Qumica Biolgica 2010

Qumica Biolgica
TP 6 CIDOS NUCLEICOS .
.

Introduccin

Los cidos nucleicos son polmeros de alto peso molecular cuyas unidades monomricas son los
nucletidos unidos por enlaces fosfodiester. Los nucletidos presentan una pentosa, un grupo
fosfato y una base nitrogenada cuya naturaleza es responsable del cdigo gentico. Existe dos
tipos de acidos nucleicos: el acido ribunucleico (RNA) y el acido desoxirribonucleico (DNA) La
principal diferencia entre ambos es la pentosa puede ser ribosa en el caso del RNA o
desoxirribosa en DNA.

La pentosa no es la nica diferencia

estructural que presentan ambos cidos
nucleicos. El DNA se caracteriza por la
presencia de la base nitrogenada Timina y
en su forma ms difundida se presenta
como una doble hlice en las que las bases
nitrogenadas complementarias se disponen
en el interior de la cadena. Las cadenas
complementarias presentan una direccin
inversa y determinan un hlice que da una
vuelta completa cada 10 bases (3,4 nm)
El RNA presenta Uracilo en lugar de
Timina y esta formado por una cadena
simple de nucleotidos.

Molcula de DNA
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La funcin biolgica de los cidos nucleicos es fundamental: el DNA es el material gentico de

las clulas no solo responsable de la herencia, sino que esta activamente involucrado en la vida
celular, pudiendo encontrarse como una sola cadena en algunos microorganismos o formando
parte de ncleo-protenas de carcter bsico en los cromosomas en organismos superiores.
Almacena informacin gentica y sirve de molde para la sntesis de protenas. Se encuentra
mayoritariamente en el ncleo y en muy poca cantidad en mitocondria y cloroplastos. El RNA
participa en la sntesis de protenas, puede presentar funcin enzimtica y se distribuye en toda
la clula, mayormente en citoplasma en forma soluble o formando parte de los ribosomas.
El dogma central de la gentica es el siguiente:

Parte experimental

Objetivos

- Extraer e identificar DNA en material biolgico

- Observar microncleos en muestras de mejilln.

Actividades

Extraccin de DNA

Pelar y rallar una cebolla mediana con rallador o procesador hasta picarla finamente.
Pesar 15 g de cebolla rallada
Adicionar 25 ml de solucin de lisis (0,1 % de SDS en 25 mM EDTA pH 8) y esperar 20 min.
Filtrar en gasa y recoger en probeta.
Transferir 4 ml de filtrado a un tubo de ensayo.
Adicionar 8 ml de etanol 95% procurando no mezclar las dos soluciones.
En la interfase observar la formacin de una fina hebra.
Retirar la interfase con pipeta Pasteur y separarla en un tubo.
Resuspender en 2 ml de agua destilada y calentar suavemente.
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Caracterizacin de DNA

Una hidrlisis cida remueve todas las bases pricas (hidrlisis de uniones N-glicosdicas entre
pentosa y las bases pricas) sin afectar las uniones fosfodiester del esqueleto nucleotdico, por lo
tanto obtenemos como producto cidos nucleicos sin bases pricas.
Las desoxipentosas debido a la hidrlisis cida sufren deshidratacin dando aldehdos -hidroxi-
levulnicos. Estos reaccionan con difenilamina dando un producto de color azul. As, la reaccin
de difenilamina servir para caracterizar, indirectamente, la presencia de DNA en clulas de
cebolla.

Actividades

Preparar los siguientes tubos

Dejar reposar 5 minutos
Observar e interpretar los resultados

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Agua destilada 1 ml -
Ribosa 1 ml
Extracto - 1 ml
Rvo difenilamina 2 ml 2 ml
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Identificacin de la pentosa

La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reaccin con orcinol, en este caso la
desoxirribosa. El cido sulfrico hidroliza las uniones fosfodiester y N-glicosdicas, liberando
ribosa, bases pricas, pirimidnicas y cido fosfrico.
La ribosa en medio cido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando
un producto verde que demuestra la presencia de RNA.

Pentosas del RNA HCl cc y calor------- furfural + orcinol ----Cl3Fe---- color VERDE

Test de microncleos

Los microncleos son pequeos cuerpos de DNA que aparecen cerca del ncleo
principal durante la interfase como resultado de una divisin celular defectuosa, la que
es el resultado de daos cromosmicos estructurales y numricos inducidos por agentes
contaminantes qumicos y orgnicos. Los microncleos se forman durante la transicin
metafase-anafase de la mitosis por daos en el huso mittico, generando fragmentos de
cromosomas retrasados durante la migracin y durante la interfase pueden observarse
como pequeas masas citoplasmticas de cromatina.

Actividades

Tomar los mejillones y abrirlos realizando un corte en el msculo abductor. Extraer las
branquias y realizar un frotis de la misma. Dejar secar y luego fijar con con Carnoy
(etanol actico 3:1) y se deja secar nuevamente. Teir los preparados con Giemsa 4 % y contar
500 clulas registrando el nmero de anormalidades.

Actividades complementarias
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1. Dibuja la estructura de las bases pricas.

2. Como se llaman las protenas asociadas al DNA en eucariota?
3. Cuales son las principales caractersticas del cromosoma bacteriano?
4. Qu funcin tienen las diferencias qumicas entre DNA y RNA?