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THMATIQUE
EN MICROBIOLOGIE
TAPER
RSUM
SUMMARY
Les vaccins constituent aujourdhui un des moyens de lutte anti-infectieuse
les plus efficaces. La place privilgie quils occupent parmi les mesures
P resen t an d fu tu re of vaccin es: new
sanitaires prophylactiques est parfaitement illustre par leffervescence
technologies
autour des capacits de production des vaccins en cette priode de pan-
Vaccines represent the most cost-effective
dmie grippale. La majorit des vaccins produits aujourdhui drive tous
and successful approach to prevent diseases.
des prototypes tablis il y a plus dun sicle par Jenner puis par Pasteur
Mortality and morbidity due to several infectious
et plus spcifiquement de ses travaux sur les procds dinactivation ou
diseases have been dramatically affected by the
dattnuation des micro-organismes. Ces vaccins ont connu un certain
widespread use of vaccination. Smallpox has
nombre de succs dont lradication de la variole proclame en 1979.
been eradicated since three decades. Vaccines
Nanmoins, force est de constater, en ce dbut de nouveau millnaire,
available are still produced through relatively
la limite de ces vaccins, notamment pour la lutte contre les infections
conventional technologies, based on Pasteurs
virales chroniques ou infections parasitaires, ce qui met en exergue la
research, more than one century ago that leads
ncessit de gnrer de nouveaux types de vaccins. Les avances bio-
to attenuation and inactivation of pathogens.
technologiques rcentes et les nouvelles connaissances en immunologie
Nevertheless, in this third millennium vaccinology,
ont permis de proposer un ventail de stratgies vaccinales innovantes,
these conventional vaccines have not been
davenir prometteur. Aujourdhui, la dfinition mme des vaccins a volu
proven to be efficacious in preventing mortalitily
et sinscrit plus largement dans le domaine des immunothrapies. Cet
and morbitity due to chronic viral infections or
article a pour but de dresser un bilan non-exhaustif des nouvelles strat-
parasite infections. A major challenge is to develop
gies rcemment dveloppes sur lesquelles reposent les espoirs pour de
new vaccine strategies able to induce protection
futurs succs vaccinaux.
against these pathogens. Achieving such ambitious
goals in a near future will certainly require a strong
Immunologie immunothrapie vaccins vaccins ADN
vecteurs viraux VLP cellule dendritique. modification of the methods that have been used
so far. This new challenge is facing nowadays
can be approached through a comprehensive
understanding of the mechanisms behind the
1. Introduction induction and the maintenance of efficacious
immune response triggered by vaccines. This
Linvention du vaccin contre la variole en 1796 et, plus review describes the recent development of new
encore, celle du vaccin contre la rage en 1885 marquent strategies of vaccination.
le dbut dune pope sanitaire dont le XXe sicle consti-
tue ce jour lapoge. Les vaccins dvelopps ont per- Immunology immunotherapy vaccine
mis de lutter, sur des continents entiers et en quelques DNA vaccine viral vector VLP dendritic cells.
dcennies, contre des flaux tels que la peste, le ttanos,
la tuberculose ou la poliomylite. Les objectifs vaccinaux
sont passs de la protection de lindividu celle de la
socit, en passant par le souhait dradiquer certaines
a UPMC Universit Paris 06 UMR7211
pathologies virales, devenu une ralit pour la variole en
CNRS UMR7211 INSERM U959 1979. La vaccination est entre dans les murs, devenue
Laboratoire dimmunologie-immunopathologie-immunothrapie une pratique rendue obligatoire en France ds la fin de
Btiment CERVI la premire guerre mondiale, et aujourdhui considre
Groupe hospitalier Piti-Salptrire comme un pilier de la mdecine prventive.
