VOLUTIONS RCENTES

THMATIQUE
EN MICROBIOLOGIE
TAPER

Vaccins daujourdhui et de demain :

nouvelles technologies
Bertrand Bellier a,*

RSUM
SUMMARY
Les vaccins constituent aujourdhui un des moyens de lutte anti-infectieuse
les plus efficaces. La place privilgie quils occupent parmi les mesures
P resen t an d fu tu re of vaccin es: new
sanitaires prophylactiques est parfaitement illustre par leffervescence
technologies
autour des capacits de production des vaccins en cette priode de pan-
Vaccines represent the most cost-effective
dmie grippale. La majorit des vaccins produits aujourdhui drive tous
and successful approach to prevent diseases.
des prototypes tablis il y a plus dun sicle par Jenner puis par Pasteur
Mortality and morbidity due to several infectious
et plus spcifiquement de ses travaux sur les procds dinactivation ou
diseases have been dramatically affected by the
dattnuation des micro-organismes. Ces vaccins ont connu un certain
widespread use of vaccination. Smallpox has
nombre de succs dont lradication de la variole proclame en 1979.
been eradicated since three decades. Vaccines
Nanmoins, force est de constater, en ce dbut de nouveau millnaire,
available are still produced through relatively
la limite de ces vaccins, notamment pour la lutte contre les infections
conventional technologies, based on Pasteurs
virales chroniques ou infections parasitaires, ce qui met en exergue la
research, more than one century ago that leads
ncessit de gnrer de nouveaux types de vaccins. Les avances bio-
to attenuation and inactivation of pathogens.
technologiques rcentes et les nouvelles connaissances en immunologie
Nevertheless, in this third millennium vaccinology,
ont permis de proposer un ventail de stratgies vaccinales innovantes,
these conventional vaccines have not been
davenir prometteur. Aujourdhui, la dfinition mme des vaccins a volu
proven to be efficacious in preventing mortalitily
et sinscrit plus largement dans le domaine des immunothrapies. Cet
and morbitity due to chronic viral infections or
article a pour but de dresser un bilan non-exhaustif des nouvelles strat-
parasite infections. A major challenge is to develop
gies rcemment dveloppes sur lesquelles reposent les espoirs pour de
new vaccine strategies able to induce protection
futurs succs vaccinaux.
against these pathogens. Achieving such ambitious
goals in a near future will certainly require a strong
Immunologie immunothrapie vaccins vaccins ADN
vecteurs viraux VLP cellule dendritique. modification of the methods that have been used
so far. This new challenge is facing nowadays
can be approached through a comprehensive
understanding of the mechanisms behind the
1. Introduction induction and the maintenance of efficacious
immune response triggered by vaccines. This
Linvention du vaccin contre la variole en 1796 et, plus review describes the recent development of new
encore, celle du vaccin contre la rage en 1885 marquent strategies of vaccination.
le dbut dune pope sanitaire dont le XXe sicle consti-
tue ce jour lapoge. Les vaccins dvelopps ont per- Immunology immunotherapy vaccine
mis de lutter, sur des continents entiers et en quelques DNA vaccine viral vector VLP dendritic cells.
dcennies, contre des flaux tels que la peste, le ttanos,
la tuberculose ou la poliomylite. Les objectifs vaccinaux
sont passs de la protection de lindividu celle de la
socit, en passant par le souhait dradiquer certaines
a UPMC Universit Paris 06 UMR7211
pathologies virales, devenu une ralit pour la variole en
CNRS UMR7211 INSERM U959 1979. La vaccination est entre dans les murs, devenue
Laboratoire dimmunologie-immunopathologie-immunothrapie une pratique rendue obligatoire en France ds la fin de
Btiment CERVI la premire guerre mondiale, et aujourdhui considre
Groupe hospitalier Piti-Salptrire comme un pilier de la mdecine prventive.
83, bd de lHpital Toutefois, si le rsultat de plus dun sicle de vaccination est
75013 Paris incontestablement positif dans les pays dvelopps, lheure
nest plus au triomphalisme. Dabord, la menace de nouvelles
* Correspondance pandmies conduit les industriels et les chercheurs sinter-
bertrand.bellier@upmc.fr roger sur leur capacit obtenir de nouveaux vaccins dans
des dlais suffisants. Mais aussi, les nombreuses annes de
recherche dun vaccin contre le virus de limmunodficience
article reu le 27 juillet, accept le 28 septembre 2009. humaine (VIH), contre lagent responsable du paludisme
2009 Elsevier Masson SAS Tous droits rservs. et les cancers dmontrent linefficacit ou plus justement

REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417 // 69

 linadaptation des vaccins classiques pour lutter contre
ces maladies. Une nouvelle re en vaccinologie souvre
donc, celle o les ultimes connaissances en immunologie
et les dernires avances en biotechnologies permettent de
repenser les vaccins et de proposer de nouvelles stratgies
vaccinales. Il apparat donc lgitime aujourdhui de revisiter
la dfinition des vaccins.
Avant de sintresser aux vaccins du futur, rappelons
dabord les caractristiques des vaccins classiques
(gures 1A et 1B), dont lvolution au cours du XXe sicle
fut principalement guide par une volont de renforcer la
scurit des vaccins.
