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COLECCIN DE SEMEN EN TOROS:

A) MTODOS

La recoleccin del semen constituye la base preliminar de la fecundacin artificial y el


problema tecnolgico ms complejo y delicado, por mltiples razones.

Debido a ello la recogida ha sido objeto de constantes estudios por parte de los investigadores,
con el fin de asegurar la elaboracin de artificios cada vez ms adecuados y de asegurar la
obtencin de la masa total del eyaculado sin alterar sus condiciones de pureza e integridad, as
como sus propiedades biolgicas, sin crearle perjuicios de ningn tipo al macho.

Son varios los mtodos que se han ideado para la recoleccin del esperma, dentro de los ms
comunes y estudiados se encuentran la vagina artificial, masaje y la electroeyaculacin.

1. Masaje rectal

Fue descubierto por primera vez en 1925, consiste en la penetracin del brazo del operador en
el recto del toro (nica especie en la que se emplea) entre 18 - 25 cm, aplicando all masaje de
las vesculas seminales de adelante a atrs y luego un exprimido de las ampollas; el
amasamiento de unos minutos de duracin ya suministra esperma.

Este mtodo permite la obtencin de material seminal de toros que no pueden efectuar la
monta o de aquellos que por alguna razn no realizan el salto natural o no admiten la vagina
artificial.

El semen obtenido por este proceso suele estar contaminado con orina, adems de
proporciones elevadas de secreciones de las vesculas seminales, lo que da un semen menos
equilibrado que en un eyaculado normal.

Solo es aplicable en los toros. La tcnica se basa en realizar un masajeo de craneal a caudal de
los rganos genitales internos para exprimir las vesculas seminales, las ampollas del
conducto deferente, y el comienzo de la uretra peneana. Se va a producir una cierta excitacin
con protrusin del pene y as podemos obtener semen. El semen que se puede obtener puede
no ser de tan buena calidad como el obtenido con otros mtodos, pero es un semen que sirve
para una evaluacin y para una inseminacin. Se necesita una persona para masajear y otra
para colectar. El semen es contaminado, no es una medicin real del volumen pero se puede
usar en ltima instancia para una inseminacin. Este mtodo es til para toros de campo que
pueden no estar acostumbrados a otros mtodos como la vagina artificial.

2. Vagina artificial:

Es el mtodo ms ampliamente difundido en la actualidad para la recoleccin del semen de


bovinos, ovinos y equinos.
Permite superar varios de los inconvenientes de la recoleccin directa en la vagina o la
coleccin por masaje; consiste en la utilizacin de un sencillo y fcilmente utilizable aparato o
vagina artificial.

Se consigue un semen francamente puro, y en proporciones normales de un eyaculado.

La primera vagina artificial para bovinos fue diseada en Rusia, consista en un cilindro rgido
de caucho u otro material similar, de unos 60 cm de largo con un dimetro de 5,5 cm,
interiormente tena un tubo de goma de pared fina, cuyos extremos se plegaban hacia atrs
sobre el cilindro exterior, formando un doble espacio donde se colocaba agua; una de los
extremos se adosaba a un recipiente de vidrio generalmente graduado.

Este aparato se llenaba de agua caliente en el compartimiento interior para subir la


temperatura interna del mismo a unos pocos grados por encima de la corporal, a travs de un
orificio con tapn rosca.

Posteriormente se crearon modificaciones varias, existiendo un modelo Ingles que modificaba


la capacidad del colector seminal, y un modelo dans que consista en un cilindro ms corto
con un acoplamiento del receptor seminal mediante un embudo de goma.

Tanto el modelo ingls como el dans tenan el colector expuesto a la luz y temperaturas
ambientales, existiendo el peligro del choque trmico en pocas de fro, para esto se dise
una vagina artificial en la que el colector va dentro de un revestimiento de tela o pintaste.

a) Preparacin de la vagina artificial: las diversas partes de la vagina artificial deben estar
limpias, estriles y secas, siendo necesario evitar cualquier contaminacin de la muestra
seminal y la transmisin de enfermedades entre los toros

Todas las piezas de la vagina artificial deben ser fregadas con agua caliente y jabn, enjuagadas
con agua caliente, luego alcohol y agua destilada, finalmente se seca.

Puede tambin esterilizarse la camisa interna en olla a presin u horno, colocndole una toalla
por dentro para evitar que se pegue.

El armado se realiza mediante la colocacin de la funda interna dentro del cilindro, se inserta
luego en los extremos, se adapta el colector al extremo correspondiente al embudo de goma,
o entre la funda y el cilindro, asegurndose siempre con bandas elsticas para evitar que se
pierda semen.

b) La tcnica de recoleccin consiste en el llenado del espacio vaginal resultante con agua
caliente, a temperatura y presin adecuada (entre 42 - 45C).

