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1. OBJETIVO
2. ALCANCE DE LA APLICACIN
2.2. Los Aroclores son mezclas de varios congneres de PCB. Cuando las muestras
contienen ms de un Aroclor, es necesario que el anlisis se realice por un analista
experimentado, para lograr niveles aceptables tanto cualitativos como cuantitativos,
teniendo en consideracin que los Aroclores se degradan por exposicin por largo tiempo
a determinadas condiciones ambientales envejecimiento o por tratamientos tecnolgicos,
generando seales que pueden presentar diferencias significativas respecto a los perfiles
de los patrones de los picos de los Arocloros empleados como estndares.
DETERMINACIN DE BIFENILOS POLICLORADOS Cdigo: M2-SAPc-03
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Los aroclores de la lista en la seccin 2.1, son los comnmente especificados en las
regulaciones de la US EPA. La cuantificacin de PCB como aroclores es apropiada para
algunas regulaciones, sin embargo, presenta dificultad cuando los aroclores han estado
expuestos en el medio ambiente por largo tiempo.
2.4. Realizar el anlisis de PCB por congneres proporciona una mayor precisin en la
cuantificacin, cuando se conoce que los PCB estn presentes. Como resultado, este
mtodo puede ser usado para determinar Aroclores, algunos congneres de PCB o PCB
totales, dependiendo de los regulaciones o necesidades de cada anlisis. El mtodo de
los congneres es de especial valor en la determinacin de Aroclores degradados. Este
mtodo no es apropiado para la determinacin de los congneres coplanares en los
niveles de partes por trilln.
2.5. La identificacin de los compuestos se basa en el anlisis por una sola columna
que debe ser confirmada en una segunda columna. Este mtodo describe las condiciones
analticas para una segunda columna cromatogrfica que puede ser utilizada para
confirmar las medidas hechas con la primera columna. Se recomienda tambin el mtodo
USEPA 8270 GC/MS (Cromatografa de gas con espectrmetro de masas) como una
tcnica confirmatoria, si la sensibilidad lo permite.
2.6. Este mtodo incluye la opcin de anlisis en doble columna. La opcin permite una
configuracin del equipo de dos columnas analticas unidas a un nico puerto de
inyeccin. La opcin permite que una sola inyeccin sea utilizada para el anlisis en las
dos columnas. El analista debe tener la precaucin que la opcin de dos columnas (dual
columna) puede no ser la apropiada cuando el instrumento sufre stress mecnico o
cuando muchas muestras fueron inyectadas en un periodo corto, o cuando son analizadas
muestras contaminadas.
y la calibracin del instrumento debe establecerse para cada clase de matriz analtica (Ej.
Solucin de Hexano a partir de extractos de muestras, muestras disueltas en aceite, etc.).
2.8. Este mtodo debe ser utilizado bajo la supervisin de un analista experimentado
en el uso del cromatgrafo de gas (GC) y hbil en la interpretacin de cromatogramas.
Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este
mtodo.
3. FUNDAMENTO TERICO
Diferentes ismeros de PCB con el mismo nmero de cloros pueden dar una respuesta
diferente en el detector. Las mezclas que contienen una misma cantidad de PCB pero
diferentes fracciones de ismeros, puede dar diferentes cromatogramas, por lo que esta
tcnica es efectiva slo cuando los estndares y los especmenes de prueba presentan
una correspondencia entre s. Los Aroclores son estndares adecuados, ya que estos son
las mezclas que se encuentran con mayor frecuencia en lquidos aislantes, entre las que
se destacan los aroclores 1242, 1254 y 1260.
partculas cargadas negativamente colisionan con las molculas del gas portador
produciendo ms electrones de alta energa.
Los electrones formados por este proceso establecen una corriente estacionaria entre el
nodo y el ctodo. Se aplica una diferencia de potencial entre 20 y 100 V de corriente
directa. Cuando un analito electronegativo eluye captura algunos de los electrones del
fondo lo cual produce una reduccin de corriente estacionaria.
Los iones del analito negativos que se mueven lentamente no son colectados por el
nodo. La extensin de la absorcin de electrones, y la reduccin de la corriente, es
proporcional a la concentracin del analito.