2. Les vaccins classiques
Les vaccins vivants attnus ont t les premiers vac-
cins produits. Ils sont aujourdhui utiliss pour prvenir
la rougeole, les oreillons, la varicelle, la rubole, la fivre
jaune, la poliomylite (vaccin oral), la tuberculose ou les
gastroentrites rotavirus et sont constitus de sou-
ches de virus ou de bactries qui ont perdu leur pouvoir
pathogne, tout en restant capables de se dvelopper
dans lorganisme. Lattnuation du pouvoir pathogne
est obtenue par passage du micro-organisme sur des
cultures cellulaires dans des conditions dfavorables (de
temprature, despce cellulaire) ou par voie chimique.
Pour la plupart, ces vaccins sont dirigs contre des virus
car la mise au point de vaccins antibactriens attnus
sest rvle problmatique (souches attnues difficile-
ment obtenues). Ces vaccins, qui induisent une vritable
infection sans manifestation pathologique, gnrent une
rponse immunitaire complte (cellulaire et humorale),
efficace et une protection maintenue sur le long terme, et
ce le plus souvent aprs une seule injection. Cependant,
ces vaccins vivants soulvent un problme dinnocuit,
interdisant leur utilisation chez des sujets immunodpri-
ms, et rendant lapplication de cette approche vaccinale
attnue impossible contre des cibles qui prsentent une
forte capacit muter (VIH, virus de lhpatite C), en
raison du risque trop lev de rversion vers un phno-
type virulent. De plus, ces vaccins vivants requirent des
conditions de stockage et de distribution contraignantes
(chane du froid respecter) limitant leur distribution dans
les pays en voie de dveloppement.
Une autre mthode classique de vaccination consiste
inoculer des micro-organismes entiers inactivs (tus).
Ces vaccins, exempts de tout problme dinnocuit (sauf
lie des ractions immunologiques inadaptes), restent
de bons immunognes capables dinduire une rponse
humorale satisfaisante et protectrice. Plusieurs vaccins
viraux de ce type sont actuellement commercialiss :
contre la grippe, lhpatite A, lencphalite japonaise, la
poliomylite (vaccin injectable) et la rage. Ces vaccins ont
galement t particulirement utiliss lors du dveloppe-
ment des vaccins antibactriens de premire gnration,
constitus de bactries entires tues : Salmonella typhi
pour la typhode, le vibrion cholrique pour le cholra,
Bordetella pertussis pour la coqueluche. Alors que linno-
cuit de ces vaccins est un avantage vident, labsence
dinfection limite leur efficacit comme en tmoigne le
schma vaccinal qui requiert des doses leves et des
70 // REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417
injections de rappel pour induire une immunit long ter-
me. Aussi, ces micro-organismes tus sont pris en charge
par le systme immunitaire comme tout autre antigne
exogne (extracellulaire) et induisent par consquent une
faible activation des lymphocytes T cytotoxiques, qui sont
pourtant des cellules essentielles dans la lutte contre les
germes dveloppement intracellulaire.
En marge, dautres types de vaccins inactivs ont t ta-
blis, contre la diphtrie et le ttanos, partir danatoxines
correspondant des toxines bactriennes, purifies puis
inactives par traitement chimique ou la chaleur. Leffi-
cacit de ces vaccins est satisfaisante et les mcanismes
de limmunit reposent dans ce cas exclusivement sur la
persistance danticorps neutralisants.
Rpondant aussi une volont de renforcer la scurit
vaccinale, de nouveaux vaccins, dits sous-unitaires, ont
vu le jour dans les annes soixante-dix. Ces vaccins acel-
lulaires sont composs dun nombre restreint dantignes,
isols et purifis partir des constituants de surface des
micro-organismes (polysaccharidiques ou protiques) et
qui constituent les cibles des anticorps. Conjointement,
lessor de la biologie molculaire et les techniques de
recombinaison gntique ont permis de rvolutionner le
mode de production de ces vaccins, produits alors par gnie
gntique. Le clonage du gne codant lantigne HBs et
son expression en levure (Saccharomyces cerevisiae) ou
en cellules de mammifre (cellules ovariennes de hamster
chinois) a permis le dveloppement du premier vaccin
sous-unitaire dit recombinant, et a remplac dfinitivement
les vaccins hpatite B dorigine plasmatique.
Ces nouveaux vaccins sont rvlateurs de lvolution de la
vaccinologie au cours du XXe sicle. Lutilisation quasi exclu-
sive de ces vaccins sous-unitaires aprs les annes 1980
tmoigne galement de limportance accorde la scurit
mais aussi limmunit humorale comme mcanisme pro-
tecteur des infections, seule rponse alors mesure pour
valuer lefficacit des vaccins. L adjuvantisation des
protines recombinantes avec les sels daluminium (seuls
adjuvants autoriss) favorisant les rponses anticorps, a
galement accentu ce dsquilibre entre les rponses
induites de type humorale ou cellulaire.
Un autre progrs considrable dans lvolution de la vac-
cinologie, en terme de simplification, dacceptabilit et
dconomie, rside dans la possibilit dadministrer en une
seule injection plusieurs valences vaccinales (combinaison
des vaccins contre la diphtrie, le ttanos, la coqueluche,
la poliomylite et les infections Haemophilus).