En pocas de mucho fro o cuando se producen demoras, el llenado de la vagina puede


realizarse a 50 C, teniendo la precaucin de controlar internamente la temperatura previo al
uso, la que no debera exceder

Los 39- 40C, para evitar quemar al animal.

A veces se puede mantener la temperatura y presin utilizando una pequea cantidad de agua
y completando con aire.

Luego de la preparacin de la vagina artificial se procede a la lubricacin interna de la misma.


Vagina artificial: Este mtodo trata de imitar las condiciones fisiolgicas del animal (se le llama
mtodo para fisiolgico). Se aplica como estimulantes el calor y la presin, imitando las
condiciones vaginales de la hembra.

*Ventajas: Como es un mtodo para fisiolgico y necesita la accin voluntaria del animal
vamos a obtener la mejor calidad de semen posible.

Es un mtodo natural

No implica riesgos para el animal

Es posible en todas las especies: solo si el animal cumple con la condicin de ser manso o
adaptado (necesita un periodo de adaptacin durante el cual el operador puede manosear al
animal sin que este se altere o desestimule).

*Desventajas: El animal debe estar entrenado

No es factible para animales de campo

Se necesita una hembra, que puede estar en celo o no: los animales mansos o acostumbrados
pueden montar maniques tambin, que no tienen por qu tener la forma de la hembra (les
alcanza con tener estmulos olfativos, o en el rumiante el reflejo de inmovilidad).

Para la mayora de las vaginas se usa agua caliente para darle la temperatura, presin de aire
para darle la presin y lubricante.

El estmulo necesario para que el equino macho eyacule es el golpeteo del glande contra el
fondo de la vagina. Por esto las vaginas artificiales no son un mero cao, y tienen el fondo
cerrado con un tubo para que pueda salir el semen.

Para los equinos tenemos diferentes modelos de vaginas artificiales: entre ellos estn el
japons, El modelo Missouri y el modelo Alemn tienen un estrechamiento bastante
pronunciado en la parte final.

A las vaginas artificiales para equinos se les coloca muchas veces un filtro, porque el semen de
equino tiene varias porciones. La porcin post espermtica que es como un gel es muy
abundante, y conviene apartarla del semen, y para esto se usa el filtro.

En los toros el modelo es sencillo y tiene una pared doble, es como un cao de plstico o de
goma con un cao de goma blanda, flexible en la parte interna. Tiene tambin una vlvula por
la que podemos poner agua caliente, y aire a presin. Tambin necesita lubricante.

En los carneros hay diferentes modelos, pero la ms comn es un cao que puede ser de
plastiducto o metal, de unos 15 cm o ms chica, con una camisa de goma. El modelo Duran
tiene 2 vaginas artificiales independientes; a una le pone ms presin que a la otra, para que el
estmulo sea mayor. El modelo Miess tiene una vagina artificial corta porque el estmulo del
carnero se produce en la base del pene; el resto es una copa de coleccin de vidrio para
obtener un semen ms puro y de mejor calidad.
Para colectar con vagina artificial la estimulacin previa es fundamental. Para estimularlo
podemos: desviar el pene y dejarlo que baje, dejar que se produzca una falsa monta, el olor de
la hembra en celo, y sobretodo el reflejo de inmovilidad en la vaca. En el suino es muy
importante el olor de la hembra en celo.

En general las vaginas artificiales deben tener una temperatura que depende de la
individualidad del animal; hay animales que responden a una temperatura mayor que otros. En
el equino se usa entre 42 a 45, en el toro 40 a 42 (aunque se prepara a 45 porque luego
cuando vamos a colectar se enfra), y en carneros de 38 a 42. Se llena con agua a 65 primero
para calentar la vagina, que luego va perdiendo temperatura y queda a 42. Muchas veces se
usa una especie de forro trmico para proteger la vagina artificial.

El lubricante que se usa generalmente es carboximetilcelulosa. Debemos tener cuidado con


algunos antispticos como la clorhexidina porque son espermicidas. Cuando aplicamos el
lubricante con un guante, es til dejar el guante puesto para que no le entre agua a la vagina y
para que no se seque el lubricante.

Es importante la localizacin del operario. En el equino debe estar a la izquierda, en el toro a la


derecha (porque hay cierta tendencia a que el pene se desve hacia la derecha cuando el toro
entra en ereccin), en el carnero se debe trabajar en un foso.

Es importante cuidar al animal y a uno mismo cuando se va a colectar semen. No debemos


ponernos debajo del animal, sino de costado.

3. Electroeyaculacin:

En 1948 investigadores franceses obtuvieron semen de bovino mediante introduccin en el


recto de un electrodo bipolar, multianular con una corriente alterna de 700 miliamperios y
hasta 30 voltios.

Una vez vaciado el recto y lavado con solucin salina, se introduce la sonda en el piso del
conducto rectal, se va aumentando progresiva y gradualmente el voltaje desde 1 hasta 10-15
voltios, volvindose a cero despus de cada incremento, este se hace de a 2 voltios cada 10
segundos.