En general las muestras slidas son extradas con acetona/hexano (1:1) o cloruro de
metileno/acetona (1:1) utilizando el mtodo de extraccin por ultrasonido (Mtodo USEPA
3550), soxhlet (Mtodo USEPA 3540 y 3541), Microondas (Mtodo USEPA 3546) u otra
tcnica apropiada.
Pueden ser aplicados al extracto una gran variedad de pasos de limpieza, dependiendo
de su naturaleza o de las interferencias de la matriz y del analito de inters. Las
interferencias en los extractos son eliminadas usando el mtodo de limpieza con cido
sulfrico/permanganato (Mtodo US EPA 3660 y 3665 A) o limpieza con florisil (Mtodo
USEPA 3546).
NOTA: Un estndar de los anlogos del DDT debe ser inyectado para determinar
cul de los picos de los PCB o Aroclor puede ser sujeta a interferencias en las
columnas analticas utilizadas. El DDT puede interferir con el ltimo pico del
Aroclor 1254 en algunas muestras de suelo y sedimentos.
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3.3.4. Coelucin de los analitos relacionados, no todos los 209 congeneres de PCB
pueden ser separados con las columnas de GC y el procedimiento descrito en
este mtodo. Si este procedimiento se amplia para abarcar otros congneres,
el analista deber documentar la resolucin obtenida para estos congneres y
establecer procedimientos para la presentacin de informes de resultados.
Tener en cuenta que dependiendo del origen de las muestras, se pueden presentar
interferencias por efecto de matriz. Las interferencias de matriz pueden variar
dependiendo de la fuente de las muestras y su diversidad y ocurren por la coextraccin de
contaminantes contenidos en ella.
Cada compuesto manipulado debe ser considerado como potencialmente peligroso para
la salud y se debe minimizar la exposicin.
5. EQUIPOS
Este mtodo describe los procedimientos para anlisis por sistemas de una y dos
columnas (dual). El mtodo de una sola columna involucra un anlisis para determinar
que un compuesto que est presente, seguido por un segundo anlisis para confirmar la
identidad del compuesto. La tcnica de una sola columna pueden emplear columnas de
dimetro pequeo (0,32 mm ID) o columnas de dimetro grande (0,53 mm ID). El
sistema de dos columnas involucra una sola inyeccin que es dividida en dos (2)
columnas que son montadas en un mismo cromatgrafo de gas. La tcnica de dos
columnas nicamente utiliza columnas de gran dimetro (0,53 mm ID).
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Las columnas listadas en esta seccin son las columnas utilizadas para desarrollar el
mtodo y obtener los resultados. La mencin de estas columnas en este mtodo no
excluye el uso de otras columnas que puedan ser utilizadas (encontradas en el mercado o
desarrolladas en el laboratorio). El laboratorio puede utilizar columnas documentando los
datos de rendimiento (Ej. Resolucin cromatogrfica, lmites de deteccin) que sean
iguales o excedan a los rendimientos descritos en este mtodo, o como apropiadas para
el propsito de la aplicacin.
Las columnas de dimetro pequeo para anlisis con una sola columna se listan a
continuacin (use ambas columnas para confirmar los compuestos identificados a menos
que sea empleada otra tcnica de identificacin como GC/MS)
5.2.1 Columna capilar, Fase metilpolisiloxano (DB-1), dimetro interno 0.32 mm,
longitud 30 m, espesor de pelcula 1.0 m.
5.2.2 Capilar, Fase slica fundida 95% dimetil 5% fenilpolisiloxano (DB-5) o
equivalente, longitud 30 m, dimetro interno 0,25 mm, espesor de pelcula de
0,25 m.
5.2.3 Columna capilar, Fase Mezcla 1:1 dimetil silicona y polietilenglicol (Durawax-
DX3), dimetro interno 0.32 mm, longitud 30 m, espesor de pelcula 0.25m.
El par 1 de columnas debe ser montado con la presin adecuada en una unin
divisora de vidrio de tres vas en forma de Y (J&W Scientific, Catalog N. 705-
0733) o un conector de slica fundida en forma de Y (Restek, Catalog No.
