofenol en una lmina.
Cubrir con una laminilla.
Para el aislamiento puede transferirse una carnada a un tubo con agar extracto
de levadura-almidn. De lo contrario mantener la carnada en un frasco que
contenga agua destilada estril con carnadas iguales nuevas.

1.2.2.2. Aislamiento de Zigomycetes Terrestres

PROCEDIMIENTO

Depositar un pequeo trozo de estircol, en cada extremo de una placa de

agar papa dextrosa.
Dejar en incubacin por 3 a 4 das, a temperatura ambiente.
Observacin macromorfolgica de las colonias fngicas
Observacin microscpica de las colonias fngicas. Con el asa de siembra en
punta roma, recoger parte de la colonia y depositarla sobre una gota de azul
de Lactofenol en una lmina y cubrir con una laminilla. Observar al
Microscopio a 40 x.

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Estos hongos en su mayora pueden ser aislados en cultivos puros,

transfiriendo los micelios o esporangiforos a tubos con agar papa dextrosa.

1.2.2. AISLAMIENTO DE ASCOMYCETOS

Como caracterstica comn presentan la formacin de ascos, dentro de los cuales se

lleva a cabo la fusin nuclear y posterior meiosis, seguido de un proceso mittico que
genera un nmero par de ncleos que, eventualmente, formarn parte de las
ascosporas (o meiosporas). La estructura bsica de los ascomicetos, al igual que el
resto de los miembros del reino, es una tpica clula eucariota rodeada de una gruesa
pared celular. Pueden estar constituidos por una clula (talo levaduriforme) o formar
parte de largos filamentos tubulares denominados hifas (talo miceliar), los cuales estn
divididos en segmentos mediante septos (o tabiques) transversales.

1.2.2.1. Levaduriformes
PROCEDIMIENTO

Se siembra la fruta madura (zona hmeda), jugo de fruta fermentado o bebida

alcohlica en una placa de agar extracto de lavadura-malta (YM), por
agotamiento.
Se incuba a temperatura ambiente por 2 a 3 das.
Se observa la formacin de colonias elevadas, opacas, grandes y bien
definidas.
Con el asa de siembra en punta roma, recoger parte de la colonia y depositarla
sobre una gota de azul De Lactofenol en una lmina y cubrir con una laminilla.
Observar al Microscopio a 40 x.

1.2.3. AISLAMIENTO DE DEUTEROMICETOS

Los hongos imperfectos (fungi imperfecti), antiguamente llamados deuteromicetos

(Deuteromycetes) o deuteromicotas (Deuteromycota), comprenden ms de 15000
especies diferentes que se clasifican juntas porque no se conoce en ellas la fase
sexual de reproduccin. De ordinario, se trata de hongos de los filos Ascomycota y
Basidiomycota que se reproducen asexualmente. Son de gran importancia para el
hombre por ser el filo de mayor patogenicidad humana dentro del Reino Fungi y tienen
un gran peso en el campo de la Biotecnologa. Entre sus miembros asimismo se
encuentran los gneros Penicillium y Aspergillus, entre otras de gran fama.

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1.2.3.1. Filamentosos
PROCEDIMIENTO

Con ayuda de una asa de siembra, depositar una pequea porcin de la

muestra sobre un tubo con agar papa dextrosa.
Incubar a temperatura ambiente por 3 a 4 das.
Hacer el estudio de las colonias que desarrollan.
Observacin microscroscopica de la colonia fngica. Con el asa de siembra en
punta roma, recoger parte de la colonia y depositarla sobre una gota de azul
de Lactofenol en una lmina y cubrir con una laminilla. Observar al
Microscopio a 40 x.

1.2.3.2. Levaduriformes
PROCEDIMIENTO

Utilizar un hisopo estril, bien lavado y esterilizado en autoclave.

Frotar la superficie de la piel (de preferencia planta y espacios interdigitales
de los pies) enrgicamente en sentido circular.
Agitar el tapiz sobre un placa con agar Sabouraud glucosado ms
Cloranfenicol.
Incubar a temperatura ambiente, sin invertir la placa, durante 48 horas.
Hacer el estudio de las levaduras aisladas.

1.2.4. AISLAMIENTO DE BASIDIOMYCETES

Constituyen aproximadamente el 30% de los hongos en general, semejan por sus

exigencias nutricionales a los ascomycetos. Mayormente son especies saprftias o
parsitas de plantas y muy raramente de animales. La mayora no forman cuerpos
fructferos en cultivo, aunque muchos producen micelio; por consiguiente es difcil
identificarlos por sus caractersticas de cultivo.

