Fraccionamiento

Subcelular
Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos
etapas:
- ruptura de las clulas o tejidos( homogenizacin del tejido)
- separacin de la fraccin deseada por centrifugacin
 Tcnicas de
HOMOGENIZACIN
Mtodos mecnicos:
- Sonicacin
- Pasar las clulas por orificios provocando su ruptura.
- Homogenizadores(mortero,juguera,homogenizador de
pistn)
Mtodos qumicos:
- Detergentes
Homogeneizacin

Objetivo: romper la membrana plsmica liberando los organelos

en suspensin con un mnimo dao funcional y estructural

Medios mecnicos:
Morteros con y sin abrasivos (tej. Vegetales)
Homogenizadores tipo Potter (tej. Animales)
Homogenizadores tipo Dounce
Homogenizadores de alta velocidad

Tratamientos enzimticos previos en algunos

casos (aorta, msculo, algunos tumores)

Elastasa
Colagenasa
Hialuronidasa
Medio de suspensin

Baja viscosidad
Proteccin osmtica
Preservacin de la membrana
Prevencin de aglutinacin
Prevencin de adsorciones

Sacarosa
Glucosa
Manitol
polialcoholes
Centrifugacin
Esquema de una Ultracentrfuga
Centrifugacin Diferencial
CENTRIFUGACION DIFERENCIAL

Fracciones Contenido g*min

600*10mi
N ncleos n
3000*10
M mitocondrias min
25000*
L lisosomas 10min

microsomas y 100000*
P membrana 30min
fraccin
S soluble
Centrifugacin en Gradiente de Densidad
(ISOPCNICA)

Permite la separacin de
la gran mayora de los
componentes celulares.

Densidad mayor en el
fondo del tubo.

Los ms utilizados:
Sacarosa
Percoll
Metrizamida
CsCl (muy corrosivo,rotor
de titanio)
Uso de marcadores especficos.

Se utilizan para evaluar la separacin por

fraccionamiento subcelular.

Se basa en el uso de substratos para las

enzimas caractersticas de cada organelo.
Malato dehydrogenasa
Sulfito citocromo c
reductasa

Monoamino oxidasa

Citocromo c oxidasa

N-acetil b-glucosaminidase
Lisosomas Fosfatasa cida

Catalasa
Acyl-CoA oxidasa

NADPH citocromo c reductasa

Glucosa 6 fosfatasa

RE - microsomas
Aplicaciones en Biologa celular.
Esta tcnica ha sido ampliamente utilizada en biologa
celular, por tanto, posee variadas aplicaciones:
Identificacin y caracterizacin de organelos.
Entrega informacin acerca de la organizacin estructural
y funcional de la clula.
Reconocimiento de protenas.
Localizacin de actividades enzimticas.
Permite entender funcionamiento de la clula gracias al
estudio de sus partes.