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Universidad Galileo

Facultad de Ciencias de la Salud


Biologa Molecular
Licenciatura en Qumica Biolgica
Integrantes:
Brisalina Tomas
Patricia Pascual
Astrid Samayoa
Kenya Uln

Prctica 1.
Extraccin de ADN en Fresas
1 ANTECEDENTES
La extraccin consiste en el aislamiento y purificacin de molculas de ADN, basada en las
caractersticas fisicoqumicas de las molculas. El ADN est constituido por dos cadenas de
nucletidos unidas entre s formando una doble hlice. El ADN es una estructura qumica cuyos
elementos fundamentales son los nucletidos, estos se organizan de manera lineal generando
enormes secuencias de informacin, La informacin que define y codifica un carcter determinado
se le denomina gen. (Alejos et al, 2008).

Los grupos fosfato del ADN estn cargados negativamente y son polares, lo que le confiere el ADN
una carga neta negativa y lo hace altamente polar, caractersticas que son aprovechadas para su
extraccin, los grupos fosfato tienen una fuerte tendencia a repelerse, debido a su carga negativa,
lo que permite disolver al ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de
la molcula. Pero en presencia de etanol se rompe la capa hidratante y quedan expuestos los grupos
fosfato. Bajo estas condiciones se favorece la unin con cationes como Na+ que reducen las fuerzas
repulsivos entre las cadenas de nucletidos y permiten que el ADN precipite (Sambrook et al,
1989). Por otro lado la capa neta negativa del ADN le permite unirse a molculas y matrices
inorgnicas cargadas positivamente (Nason 1965 travaglini 1973 Sambrook et al 1985).

Los polmeros son molculas que tienen la capacidad de unirse y formar cadenas. La molcula de
ADN es un polmero de cadenas de nucletidos. Es decir es polinucletido,existen diversos
procedimientos para extraer ADN de las clulas. Estos varan en lacantidad y pureza del ADN que
se obtiene al finalizar el procedimiento, pero la base detodos ellos es muy similar.La extraccin de
ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y
la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse
tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de
enzimas que puedan degradarlo y paraaislarlo hay que hacer que precipite en alcohol .La solucin
con detergente y sal es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear.El
alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando seencuentra en alcohol
se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.Cuando el ADN va a utilizarse en
el laboratorio para otras aplicaciones, se toman estasfibras que precipitan en la interfase y se
disuelven en agua o en un amortiguador apropiado.Esta solucin de ADN se puede mantener a 4C
(en un refrigerador) por aos, puesto quees una molcula muy estable.
2 OBJETIVOS
GENERAL
Obtener el ADN de fresas mediante tres mtodos de extraccin de enzimas de diferente
procedencia.
ESPECFICOS
a. Determinar que mtodo es ms efectivo para extraer ADN
b. Definir cada una de las funciones que cumplen los reactivos y los materiales agregados
durante el proceso de extraccin del ADN.

3 MATERIALES Y EQUIPO
EQUIPO
227 grs de fresas
Sal
Detergente
Tubos cnicos
Un ablandador
Jugo de pia
Jugo de papaya
Recipiente para mezclar (mortero, pistilo)
Colador
REACTIVOS
100ml de agua desmineralizada
Alcohol al 95%
VARIOS
Equipo de bioseguridad (bata, lentes, guantes, gorro)
Equipo de limpieza (algodn, alcohol)

4 PROCEDIMIENTO
a) Obtencin de la muestra para la extraccin
Poner en una licuadora o moler:
libra de fresas
Agregar 1/8 cucharadita sal de mesa (menos de 1 ml, es decir una pizca)
Mezclar por 15 segundos, evitando que las fresas se calienten porque pierden el material
gentico que las compone (se rompe).
Seguidamente colar las fresas obteniendo nicamente el jugo
Agregue 2 cucharadas de detergente lquido (aproximadamente 30 ml)
Mezclar
Dejar que la mezcla repose durante 5-10 minutos en el refrigerador.
Sacar la mezcla del refrigerador
Vertir 1/3 del tubo con la mezcla, es decir 5 ml en los tres tubos previamente rotulados.
Agregar una pizca de enzimas a cada tubo (ablandador, jugo de pia y jugo de papaya, y
revolver suavemente.
Usar los tres mtodos de extraccin y obtener los resultados correspondientes

b) Separacin de alcohol
Inclinar el tubo de ensayo y vertir lentamente alcohol de friccin (70-95% isopropilo o
alcohol etlico), en el tubo suavemente inclinado para que forme una capa encima de la
mezcla.
Vierta hasta que tenga sobre el la misma cantidad de alcohol en los tres tubos.
El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior separando el
ADN.