PROCEDIMIENTO

Identificar los soros cerrados en plantas infectadas.

Abrir el soro, con asa de siembra estril, tomar una muestra de las esporas y
sembrar en una placa con agar extracto de malta.
Incubar a temperatura ambiente por 3 a 4 das.
Observar el desarrollo de colonias y resembrar el micelio en tubos con agar
extracto de malta.

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II. RESULTADOS

Solo se pudo observar la macromorfologia de las colonias fngicas debido a que

no se pudo observar en el microscopio ms a detalle .

Aislamiento de Zigomycetes Acuticos

Muestra : Agua de charco con
uas ,moscas y cabellos .
Tipo de Hongos :
Zigomycentes acuticos
Forma : Filamentosa
Elevacin : Convexa
Margen : Lobulada
Desarrollo : Regular

Aislamiento de Zigomycetes Terrestres

Muestra :Pan con moho

Tipo de Hongos :
Zigomycentes terrestre
Forma : Irregular
Elevacin : Umbonado
Margen : Ondulado
Desarrollo : Abundante

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AISLAMIENTO DE ASCOMYCETES
Muestra : Fruta fermentada
Tipo de Hongos : Ascomycetes
Forma : Circular
Elevacin : Pulvinada
Margen : Entero
Desarrollo : Algunos

AISLAMIENTO DE DEUTEROMYCETES

Muestra : Naranja en mal

estado
Tipo de Hongos :
Deuteromycetes
Forma : Rizoide
Elevacin : Elevada
Margen : Lobulada
Desarrollo : Abundante

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AISLAMIENTO DE BASIDIOMYCETES

Muestra : Entre los dedos

(sudor)
Tipo de Hongos :
Basidiomycetes
No se desarroll la muestra .

III. DISCUSIN DE RESULTADOS

AISLAMIENTO DE ZIGOMYCETES ACUTICOS

Nuestro objetivo es poder identificar el crecimiento de hongos utilizando moscas

que nos permitirn observar el crecimiento, al igual del experimento de la otra
universidad utilizamos como cebo moscas, uas, cabellos, pinzas, para
comenzar a realizar nuestro experimento solo utilizamos una caja Petri donde se
coloc 15mL de agua de rio, y se puso a hervir las moscas antes de colocarla en
la caja Petri junto al agua de rio, lo cual la universidad a discutir solo agrego las
moscas en tres tipos de agua en tres cajas Petri sin hacerlas hervir, lo mismo
hizo con los exoesqueletos de los camarones y los fragmentos de uas y como
resultado no se pudo observar en el microscopio ptico las hifas de los hongos
que crecieron alrededor de las moscas, en los resultados de ellos encontraron
micelio cenoctico, esto tal vez por qu se sigui procedimientos distintos y
aparte que tambin utilizaron el microscopio estereoscpico.
FUENTE: FACULTAD DE BIOLOGA- UNIVERSIDAD DE MICHOACANA DE SAN
NICOLS DE HIDALGO- PRACTICAS DE LABORATORIO DE MICOLOGPIA-
OBSERVACIN DE HONGOS ACUTICOS

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AISLLAMIENTO DE ZIGOMYCETES TERRESTRES: AISLAMIENTO DE

MUCORCEOS
Al observar la muestra despus de haber seguido sigilosamente lo especificado en la
hoja de laboratorio notamos que la muestra de pan con moho formo colonias de hogos
las cuales se notan a simple vista como si fueran grnulos que sobre salen de la
muestra despus del tiempo que especifico la prctica y la correcta posicin de cada
pedacito de estircol en la caja Petri.
Nos preguntamos el por qu se da el origen de estos microorganismo y las causas que
lo producen y casi la mayora del equipo considera que se debe a la interaccin de
estos microorganismos y el agar papa dextrosa as dando como resultado a que se
produzca esa formacin y tambin al ambiente al cual sometimos a las bacterias en si
esto ocurre gracias a la intervencin de diversos factores como fsicos y ambientales.
Consideramos tambin que el crecimiento de las colonias alrededor del pan con moho
tambin se debe a la putrefaccin del pan.
FUENTE: FACULTAD DE INGENIERIA- UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE
CIENCIAS E INGENIERIA-PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA-
AISLAMIENTO DE LOS HONGOS