20405), o equivalente.
6. REACTIVOS
Utilice reactivos grado pesticida en todos los procedimientos, salvo se indique lo contrario.
Se entiende que todos los reactivos deben cumplir con las especificaciones del comit de
reactivos analticos de la Sociedad Americana de Qumica, para los reactivos que cuenten
con tales especificaciones. Otros grados de reactivos pueden ser usados evaluando
primero que el grado de pureza del reactivo es lo suficientemente alto para permitir su uso
sin disminuir la exactitud de la determinacin.
NOTA: Almacene las soluciones estndar (estndares stock, mixtos, calibracin, interno,
y surrogates) a 4 C en un contenedor, sellados con tapas de tefln (PTFE), protegido de
la luz. Cuando el estndar es preparado, se recomienda que las alcuotas sean
almacenadas individualmente en pequeos viales. Todas las otras soluciones estndar
deben ser reemplazadas despus de seis (6) meses o cuando los ensayos control de
calidad de rutina indiquen algn problema
6.1. Solventes
Intercambie a n-Hexano o Isooctano antes del anlisis, los solventes utilizados en los
procedimientos de extraccin y limpieza incluyen n-Hexano, Dietilter, Cloruro de
Metileno, Acetona, Acetato de Etilo, e Isooctano (2,2,4-trimetilpentano). Se pueden
requerir Acetona o Tolueno para la preparacin de algunas soluciones estndar.
Cada casa fabricante posee sus propios nombres para los diferentes tipos de grados
de pureza. Lo ms importante, es demostrar que los solventes utilizados no
interfieren de ninguna forma con el anlisis ya sean de la calidad sugerida o de una
superior.
Cada uno de los solventes debe ser analizado para demostrar estar libre de Ftalatos.
Todas las referencias de agua en este mtodo se refieren a Agua reactivo libre de
compuestos orgnicos.
Pueden ser preparadas a partir de materiales estndar puros o pueden ser compradas
como soluciones certificadas.
6.3.1. Para preparar las soluciones estndar stock pese exactamente cerca de
0,0100 g de compuesto puro. Disuelva el compuesto en Isooctano o Hexano
y diluya a volumen en un matraz volumtrico de 10 mL. Si la pureza del
compuesto es del 96% o mayor, el peso puede ser utilizado sin la correccin
del clculo de la concentracin de la solucin estndar stock.
6.3.3. Transfiera la solucin estndar a un vial mbar de vidrio con tapa cubierta
interna y almacene a temperatura de 4C y protegida de la luz. Estas
soluciones deben reemplazarse despus de 6 meses o en el momento en
que los resultados de comparacin con los blancos fortificados o las
muestras de control indiquen que presentan problemas.
Un estndar que contiene una mezcla de aroclor 1016 y aroclor 1260 incluye muchos
de los picos representativos de las cinco mezclas de aroclor. Inicialmente la calibracin
inicial de mltiples puntos empleando una mezcla de estos aroclor a 5 concentraciones
debe ser suficiente para demostrar la linealidad de la respuesta del detector sin la
necesidad de realizar calibraciones iniciales de mltiples puntos para cada uno de los
siete aroclores. Adems, esta mezcla se puede utilizar como un estndar para demostrar
que una muestra no contiene picos que puedan representar uno de los aroclores. Este
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Los estndares individuales de cada uno de los otros cinco aroclores servirn de ayuda
para los analistas en el reconocimiento del perfil de los patrones. Suponiendo que los
aroclores 1016/1260 se han utilizado para demostrar la linealidad del detector, los cinco
estndares restantes de aroclores tambin puede ser usada para determinar el factor de
calibracin para cada aroclor cuando se utiliza un modelo de regresin lineal. Preparar un
estndar de cada uno de los otros aroclores. Las concentraciones deben generalmente
corresponden a el punto medio del rango lineal del detector.
Si los resultados se determinan para los distintos congneres de PCB, los estndares se
pueden preparar desde los 19 congneres listados en la seccin 2.1. Este procedimiento
puede ser apropiado para otros congneres, pero el analista debe documentar la
resolucin de los congneres para informar de los resultados de coelucin.
