RT- PCR

La reaccin en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en ingls son PCR ("polymerase chain
reaction"), es una tcnica que fue desarrollada por Kary Mullis a mediados de los aos 80. Con
esta metodologa se pueden producir en el laboratorio mltiples copias de un fragmento de ADN
especfico, incluso en presencia de millones de otras molculas de ADN.Se basa en la actividad
de la enzima ADN polimerasa que es capaz de fabricar una cadena de ADN complementaria a
otra ya existente. Sus nicos requerimientos son que existan nucletidos en el medio que son la
materia base para fabricar el ADN (los nucletidos de adenina, timina, citosina y guanina), y una
pequea cadena de ADN que pueda unirse a la molcula que queremos copiar para que sirva como
cebadora (el cebador, en ingls "primer"). (Rodriguez, 2006)

La clave en la PCR cuantitativa es la posibilidad de detectar en tiempo real la amplificacin de

nuestro genoma de inters. Para llevar a cabo esta deteccin existen varios mtodos pero casi
todos basados en la utilizacin de otro fragmento de ADN (sonda) complementario a una parte
intermedia del ADN que queremos amplificar (CUTLEK, s.f.)

En la PCR en tiempo real se emplean sondas marcadas con fluorocromos. Las sondas de hidrlisis,
frecuentemente empleadas en esta tcnica, son oligonucletidos que presentan fluorocromos en
ambos extremos y tienen una secuencia complementaria a parte del fragmento de ADN que se quiere
amplificar. En general para que sea vlida esta tcnica requiere realizar en paralelo una curva
patrn en las mismas condiciones para conocer la cantidad total de ADN que se est amplificando.
(Medicina Molecular, 2007)

Consideraciones generales

Debido a la elevada sensibilidad de la tcnica, uno de los puntos ms importantes a la hora de

realizar una PCR en Tiempo Real, es la calidad del material de partida. Por ello, la extraccin de
los cidos nucleicos de la muestra toma un papel crtico y fundamental. Aunque en los ltimos
aos se han hecho grandes progresos en la simplificacin de la extraccin y purificacin de los
cidos nucleicos bacterianos y virales de muestras clnicas, todava no se ha encontrado un mtodo
automtico universal que se pueda utilizar con cualquier tipo de muestra. (CUTLEK, s.f.)

USOS

(Guamn, 2009)
(Guamn, 2009)