AISLAMIENTO DE ASCOMYCETES: LEVADURIFORMES

Al observar nuestra muestra despus de haber realizado el experimento

siguiendo todos los pasos sin equivocarnos, notamos que durante la elaboracin
de la prctica tenamos que coger la parte blanda de la fruta fermentada para
poder estriar, despus del estriado pudimos observar el crecimiento de colonias
muy pequeas de hongos, durante la realizacin de la prctica no hubo ninguna
dificultad ya que solo era estriar la muestra de la fruta fermentada, y despus
ponerlo en el horno a una temperatura adecuada para el crecimiento de los
hongos, que es lo que se esperaba y se logr el propsito de poder observar la
colonia de hongos formados en la caja Petri con el agar de extracto de levadura.
FUENTE: FACULTAD DE INGENIERIA- UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE CIENCIAS
E INGENIERIA-PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA-
AISLAMIENTO DE LOS HONGOS

AISLAMIENTO DE DEUTEROMYCETES: FILAMENTOSOS

Durante el desarrollo dela prctica de laboratorio de aislamiento de hongos, para

poder seguir los procedimientos de la prctica tenamos que tener la muestra de
frutas (naranja), que estas deberan estar malogradas, con hongos si era posible
ya que esto se debe que se pudo introducir de mejor forma en los tubos de
ensayo que contenan agar papa dextrosa la cual es la ms utilizada para para
el cultivo de hongos, y para el crecimiento de estos mohos, la dificultad que se
tuvo es el no poder introducir con la asa de siembra correctamente en la parte
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media del agar, para tener un mejor crecimiento, pero si se logr el crecimiento
de mohos en el tubo con fruta (naranja).
FUENTE: FACULTAD DE INGENIERIA- UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE CIENCIAS
E INGENIERIA-PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA-
AISLAMIENTO DE LOS HONGOS

AISLAMIENTO DE BASIDIOMYCETES

Con unos hisopos esterilizados se prepararon las muestras necesarias para

estriar, en este caso se prepar la frotacin del sudor generado entre los dedos,
lo cual despus estriamos en tubo la cual contenan agar sabouraud glucosado
que es utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos
patgenos y saprfitos, lo cual permite observar el crecimiento de mohos delas
manos, pero no se pudo observar los mohos de las manos, esto debido que
antes que se frote la mano nuestro compaero se lav la mano y tal vez sus
manos estaban limpias libres de hogos y bacterias.
FUENTE: FACULTAD DE INGENIERIA- UNIVERSIDAD CONTINENTAL DE
CIENCIAS E INGENIERIA-PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGA-
AISLAMIENTO DE LOS HONGOS

IV. CONCLUSIONES

Luego de una semana de haber sembrado los hongos en placas,

observamos a las colonias que se formaron en las placas,
caracterizndolas en sus diferentes aspectos. Esto nos ayud a conocer
a las diferentes: coloraciones, aspectos y consistencia que tienen los
hongos, relacionados con el origen de sus muestras biolgicas y
ambientales.
Logramos identificar algunos hongos como son los geofilicos, acuticos,
zoofilicos, antropofilicos, segn su habitad.

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V. CUESTIONARIO

1. Definir los siguientes trminos:

Talo: Cuerpo de las plantas en que no hay diferenciacin de tallo, hojas y raz.

Hifa cenoctica: Las hifas son una red de filamentos cilndricos que conforman la
morfologa del cuerpo de los hongos multicelulares, las hifas cenocticas pueden
contener cientos a miles de ncleos a lo largo de todo el filamento citoplasmtico.

Hifa septada: Las hifas pueden presentar un tipo de segmentacin que divide al
filamento en septos, delimitada por estructuras denominadas tabiques, lo cual
permite la separacin citoplsmatica.

Hifa: Las hifas son una red de filamentos cilndricos que conforman la morfologa
del cuerpo de los hongos multicelulares

Micelio: Aparato vegetativo de los hongos que le sirve para nutrirse y est
constituido por hifas

Levadura: Hongo unicelular que produce enzimas capaces de provocar la

fermentacin alcohlica de los hidratos de carbono.

Espora o conidia: Clula vegetal reproductora que no necesita ser

fecundada.
"los musgos, los helechos y los hongos tienen esporas"

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2. Cules son las diferencias entre levaduras y mohos?