Los estndares de los congneres se pueden preparar de manera similar a los aroclores,
o pueden ser comprados como soluciones certificadas. Prepare los estndares de
calibracin con un mnimo de cinco (5) concentraciones diferentes por dilucin del
estndar stock con Hexano o Iso-octano. Las concentraciones deben corresponder al
rango de concentraciones encontradas en muestras reales y en el rango lineal del
detector.
Cuando los PCB se han de determinar cmo aroclores, el estndar interno normalmente
no se utiliza y el decaclorobifenil se emplea como estndar de surrogate.
El rendimiento del mtodo debe ser monitoreado utilizando compuestos surrogate. Los
estndares surrogate son adicionados a todas las muestras, blanco de mtodo, adiciones
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Cuando los PCB se han de determinar como aroclores, el decaclorobifenil puede ser
utilizado como un surrogate, y se aade a cada muestra antes de la extraccin. La
concentracin de la solucin recomendada es de 5.0 mg/L en acetona, el tetracloro-m-
xileno tambin puede ser utilizado como surrogate para el anlisis de aroclores.
Transfiera las soluciones estndares a un vial mbar de vidrio con tapa cubierta interna y
almacene a temperatura de 4C y protegida de la luz. Estas soluciones deben
reemplazarse despus de 2 meses o en el momento en que los resultados de
comparacin con los blancos fortificados o las muestras de control indiquen que presentan
problemas.
7. MATERIALES E INSUMOS
7.1 Mortero
7.2 Micropipetas con puntas desechables de tefln.
7.3 Pipetas Pasteur.
7.4 Papel de aluminio.
7.5 Marcadores vidriograf.
7.6 Pipeteador de caucho.
7.7 Balones aforados de vidrio clase A, con tapa esmerilada.
7.8 Viales mbar, con tapa rosca plstica y con septa de tefln / goma roja de 2 mL.
7.9 Papel absorbente.
7.10 Frascos de vidrio mbar con tapa rosca para residuos de solventes.
7.11 Frasco para residuos de PCB.
7.12 Viales transparentes de 20 y 50 mL, con tapa plstica y septa de tefln.
7.13 Jeringas analticas (10 L, 100 L y 1000 L)
Nota: Todos los viales utilizados para el anlisis deben ser nuevos, o en su defecto,
previamente lavados y sometidos a tratamiento trmico en un horno. Las septas deben
ser nuevas. Una vez este tipo de insumos se utilizan para el anlisis de PCB en aceites
deben descartarse de manera adecuada segn las disposiciones de los entes reguladores
competentes.
9. LIMPIEZA DE MATERIAL
9.1. Enjuague todo material de vidrio con el ltimo solvente utilizado tan pronto como
sea posible.
9.2. Lave con agua del grifo y detergente neutro; enjuague con agua del suministro y
agua destilada, en este orden.
9.3. Escurra el agua.
9.4. Enjuague todo el recipiente con acetona y deje secar
9.5. Coloque el material en una mufla o estufa que alcance 400C (A excepcin del
material volumtrico)
9.6. Dejar enfriar el material
9.7. Tapar el material con papel de aluminio o invierta y almacene en un ambiente
limpio para prevenir la acumulacin de polvo u otros contaminantes
Cada uno de los Aroclores debe calibrarse previamente, realizando curvas en solvente,
para este efecto se diluye en solvente cada estndar de cada Aroclor, partiendo de las
soluciones descritas en la seccin 6.3. Una vez se ha logrado una solucin de trabajo
confiable, deben realizarse diluciones de la misma a por lo menos 5 puntos diferentes de
concentracin y en un rango que incluya los niveles de concentracin de mayor
importancia en el anlisis. Una vez los estndares se han inyectado se obtienen los
perfiles caractersticos para cada Aroclor. Este perfil caracterstico permite identificar
cualitativamente que Aroclor est presente en las muestras; adems, deben escogerse los
picos ms representativos del perfil; es decir, aquellos con mayor rea, resolucin, mejor
simetra y que slo pertenezcan al Aroclor en cuestin; para realizar curvas de calibracin
externa con cada uno de estos picos de modo que cada Aroclor tenga, como mnimo tres
picos de cuantificacin, cada uno con su respectiva curva de calibracin.