5 RESULTADOS
TABLA N.1 Mtodos de extraccin de ADN a partir de jugo de fresas
Mtodo de Caractersticas Color Resultados
extraccin obtenidos
Jugo de pia spero Blanco +
Jugo de papaya Ligoso Blanco +++
Ablandador spero Blanco +++
(suavirrico)

Figura N.1
Extraccin del ADN mediante
la enzima bromelina obtenida
del zumo de pia
Figura N.2
Extraccin del ADN mediante la
enzima bromelina/ papana
obtenida del ablandador suavirrico

Figura N.3
Extraccin del ADN mediante la
enzima papana obtenida del zumo
de papaya.
6 DISCUSIN DE RESULTADOS
Segn los resultados, el ADN obtenido de las fresas fu una capa blanca, larga y de consistencia
fibrosa. La sal que se le agreg, ayud a que se adhiriera. Entonces, lo que se obtuvo fueron grupos
de molculas de ADN enredadas entre s unas ms prominentes que otras. Segn la teora, el ADN
normalmente permanece disuelto en agua, pero cuando el ADN salado entra en contacto con el
alcohol no se disuelve. Esto es llamado precipitacin. La fuerza fsica del ADN se agrupa mientras
precipita tira ms hebras junto con l a medida que se eleva en el alcohol. Durante la obtencin del
ADN se utiliz un palillo de madera para recoger el mismo. Se dice que el ADN se puede almacenar
si se quiere observar detenidamente a un pequeo contenedor lleno de alcohol. Cuando se realiza
una extraccin pura de ADN a un compuesto como en el caso del experimento con las fresas, el
detergente es un compuesto que interviene en esta pureza ya que contiene lauril sulfato de sodio
que remueve grasas y protenas. ste acta de la misma manera en el protocolo de extraccin de
ADN, separando las grasas (lpidos) y las protenas que constituyen las membranas que rodean
la clula y el ncleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la clula.

Cabe mencionar que el calor suaviza los fosfolpidos (grasas) en las membranas que rodean la
clula y el ncleo. Tambin desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas
(ADNasas) las cuales, si estn presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeos que lo
hara imposible de ver, fue por esta razn que cuando se trituraban las fresas durante la extraccin
no se tenan que calentar demasiado por los aspectos anteriormente mencionados ya que si las
enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, ste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las
enzimas se desnaturalizan a 60 Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80 Celsius.

Por otro lado, los zumos de pia y papaya contienen enzimas, la bromelina y la papana, la solucin
ablandadora de carne tambin acta como una enzima, ya que contiene las enzimas de ambos
zumos, la funcin que cumplen estas enzimas es la de eliminar las protenas que puedan contaminar
el ADN. El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solucin, donde puede ser visto. Adems de
permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son
dejados en la solucin acuosa.

El material que se necesita para ello es fcil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno
de los ingredientes tiene su propia funcin. La solucin de sal y jabn sirve para romper la
membrana plasmtica y nuclear e incluso la pared celular. El alcohol etlico sirve para precipitar el
ADN.
7. CONCLUSIN
El resultado de la extraccin fue la aparicin de fibrillas de ADN de un color blanco precipitado
sobre el alcohol (mezcla Heterognea).

El proceso de extraccin de ADN desde una clula es el primer paso para


muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnologa.

Con esto podemos saber cmo es el procedimiento del extracto del ADN, as como su estructura
de una forma fcil y sencilla.

7 BIBLIOGRAFA
1. Bonfil O., Martn. 50 aos de la doble hlice. La molcula ms bella del mundo. Cmo
ves? DGDC UNAM. No. 53 Abril, 2003 pp. 10-16
2. Strathern, Paul. Crick, Watson y el ADN. Siglo XXI de Espaa, 199. 112 pp.
3. How to Extract DNA from a strawberry. Documento sin referencias, proporcionado por
investigadores del IBT-UNAM, Cuernavaca, Morelos.
4. Catal, Rosa Mara. Extraccin del ADN del kiwi. Revista Cmo ves? DGDC UNAM.
Gua del maestro No. 37. Edicin especial sobre las ciencias del genoma.

Disponible en:
http://www.conacytprensa.mx/index.php/vocabulario/6968-secuenciacion-de-adn
http://www.comoves.unam.mx/numeros/articulo/146/diez-anos-del-genoma-humano-promesas-
rotas-y-hallazgos-inesperadoshttp://www.cienciorama.unam.mx/a/pdf/302_cienciorama.pdf

8 ANEXOS