Este mtodo se comprob que produca normalmente eyaculados de mayor volumen, pero de
menores concentraciones espermticas que las obtenidas por la vagina artificial.

Esta tcnica es utilizada sobre todo en animales incapacitados, o que rehsan la vagina
artificial, siendo preciso tomar algunas precauciones, ya que la ausencia de libido puede ser un
carcter negativo transmisible a la descendencia.

Electroeyaculacin: Se basa en la estimulacin elctrica de los centros nerviosos responsables


tanto de la ereccin como de la eyaculacin (como son diferentes nervios, es posible obtener
eyaculacin sin ereccin y viceversa). Su origen proviene del hombre; se vio que los
electrocutados antes de morir eyaculaban, entonces se trat de ver porqu la corriente
elctrica los haca eyacular.
*Ventajas:

q Se aplica en casi todas las especies: todas las especies pueden electroeyacular. En los
equinos y suinos no se usa debido al nerviosismo de estas especies. Es muy usada en
rumiantes. Tambin se aplica en aves.

q No es necesaria la voluntad del animal

q Es usada en la evaluacin reproductiva de los animales de campo: esto es ventajoso ya que


los animales de campo, que no estn acostumbrados al manejo pueden ponerse agresivos si
usamos otros mtodos como puede ser la vagina artificial.

q Puede ser usada en animales imposibilitados para la monta: Esto es bueno pero cuando los
problemas son por artrosis, problemas de columna, problemas en las patas, etc. Debemos
tener cuidado que los problemas no sean de libido, por falta de deseo sexual, porque estos
problemas se transmiten y generan caractersticas negativas para la reproduccin.

q No es necesario con una vaca en celo

q Si es correctamente realizada el semen puede tener buena calidad: En este punto se plantea
una discrepancia, ya que algunos dicen que el semen obtenido con electroeyaculacin tiene
mayor volumen por mayor estimulacin de las glndulas accesorias y tiene poca concentracin
de espermatozoides. Otros dicen que se obtiene un semen de igual calidad al obtenido con
vagina artificial. En general puede variar segn la pericia del operador para estimular al animal
o los instrumentos usados.

* Desventajas:

- Se necesita experiencia: se necesita experiencia ya que la estimulacin exagerada puede


producir dolor, y con esto el animal va a poner resistencia en manejos sucesivos. Si el animal es
hiperexcitable puede llegar a morir si es sobre estimulado.

- Tener cuidado con animales de baja libido

- No es posible observar otros elementos de la monta: no vamos a poder observar la


bsqueda de las hembras, ni la intromisin ni el golpe de rin (envin al eyacular).

- Si no se realiza bien el semen puede contaminarse: si el macho eyacula dentro del prepucio
el semen se va a contaminar.

- Se necesita un equipo especial que es costoso: se necesita un electroeyaculador.

Conclusin: La calidad del semen depende del operador y del animal. Si la estimulacin no es
buena el semen tampoco lo es. Hay animales hiperexcitables y no eyaculan. Si no muestra
espermatozoides no podemos diagnosticar azoospermia, porque puede ser un error en la
aplicacin de la tcnica.

Metodologa: Se introducen 2 electrodos en el recto del animal buscando llegar a los centros
de la ereccin y de la eyaculacin, al sistema nervioso pelviano. A veces es necesario vaciar el
recto de materia fecal y mojar el vstago con agua para que la electricidad se transmita ms
fcilmente.

Electrodos:

Existen distintos vstagos intrarectales. El tipo francs tiene 4 anillos de metal en vstagos de
goma, en el cual estn conectados el 1 con el 3 y el 2 con el 4 (estn conectados en 2
series, uno en la blanca y otro en la roja). Se pasa una corriente que va desde el 1er anillo
hasta el 2do, del 2do al 3ero y del 3ero al 4to, y as estimulamos una gran zona del animal.

El modelo Hill tiene 3 placas horizontales. Cuando hacemos pasar corriente, sale de la placa del
medio para las de los costados.

El modelo italiano tiene anillos que se colocan en una mano (previo a la postura de un guante
de goma), dedo por medio. A continuacin, con cualquiera de los modelos, se va pasando
desde la base del pene hacia las glndulas accesorias. El otro operador va aplicando una
corriente alterna que llega a 20 o 25 voltios como mximo. Se hacen grupos de estmulos que
son seriados, que van aumentando en intensidad y en ritmo segn como vayamos obteniendo
el semen. Vamos variando de 0 a 1000 miliamperios. Se hace de 2 a 3 segundos de
estimulacin con 1 segundo de descanso. Funcionan con batera o con corriente de 220.