Despus de identificar el tipo de Aroclor, este se cuantifica por medio de los picos
caractersticos escogidos. Cada pico tendr una concentracin caracterstica. Esta se
calcula de la siguiente manera.
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Donde:
: concentracin de PCB (en mgAroclor/Lsolucin).
: rea del pico.
: pendiente (obtenida de la regresin lineal).
: intercepto (obtenido de la regresin lineal).
La regresin lineal puede corresponder a una calibracin externa o a una calibracin por
estndar interno. Dependiendo del tipo de calibracin la frmula que define la pendiente
vara. Este mtodo es aplicable a la cuantificacin de PCB como Aroclores o como
congneres.
Donde:
: concentracin de PCB en la muestra (en mgAroclor/Lsolucin).
: rea del pico en la muestra.
: rea del estndar interno en la muestra.
: rea del pico en el estndar.
: rea del estndar interno en el estndar.
: concentracin de PCB en el estndar (en mgAroclor/Lsolucin).
Vf
PCBT C PCB
ms
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Donde:
: concentracin total de PCB en el suelo o sedimento (mgAroclor/kgSuelo/sedimento).
: concentracin de PCB (en mgAroclor/Lsolucin).
Vf: Volumen final de aforo del extracto (Lsolucin).
ms: Masa inicial de muestra (en Kgmuestra).
Es importante resaltar que la es una aproximacin del contenido real de PCB. Para
que sea verosmil, el perfil de la muestra debe coincidir satisfactoriamente con el de un
Aroclor nicamente. Para mezclas de Aroclores o perfiles irreconocibles es indispensable
realizar la cuantificacin por congneres individuales, procedimiento que no se cubre en
este protocolo.
Donde:
: Concentracin total de PCB en el aceite (mgAroclor/kgsuelo/sedimento).
: Concentracin de cada congnere individual (en mgAroclor/Lsolucin).
Vf: Volumen final de aforo del extracto (Lsolucin).
ms: Masa inicial de muestra (en Kgmuestra).
Cada laboratorio debe demostrar ser competente para llevar a cabo el anlisis de PCB.
Esto implica competencia en el mtodo de preparacin de la muestra y la tcnica de
determinacin utilizada, generando datos aceptables de exactitud y precisin para el
analito de inters en una matriz sin interferentes. El laboratorio debe verificar la validez de
sus figuras de mrito cada vez que se realice un cambio de personal o se realicen
cambios en los equipos.
Para demostrar la capacidad inicial del laboratorio se debe determinar las figuras de
mrito de la metodologa de anlisis (linealidad y rango de trabajo, porcentaje de
recuperacin, la desviacin estndar relativa y el lmite de deteccin para cada Aroclor); a
partir de los datos obtenidos en el proceso de validacin. Las figuras de mrito que se
obtengan con este mtodo dependen del tratamiento de la muestra y su efecto matriz.
Cada laboratorio est en capacidad de escoger los criterios de aceptacin regulados que
utilizar para sus figuras de mrito.
El anlisis de las muestras se realiza por secuencias. Cada secuencia de anlisis contiene
un mximo 20 muestras, adems del control analtico que consiste en un blanco de
reactivos (inyectado como chequeo para confirmar la ausencia de contaminacin
cruzada), blanco de muestra, la muestra de control de laboratorio, una rplica de muestra
y una muestra enriquecida con el analito. La recuperacin de los analitos en la muestra
enriquecida debe ser determinada y comparada con los lmites de control establecidos por
el laboratorio.
Si la calibracin se realiza utilizando un estndar interno, ste debe evaluarse para ser
aceptado. La medida del rea del estndar interno no debe superar el 50% de rea del
promedio calculado en la calibracin. Cuando el rea del estndar interno esta fuera de
los lmites, el laboratorio debe verificar la metodologa y efectuar las medidas necesarias
para mantener la validez de su mtodo.
15. BIBLIOGRAFA