83, bd de lHpital Toutefois, si le rsultat de plus dun sicle de vaccination est
75013 Paris incontestablement positif dans les pays dvelopps, lheure
nest plus au triomphalisme. Dabord, la menace de nouvelles
* Correspondance pandmies conduit les industriels et les chercheurs sinter-
bertrand.bellier@upmc.fr roger sur leur capacit obtenir de nouveaux vaccins dans
des dlais suffisants. Mais aussi, les nombreuses annes de
recherche dun vaccin contre le virus de limmunodficience
article reu le 27 juillet, accept le 28 septembre 2009. humaine (VIH), contre lagent responsable du paludisme
2009 Elsevier Masson SAS Tous droits rservs. et les cancers dmontrent linefficacit ou plus justement
(A) Virus sauvage. Reprsentation schmatique du virus contre lequel les stratgies vaccinales sont destines. Les cercles noirs illustrent lantigne cible.
(B) Vaccins classiques. Les vaccins vivants attnus (figure gauche) sont des virus apathognes obtenus partir des virus sauvages, aprs mutations
(cercles blancs), induites par passage sur des cultures cellulaires dans des conditions dfavorables ou par gnie gntique. Les vaccins tus (figure du
milieu) sont obtenus par traitement chimique ou la chaleur des virus sauvages. Les vaccins sous-unitaires (figure droite) sont obtenus par purification des
antignes isols partir des constituants de surface du virus sauvage ou par production in vitro grce au gnie gntique. (C) Vaccins ADN. Les antignes
sont exprims in situ aprs administration de plasmides dADN porteurs des squences gntiques codant les antignes vaccinaux. (D) Vecteurs vivants
recombinants. Les squences gntiques codant les antignes vaccinaux sont vhicules par un vecteur viral recombinant, le plus souvent dfectifs pour
la rplication. (E) Pseudo-particules virales ou VLP. Les VLP homologues (figure gauche) sont formes par assemblage des protines de structure du
virus sauvage. Les particules, de structure comparable celles du virus sauvage, sont vides de gnome viral. Des VLP htrologues (figure droite) peuvent
tre gnres partir de protines structurales de virus htrologue sur lesquelles sont fusionns ou greffs les antignes vaccinaux. (F) PlasmoVLP. Les
plasmoVLP sont des vaccins ADN optimiss, autorisant la formation de VLP homologues ou htrologues in situ aprs expression. (G) Ciblage des cellules
dendritiques. Diffrentes stratgies visant dlivrer les antignes spcifiquement aux cellules dendritiques sont dveloppes. Lapport antignique peut
se faire ex-vivo (figure gauche) par ajout de protines recombinantes ou par transfection dun plasmide dADN porteur des squences antigniques sur une
culture de cellules dendritiques qui seront ensuite injectes au patient. Le ciblage des cellules dendritiques peut se faire in vivo (figure droite) au moyen
danticorps, de protines bactriennes ou de vecteurs viraux capables de se lier spcifiquement aux rcepteurs de surface des cellules dendritiques.
virulence des souches vaccinales attnues, et ceux des Par ailleurs, des stratgies immunostimulatrices sont propo-
vaccins protiques recombinants connus pour induire de ses pour augmenter ou orienter les rponses immunitaires
faibles rponses CTL. induites aprs vaccination ADN. Ces stratgies adjuvantes
Lefficacit de cette technologie de vaccination a rapidement consistent administrer simultanment lADN vaccinal des
amen tester les vaccins ADN chez le primate non humain squences exprimant des cytokines ou dautres molcules
et chez lhomme, pour diffrentes infections (hpatite B, immunostimulatrices [18]. Parmi ces adjuvants gntiques,
VIH, paludisme) [8, 9]. Un certain nombre de questions les oligodsoxynuclotides synthtiques de type CpG,
concernant linnocuit de ces vaccins a alors t soulev, drivs dADN bactrien et capables de se lier et dactiver
dont le risque dintgration de lADN tranger dans un des le toll-like receptor de type 9 exprim par les cellules
chromosomes du sujet vaccin. Trs peu deffets secondai- dendritiques, sont particulirement efficaces pour renforcer
res ont t observs, tmoignant de lexcellente tolrance la rponse helper de type 1 (Th1) et renforcer limmunit
ces vaccins et aucune intgration stable de lADN dans spcifique antivirale ou anti-tumorale [19].
