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INTRODUCCIN

La velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas es estudiada por la cintica


enzimtica. Existen estudios que proporcionan informacin directa acerca del mecanismo
Problemas T [C] Absorbancia[ 540nm] Azcar Reductor[mol] Velocidad
P1 0C 0.043 0.08130081 0.00813008
P2 25C 0.245 2.26480836 0.22648084
P3 37C 0.746 8.08362369 0.80836237
P4 50C 0.63 6.73635308 0.67363531
P5 75C 0.144 1.09175377 0.10917538
P6 92C 0 0.58072009 0.05807201
de la reaccin cataltica y de la especificidad de la enzima. Para conocer a fondo el
mecanismo de reaccin de una enzima, es necesario estudiar la velocidad y la dinmica
de la misma, a su vez, esto nos permite conocer el rol que cumple en el metabolismo, as
como la regulacin de su actividad por inhibidores naturales, frmacos, venenos y
cualquier otro tipo de sustancias.

Las dos propiedades de mayor importancia en la cintica enzimtica son:

Tiempo que tarda una enzima a llegar a su punto de saturacin


Velocidad mxima que puede alcanzar la reaccin catalizada por la enzima

La velocidad de una reaccin enzimtica puede medirse experimentalmente, al no


consumirse la enzima en el proceso de catlisis de la reaccin, se suele medir la
disminucin de concentracin de sustrato en el tiempo, as como el aumento de la
concentracin del producto.

La velocidad de una reaccin enzimtica puede verse afectada por los siguientes factores:

Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin


Efecto del pH sobre la velocidad de reaccin
Efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de reaccin
Efecto de inhibidores sobre la velocidad de reaccin
OBJETIVOS

TEMPERATURA
o Observar cmo la temperatura afecta las reacciones enzimticas
o Calcular el valor de la energa de activacin de la reaccin catalizada por la
invertasa

pH
o Determinar el efecto del pH sobre la velocidad de la reaccin catalizada
o Identificar el pH ptimo de la enzima

CONCENTRACIN DEL SUSTRATO


o Observar el efecto de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de la
reaccin enzimtica

INHIBIDORES
o Determinar el tipo de inhibicin producido por una sustancia sobre la
actividad cataltica
RESULTADOS

Tabla 1 : Efecto de la temperatura (tubos problema)

Grafico 1: Vo vs Temperatura

Vo
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100
T

[] [2.26480836]
Clculo de Vo: =
10
ejemplo = = 0.22648084
10
Tabla 2: Efecto de la temperatura lineal

T[C] Vo T K 1/T ln Vo
10 0.127 283.15 0.00353 -2.0636
12 0.1672 285.15 0.00351 -1.7886
15 0.2275 288.15 0.00347 -1.4806
20 0.328 293.15 0.00341 -1.1147
25 0.22648084 298.15 0.00335 -1.4851
30 0.529 303.15 0.0033 -0.6368
32 0.5692 305.15 0.00328 -0.5635
34 0.6094 307.15 0.00326 -0.4953
35 0.6295 308.15 0.00325 -0.4628
37 0.80836237 310.15 0.00322 -0.2127

Grafica 2: LnVo vs 1/T

0 1/T
0.0032 0.0033 0.0034 0.0035 0.0036
-0.5

-1
LnVo

-1.5

-2
y = -5336.4x + 16.887
R = 0.9135
-2.5
De la ecuacin del grafico la pendiente m= -Ea/R despejando a Ea=-mR

m=-5336.4 Ea=-(-5336.4)(1.987cal/mol k)=10603.4268 cal/mol

R=1.987 cal/mol k

Discusin

Se observ experimentalmente que al inicio con el crecimiento de la temperatura se ve


favorecida la actividad enzimtica, esto se verifica con los valores de velocidad obtenidos
a raz de la absorbancia. Pero sobrepasando el punto de temperatura donde se registra la
velocidad mxima, la actividad enzimtica y por lo tanto la velocidad comienza a decaer
debido a la desnaturalizacin de la enzima, a medida que se sigue aumentando la
temperatura llega el punto donde l actividad enzimtica es nula.

Se obtuvo grficamente el valor de temperatura ptima experimental que fue de 37C lo


que no corresponde al valor que nos presenta a bibliografa de 55C para la Invertasa, el
error se gener al no tener un buen control de tiempo de reaccin enzimtica ya que se le
dio mayor tiempo para reaccionar al problema de esta temperatura antes de detener la
racin.

Conclusin

A medida que aumenta la temperatura, la velocidad enzimtica es mayor, sin embargo


existe un punto lmite, el cual, de ser sobrepasado puede tener consecuencias que
afecten a la enzima al grado de desnaturalizarla y por tanto puede perder su actividad. La
temperatura ptima es en la que la enzima trabaja mejor produciendo una mayor cantidad
de producto.