3. Vers de nouveaux vaccins
Malgr le dveloppement considrable des vaccins aux
XXe sicle, les maladies infectieuses reprsentent encore
actuellement un problme aigu de sant publique lchelle
mondiale. Elles sont la cause de 30 % des dcs dans le
monde. Ce taux signifie la mort de 14 millions dindividus
par an. Sur ces 14 millions, plus de 9 millions sont des
enfants de moins de cinq ans. Des maladies que lon croyait
matrises rapparaissent et de nouveaux germes patho-
gnes mergent priodiquement. Il est donc une priorit
de dvelopper de nouveaux vaccins contre ces maladies
mergentes mais galement de repenser les formulations
 VOLUTIONS RCENTES EN MICROBIOLOGIE

Figure 1 Principe des stratgies vaccinales daujourdhui et de demain.

(A) Virus sauvage. Reprsentation schmatique du virus contre lequel les stratgies vaccinales sont destines. Les cercles noirs illustrent lantigne cible.
(B) Vaccins classiques. Les vaccins vivants attnus (figure gauche) sont des virus apathognes obtenus partir des virus sauvages, aprs mutations
(cercles blancs), induites par passage sur des cultures cellulaires dans des conditions dfavorables ou par gnie gntique. Les vaccins tus (figure du
milieu) sont obtenus par traitement chimique ou la chaleur des virus sauvages. Les vaccins sous-unitaires (figure droite) sont obtenus par purification des
antignes isols partir des constituants de surface du virus sauvage ou par production in vitro grce au gnie gntique. (C) Vaccins ADN. Les antignes
sont exprims in situ aprs administration de plasmides dADN porteurs des squences gntiques codant les antignes vaccinaux. (D) Vecteurs vivants
recombinants. Les squences gntiques codant les antignes vaccinaux sont vhicules par un vecteur viral recombinant, le plus souvent dfectifs pour
la rplication. (E) Pseudo-particules virales ou VLP. Les VLP homologues (figure gauche) sont formes par assemblage des protines de structure du
virus sauvage. Les particules, de structure comparable celles du virus sauvage, sont vides de gnome viral. Des VLP htrologues (figure droite) peuvent
tre gnres partir de protines structurales de virus htrologue sur lesquelles sont fusionns ou greffs les antignes vaccinaux. (F) PlasmoVLP. Les
plasmoVLP sont des vaccins ADN optimiss, autorisant la formation de VLP homologues ou htrologues in situ aprs expression. (G) Ciblage des cellules
dendritiques. Diffrentes stratgies visant dlivrer les antignes spcifiquement aux cellules dendritiques sont dveloppes. Lapport antignique peut
se faire ex-vivo (figure gauche) par ajout de protines recombinantes ou par transfection dun plasmide dADN porteur des squences antigniques sur une
culture de cellules dendritiques qui seront ensuite injectes au patient. Le ciblage des cellules dendritiques peut se faire in vivo (figure droite) au moyen
danticorps, de protines bactriennes ou de vecteurs viraux capables de se lier spcifiquement aux rcepteurs de surface des cellules dendritiques.

REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417 // 71

 vaccinales pour renforcer lefficacit des vaccins existants.
La vaccinologie moderne se doit dintgrer les nouvelles
connaissances en immunologie fondamentale, en micro-
biologie, ainsi que lavance des nouvelles technologies
pour assurer le dveloppement de vaccins nouveaux non
seulement quant leur cible mais aussi quant leur com-
position et leur mode dadministration.
Il parat primordial de prendre en considration les autres
composants du systme immunitaire, autres que les rpon-
ses anticorps, pour la fabrication des vaccins. Aujourdhui,
les tudes sont aussi axes sur limplication des lymphocy-
tes T CD8+ cytotoxiques (CTL), des lymphocytes T helpher
(Th1 et Th2) et des cellules prsentatrices dantignes et
plus particulirement les cellules dendritiques qui expri-
ment les molcules de costimulation indispensables
lactivation des lymphocytes T nafs. Il est donc possible
dimaginer le dveloppement de formulations vaccinales
spcifiques, adaptes selon le pathogne cible. La mise
en place de rponses CTL et la gnration de cellules
mmoire CD8+ sont essentielles pour la lutte contre les
infections virales, parasitaires ou la lutte anti-tumorale,
car elles autorisent la destruction des cellules infectes ou
tumorales. Lactivation des lymphocytes T CD8+ requiert
une prsentation efficace des dterminants antigniques
par les molcules du complexe majeur dhistocompatibi-
lit (CMH) de classe I. Cette voie de prsentation permet
classiquement de prsenter les antignes qui drivent des
constituants intracellulaires, dorigine endogne ou micro-
bienne, aprs protolyse par des complexes enzymatiques
cellulaires (protasome). Ainsi, les stratgies qui cherchent
exprimer ou introduire les antignes vaccinaux dans
les cellules prsentatrices gnreraient des rponses
CTL fortes. Ces diffrentes stratgies seront prsentes
ultrieurement. linverse, les vaccins inactivs ou sous-
unitaires constituent une source dantignes extracellulaires
qui sont alors prsents de faon moins efficace par les
molcules de CMH classe I et ninduisent par consquent
que de faibles rponses CTL. Ces vaccins classiques
non-vivants savrent donc inadapts pour la lutte contre
les pathognes intracellulaires, ce qui souligne une fois de
plus le besoin de gnrer de nouveaux vaccins.