les cellules de lhte na t rapporte [10, 11]. Au total, les nouvelles amliorations proposes pour la
Alors que les tudes ralises chez les rongeurs ont montr vaccination ADN [13], qui visent renforcer lefficacit
une efficacit remarquable de limmunisation par injection de transfection, augmenter le niveau dexpression des
directe de lADN, les rponses immunitaires obtenues lors antignes ainsi que leur immunognicit, mais aussi leur
des premiers essais cliniques ont t dcevantes [12]. Le association dautres vaccins dans des stratgies vacci-
plus souvent des immunisations rptes avec de fortes nales de type prime-boost (dcrites plus loin) feront de
doses dADN (plusieurs milligrammes) sont ncessaires ces vaccins ADN, de deuxime ou troisime gnration,
pour induire des rponses immunitaires cellulaires faibles, une ralit [15].
et peu dindividus dveloppent des anticorps contre les
antignes exprims [13]. 5. Vecteurs vivants recombinants
Suite cette premire gnration de vaccins ADN dits
prometteurs , de nombreuses recherches ont t entre- La stratgie de vaccination au moyen de vecteurs vivants
prises pour amliorer leur efficacit. Parmi les axes dve- recombinants peut tre perue comme une optimisation de
lopps, la question des modalits dadministration de la stratgie de vaccination ADN, pour laquelle ltape de
lADN a t particulirement tudie. En effet, la quantit pntration du matriel gntique dans la cellule savre tout
de cellules transfectes et la nature de celles-ci sont des particulirement efficace et non limitante. Les squences
facteurs dterminants qui sont aujourdhui incrimins dans gntiques vaccinales sont ici vhicules par des vecteurs
lchec des premiers essais. Lintroduction parentrale de bactriens ou viraux vivants non-rplicatifs. Nous nous
lADN plasmidique en simple solution saline par voie intra- intresserons ici plus particulirement ces derniers, qui
musculaire, qui fut la voie principalement utilise dans les constituent les vecteurs naturels les plus volus pour le
premiers essais, limite le niveau de transfection et en cons- transfert de matriel gntique dans la cellule hte et qui
quence la quantit dantignes exprims. Par ailleurs, cette sont majoritairement utiliss en essais cliniques.
voie cible prfrentiellement les myocytes qui, en raison de Un vecteur viral est un virus dans lequel des gnes essentiels
labsence dexpression de molcules de costimulation, ne la rplication virale ont t ventuellement supprims (le
peuvent activer directement les lymphocytes T nafs mal- virus est alors dfectif pour la rplication) et remplacs par
gr la prsentation en surface des pitopes associs aux des squences codant les antignes dintrt (gure 1D).