Tabla 3: Efecto del pH en la velocidad de reaccin enzimtica

pH Absorbancia Azcar Reductor Velocidad(UI)


[ 540nm] [mol]
P1 4.5 0.196 1.6957 0.16957
P2 5.0 0.212 2.62485 0.26249
P3 5.5 0.276 1.88153 0.18815
P4 7.5 0.044 -0.0697 -0.007

Grafica 3: Vo vs pH

0.3

0.25

0.2
Vo

0.15

0.1

0.05

0
4.5 5 5.5 7.5
-0.05
pH
Discusin

Cuando la concentracin de iones hidrogeno es muy baja en comparacin con la


concentracin optima, la molcula los cede desapareciendo cargas positivas o
apareciendo cargas negativas en su superficie. Ante una concentracin elevada de iones
hidrogeno, algunos se fijan a la molcula desapareciendo cargas (-) o poniendo cargas (+)
que no existan.

Los resultados arrojaron un pH ptimo con valor de 5 que corresponde al encontrado en la


bibliografa para Invertasa.

Conclusin

Como en los efectos registrados por la temperatura en el pH se pude alterar o favorecer la


actividad enzimtica. Esto se debe a que cuando pH tiene tendencias alcalinas, la enzima
muestra una disminucin de la actividad. Caso contrario se observa que a pH acido ya
que la enzima se vio favorecida en su actividad ya que el ptimo se encontr en pH=5.

Tabla 4. Concentracin de la enzima

Conc. de Absorbancia Azcar Velocidad


Enzima Reductor
Testigo 0.5 0 -0.58072009 -0.05807201
P1 0.1 0.104 0.6271777 0.06271777
P2 0.2 0.179 1.49825784 0.14982578
P3 0.3 0.197 1.70731707 0.17073171
P4 0.4 0.352 3.50754936 0.35075494
P5 0.5 0.314 3.06620209 0.30662021

Tabla 5: Efecto de concentracin de sustrato

Problemas Absorbancia[ A.R Velocidad 1/Vo [s] 1/[s]


540nm] [mol] [UI]

P1 0.769 8.3508 0.83508 1.19749006 0.01 100

P2 0.979 10.7666 1.07666 0.92879832 0.02 50

P3 1.227 13.6702 1.36702 0.73151819 0.03 33.3333333

P4 1.555 17.4797 1.74797 0.5720922 0.04 25

P5 1.526 17.5609 1.75609 0.5694469 0.06 16.6666667

P6 1.459 16.3647 1.63647 0.61107139 0.1 10


Clculos
[] [8.3508]
= 10
Ejemplo = 10
= 0.83508

Concentracin de Sustrato

C1V1=C2V2 Si se adiciono 0.1ml de Sacarosa 0.2M y se llev a un volumen de 2 ml


(0.2)(0.1)
2
= 0.01

Tabla 6: Efecto inhibidores

Problemas Absorbancia[ A.R[mol] Velocidad[UI] 1/Vo [s] 1/[s]


540nm]

P1 0.485 5.0522 0.50522 1.97933573 0.01 100

P2 0.781 8.4901 0.84901 1.17784243 0.02 50

P3 1.12 12.4274 1.24274 0.80467354 0.03 33.3333333

P4 1.14 12.6597 1.26597 0.78990813 0.04 25

P5 1.477 16.5737 1.65737 0.60336557 0.06 16.6666667

P6 1.324 14.7967 1.47967 0.67582637 0.1 10

Grfica: Vo vs [S]

2 Sustrato
1.8
Inhibidor
1.6
1.4
1.2
Vo

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
[s]
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12
Grfica: 1/Vo vs 1/[s]

2.5 sustrato

y = 0.0155x + 0.397 Inhibidor


2 Linear (sustrato )
Linear (Inhibidor)
1.5
y = 0.0074x + 0.4795
1/Vo

0.5

1/[s]
0
0 50 100 150

1 1 1
Calculamos Km a partir de la ecuacin del grafico
= + []


Donde m= Para el sustrato solo se obtuvo una Vmax= 1.75609 despejando a

km=m*Vmax

Km=(0.0155)(1.75609)=0.02722

Para la presencia de inhibidor obtuvimos una Vmax=1.65737 despejando a km=m*Vmax

Km=( 0.0074)( 1.65737)=0.012265

Discusin

En las grficas se puede observar que mientras mayor sea la cantidad de sustrato en
este caso sacarosa aumenta la velocidad de reaccin por efecto de la actividad cataltica,
hasta llegar a un punto donde aunque se adicione ms sustrato la velocidad no
aumentara, debido a que toda la enzima se encuentra transformando sustrato.

La lnea de tendencia marca como la presencia de un inhibidor disminuye la velocidad de


la reaccin, esto se ve reflejado en la produccin de menores cantidades de AR en la
prctica.
Las velocidades mximas de reaccin en comparacin fueron sin inhibidor 1.75609 UI y
con inhibidor 1.65737UI.

Conclusin

El efecto inhibidor redice la actividad enzimtica por lo tanto se obtienen velocidades de


produccin menores a las obtenidas sin presencia del mismo.

Se observa que se tienen un inhibidor de tipo no competitivo debido a que este no


compite con el sitio activo de la enzima y no afecta de manera drstica su accin
enzimtica.

BIBIOGRAFA

Pea Daz, Antonio. Bioqumica. Editorial Limusa NORIEGA. Pg 194-200


Izquierdo, Jos Felipe. Cintica de las reacciones qumicas. Ediciones Universidad
de Barcelona. Pg 269-275