Ladquation entre le type de rponses immunitaires induites
aprs inoculation du vaccin et les mcanismes immunitai-
res naturels assurant la protection de lorganisme contre
lagent tranger est indispensable pour le succs de la
vaccination. Ltablissement des corrlats de protection
est donc une donne dcisive pour la stratgie de dve-
loppement du vaccin. Le manque dinformations sur les
corrlats immunitaires de protection a dailleurs constitu un
des freins au dveloppement dun vaccin prventif contre
le virus de lhpatite C (VHC). De nombreuses donnes
obtenues chez lhomme ou chez le chimpanz aprs infec-
tion par le VHC sont aujourdhui disponibles et rvlent
la fois limportance des rponses cellulaires de type CTL
et CD4+ Th1 pour llimination des cellules infectes [1,
2], ainsi que lapparition des anticorps neutralisants qui
inhibent linfection virale [3]. La gnration de rponses
immunitaires tendues , mobilisant les diffrents effec-
teurs du systme immunitaire et ciblant diffrents consti-
tuants du micro-organisme apparat ainsi favorable pour
la gnration dune immunit relle. rpondant notamment aux problmes de rversion vers la
72 // REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417
Alors que seule la quantit deffecteurs (titre danticorps,
frquence de cellules mmoire) induits aprs vaccination
tait value jusqu prsent, demain la qualit des rponses
et des effecteurs induits (affinit des anticorps, caractre
neutralisant des anticorps, ratio entre cellules T mmoire-
effectrices et T mmoire-centrales, multifonctionnalit des
lymphocytes T effecteurs et mmoire) sera systmatiquement
considre dans les dveloppements vaccinaux [4].
Les progrs extrmement rapides intervenus ces derni-
res annes en immunologie et en microbiologie ont ainsi
favoris lmergence de nouvelles stratgies vaccinales
innovantes et accroissent le potentiel dj immense des
vaccins. Parmi ces nouvelles technologies en vaccinolo-
gie, le dveloppement de vaccins vivants recombinants et
multivalents, celui de la vaccination par ADN, lutilisation
de pseudo-particules virales, le ciblage et lutilisation des
cellules dendritiques, occupent des places trs importantes
dans les recherches acadmiques et industrielles comme
en tmoigne le nombre impressionnant de publications
scientifiques sur le sujet.
4. Vaccins ADN
La vaccination gntique ou vaccination par ADN nu est
un concept novateur en vaccinologie, n au dbut des
annes 90 [5]. Il ne sagit plus dadministrer les antignes
ports ou purifis partir des micro-organismes mais din-
troduire directement par injection intramusculaire ou intra-
dermique le gne codant lantigne vaccinal clon dans
un plasmide dADN bactrien (gure 1C). Les avantages
de lutilisation de lADN sont nombreux. Les vecteurs sont
faciles construire et produire en grandes quantits. Ils
sont trs stables y compris temprature ambiante ; en
consquence, le stockage, le transport et la distribution sont
plus pratiques et moins contraignants. Il est galement pos-
sible de construire des vecteurs multiples qui comprennent
diffrents gnes codant de multiples antignes et pouvant
ainsi largir la valence vaccinale [6, 7].
Plus important, lantigne produit partir du vaccin ADN est
exprim dans les cellules transfectes et sera donc directe-
ment prsent par les molcules du CMH de classe I. Dans
le cas o la cellule transfecte est une cellule prsentatrice
dantignes (CPA), elle aura la capacit de dclencher une
rponse CTL aprs migration vers les ganglions lymphodes
o elle prsentera lantigne associ aux molcules CMH
classe I aux lymphocytes T CD8+. Lexpression de lantigne
par dautres types cellulaires (myocytes ou kratinocytes)
semble contribuer galement au dclenchement des rpon-
ses immunitaires. Les modifications post-traductionnelles
apportes aux protines produites dans les cellules trans-
fectes assurent une conformation native des antignes,
favorisant ainsi le dveloppement de rponses anticorps
aprs leur externalisation. De plus, la capture par les CPA
de ces protines no-exprimes assure lactivation des
lymphocytes helper T CD4+ qui renforcent les rponses
immunitaires induites.
Les vaccins ADN apparaissent donc comme une strat-
gie sre et simple pour induire des rponses immunitaires
compltes (humorales et CTL), et font de cette approche
une alternative de choix lutilisation des vaccins vivants,

virulence des souches vaccinales attnues, et ceux des
vaccins protiques recombinants connus pour induire de
faibles rponses CTL.
Lefficacit de cette technologie de vaccination a rapidement
amen tester les vaccins ADN chez le primate non humain
et chez lhomme, pour diffrentes infections (hpatite B,
VIH, paludisme) [8, 9]. Un certain nombre de questions
concernant linnocuit de ces vaccins a alors t soulev,
dont le risque dintgration de lADN tranger dans un des
chromosomes du sujet vaccin. Trs peu deffets secondai-
res ont t observs, tmoignant de lexcellente tolrance la rponse helper de type 1 (Th1) et renforcer limmunit
ces vaccins et aucune intgration stable de lADN dans
les cellules de lhte na t rapporte [10, 11]. Au total, les nouvelles amliorations proposes pour la
Alors que les tudes ralises chez les rongeurs ont montr
une efficacit remarquable de limmunisation par injection
directe de lADN, les rponses immunitaires obtenues lors
des premiers essais cliniques ont t dcevantes [12]. Le
plus souvent des immunisations rptes avec de fortes
doses dADN (plusieurs milligrammes) sont ncessaires
pour induire des rponses immunitaires cellulaires faibles,
et peu dindividus dveloppent des anticorps contre les
antignes exprims [13].