Cuando empieza, primero va a chorrear un lquido claro que no se colecta, porque es producto
de secrecin de las glndulas bulbouretrales que van a lubricar la uretra. Cuando el color
cambia a lechoso, vamos a empezar a colectar.

A veces pasa que el pene no se protruye porque se produce una contraccin del retractor del
pene, entonces debemos destrabarlo empujando desde la S peneana o tirando del pene hacia
abajo.

Corriente:

Alterna 20 25 volts mx.

0 a 1000 mA+

B) DISPOSITIVOS PARA EL MANEJO DE LOS ANIMALES

Uno de los recursos menos sofisticados para mantener a una vaca mientras el toro efecta el
salto y se practica la recogida seminal es el caballete de monta; una vaca nerviosa puede
moverse considerablemente y la accin del toro puede empujar la vaca de un lado a otro, la
cual es sumamente peligroso para el operador. Incluso cuando se recurre al empleo del
maniqu existe cierto peligro para el que realiza la recoleccin, especialmente si no se instala
una valla protectora junto al animal.

C) CONDUCTA A SEGUIR CON EL TORO.


a. Limpieza : El toro destinado a la recogida espermtica debe estar lo ms limpio posible de
polvo y suciedad a fin de evitar la contaminacin del semen; previo a la recogida se le quitan
las partculas sueltas de suciedad, manteniendo limpia la regin ventral del animal , no debe
esquilarse a fondo la zona para evitar la irritacin de los pelos cortos y estos solos no son
capaces de proteger adecuadamente la abertura prepucial.

En centros de inseminacin es comn la limpieza de la zona prepucial y ventral con una toalla
mojada previo a la recoleccin; cuando est muy sucia se hace un lavado a fondo con
suficiente tiempo previo para que el animal este seco al momento de la recoleccin; si esta
mojado se favorece la proliferacin y transmisin de enfermedades bacterianas.

b. Excitacin precoital: reteniendo al toro por unos minutos antes del salto, se observ un
incremento importante en el nmero y volumen de espermatozoides, en comparacin con
muestras obtenidas ad libitum.

c. Mantenimiento del impulso sexual: un toro usado con frecuencia puede volverse fro e
indiferente a la monta o servicio de la vagina artificial cuando se sigue siempre el mismo
procedimiento rutinario se aburre.

Se debe utilizar para evitar esto tcnicas para contrarrestar la perdida de libido, que pueden
ser por un lado el cambio de la hembra y por otro la estimulacin sexual del toro cambiando
las circunstancias en que se produce la extraccin, se usa otro lugar, otro personal,
indumentaria distinta o de colores distintos, y se acta de distinta manera; es importante
evitar distracciones del animal al saltar como presencia de muchas gente o movimientos
bruscos.

1. INTRODUCCIN

La inseminacin artificial, es una tcnica que consiste en depositar en el aparato genital de una
hembra, con la ayuda del instrumental apropiado, el semen recolectado de un macho.

En los siguientes apartados se explica dicha tcnica con el objetivo de que se realice evitando,
en la medida de lo posible cualquier tensin o sufrimiento para el animal.

2. SELECCIN Y MANEJO DE LOS SEMENTALES

Los machos utilizados en inseminacin artificial se someten previamente a una estricta


valoracin y seleccin gentica. Estos machos deben tener un alojamiento conveniente, recibir
una alimentacin adecuada y un fuerte control sanitario. Son rigurosamente examinados en
cuanto a aparato locomotor, tamao testicular, pruebas de libido, edad, factores
medioambientales, posible transmisin de genes letales o cualquier otra anormalidad.

3. RECOLECCIN DEL SEMEN


Constituye la primera operacin a realizar en la tcnica de la inseminacin artificial. Es
necesario entrenar previamente a los animales para que se adapten al local, al mtodo de
recogida y a la presencia del operario, con el fin de realizar una correcta obtencin seminal.

La estimulacin sexual antes de la recogida del semen incrementa el nmero de


espermatozoides y tambin el volumen de eyaculado. Esto se consigue permitindoles que
hagan uno o dos falsos saltos, cambiando al animal que montan, etc. El aumento de la
frecuencia de recogida disminuye el volumen y la calidad del eyaculado. El nmero adecuado
de recolecciones por semana ser en toro de 2-6, en morueco, de 7-25, en macho cabro, de 7-
20, en cerdo, de 2-3 y en caballo de 2-6.

Para comenzar a extraer semen en los machos es determinante su edad y su tamao testicular.
La edad idnea para usar a un macho como donante de semen vara en funcin de la especie y,
por lo general, es de 12 meses en el caso del toro, de 7 a 8 meses en el caso del carnero,
macho cabro y cerdo y 24 meses en el caballo.

Existen varios mtodos para la recogida del esperma; el ms utilizado es el de la vagina


artificial, sobre todo en toro, morueco, macho cabro, caballo y conejo. Se basa en la utilizacin
de un aparato prctico y simple que trata de imitar en lo posible al aparato genital femenino
de las hembras y permita una rpida recogida del eyaculado, libre de contaminaciones.