molcules de CMH classe I. Aujourdhui, des techniques De nombreux virus ont t modifis gntiquement afin de
alternatives sont exprimentes, ciblant prfrentiellement pouvoir les utiliser comme vecteurs de vaccination. Parmi
la peau, tissu riche en CPA professionnelles (cellules de ceux l, les adnovirus, les virus adno-associs (AAV),
Langerhans de lpiderme, cellules dendritiques du derme). les rtrovirus, le virus de la vaccine ainsi que les diffrents
Parmi les mthodes dveloppes pour augmenter in vivo virus de la famille des Poxviridae sont principalement utili-
lefficacit de transfection, des techniques biolistiques de ss. Chaque systme de transfert de gnes possde ses
type gene gun (bombardement de lpiderme par des avantages et ses limites, portant notamment sur la taille
microbilles dor recouvertes dADN), dinjection par jet des inserts vhiculs, le tropisme cellulaire du vecteur et
sans aiguille (administration cutane dADN en solution sali- son immunognicit. Comme indiqu prcdemment,
ne propulse grande vitesse) ou encore dlectrotransfert cest lefficacit dinfection des cellules et donc le fort taux
(application dun champ lectrique entre deux lectrodes dexpression des antignes, qui font de ces vecteurs des
au site dinjection) semblent les plus prometteuses [14, candidats vaccins de choix. Un autre des avantages consi-
15]. Dans nos tudes, nous avons dj compar certai- drables de ces vecteurs est que leur administration imite
nes de ces mthodes dinjection. De faon schmatique, linfection naturelle, favorable linduction dune rponse
nous avons observ que linjection intramusculaire chez immunitaire forte et durable. Leur efficacit est souligne
la souris, qui requiert au moins 100 g dADN, est 10 fois par leur capacit induire une rponse cellulaire et/ou
moins efficace quune injection intramusculaire suivie dune humorale aprs une seule injection. Lexpression intra-
lectroporation, pour linduction des rponses vaccinales, cellulaire des antignes fait de ces vecteurs des vaccins
qui est galement moins efficace que la technique de gene particulirement efficaces pour induire des rponses CTL.
gun qui ne ncessite que 0,5 g dADN [16], elle-mme Contradictoirement, leur inconvnient majeur, en plus de
moins efficace que les techniques par jet ou injection celui li la pathognicit potentielle du virus utilis suite
intradermique suivie dune lectroporation (qui ncessitent une ventuelle recombinaison avec un virus sauvage,
toutefois 10 g dADN) [17]. rside dans limmunognicit de ces vecteurs. En effet,
ges des vaccins ADN et VLP offrant ainsi lavantage dune de vaccins adapts pour la gnration de rponses CTL.
production simple, rapide, peu onreuse et grande chelle Ils sont constitus de cellules tumorales ou de cellules
des vecteurs ADN plasmidiques tout en assurant une forte dendritiques charges avec les antignes tumoraux. Luti-
immunognicit des antignes exprims, vhiculs la sur- lisation de cellules tumorales inactives, associes un
face des VLP produites in situ par les cellules transfectes. adjuvant, en vaccination anti-tumorale, est conceptuel-
Nous avons choisi de gnrer des VLP qui drivent dun lement satisfaisante, puisque ces cellules constituent
rtrovirus murin (Moloney murine leukemia virus). La simpli- une source authentique dantignes tumoraux qui seront
cit de son gnome, sa facile manipulation gntique et la activement reconnus en prsence dadjuvant. La difficult
capacit de ce virus tre pseudotyp par des enveloppes daccs et de purification de ces cellules tumorales ainsi
htrologues ont dtermin ce choix. Selon lapplication que la dcouverte dantignes communs un mme type
vaccinale, il est possible dinsrer des squences gnti- de tumeur ont conduit utiliser en thrapeutique des
ques spcifiques des antignes vaccinaux dans les gnes lignes cellulaires tumorales allogniques (non-spcifiques)
codant les protines de structure rtrovirales (Gag et/ou prfrentiellement des cellules spcifiques du patient.
Env) ou de substituer lenveloppe rtrovirale par une autre Toujours dans le but de renforcer limmunognicit de ces
enveloppe virale (VHC, VIH). Nous avons pu dmontrer vaccins, des modifications gntiques des cellules tumo-
que linsertion des antignes dans gag ou env ne limitait rales ont galement t ralises, leur faisant exprimer
pas la formation des VLP, et permettait de gnrer une des cytokines immunostimulatrices et/ou des molcules
rponse efficace contre les antignes insrs, rponse plus de co-stimulation [40]. Ces modifications font de ces cel-
forte que celle induite par des constructions contrle ne lules tumorales de vritables CPA artificielles capables
formant pas de VLP. Lavantage de la formation des VLP dactiver efficacement les lymphocytes T spcifiques des
a galement t observ pour la gnration des anticorps antignes tumoraux.