Suite cette premire gnration de vaccins ADN dits
prometteurs , de nombreuses recherches ont t entre-
prises pour amliorer leur efficacit. Parmi les axes dve-
lopps, la question des modalits dadministration de
lADN a t particulirement tudie. En effet, la quantit pntration du matriel gntique dans la cellule savre tout
de cellules transfectes et la nature de celles-ci sont des
facteurs dterminants qui sont aujourdhui incrimins dans
lchec des premiers essais. Lintroduction parentrale de
lADN plasmidique en simple solution saline par voie intra-
musculaire, qui fut la voie principalement utilise dans les
premiers essais, limite le niveau de transfection et en cons-
quence la quantit dantignes exprims. Par ailleurs, cette
voie cible prfrentiellement les myocytes qui, en raison de
labsence dexpression de molcules de costimulation, ne
peuvent activer directement les lymphocytes T nafs mal-
gr la prsentation en surface des pitopes associs aux
molcules de CMH classe I. Aujourdhui, des techniques
alternatives sont exprimentes, ciblant prfrentiellement
la peau, tissu riche en CPA professionnelles (cellules de
Langerhans de lpiderme, cellules dendritiques du derme).
Parmi les mthodes dveloppes pour augmenter in vivo
lefficacit de transfection, des techniques biolistiques de
type gene gun (bombardement de lpiderme par des
microbilles dor recouvertes dADN), dinjection par jet
sans aiguille (administration cutane dADN en solution sali-
ne propulse grande vitesse) ou encore dlectrotransfert
(application dun champ lectrique entre deux lectrodes
au site dinjection) semblent les plus prometteuses [14,
15]. Dans nos tudes, nous avons dj compar certai-
nes de ces mthodes dinjection. De faon schmatique,
nous avons observ que linjection intramusculaire chez
la souris, qui requiert au moins 100 g dADN, est 10 fois
moins efficace quune injection intramusculaire suivie dune
lectroporation, pour linduction des rponses vaccinales,
qui est galement moins efficace que la technique de gene
gun qui ne ncessite que 0,5 g dADN [16], elle-mme
moins efficace que les techniques par jet ou injection
intradermique suivie dune lectroporation (qui ncessitent
toutefois 10 g dADN) [17].
VOLUTIONS RCENTES EN MICROBIOLOGIE
Par ailleurs, des stratgies immunostimulatrices sont propo-
ses pour augmenter ou orienter les rponses immunitaires
induites aprs vaccination ADN. Ces stratgies adjuvantes
consistent administrer simultanment lADN vaccinal des
squences exprimant des cytokines ou dautres molcules
immunostimulatrices [18]. Parmi ces adjuvants gntiques,
les oligodsoxynuclotides synthtiques de type CpG,
drivs dADN bactrien et capables de se lier et dactiver
le toll-like receptor de type 9 exprim par les cellules
dendritiques, sont particulirement efficaces pour renforcer
spcifique antivirale ou anti-tumorale [19].
vaccination ADN [13], qui visent renforcer lefficacit
de transfection, augmenter le niveau dexpression des
antignes ainsi que leur immunognicit, mais aussi leur
association dautres vaccins dans des stratgies vacci-
nales de type prime-boost (dcrites plus loin) feront de
ces vaccins ADN, de deuxime ou troisime gnration,
une ralit [15].
5. Vecteurs vivants recombinants
La stratgie de vaccination au moyen de vecteurs vivants
recombinants peut tre perue comme une optimisation de
la stratgie de vaccination ADN, pour laquelle ltape de
particulirement efficace et non limitante. Les squences
gntiques vaccinales sont ici vhicules par des vecteurs
bactriens ou viraux vivants non-rplicatifs. Nous nous
intresserons ici plus particulirement ces derniers, qui
constituent les vecteurs naturels les plus volus pour le
transfert de matriel gntique dans la cellule hte et qui
sont majoritairement utiliss en essais cliniques.
Un vecteur viral est un virus dans lequel des gnes essentiels
la rplication virale ont t ventuellement supprims (le
virus est alors dfectif pour la rplication) et remplacs par
des squences codant les antignes dintrt (gure 1D).
