UNIVERSIDAD MAYOR REAL Y PONTIFICIA DE SAN

FRANCISCO XAVIER DE CHUQUISACA

FACULTAD TECNOLOGA

CARRERA: Ing. Qumica

MATERIA: Fundamentos de ingeniera bioqumica

PRACTICA: 1

DOCENTE: Ing. Francisco Camacho

UNIVERSITARIO (A): Mendoza Aez Darinca Paulet

Sucre-Bolivia
1. Importancia de la inmovilizacin de enzimas.

Confinamiento fsico de una enzima o clula en una determinada regin de espacio, de

manera que su actividad cataltica se retenga y pueda ser reutilizada.

Los enzimas, clulas enteras u orgnulos celulares o bien combinaciones de ellos que
se encuentran en un estado tal que permite su reutilizacin permitiendo que el proceso
biotecnolgico sea econmicamente rentable.

La inmovilizacin de enzimas es un proceso en el que se confina o localiza a la enzima

en una regin definida del espacio, para dar lugar a formas insolubles que retienen su
actividad cataltica y que pueden ser reutilizadas repetidamente. Esta inmovilizacin
est dirigida a inducir cambios en el medio ambiente de la enzima y por lo tanto provoca
cambios en las propiedades dependiendo de la enzima y del mtodo de inmovilizacin

2.- Tcnicas de Inmovilizacin de Enzimas

MTODO QUIMICO
Unin covalente: la unin covalente de molculas enzimticas a travs de residuos de
aminocidos no esenciales (es decir, aminocidos menos agua) a soportes
funcionalizados insolubles en agua son el mtodo ms utilizado para inmovilizar
enzimas.
Los grupos funcionales de los residuos de aminocidos no esenciales que son
adecuados para el proceso de inmovilizacin son los grupos a-, f3- o y-carboxlicos
libres, grupos a- o fJ-amino y grupos fenilo, hidroxilo, sulfhidrilo o imidazol.
La anotervacin de la inmovilizacin por unin covalente es la copolimerizacin de la
enzima con un monmero reactivo (M) tal como se muestra:
nM + E Mn E
Donde Mn E puede tener la siguiente estructura:
M
I
MMEMMM
I
M
I
M
Los soportes insolubles en agua empleados habitualmente para la unin covalente de
enzimas incluyen: soportes sintticos tales como polmeros basados en acrilamida,
polmeros basados en anhdrido maleico, polmeros basados en cido metacrlico,
polmeros basados en estireno y polipptidos y soportes naturales tales como agarosa
( Sepharose), celulosa, dextrano (Sephadex), vidrio y almidn (Zaborsky, 1973).
Los polmeros ya activos como los copolmeros de anhdrido maleico se mezclarn
simplemente con enzimas para producir enzimas inmovilizadas. Normalmente, los
polmeros naturales o sintticos deben activarse al tratarlos con reactivos antes de
agregar la enzima.
La activacin implica la conversin qumica de un grupo funcional del polmero. El sitio
activo de la enzima no debe estar involucrado en la unin, en cuyo caso la enzima
perdera su actividad tras la inmovilizacin.

Mtodos fsicos

Atrapamiento
Consiste en la retencin fsica de la enzima en las cavidades interiores de una matriz
slida porosa constituida generalmente por prepolmeros fotoentrucruzables o
polmeros del tipo poliacrilamida, colgeno, alginato, carraginato o resinas de
poliuretano. El proceso de inmovilizacin se lleva a cabo mediante la suspensin de la
enzima en una solucin del monmero. Seguidamente se inicia la polimerizacin por un
cambio de temperatura o mediante la adicin de un reactivo qumico. El atrapamiento
puede ser en geles o en fibras, que suelen ser ms resistentes que los geles. En el
primer caso, la enzima queda atrapada en el interior de un gel, mientras que en el
segundo caso la enzima se encuentra ocluida dentro de las microcavidades de una fibra
sinttica. El atrapamiento, de gran sencillez desde el punto de vista experimental,
requiere poca cantidad de enzima para obtener derivados activos. Como ventaja
adicional, la enzima no sufre ninguna alteracin en su estructura. De todas formas, el
atrapamiento requiere un control riguroso de las condiciones de polimerizacin, as
como la comprobacin de que la naturaleza qumica del proceso no altera los grupos
reactivos de la protena.