neutralisants [17] et linduction dune immunit antivirale Alternativement, lutilisation de cellules dendritiques char-
protectrice [16]. Aujourdhui, nous travaillons appliquer ges avec des antignes tumoraux est une stratgie plus
la stratgie plasmoVLP pour des vaccinations prventives directe qui permet dinduire efficacement des rponses T
contre le VHC [22], le VIH et les infections Inuenza (H5N1 spcifiques chez les patients traits [41]. Les antignes
et H1N1/2009). Nous cherchons galement renforcer tumoraux peuvent tre apports sous forme de broyat
limmunognicit de nos vaccins en insrant la surface tumoral, de peptides synthtiques spcifiques de la tumeur
des VLP des molcules capables de cibler et dactiver les et pouvant tre prsents par les molcules CMH du
cellules dendritiques, ce qui devrait favoriser le dclenche- patient, ou de squences gntiques (ADN ou ARN) sp-
ment des rponses immunitaires. cifiques des antignes exprims ex-vivo dans les cellules
dendritiques (gure 1G).
8. Ciblage des antignes Malgr son efficacit dinitiation des rponses immunitaires,
force est de constater que cette stratgie na obtenu que
vers les cellules dendritiques de faibles rponses cliniques objectives. Il est aujourdhui
admis la ncessit de combiner cette stratgie des
La comprhension du rle majeur jou par les cellules den- stratgies adjuvantes, tel lajout de ligands aux toll-like
dritiques dans linduction des rponses immunitaires a fait de receptor ou la molcule CD40, qui induisent lactivation
ces cellules un acteur cl dans le dveloppement vaccinal. des cellules prsentatrices dantignes et renforcent leur
La capture et la prsentation des antignes par ces cellules capacit stimulatrice (par augmentation dexpression des
sont des tapes dcisives pour limmunognicit du vaccin. molcules de costimulation en surface). Par ailleurs, des
Aujourdhui de nombreuses stratgies cherchent dlivrer interventions complmentaires qui rglent le problme de
spcifiquement les antignes vers les cellules dendritiques la phase de reconnaissance de la cellule tumorale et celui
(gure 1G). Pour cela, les antignes peuvent tre coupls de la tolrance locale induite par la tumeur sont galement
des anticorps reconnaissant spcifiquement les molcules proposes.
de surface des cellules dendritiques [35] ou des toxines
bactriennes ayant la capacit de se fixer sur des molcules
de surface des cellules dendritiques [36, 37]. Plus rcem- 10. Nouvelles voies
ment, il a galement t propos de cibler spcifiquement
les CPA laide de vecteurs viraux recombinants (lentivirus)
dadministration
pseudotyps avec une enveloppe mute, rendue spcifique
Tout comme soulign prcdemment, le succs des stra-
des cellules dendritiques [38]. Globalement, il a t montr
tgies vaccinales repose sur la comprhension gn-
que ces stratgies favorisent la prsentation antignique par
rale des mcanismes immunologiques et lintgration de
les CPA et linduction des rponses CTL [39]. Ces strat-
ces connaissances. Ainsi, les modalits dadministration
gies sont principalement dveloppes en vaccination anti-
des vaccins sont aujourdhui dfies. Jusqu ce jour, les
infectieuse (VIH, malaria) ou anti-tumorale et sont actuelle-
vaccins taient surtout inoculs par voie sous-cutane
ment testes en clinique humaine.
ou intramusculaire. Lavantage de ces voies tient un
contrle de la dose injecte, et un dpt de lantigne,
9. Vaccins cellulaires qui, en prsence dadjuvant, sera libr progressivement
et stimulera le systme immunitaire durablement. Cepen-
Plus spcifiquement destines aux immunothrapies anti- dant, ces vaccins injectables traditionnels engendrent une
tumorales, les vaccins cellulaires sont un nouveau type bonne immunit systmique mais ninduisent pas ou peu
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