De nombreux virus ont t modifis gntiquement afin de
pouvoir les utiliser comme vecteurs de vaccination. Parmi
ceux l, les adnovirus, les virus adno-associs (AAV),
les rtrovirus, le virus de la vaccine ainsi que les diffrents
virus de la famille des Poxviridae sont principalement utili-
ss. Chaque systme de transfert de gnes possde ses
avantages et ses limites, portant notamment sur la taille
des inserts vhiculs, le tropisme cellulaire du vecteur et
son immunognicit. Comme indiqu prcdemment,
cest lefficacit dinfection des cellules et donc le fort taux
dexpression des antignes, qui font de ces vecteurs des
candidats vaccins de choix. Un autre des avantages consi-
drables de ces vecteurs est que leur administration imite
linfection naturelle, favorable linduction dune rponse
immunitaire forte et durable. Leur efficacit est souligne
par leur capacit induire une rponse cellulaire et/ou
humorale aprs une seule injection. Lexpression intra-
cellulaire des antignes fait de ces vecteurs des vaccins
particulirement efficaces pour induire des rponses CTL.
Contradictoirement, leur inconvnient majeur, en plus de
celui li la pathognicit potentielle du virus utilis suite
une ventuelle recombinaison avec un virus sauvage,
rside dans limmunognicit de ces vecteurs. En effet,
REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417 // 73
 suite linjection du vecteur viral recombinant, le systme
immunitaire ragit la fois contre lantigne nouvellement
exprim mais galement contre le vecteur lui-mme. Faisant
de cette limite une force, il a t propos de produire des
vaccins multivalents en utilisant un virus modifi contre
lequel on cherche vacciner la personne utilis comme
vecteur et qui expriment un ou plusieurs antignes dintrt
drivs dun autre pathogne. Plusieurs candidats vaccins
de ce type sont en cours dvaluation, notamment un vaccin
recombinant rougeole-VIH, constitu dun virus de la rougeole
attnu et portant des antignes du virus du sida [20, 21].
Limmunognicit de ces vecteurs constitue cependant une
limite dans la plupart des protocoles, empchant les injec-
tions rptes dun mme vecteur vaccinal [22]. Mais aussi
dans le cas o le sujet prsente une immunit prexistante
contre le vecteur utilis, la rponse induite contre lantigne
dintrt peut alors tre significativement rduite voire abo-
lie suite la neutralisation du vecteur avant quil nait eu le
temps dinfecter les cellules de lhte [23, 24].
Dans les protocoles vaccinaux qui requirent des injec-
tions multiples, il est donc ncessaire dadministrer lanti-
gne sous des formes diffrentes. Ces stratgies dites de
prime-boost consistent administrer le mme antigne
prsent successivement dans le contexte de deux (voire
trois) vecteurs ou formulations diffrentes. Les stratgies les
plus rpandues combinent un vecteur viral recombinant en
primo-injection un deuxime vecteur viral diffrent ou des
protines recombinantes (produites par gnie gntique) en
injection de rappel ; mais aussi des stratgies associant lADN
un vecteur viral recombinant. Ainsi, chez le primate, une
immunit protectrice contre le virus de limmunodficience
simienne a t rcemment obtenue aprs injections de deux
vecteurs adnovirus rAd26/rAd5 [25]. Chez lhomme, des
rponses immunitaires leves contre des antignes du VIH
ont t obtenues aprs immunisation par des combinaisons
de types ADN/vecteurs poxvirus (MVA ou NYVAC) [26, 27].
Plusieurs essais cliniques sont en cours pour tester leffi-
cacit de ces diverses combinaisons. Le rationnel de ces
combinaisons reste encore empirique et lefficacit sup-
rieure de certaines combinaisons par rapport dautres
reste mal comprise. Il semble galement vraisemblable que
le choix de la combinaison gagnante soit dpendant de
lantigne et du pathogne cible.
6. Pseudo-particles virales
ou VLP
Les VLP ( virus-like particle en anglais) sont des particules
vaccinales formes de protines recombinantes sous-unitai-
res, capables de sassembler en une structure particulaire,
reproduisant fidlement la structure des particules virales
(gure 1E). Lassemblage particulaire de ces immunog-
nes et labsence de gnome viral font deux des candidats
vaccins de choix en raison de leur forte immunognicit et
de leur haut niveau de scurit. ce jour, des vaccins de
type VLP sont dj commercialiss pour les infections
hpatite B et papillomavirus humains (HPV) responsables
du cancer du col de lutrus.
De nombreux types de VLP sont maintenant dvelopps
partir de plus de trente virus diffrents [28]. Leur production
74 // REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417
est systmatiquement ralise par gnie gntique. Les
gnes codant les protines structurales sont clons puis
exprims dans des systmes dexpression procaryote ou
eucaryote. Les VLP drives de virus non-envelopps sont
gnralement formes des seules protines de capside ayant
la particularit de sauto-assembler aprs expression in vitro
telles les protines L1 de HPV-6, -11, -16, -18 produites
sur levure (Saccharomyces cerevisiae) et incluses dans le
vaccin Gardasil [29]. La production des pseudo-particules
drives de virus envelopps rsulte quant elle de las-
semblage des protines de capside et des glycoprotines
denveloppe dans un systme dexpression cellulaire (de
mammifre ou dinsecte). De telles VLP sont aujourdhui
dveloppes pour une application vaccinale contre le VIH
partir des protines Pr55Gag et des glycoprotines Gp160,
Gp120 ou Gp41 [30] ou pour une application vaccinale
contre le VHC partir des protines Core et des glycopro-
tines E1E2 [31].