3. Porque las colonias de levaduras son ms grandes que las colonias bacterianas?

4. Porque las levaduras tienen que ser cultivadas por un periodo ms largo que las
bacterias?
La mayora de las fungemias son por levaduras, causando estos microorganismos
ms de un 90% de verdaderas septicemias1-3. Ante la sospecha clnica de fungemia,
hay autores que recomiendan una incubacin de los hemocultivos a 22-30C
durante 30 das antes de descartarlos como negativos4, aunque la mayora de los
estudios consideran 5-7 das suficientes para el crecimiento de levaduras, ya que la
mayora de ellas crecen en 2-3 das a 37C

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5. Porque el agar Saboraud Dextrosa es usado para cultivar levaduras y mohos?

Explique su respuesta en base a la composicin de este medio de cultivo.

Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patgenas y

no patgenas.

El bajo pH del medio resulta favorable para el crecimiento de los hongos y

ligeramente inhibitorio para las bacterias. En caso de requerirse un incremento en
la inhibicin del crecimiento de bacterias, se recomienda aadir agentes
antimicrobianos como la gentamicina que inhibe el crecimiento de los
microorganismos gram negativos o el cloramfenicol que tiene un amplio espectro
de accin.

6. Puede un medio de cultivo para bacterias ser usado para cultivar mohos? Explique
su respuesta.

Los hongos prefieren otros medios de cultivo, como el Agar Saboraud., adems que
las bacterias necesitan un tiempo de incubacin menor que de los hongos , y el tipo
de agar que las bacterias prefieren tiene otra composicin.

7. Porque no se debe invertir las placas al incubar hongos filamentosos?

Porque estos son preparados en un medio acutico, mas no en un agar slido

como se suele cultivar normalmente, entonces solo se debe mantener en la forma
normal, mas no invertirla ya que todo el lquido se derramara.

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8. Qu tipo de hifas presentan Mucor, Aspergillus y Rhizopus?

*Mucor: Hifas cenocticas en angulo recto

* Aspergillus: Tienen hifas tabiculares
* Rhizopus: Hifas septadas

9. Qu tipo de esporas asexuales presentan Mucor y Penicillium?

* Los hongos Mucorales son tpicamente de rpido crecimiento, y sus anchas hifas,
sin septo (los septos multiperforados son exclusivos
de esporangiforos y gametangios). Las hifas crecen mayormente en sustratos.
Los eporangiforos tienen hifas simples o ramificadas, que soportan
sacos esporangios llenos de esporangisporos asexuales.

* Penicillium se caracterizan por formar conidios mediante una estructura ramificada

que recuerda la forma de un pincel, las ramificaciones terminan en unas clulas que se
conocen como fialides. Las filides originan las esporas.

10. Que divisin del Reyno Fungi carece de fase sexual?

Los Deuteromicetos o tambin llamados hongos imperfectos

11. Cul es la funcin de las esporas?

Nos ayuda a determinar la forma y el tipo de reproduccin que pueden tener los
hongos.

12. Qu condiciones requieren los hongos para reproducirse?

Los mohos un tipo de hongos prosperan sobre una gran cantidad de sustancias
orgnicas y, provistos de la humedad suficiente, acaban velozmente con la madera,
el papel y el cuero. En las frutas, las enzimas penetran muy por detrs del rea de
crecimiento visible daando la planta. Pero adems de ser destructivos, los mohos
tienen tambin muchos usos industriales. Intervienen en la fermentacin de cidos
orgnicos y de algunos quesos: los quesos Camembert y Roquefort adquieren sus
sabores particulares de las enzimas de Penicillium camemberti y Penicillium
roqueforti, respectivamente. La penicilina, un producto del moho verde Penicillium
notatum, revolucion los antibiticos tras su descubrimiento en 1929, y el moho
rojo del pan, Neurospora, es importante en los experimentos genticos .

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13. Porque se realiza la tincin de los hongos con azul de Lactofenol? Explique
brevemente la funcin de los componentes (fenol, cido lctico y azul de algodn) de
esta tincin.

Usado para la observacin de hongos

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ANEXOS

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PGINAS WEB
https://microdonto.files.wordpress.com/2009/04/pruebas-bioquimicas.pdf
http://medicina.usac.edu.gt/quimica/biomol/lipid.htm
http://www.bd.com/ds/technicalCenter/inserts/Sabouraud_Media_Low%20pH.p
df

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