Se pueden utilizar hembras en celo como seuelo para la monta o bien potros o maniques que
proporcionan estabilidad y facilitan la recogida seminal.

En el verraco la tcnica ms utilizada en la actualidad para la obtencin de semen es el mtodo


manual y en las aves el masaje con pellizcamiento de la zona perineal.

4. VALORACIN DE LA CALIDAD SEMINAL

La contrastacin seminal es un paso previo imprescindible a la preparacin de las dosis


seminales.

La mejor forma de comprobar que el semen es de calidad es observar la prolificidad de la


hembra inseminada, o bien mediante el estudio de la fertilidad, entendida sta como el
porcentaje de hembras no repetidoras tras la inseminacin, pero esto requiere tiempo y
dinero. Por tanto, se desarrollan mtodos de laboratorio que deben permitir determinar
cuntos y/o qu espermatozoides son funcionalmente competentes para logra el proceso de
fecundacin.
Generalmente la fertilidad de un macho o de una dosis de semen se incrementa a medida que
aumenta el nmero de espermatozoides hasta un umbral (fertilidad ptima), momento en que
al elevar el nmero de espermatozoides no aumenta la fertilidad; en consecuencia es
imposible recomendar un nmero mnimo de espermatozoides por dosis que se pueda aplicar
a cualquier condicin.

Existen dos tipos de caracteres que determinan la calidad seminal. Se consideran caracteres
compensables aquellos para los que elevando el nmero de espermatozoides por dosis se
obtiene una elevacin de la fertilidad y estn relacionados con la capacidad de los
espermatozoides para alcanzar y penetrar el ovocito despus de la inseminacin: motilidad
progresiva, integridad acrosmica, capacidad de hinchamiento en condiciones hipoosmticas,
integridad de la membrana, capacidad de unin a la zona pelcida, duracin de la viabilidad
espermtica y la morfologa espermtica.

Se consideran caracteres no compensables aquellos para los que las diferencias de fertilidad
entre los machos no pueden reducirse aumentando el nmero de espermatozoides y se
relacionan con la contribucin paternal al potencial desarrollo del embrin: caractersticas
ligadas al ADN, presencia de vacuolas nucleares, anormalidades de la cabeza, etc.

Una vez recogido el semen se debe mantener a una temperatura de 30-37 C en bao Mara
hasta que se valore y se le someta a posteriores manipulaciones, que deben realizarse lo ms
rpidamente posible.

Los mtodos utilizados para valorar la calidad seminal son los siguientes:

Examen macroscpico

- Volumen del eyaculado: gracias a esta determinacin se pueden observar las desviaciones del
volumen normal de cada animal y detectar posibles problemas.

- Aspecto: se observa la coloracin, apariencia opaca o traslcida, presencia de contaminantes


(orina), cogulos, pus, olor caracterstico, etc.

Examen microscpico
- Concentracin de espermatozoides: consiste en la determinacin del nmero de
espermatozoides por unidad de volumen. Esta determinacin se puede realizar por recuento
microscpico directo de clulas, a travs de un espectrofotmetro, a travs de un sistema de
videomicrografa o con un contador electrnico de partculas. Por lo menos tiene que haber en
el eyaculado una concentracin de 1.000 x 106 espermatozoides/mL en toro, 3.000 x 106
espermatozoides/mL en ovino, 2.400 x 105 en caprino y 200 x 106 en porcino.

- Morfologa de los espermatozoides: se estima la proporcin de espermatozoides con formas


anormales respecto al total de espermatozoides contado. Todos aquellos eyaculados en los
que el contenido de formas anormales sobrepase un cierto lmite deben ser eliminados (no
debe ser superior al 20-25%).

Motilidad y pruebas de funcionalidad del transporte espermtico

- Motilidad de conjunto o masal: se valora la calidad del movimiento en forma de oleaje en una
escala de apreciacin subjetiva.

- Motilidad individual: al menos el 60-65% de los espermatozoides deben presentar


movimiento regular progresivo, nunca curvo, rotatorio ni oscilante.

- Porcentaje de espermatozoides vivos-muertos.

5. DILUCIN Y CONSERVACIN DEL ESPERMA

Una vez contrastado el eyaculado se proceder a la dilucin del mismo, para obtener las dosis
seminales.

El objetivo de la dilucin es permitir que con un solo eyaculado se puedan inseminar un gran
nmero de hembras. De un eyaculado de vacuno de 8 mL que tiene 10 x 109 espermatozoides,
se pueden obtener hasta 500 dosis de 0,25 mL. Normalmente se obtienen de 100 a 300 dosis
por eyaculado en toro, de 10 a 15 en morueco o macho cabro y de 15-20 en el verraco.

