o que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio

en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente

sin algn tratamiento previo. De acuerdo a la reaccin que ocurre, existen
diferentes tipos de coloracin:

Simple:
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien
con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de
lactofenol).
El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de
hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por
ejemplo de la clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de las
paredes celulares de los hongos.
La tinta china o Nigrosina permite observar clulas levaduriformes
capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR. Los polisacridos
capsulares rechazan la tinta china y la cpsula aparece como un halo claro
alrededor de los microorganismos. Azul de metileno de Loeffler puede
agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia
de leucocitos.
En este tipo de coloracin el colorante utilizado sirve solo para denotar la
morfologa celular.

Dobles:
Esta se usa para colorear estructuras como por ejemplo: La tincin de
Schaeffer-Fulton es una tcnica diseada para diferenciar las endosporas
mediante la tincin de las endsporas presentes en verde, y cualquier otro
cuerpo bacteriano rojo. La mancha primaria es verde de la malaquita, y el
colorante es safranina, que tie cualquier otro cuerpo bacteriano rojo.
Diferencial:
Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se
diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con
su propia constitucin qumica.
 Los ejemplos clsicos seran la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen.
El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre clulas
bacterianas o entre partes de una misma clula, estas tcnicas utilizan ms
de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para la tincin.
Los colorantes ms usados son: azul de metileno, cristal violeta, safranina,
estos son catinicos y se combinan fuertemente con componentes celulares
cargados negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos
cidos.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes
de teirlas, proceso conocido como fijacin. Despus de esta habitualmente
se realiza la tincin. La fijacin produce generalmente encogimiento de las
clulas, la tincin por el contrario, hace que las clulas parezcan mayores de
lo que son realmente.

I. PROCEDIMIENTOS
Pasos para una coloracin
1. Extensin o frotis
2. Fijar la muestra
3. Realizar la tincin
4. Lavar
5. Secar
6. Muestra lista para observar
COLORACIN DE GRAM

1. Previa extensin y fijacin de la muestra, cubrirla con la solucin fenicada

de violeta de genciana o cristal violeta.
 Tiempo: de 30 a 60 segundos, aproximadamente.

2. Lavar con agua

3. Cubrir con lugol y dejar actuar de 2 a 3 minutos.

4. Lavar

5. Decolorar con alcohol, solo o con alcohol-acetona hasta que ya no se

desprenda ms colorante de la lmina, luego lavar

6. Contrastar con safranina.

7. Lavar, secar y observar a inmersin.
II. RESULTADOS
III. DISCUSIN DE RESULTADOS
Luego de los diferentes procedimientos de coloracin llevamos la muestra al

microscopio y obtuvimos los siguientes resultados en el que pudimos

diferenciar grupos de bacterias Gram positivas y gran negativas adems de

hongos esto debido a un error de principiantes que al momento de la

extensin no se hizo de una sola colonia sino que con el asa recogimos de

diferentes colonias o ms claro de toda la superficie del medio de cultivo.

Adems en la tincin de Gram pudimos notar:

IV. CONCLUSIONES
En esta prctica reconocimos los principales procedimientos para
realizar una coloracin.
La tincin de Gram es una tcnica de coloracin que sirve para
reconocer bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Las bacterias Gram positivas quedaron de color violeta
Las bacterias Gram negativas de color rojo

V. BIBLIOGRAFIA
Brock et al. Biologa de los microorganismos. 12 Edicin. Madrid.
Pearson: Adisson Wesley. 2009.
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/observacion-microscopica/fijacion Consultada el 26
de Enero de 2015.
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. Microbiology.
10th Edition. Pearson Education. 2010.
http://www.bacteriainphotos.com/ Consultada el 26 de Enero de 2015.