La forte immunognicit de ces vaccins a conduit utiliser
les VLP comme des plateformes antigniques, en implantant
dans les protines structurales des antignes vaccinaux
(pitopes ou polypeptides) htrologues [32]. Ce greffage
antignique est principalement ralis par gnie gntique,
gnrant une protine de fusion entre les antignes et les
protines structurales. Alternativement, lassociation entre
les deux entits peut tre ralise par couplage chimique.
La socit suisse Cytos Biotechnology propose aujourdhui
plus de dix candidats vaccins diffrents, tous bass sur le
greffage dantignes sur des pseudo-particules drives de
bactriophage, et ayant pour cible des extraits allergniques
dacarien, des molcules de linflammation ou encore la
nicotine ou la cocane [33].
La remarquable immunognicit des VLP peut sexpliquer
par leur capacit tre efficacement reconnues et prises en
charge par le systme immunitaire. La dimension des VLP,
leur structure particulaire et leur capacit interagir avec des
rcepteurs cellulaires de surface facilitent leur migration vers
les organes lymphodes drainant et leur capture par les CPA
rsidantes. Une fois pris en charge, les antignes drivs
sont dgrads et prsents efficacement par les molcules
de CMH classe II et exceptionnellement par les molcules de
classe I (mcanisme de prsentation antignique croise).
Il est galement propos que la rptition des motifs anti-
gniques prsents la surface des VLP facilite lactivation
des lymphocytes B et la scrtion danticorps [34].
Lensemble des donnes dimmunognicit obtenues dans
les modles dtudes exprimentaux et chez lhomme confir-
me le potentiel des VLP induire des rponses immunitaires
compltes et de forte intensit. Seule la production grande
chelle reste aujourdhui une des limites majeures lutilisa-
tion des VLP enveloppes en vaccination humaine.
7. Stratgie combine :
les plasmoVLP
Sur ces conclusions, nous avons dvelopp un nou-
veau concept vaccinal dit plasmoVLP . Les plasmoVLP
sont des vaccins ADN capables de former in vivo des
VLP recombinantes vhiculant les antignes vaccinaux
(gure 1F). Cette stratgie vaccinale combine les avanta-

ges des vaccins ADN et VLP offrant ainsi lavantage dune
production simple, rapide, peu onreuse et grande chelle
des vecteurs ADN plasmidiques tout en assurant une forte
immunognicit des antignes exprims, vhiculs la sur- lisation de cellules tumorales inactives, associes un
face des VLP produites in situ par les cellules transfectes.
Nous avons choisi de gnrer des VLP qui drivent dun
rtrovirus murin (Moloney murine leukemia virus). La simpli-
cit de son gnome, sa facile manipulation gntique et la
capacit de ce virus tre pseudotyp par des enveloppes
htrologues ont dtermin ce choix. Selon lapplication
vaccinale, il est possible dinsrer des squences gnti-
ques spcifiques des antignes vaccinaux dans les gnes
codant les protines de structure rtrovirales (Gag et/ou
Env) ou de substituer lenveloppe rtrovirale par une autre
enveloppe virale (VHC, VIH). Nous avons pu dmontrer
que linsertion des antignes dans gag ou env ne limitait
pas la formation des VLP, et permettait de gnrer une
rponse efficace contre les antignes insrs, rponse plus
forte que celle induite par des constructions contrle ne
formant pas de VLP. Lavantage de la formation des VLP
a galement t observ pour la gnration des anticorps
neutralisants [17] et linduction dune immunit antivirale
protectrice [16]. Aujourdhui, nous travaillons appliquer
la stratgie plasmoVLP pour des vaccinations prventives
contre le VHC [22], le VIH et les infections Inuenza (H5N1
et H1N1/2009). Nous cherchons galement renforcer
limmunognicit de nos vaccins en insrant la surface
des VLP des molcules capables de cibler et dactiver les
cellules dendritiques, ce qui devrait favoriser le dclenche-
ment des rponses immunitaires.
8. Ciblage des antignes
vers les cellules dendritiques
La comprhension du rle majeur jou par les cellules den-
dritiques dans linduction des rponses immunitaires a fait de
ces cellules un acteur cl dans le dveloppement vaccinal.
La capture et la prsentation des antignes par ces cellules
sont des tapes dcisives pour limmunognicit du vaccin.
Aujourdhui de nombreuses stratgies cherchent dlivrer
spcifiquement les antignes vers les cellules dendritiques
(gure 1G). Pour cela, les antignes peuvent tre coupls
des anticorps reconnaissant spcifiquement les molcules
de surface des cellules dendritiques [35] ou des toxines
bactriennes ayant la capacit de se fixer sur des molcules
de surface des cellules dendritiques [36, 37]. Plus rcem-
ment, il a galement t propos de cibler spcifiquement
les CPA laide de vecteurs viraux recombinants (lentivirus)
pseudotyps avec une enveloppe mute, rendue spcifique
des cellules dendritiques [38]. Globalement, il a t montr
que ces stratgies favorisent la prsentation antignique par
les CPA et linduction des rponses CTL [39]. Ces strat-
gies sont principalement dveloppes en vaccination anti-
infectieuse (VIH, malaria) ou anti-tumorale et sont actuelle-
ment testes en clinique humaine.
9. Vaccins cellulaires
Plus spcifiquement destines aux immunothrapies anti-
tumorales, les vaccins cellulaires sont un nouveau type
VOLUTIONS RCENTES EN MICROBIOLOGIE
de vaccins adapts pour la gnration de rponses CTL.
Ils sont constitus de cellules tumorales ou de cellules
dendritiques charges avec les antignes tumoraux. Luti-
adjuvant, en vaccination anti-tumorale, est conceptuel-
lement satisfaisante, puisque ces cellules constituent
une source authentique dantignes tumoraux qui seront
activement reconnus en prsence dadjuvant. La difficult
daccs et de purification de ces cellules tumorales ainsi
que la dcouverte dantignes communs un mme type
de tumeur ont conduit utiliser en thrapeutique des
lignes cellulaires tumorales allogniques (non-spcifiques)
prfrentiellement des cellules spcifiques du patient.
Toujours dans le but de renforcer limmunognicit de ces
vaccins, des modifications gntiques des cellules tumo-
rales ont galement t ralises, leur faisant exprimer
des cytokines immunostimulatrices et/ou des molcules
de co-stimulation [40]. Ces modifications font de ces cel-
lules tumorales de vritables CPA artificielles capables
dactiver efficacement les lymphocytes T spcifiques des
antignes tumoraux.
Alternativement, lutilisation de cellules dendritiques char-
ges avec des antignes tumoraux est une stratgie plus
directe qui permet dinduire efficacement des rponses T
spcifiques chez les patients traits [41]. Les antignes
tumoraux peuvent tre apports sous forme de broyat
tumoral, de peptides synthtiques spcifiques de la tumeur
et pouvant tre prsents par les molcules CMH du
patient, ou de squences gntiques (ADN ou ARN) sp-
cifiques des antignes exprims ex-vivo dans les cellules
dendritiques (gure 1G).
Malgr son efficacit dinitiation des rponses immunitaires,
force est de constater que cette stratgie na obtenu que
de faibles rponses cliniques objectives. Il est aujourdhui
admis la ncessit de combiner cette stratgie des
stratgies adjuvantes, tel lajout de ligands aux toll-like
receptor ou la molcule CD40, qui induisent lactivation
des cellules prsentatrices dantignes et renforcent leur
capacit stimulatrice (par augmentation dexpression des
molcules de costimulation en surface). Par ailleurs, des
interventions complmentaires qui rglent le problme de
la phase de reconnaissance de la cellule tumorale et celui
de la tolrance locale induite par la tumeur sont galement
proposes.
10. Nouvelles voies
dadministration
Tout comme soulign prcdemment, le succs des stra-
tgies vaccinales repose sur la comprhension gn-
rale des mcanismes immunologiques et lintgration de
ces connaissances. Ainsi, les modalits dadministration
des vaccins sont aujourdhui dfies. Jusqu ce jour, les
vaccins taient surtout inoculs par voie sous-cutane
ou intramusculaire. Lavantage de ces voies tient un
contrle de la dose injecte, et un dpt de lantigne,
qui, en prsence dadjuvant, sera libr progressivement
et stimulera le systme immunitaire durablement. Cepen-
dant, ces vaccins injectables traditionnels engendrent une
bonne immunit systmique mais ninduisent pas ou peu
REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417 // 75
 dimmunit au niveau des muqueuses, qui reprsentent le
premier site dentre des pathognes dans lorganisme (via
les systmes respiratoire, intestinal et gnital). Il est donc
important de dvelopper de nouveaux vaccins dutilisation
simple et capables de confrer une protection tendue,
muqueuse et systmique. Parmi les voies dadministra-
tions, linjection pidermique, intradermique, transcutane,
intranasale, orale et rectale sont aujourdhui ltude [42,
43]. En plus daugmenter lefficacit des mcanismes
protecteurs, la vaccination par voie muqueuse devrait
galement faciliter laccessibilit aux vaccins en simplifiant
leur administration.
11. Conclusion
Les efforts rcemment dploys pour le dveloppement de
nouveaux vaccins a conduit sinterroger sur le vaccin idal,
cest--dire celui qui permettrait la ralisation lchelle
mondiale de la couverture vaccinale la plus large et la plus
efficace. Cette ralisation implique la satisfaction dexi-
gences de plusieurs ordres: scientifiques (efficacit sans
Rfrences
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76 // REVUE FRANCOPHONE DES LABORATOIRES - DCEMBRE 2009 - N417
effet secondaire), technologiques (stabilit), sociologiques
(facilit dadministration) et conomiques (faible cot du
vaccin et de la vaccination). Lidal serait une prparation
vaccinale stable confrant, vie, une immunit protectrice
universelle (totivalente) aprs une seule administration
par voie non invasive. Il est hautement vraisemblable que
la satisfaction de cet idal se heurtera des obstacles
thoriques et pratiques, dont certains seront insurmon-
tables. Nanmoins, cette dfinition a le mrite de donner
aux chercheurs limpulsion ncessaire pour aborder ce
dfi, dont laccomplissement requiert la mise en jeu des
technologies les plus innovantes. Cest ainsi que beau-
coup defforts sont consacrs obtenir des formulations
vaccinales innovantes, plus performantes, pouvant tre
produites aisment et assurant une valence multiple, et
aussi des moyens de prsentation antignique convenant
la voie muqueuse assurant une immunit complte :
locale et systmique, humorale et cellulaire.
Conit dintrt : aucun.
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