Un segundo aspecto es el mantenimiento de la capacidad vital y fertilizante del esperma


mediante la creacin in vitro de un medio favorable. Las propiedades que debe tener un buen
diluyente-conservador son:

Que sea isotnico al semen y tenga capacidad para mantener la presin osmtica.

Que tenga capacidad amortiguadora.


Que proporcione los nutrientes necesarios para el metabolismo de los espermatozoides.

Que inhiba el crecimiento bacteriano.

Que no tenga elementos txicos o dainos ni para el semen ni para el aparato reproductor.

6. INSEMINACIN DE DISTINTAS ESPECIES

El porcentaje de fertilidad obtenido con la inseminacin artificial depende de varios factores


como la calidad del semen, una tcnica adecuada de procesamiento, una tcnica adecuada de
inseminacin, hembras saludables e inseminacin en el momento adecuado.

6.1. Momento de la inseminacin

Para elegir el momento adecuado de la inseminacin artificial es imprescindible la deteccin


correcta del celo en las hembras.

El momento ptimo para realizar la inseminacin artificial depende del momento de la


ovulacin, tiempo de madurez del vulo y su paso por el oviducto, de la capacitacin de los
espermatozoides y de su capacidad de supervivencia en el aparato genital femenino. El
momento ptimo en las diferentes especies es el siguiente:

Vacas: 12-24 horas despus del inicio del estro; en la prctica se traduce en que si se observa
el celo por la maana se insemina por la tarde y las que muestran el celo por la tarde son
inseminadas a la maana siguiente.

Ovejas: 15-17 horas despus del inicio del estro.

Cabras: 12-36 horas despus del comienzo del estro.

Cerdas: 22-33 horas despus del inicio del estro.

6.2. Tcnicas de inseminacin

Las tcnicas de inseminacin artificial utilizadas en cada una de las especies se explican a
continuacin:

Vaca: se utiliza la inseminacin recto-vaginal o de fijacin cervical.

Oveja y cabra: la tcnica ms habitual es la inseminacin cervical.

Cerda: la tcnica tradicional usada en porcino es la inseminacin intrauterina

Congelacin de semen bovino


Jairo Serrano 23/06/2016 1 Comentario

La criopreservacin del semen ha sido la tcnica ms antigua y que ms ha influido en la


difusin del empleo de la IA en la Reproducin Asistida. Como regla general la refrigeracin del
espermatozoide es un mtodo sencillo que de manera exitosa ha permitido ampliar el tiempo
de viabilidad del espermatozoide, al reducir su tasa metablica y por lo tanto prolongar la
supervivencia del semen mediante la disminucin del porcentaje de sustratos empleados y la
produccin de toxinas.

Si bien la criopreservacin garantiza la supervivencia de los espermatozoides, una elevada y


variable proporcin del proceso de congelacin-descongelacin afecta la integridad de la
membrana plasmtica (MP) y acrosomal (MA) tanto en lo referente a la morfologa como a la
funcionalidad, lo cual suele ocasionar daos irreversibles y causar muerte celular e
infertilidad. Se ha demostrado como los espermatozoides de diferentes toros evaluados,
resisten de manera distinta los efectos lesivos de la criopreservacin, de manera
indiscriminada sobre la integridad estructural y funcional MP y MA, lo que afecta la capacidad
fecundante de las muestras seminales destinadas a IA. (RUBIO-GUILLEN 2009)

Por lo tanto el xito de la criopreservacin del semen depende de varios factores que
interactan entre s como el criprotector, tipo de diluyente, tasa de enfriamiento, tasa de
descongelacin y empaque, as como la variacin individual del reproductor.

Es inevitable que se presente perdida de la viabilidad del espermatozoide debido a su manejo


antes del proceso de congelacin as como durante el proceso mismo, por lo que el xito de la
criopreservacin se mide por la capacidad de mantener su capacidad fecundante despus de
la descongelacin. Para lograr lo anterior debe mantener su capacidad para producir energa
mediante el metabolismo, mantener la configuracin e integridad de la membrana plasmtica,
retener su motilidad y conservar las enzimas, como la acrosina, dentro del acrosoma para
permitir la penetracin del ovocito.