Inclusin en membranas: Dividida en dos tipos:

Micro encapsulacin: En esta tcnica, las enzimas estn rodeadas de membranas
semipermeables que permiten el paso de molculas de sustrato y producto, pero no de
enzima. Estas membranas semipermeables pueden ser permanentes (originadas por
polimerizacin interfacial) o no permanentes (generadas por surfactantes, tambin
llamadas micelas reversas). Las microcpsulas obtenidas son de forma esfrica, con
tamaos comprendidos entre 1 y 100 mm de dimetro. Mediante este mtodo se pueden
encapsular simultneamente una gran variedad de enzimas, clulas o biomolculas,
permitiendo que se lleven a cabo determinadas reacciones que suceden en mltiples
pasos
Reactores de membrana: El desarrollo de reactores o sistemas que contengan
enzimas atrapadas ha despertado gran inters en la industria. Estos reactores emplean
membranas permeables al producto final, permeables o no al sustrato inicial y
obviamente impermeables a la enzima. Mediante una bomba se establece un flujo
lquido de sustrato que atraviesa el reactor.
En general, en esta metodologa, se procede inicialmente a la adsorcin de la enzima
sobre la membrana que formar el reactor. Esta adsorcin se puede realizar de dos
formas:
1. Mediante el paso de una solucin tamponada de enzima a travs de la membrana.
2. Por contacto continuo de una solucin de enzima con la membrana.

3.-Efecto de la resistencia a la trasferencia de masa

La inmovilizacin de enzimas puede introducir un nuevo problema, el cual est ausente

en enzimas libres. Este problema se debe al gran tamao del enzima inmovilizado o
debido a la inclusin del enzima en la matriz polimrica. El trayecto hipottico del
sustrato desde el fluido hasta el enzima:

Transferencia desde el seno del liquido hasta la capa relativamente no mezclada

que rodea el enzima inmovilizado.
Difusin a travs de la capa relativamente no mezclada.
Difusin desde la superficie de la partcula hacia el sitio activo del enzima en el
interior del soporte.

Resistencia externa a la transferencia de masa: Si un enzima es inmovilizado en la

superficie de la partcula de soporte, la trayectoria del sustrato solo se compone de las
dos primeras etapas. La velocidad de transferencia de materia ser proporcional a la
diferencia de concentracin (fuerza impulsora):
Durante la reaccin, la velocidad de transferencia de sustrato es igual a la velocidad de
consumo del mismo. Por lo tanto, si la velocidad de reaccin puede ser descripta por
Michaelis-Menten:

Expresando esta ecuacin en forma adimencional:

Nmero de Damkhler: es la relacin entre la mxima velocidad de reaccin qumica y

la mxima velocidad de transferencia de materia:

NDa << 1: la transferencia de materia es mucho mayor que la velocidad de reaccin.

Por lo tanto, la velocidad global de reaccin es controlada por la reaccin enzimtica:

NDa >> 1: la velocidad de reaccin es mucho mayor que la transferencia de materia.

Por lo tanto, la velocidad global de reaccin es controlada por la transferencia de
materia, la cual se puede describir como una reaccin de primer orden:
Para medir la extensin en la cual la velocidad de reaccin es alterada debido a la
transferencia de materia, se define el factor de efectividad interno de un enzima
inmovilizado como:

Resistencia interna a la transferencia de masa: El conjunto de suposiciones generan

un modelo denominado modelo distribuido:

El sistema es isotrmico.
La transferencia de materia ocurre solamente por difusin molecular.
La difusin se describe por la Ley de Fick con un coeficiente de difusin
constante.
El sistema es homogneo.
El coeficiente de particin del sustrato es igual a uno.
El sistema est en estado estacionario.
La concentracin de sustrato vara con una sola variable espacial.

El conjunto de suposiciones generan un modelo denominado modelo distribuido.

Aplicando un balance de materia para el sustrato para una cascara esfrica de espesor
dr: