APUNTES DE INMUNOLOGIA

PARA ESTUDIANTES DE MEDICINA

PROCESAMIENTO Y PRESENTACIN DEL ANTGENO

Dr. Alex Castaeda

Dr. David Rodrguez
Curso de Inmunologa General UPAO

Los linfocitos T reconocen determinantes peptdicos producidos en dos compartimentos

celulares diferentes:
Los agentes infecciosos se replican en dos compartimentos celulares: Los virus se replican en
el citosol, mientras que la mayora de las bacterias patgenas y algunos parsitos se replican en el compartimento
vesicular, es decir los fagosomas y endosomas de la clula. El sistema inmune utiliza diferentes estrategias para
deshacerse de ellos. Las clulas infectadas con virus u otros agentes que viven en el citosol, son eliminados por
los LT citotxicos (CD8 +) y los agentes presentes en el compartimento endosmico por los LT CD 4+.
Los agentes infecciosos pueden llegar al compartimento vesicular de la clula de dos maneras:
Algunas bacterias, como las Mycobacterias (tuberculosis y lepra) tienen la capacidad de invadir macrfagos y
proliferar en las vesculas. Otras bacterias, de desarrollo extracelular, pueden producir toxinas y productos que
son internalizados por endocitosis o fagocitosis por los macrfagos y otras clulas. El linfocito B, a travs de
sus inmunoglobulinas de superficie tambin puede captarlos.
Los LT CD 4 + caen en dos categoras funcionales: Los que actan como helper o de ayuda, y
que activan al LB (segunda seal) y los LT inflamatorios o de hipersensibilidad retardada, o productores de
citoquinas, que activan macrfagos para que destruyan los grmenes que alojan.
Por lo tanto, los LT no solo discriminan entre lo propio y lo extrao, sino que son capaces de
reconocer de que compartimento celular proceden estos ltimos. Esto se logra presen-tando los pptidos extraos
sobre la superficie de la clula sobre dos clases de molculas diferentes. Los procedentes del citosol se presentan
sobre molculas MHC clase I y los provenientes de los endosomas sobre Clase II.
Como la generacin de los pptidos implica la modificacin de las protenas nativas, se lo
conoce como procesamiento del antgeno, mientras que la exposicin de los pptidos en los MHC sobre la
membrana corresponde a la presentacin del antgeno
Las molculas MHC Clase I y II, aunque diferentes en su estructura molecular, comparten
similitudes en su estructura tridimensional, ya que ambos tienen un bolsillo para alojar el pptido. La
diferencia entre los clase I, en los que el bolsillo est formado por plegamientos alfa hlice de la cadena alfa, y
los Clase II en que ambas cadenas alfa y beta concurren en la formacin del bolsillo, es que en stos ltimos el
bolsillo o hendidura est abierta en ambos extremos, mientras que en los clase I est cerrada y el pptido
queda enterrado en la molcula MHC.
El linfocito T reconoce eptopes cualitativamente diferentes de los que reconoce el LB. El LB,
y sus productos secretados, los anticuerpos, reconocen estructuras terciarias sobre la superficie de molculas
complejas de antgenos, es decir, secuencias que pueden desaparecer al desenrollar la protena. El LT reconoce
secuencias cortas que pueden estar ocultas en el interior de la molcula de protena intacta. Son reconocidas slo
si son expuestas sobre la molcula MHC. Esto ha sido demostrado estimulando LT con complejos peptido:
MHC.
 Como el pptido se une al bolsillo del extremo del antgeno MHC, el ligando que es reconocido
por el LT en realidad slo vara en la parte que expone el pptido. Visto desde arriba, cmo lo vera el LT, el
pptido ocupa la parte central y est rodeado por las alfa hlices de la cadena alfa en clase I y de cadenas alfa y
beta en clase II. Se calcula que la superficie de contacto del TCR (Receptor para antgeno del LT) con el pptido
es de unos 600 A 2 en el centro del rea de contacto total.
Los pptidos se unen a las molculas MHC maduras:
Cada clula produce pocas molculas MHC diferentes, pero puede ser infectada por una gran
variedad de patgenos, cuyas secuencias peptdicas son diferentes. Para que los LT puedan saber que la clula
est infectada, los MHC deben ser capaces de unirse en forma estable a muchos peptidos diferentes. Esto los
hace muy diferentes de los receptores para molculas peptdicas, como los receptores de hormonas, ya que esos
se unen slo a ciertas molculas con alta especificidad. Aqu, mas bien ocurre lo mismo que con algunas
proteasas, en que el sitio activo de la enzima consta de unos 6 o 7 aminocidos, pero es un residuo particular el
que determina la unin. Los estudios cristalogrficos de los complejos MHC: pptido han demostrado cmo un
solo punto de unin puede conferir la estabilidad al complejo, y permitir, al mismo tiempo, el poder unirse con
muchos pptidos diferentes.
Los estudios que purifican los complejos MHC: pptido, los separan y, despus de
secuenciarlos, los vuelven a unir, han demostrado que los pptidos que se unen a MHC clase I son de 8 a 10
aminocidos de largo. El pptido queda fijo por los extremos, ya que sus extremos N- terminal y C-terminal
reaccionan con sitios constantes en las puntas de la hendidura ( bolsillo) El pptido queda estirado en la
hendidura (si es ms largo, se acomoda doblndose en los residuos glicina y prolina) Adems los pptidos tienen
residuos laterales pequeos en posiciones precisas, los que se alojan en bolsillitos laterales de la hendidura
principal del MHC y anclan el pptido en posicin, por lo que se llaman residuos ancla. Generalmente estn
cerca del extremo C- terminal y son hidrofbicos. Cada variante allica de MHC tiene sitios determinados para
anclar estos residuos, de manera que los pptidos que se unen a ese antgeno MHC comparten todos el residuo
ancla, y uno o dos residuos en la misma posicin, sin importar el largo del pptido (se acomoda doblndose) ni
el resto de su secuencia. As, la molcula MHC es capaz de unirse en forma estable a muchos pptidos diferentes
del tamao adecuado.
La interaccin con los clase II est menos comprendida a nivel molecular. Se sabe que los
pptidos que se unen a molculas clase II son de por lo menos 13 residuos o mucho ms largos, y que, al estar
abierto el bolsillo en los extremos, no existen los sitios constantes de unin a los extremos del pptido y a los
residuos ancla. Aparentemente el pptido es mantenido en su lugar por interaccin con las cadenas que forman
las paredes de la hendidura.
Procesamiento de pptidos que se unen a molculas MHC clase I:
En general, las molculas de superficie, includas las MHC, son sintetizadas en la cara citoslica
del retculo endoplsmico y traslocadas al lumen de ste, donde se pliegan antes de ser transportadas a la
membrana. Entonces: Cmo es posible que un pptido proveniente de un virus en el citosol llegue al interior
del RE para unirse con el MHC?
La respuesta a esta pregunta se obtuvo a travs de trabajos hechos en la dcada de los 80 con
una lnea de clulas mutantes que tienen un defecto en la presentacin de antgenos por MHC clase I, os que
casi no se expresan en la membrana, aunque son sintetizados por la clula. Esta observacin hizo suponer que
la unin al pptido citoslico era indispensable para la expresin de MHC en la membrana. El estudio de DNA
de stas clulas demostr que los genes faltantes correspondan a dos protenas de unin al ATP (ATP-binding
proteins). Estas protenas estn codificadas dentro de la regin MHC, y participan en fenmenos de transporte
de membrana en muchas clulas, incluidas algunas bacterias. Esta familia de protenas est asociada con el
transporte dependiente de ATP de azcares, iones, aminocidos y pptidos a travs de membranas. Las protenas
transportadoras que faltaban en las clulas mutantes correspondan a transportadores asociados a membrana de
RE. La transfeccin de los genes deletados a las clulas hizo que ellas empezaran a expresar normalmente los
clase I en su membrana.
Estas protenas se conocen ahora como las TAP 1 y TAP-2 (Transportadoras asociadas con Antgenos
Presentados). Ambas protenas TAP forman un heterodmero y su funcin se ha demostrado en varios sistemas
in vitro. Se sabe que este sistema de transporte, ATP- dependiente, prefiere los pptidos de ms de 8 aminocidos
con un residuo hidrofbico en el extremo carboxiterminal, es decir el tipo exacto de pptido que se va a unir a
MHC clase I. Es decir, los pptidos citoslicos entran al lumen del RE a travs de un sistema especializado de
transporte.
Faltaba, sin embargo, explicarse porqu las clulas mutantes carentes de TAP casi no tienen
expresin de MHC clase I en su membrana. Se vio que las cadenas alfa recin sintetizadas en el RE se unen
rpidamente con la beta-2 microglobulina, y cuando estn parcialmente plegadas, se les une una protena
asociada a la membrana del RE, llamada calnexina, la cual retiene a la molcula MHC parcialmente plegada en
el lumen del RE. La calnexina participa tambin en el ensamblaje de otras molculas muy importantes en la
respuesta inmune, como los TCR y los MHC clase II. En las clulas carentes de TAP, estos complejos MHC
clase I- calnexina permanecen muchas horas en el RE, lo que indica que es la unin del bolsillo de la cadena
alfa con el pptido lo que permite que termine de plegarse, se disocie de la calnexina y pueda ser transportada a
la membrana. Una vez unido el pptido, la molcula MHC clase I se hace muy estable y es rpidamente
transportada en vesculas de exocitosis a la membrana.
En clulas normales, tambin se encuentran continuamente muchos complejos MHC-
calnexina en el interior del RE, lo que sugiere que hay exceso de molculas clase I en relacin a los pptidos.
Esto es lgico si se considera la funcin de estas molculas, ya que ellas deben estar siempre dispuestas a
transportar y presentar pptidos virales apenas la clula se infecte, para que la respuesta sea efectiva. En
condiciones normales, los MHC clase I se unen con los pptidos celulares propios normales que cumplan las
caractersticas para combinarse con ellos, por lo que, para asegurar que no van a faltar molculas para presentar
los pptidos virales apenas entre un virus, es teniendo un exceso de ellas siempre disponible.
Los pptidos que van a ser transportados al interior del RE por las TAP, se originan en el
citosol. Normalmente las clulas estn degradando sus protenas viejas y reemplazndolas por otras recin
sintetizadas. Gran parte de la degradacin citoslica de protenas la realiza un complejo de proteasas
multicataltico, formada por 28 subunidades, llamada proteasoma. Es interesante que algunas unidades (no
todas) de esta enzima se codifican tambin en la regin MHC, cerca del gen de las TAP, lo que sugiere que
habran proteasas especficas para producir pptidos que puedan unirse a MHC clase I. Tambin es posible que
estas enzimas codificadas dentro de MHC de alguna manera favorezcan la unin del pptido a las TAP, para su
transporte al interior del RE, aunque las evidencias experimentales an no son claras al respecto.
Si los MHC clase I presentan pptidos que se originan en el citosol, Cmo se explica que
presenten pptidos de protenas de membrana de la clula, o de productos secretados por ella, los que
normalmente se traslocan al interior del RE como protena, para ser transportados a la membrana o al exterior?
Se cree que puede pasar que no todas estas molculas de protenas son efectivamente traslocadas al RE, y que
algunas se quedan en el citosol. Las secuencias especficas de aminocidos aminoterminales que protegen a las
molculas recin sintetizadas de ser degradadas en el interior del RE, son una seal para degradacin rpida en
citosol (y viceversa). Entonces, una molcula perdida que est en el citosol debiendo estar dentro del RE, es
rpidamente degradada y sus pptidos son transportados por las TAP y se unen a los MHC clase I.
Procesamiento de pptidos que se unen a los MHC clase II:
Los grmenes de desarrollo extracelular que son ingeridos por los macrfagos, y aquellos que
se multiplican en el interior de las vesculas de stas clulas (como las Mycobacterias que causan la tuberculosis
y la lepra), no son accesibles a la accin del proteasoma, y son degradados por las proteasas presentes en las
vesculas en peptidos que se unen a los MHC clase II y son presentados a los LT CD 4 (+). Lo mismo ocurre
con cualquier protena extracelular que sea internalizadas por las clulas.
Lo que se sabe de esta va de procesamiento de antgeno proviene de experimentos hechos con
protenas simples que se agregan a cultivos de clulas presentadoras, ya que as se puede cuantificar los pasos
del procesamiento. Se sabe que las vesculas endocitsicas tienen un ambiente cada vez mas cido a medida que
progresa el proceso de su contenido. Si se sube el pH, el procesamiento de las protenas se detiene. Esto hace
pensar que las enzimas que actan deberan ser proteasas cidas. Entre ellas se encuentran la catepsina B y la
D. Se ha visto que, hasta cierto punto, se puede reproducir el procesamiento in vitro, usando estas enzimas en
pH cido.
Los MHC clase II viajan a la membrana en vesculas y, en algn momento stas deben unirse
con los endosomas, para que se una el peptido y la molcula se exprese en la membrana. La funcin de los MHC
clase II es presentar los antgenos procesados por la va de los endosomas, por lo que se debe evitar que se unan
a ellos los peptidos transportados por las protenas TAP mientras las molculas MHC clase II recin sintetizadas
estn an en el RE. Esto se logra por la accin de una protena que se suele llamar cadena invariable de clase
II o protena Ii. Esta protena es un trmero, y cada una de sus unidades se une en forma no covalente con el
heterodmero alfa- beta clase II. En esta unin participa la calnexina, la que se disocia slo cuando el complejo
de Clase II-Ii est completamente ensamblado. Esto evita que los MHC clase II puedan unirse a los pptidos
presentes en el RE. La protena Ii, gracias a la estructura del extremo N-terminal citoslico de su molcuala,
dirige la migracin de los MHC II a las vesculas, que son un tipo intermedio entre endosoma y lisosoma, y que
algunos autores llaman compartimento Clase II, donde estos se pueden encontrar por varias horas. Dentro del
endosoma, la Ii va siendo degradada en forma ordenada y secuencial. Primero se degrada la parte que obstruye
el bolsillo del clase II, un pptido pequeo llamado CLIP (CLass II associated Invariable chain Peptide), pero
queda el resto de la cadena, que mantiene al MHC en el compartimento endosomal, pero permite que se le una
un peptido en el bolsillo. Cuando ya ste se ha unido, se degrada el resto de la cadena invariable y el MHC
queda libre para migrar a la membrana. Si cuando la cadena Ii se disocia por completo el MHC an no est
ocupado por un peptido, es rpidamente degradado por las proteasas del endosoma. Eso significa que muchos
de los peptidos presentados por Clase II son fragmentos de las molculas Clase II degradadas. Esto hace suponer
que, igual que con clase I, hay molculas clase II en exceso, de manera que cuando hay una infeccin por
grmenes de desarrollo intraendosomal, o hay ingestin de partculas extraas, o el linfocito B internaliza un
complejo de antgeno- inmunoglobulina de superficie, haya suficientes molculas Clase II vacas para
presentar al LT y as permitir la activacin del macrfago y la sntesis efectiva de anticuerpos por el LB.
La unin de los MHC con los peptidos debe ser estable, ya que, si se disociara fcilmente, por
una parte, el linfocito T no vera que la clula est infectada y, por otra parte, una molcula MHC sobre una
clula no infectada podra combinarse con un peptido liberado desde otra clula, y sera destruda ( por el LTc)
sin necesidad una clula. Los experimentos hasta ahora sugieren que la unin es, en realidad, casi irreversible.
Esto asegura que la presentacin del antgeno ser prolongada y eficiente. Adems, si se disocia un complejo
MHC- peptido artificialmente, la molcula MHC se vuelve inestable, pierde su conformacin, la beta-2 micro
se disocia inmediatamente de los clase I, y la molcula es degradada.