El semen despus de refrigerado a 5-8C sobrevive por 24-48 horas y an 96 horas sin que
haya disminucin del porcentaje de fertilidad. En la actualidad la tcnica congelacin se ha
estandarizado y el semen se almacena indefinidamente en nitrgeno lquido a -198C,
manteniendo una fecundacin aceptable en las tasas de fertilizacin luego de la
descongelacin. Generalmente, la viabilidad del esperma disminuye un 50% por efecto de la
criopreservacin al afectar varios de los organelos espermticos, la induccin prematura de la
reaccin acrosmica, alteracin de la funcin mitocondrial, reduccin de la motilidad y fallas
en la decondensacin de la cromatina. (CHAVERIO 2006)

Otro frente de investigacin en la ltima dcada ha sido el de desarrollar mtodos que


permiten examinar las caractersticas ultraestructurales del esperma y sus alteraciones, entre
las que se encuentra la prueba de kintica del esperma para anlisis de la motilidad mediante
asistencia computarizada (Computer Assisted Semen Analysis (CASA), prueba de resistencia
osmtica (hypo-osmotic swelling test HOST), evaluacin de la integridad y permeabilidad de la
membrana plasmtica mediante colorantes fluorescentes, evaluacin del estado acrosomal
con lectinas fluorescena isocianato conjugado, investigacin de la integridad del ADN
utilizando SCSA (Chromatin Structure Assay Test SCSA) o evaluacin del estado de la
arquitectura membranosa.

El empleo de una combinacin de pruebas en lugar de una sola prueba, puede conllevar a
obtener una informacin ms completa sobre el estado del espermatozoide. Las pruebas
dirigidas a evaluar la integridad de la estructura cromtica del esperma son capaces de
identificar los defectos espermticos que normalmente no se detectan durante los anlisis
convencionales del semen. Los mtodos requieren de la aplicacin de microscopio
fluorescente y/o tcnicas de citometra de flujo, por lo que por su alta cantidad, repetitibilidad
y sensibilidad ya se desarrollan en muchas centrales modernas de Reproduccin Asistida.
(LEMMA 2011).

MANEJO DEL SEMEN A CRIOPRESERVAR.

Despus de determinar la fertilidad del Reproductor, puede tomarse la decisin de recolectar


muestras de semen para la produccin de pajillas con destino al programa de inseminacin.
Ver el Captulo Manejo Reproductivo Del Hato, Evaluacin Calidad Seminal de esta publicacin.

Con posterioridad a la evaluacin de la calidad del semen y realizar el clculo de la


concentracin espermtica, es importante determinar la cantidad de Espermatozoides con
Motilidad progresiva Morfolgicamente Normales (MPMN) en el eyaculado. El nmero de
MPNM ser utilizado para calcular el nmero de dosis que pueden ser congeladas.

Manejo del semen

En el ejemplo siguiente se muestra la forma a seguir para calcular el nmero de dosis y dilucin
de una muestra de eyaculado. La existencia de numerosas fuentes de variacin de la fertilidad
(toro, eyaculado, nmero de espermatozoides, hembra, etc.) impone que el centro de
inseminacin artificial deba incluir en la dosis de semen congelado un nmero de
espermatozoides bastante elevado. Cuando se utilizan 20 millones de espermatozoides/dosis,
un porcentaje de de motilidad progresiva de 30 a 50% a la hora de cero postdescongelacin,
permite disponer de entre 6 a 10 millones de clulas espermticas con motilidad
progresiva/dosis. El profesional puede solicitar o considerar cual es la concentracin deseada
por pajilla. (CABODEVILLA).
La CSS tiene aprobados dos protocolos para la dilucin del semen bovino, que son:

El protocolo Estandar CSS que es un mtodo de dos pasos.

El protocolo Alternativo CSS que es un mtodo de un paso.

Biladyl

El Protocolo Estandar CSS es usado en los Estados Unidos y requiere de dos pasos. Los
diluyentes ms comnmente utilizados en este protocolo tienen como amortiguadores el Tris
(hidroximetil-aminometano) o el Citrato de sodio.

Requieren de yema de huevo para proteger las clulas espermticas contra el shock trmico
por fro y vienen presentados comercialmente con dos fracciones (A y B) y una mezcla de
antibiticos. La Fraccin B es similar a la Fraccinn A, excepto que contiene 14% de glicerol
como crioprotector.

El protocolo de dos pasos logra una concentracin final de 20% de yema de huevo, 7% de
glicerol, 50 g de Tilosina, 250 g de Gentamicina, 150 g de Lincomicina y 300 g de
estreptomicina por cada ml de semen diluido y congelado. Ejemplos de diluyentes comerciales
disponibles en el mercado para el sistema de dos pasos son el Biladyl

Tcnica de dilucin del semen.

Los antibiticos se adicionan cuidadosamente al semen puro en una proporcin de 0.02 ml de


la mezcla de por cada ml de semen. Los antibiticos deben estar en contacto por 3 a 5
minutos con el semen puro, antes de proseguir la dilucin

En un matraz o tubo de ensayo de 50 ml. se diluye el semen con antibiticos, con un pequeo
volumen de Fraccin A precalentada. Dependiendo del nmero calculado de pajillas a
procesar, el eyaculado debe luego diluirse con ms Fraccin A hasta completar el 50% del
volumen de diluyente total a usar. La Fraccin A del diluyente debe tener la misma
temperatura del semen al momento de mezclarse (20-32C)

Enfriar el semen diluido lentamente durante un perodo mnimo de dos horas hasta llegar a
4C. Para realizar este paso, el recipiente con el semen diluido debe dejarse enfriar hasta
temperatura ambiente y luego se coloca en un refrigerador a 4C.

