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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Facultad de ingeniera ambiental

MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES
Tubos de ensayo X27
Mechero
Algodn
Asa en argolla o anillo
Agua destilada
Papel Kraft
Pabilo
Esptula
Pipetas
Pera de succin
Campana de Durham
Matraz de Erlenmeyer

Equipo electrnico:

Balanza
Auto Clave
Incubadora
Refrigeradora

Medios utilizados:

Caldo Lauril Sulfato


Caldo BRILA (Verde Brillante Bilis 2%)
Caldo Lactosado

Muestra:

Aj de FIEECS

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METODOLOGA
La muestra utilizada fue aj del restaurante de FIEECS
PREPARACIN DE LAS DILUCIONES
En 3 botellas con 90 ml de agua peptonada se preparan las diluciones de la siguiente
manera:
En una primera botella se aade una porcin de muestra (en este caso aj) de
aproximadamente 10ml. Esta 1 botella se rotula como 10-1 y se homogeniza agitando.
Con una pipeta estril se transfiere 10ml de la 1 dilucin a una 2 botella la cual ser
rotulada como 10-2, agitndose para homogenizar. Finalmente con otra pipeta estril
se repite la operacin de la segunda botella a una tercera rotulando esta ultima como
10-3

DETECCIN DE COLIFORMES TOTALES


Prueba presuntiva:
Se separan 9 tubos de ensayo con campanas de Durkham y Caldo Lauril
Sulfato, previamente preparado y se rotulan de 3 en 3 de acuerdo a las
diluciones de 10-1,10-2 y 10-3
Con una pipeta estril se transfiere 1ml de la dilucin a 10-3 a los tubos con
C.L.S rotulados con la misma dilucin.
Usando otra pipeta estril se transfiere 1ml de la dilucin a 10-2 a los tubos
rotulados igualmente.
Nuevamente se toma una pipeta estril y se transfiere 1ml de la dilucin a 10-1
a los tubos con C.L.S restantes.
Puestos todos los tubos en una gradilla pasan a la incubadora en un periodo
aproximado de 24h. De ah, se realiza la lectura, considerndose positivos los
tubos que presenten turbidez y formacin de gas en la campana de Durkham.
No se mostraron tubos negativos; por ello, no fue necesaria una resiembra en
C.L.S
Con los tubos positivos se realiza la lectura y pasan a la prueba confirmativa.

Prueba confirmativa:

Segn la cantidad de tubos positivos de la prueba presuntiva se separan tubos


de ensayos con campana de Durkham usndose esta vez el Caldo Lactosado
Verde Brillante Bilis 2% (Brila) como medio de cultivo.

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En los tubos con Caldo Brila se inocula una asada del los tubos con C.L.S,
previamente agitados suavemente para homogenizar los coliformes en el
medio. Para esta inoculacin se hace uso del Asa de Kol y el mechero.
Para no dar lecturas errneas segn se vayan inoculando los tubos Brila se
rotulan de acuerdo el tubo de donde proceden, indicando principalmente que
dilucin es su origen.
Inoculados y rotulados los tubos se colocan en una gradilla y pasan a la
incubadora por 24h aproximadamente.
Pasado el periodo de incubacin se realiza la lectura de la misma manera de la
prueba presuntiva.
Con la lectura realizada se registran los datos y se dan los resultados del NMP.

DETECCIN DE COLIFORMES FECALES


Para la deteccin de Colis fecales se hace un repicaje de los tubos Brila
positivos en tubos rotulados de Caldo Lactosado con campanas de Durkham.
A diferencia de las pruebas anteriores los tubos de C. Lactosado son cerrados
lo ms hermticos posibles y puestos en una gradilla son llevados a Bao
Mara a una T de 44,5 +/-0.5 por un periodo de 24h.
Transcurrido el tiempo necesario se realiza la lectura de los tubos positivos.
Estos son los que presentan cierta turbidez, pero ms que todo la formacin de
gas dentro de la campana de Durkham.
Registrados los datos, en este caso todos fueron positivos, se presentan como
resultados el NMP.

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RESULTADOS:
Muestra de Aj de FIEECS
TUBOS POSITIVOS

DILUCIN
MEDIO DE CULTIVO T

10-1 10-2 10-3

Caldo Lauril Sulfato 37 3 3 3

Caldo Brila 37 3 3 3

Caldo Lactosado 44.5 3 3 3

Coliformes totales NMP: 3-3-3 = 2400 X 102 NMP/ 100 ml

Coliformes fecales NMP: 3-3-3 = 2400 X 102 NMP/ 100 ml

Diluciones preparadas

TUBOS CON C.L.S

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TUBOS CON CALDO BRILA

10-1 10-2
10-3
TUBOS CON CALDO LACTOSADO

10-1 10-2
10-3

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RECOMENDACIONES:
Usar guantes y tapar la boca para evitar las contaminaciones.
Esterilizar el rea antes de iniciar el trabajo.
Rotular los tubos de ensayos usados en diferentes concentraciones del mismo
medio para evitar confusiones.
Realizar el proceso de sembrado cuidadosamente sin que toque con las
paredes del tubo de ensayo.
Observar cuidadosamente las muestras para no dar resultados errneos
Si se observa en un tubo de ensayo que no hay seales de coliformes,
entonces esperar 24 horas ms ya que esto evitara los falsos negativos.
Al salir del laboratorio lavar las manos con solucin antibacterial.