Nota: 300 ml de lquido con temperatura de 30 a 35C disminuyen su temperatura hasta 4C


en un perodo aproximado de 2 horas.

La segunda mitad del volumen total de diluyente corresponde a la Fraccin B que contiene
glicerol, la cual debe estar pre-enfriada a 4C. El volumen de Fraccin B se adiciona
gradualmente al semen ya extendido con Fraccin A durante un perodo de 30 minutos hasta
alcanzar una proporcin 1:1. El volumen final de semen completamente extendido contendr
una concentracin final de 7% de Glicerol.

El semen completamente diluido debe tener un perodo de equilibrio a 4C por un mnimo de


4 horas. Este tiempo puede ser usado para llenar y sellar las pajillas y ubicarlas sobre las
gradillas de congelacin y conteo e iniciar la curva de fro lenta.

El Protocolo Alternativo es un mtodo de un paso. Es el mtodo ms empleado en Europa.


Est aprobado para ser utilizado con Tris (hididroximetilamiometano) como amortiguador y
requiere la adicin de 20% de yema de huevo. El diluyente no est fraccionado y contiene 7%
de Glicerol ms antibiticos. El protocolo produce una concentracin de 100 g de Tilosina,
500 g de Gentamicina 300 g de Lincomicina y 600 g de Estreptomicina por cada ml de
semen diluido y congelado. Un ejemplo de diluyente comercial para este protocolo es el
Triladyl.

Triladyl

Tcnica de dilucin del semen.

Igualar la temperatura del diluyente con la temperatura del semen, ubicando ambos
componentes dentro de un bao mara a una temperatura de 28 a 32C, Los antibiticos
deben mantenerse a la misma temperatura.

Los antibiticos son adicionados cuidadosamente al semen puro en una proporcin de 0.02 ml
de la mezcla por cada ml de semen. Los antibiticos deben estar en contacto por 3 a 5 minutos
con el semen puro, antes de proseguir con la dilucin.

En un matraz o tubo de ensayo de 50 ml, se diluye inicialmente el semen con los antibiticos,
con un pequeo volumen de diluyente, en forma lenta.

Dependiendo del nmero de pajillas a procesar, prosiga la dilucin del semen hasta alcanzar el
volumen total de dilucin.

Enfriar lentamente el semen diluido durante un perodo mnimo de 2 horas hasta llegar a 4C y
contine el proceso como en el protocolo estandar (BARACALDO).

Durante la preparacin de los diluyentes se puede utilizar un agitador magntico para asegurar
su dilucin y mezcla. Despus del proceso de mezclado se puede o no filtrar el diluyente.

Una vez realizada la dilucin se contina con el marcado, llenado y sellado de las pajillas. Este
proceso puede efectuarse a temperatura ambiente o despus de entrar la dilucin del semen a
4C, de manera manual o computarizada. Actualmente se utilizan pajillas de 0.25 y 0.5 ml.
Impresora pajillas

Impresora de pajillas.

Despus del llenado, las pajillas se sellan manualmente con polvo de polivinilo, selladores
trmicos o por ultrasonido, esferas metlicas o de vidrio, dependiendo del equipo empleado.

Selladora

Selladora trmica manual.

Una vez empacado el semen, se debe llevar a cabo una curva de enfriamiento lenta, la cual se
inicia con la refrigeracin de equilibrio a 4C en un perodo de 4 horas. Luego se procede a la
congelacin del semen en pajillas mediante el sistema de vapor de nitrgeno lquido a -120 C,
colocando las gradillas con las pajillas a 4 cm sobre el nivel de nitrgeno, contenido en el
recipiente para tal efecto, mantenindose por al menos 10 minutos. Enseguida la gradillas se
introducen directamente en el nitrgeno lquido para ser conservadas a -180C o 196C.

El proceso de congelacin en Centrales de Reproduccin se efecta en equipos


computarizados. Con este sistema existe la opcin de congelar un nmero mnimo, hasta miles
de pajillas en un solo paso, en forma confiable y exacta. Las congelaciones computarizadas
ofrecen posibilidades ilimitadas para almacenar diferentes programas de congelacin,
utilizando tasas de congelacin desde 0.01 hasta 60C/minuto, con una exactitud mxima y en
rangos de temperatura desde +40C a -180C.

Despus del proceso de congelacin se trasfieren las pajillas a termos de almacenamiento con
nitrgeno lquido, usados para distribucin y comercializacin del semen congelado.

Es importante evaluar los lotes de pajillas luego de su descongelacin, para darles el visto
bueno y calificarlas como aptas para inseminacin o rechazarlas. En un prximo artculo
tratar el tema de la evaluacin del semen congelado.