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INFORME DE BIOLOGA

GRUPO 3
INTEGRANTES: Scarleth Soto
Gisselle Soto
Matas Rojas
Jordi Osorio
Informe de biologa

Cmo reconocer un catalizador biolgico y sus caractersticas? Cmo


afectan factores externos en ellas?
Introduccin

El problema de nuestra investigacin es ver cmo reaccionan estas enzimas segn


algunos factores y como estas pueden afectarnos, es decir, cmo se podra ver uno
afectado por una situacin as y el propsito es comprobar esta situacin con lo
practicado en el laboratorio y aparte utilizando fuentes externas.
Conceptos involucrados
Para empezar, debemos conocer definiciones bsicas:
Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de una reaccin
qumica, sin que ella se vea alterada como resultado del proceso.
La mayora de las enzimas son protenas
funcionan entre ciertos lmites de temperatura; requieren una temperatura ptima
su accin se manifiesta nicamente a cierta concentracin de protones Ph
concentracin del sustrato; a mayor concentracin de sustrato, la velocidad de
reaccin aumenta.
Inhibidores
Velocidad de reaccin; cantidad de sustancia que se transforma en una
determinada reaccin por unidad de tiempo y volumen.

Qu fenmenos, objeto o acontecimiento estudi u observ?


Los objetos que utilizamos fueron tubos de ensayos, reactivos, papas, mortero, arena fina,
mechero, gradillas, agua destilada, vasos precipitados, Lugol, buffer fosfato, pipetas
volumtricas, solucin de almidn, etc.
Lo que vamos a estudiar nosotros es cmo reacciona la enzima segn algunos factores,
tales como agregar H2O2, variacin de temperatura, etc.
1.-En el prctico uno utilizamos papas, reactivos, tubos de ensayos. Ah lo que
observamos principalmente fue la formacin de burbujas, como variaba al modificar
algunas variables. Por ejemplo, al agregar H2O2 en una papa cruda se formaron burbujas
porque la catalasa degrada el H2O2 formando agua y oxgeno. En cambio, cuando
usamos FeCl3 y H2O2 la reaccin fue muy exotrmica y salieron ms burbujas que en la
anterior, al igual que el MnO2.
2.- En el prctico dos, observamos cmo la enzima se comportaba a los cambios de
temperaturas, por ejemplo, a una temperatura muy alta se desnaturaliza y a una muy baja
se inactivo.

Metodologa

Actividad Prctica N1
Materiales:

Tubos de ensayo
Perxido de hidrgeno (H O )2 2

Mortero
Arenas Fina
Papas Crudas
Mechero
Gradillas
MnO 2

FeCl3

Agua Destilada
Pinzas de madera
Rejilla
trpode

Montaje Experimental y Procedimiento 1 :


Se preparar una batera de tubos de ensayo rotulados del 1 al 5. En etapas
sucesivas se ir agregando sobre las sustancias a analizar, una cantidad
determinada de perxido de hidrgeno. Se cortarn 3 trozos de papa cruda de
igual tamao (Aproximadamente 0,5 cm de arista)
Tubo 1: Con una pinza de madera, se toma un trozo de papa cruda y se deja caer
en el fondo del tubo de ensayo. Se agrega sobre l 1,5 ml de H O . Se agita.
2 2

Tubo 2: Se toma otro trozo de papa cruda. Se coloca en un mortero con una
pequea cantidad de arena fina y 0.5 ml de agua destilada. Se macera la papa
hasta obtener una pasta acuosa, se deja escurrir el lquido turbio resultante en el
tubo de ensayo 2, cuidando de dejar el residuo grueso en el mortero a fin de
repetir la extraccin por unas dos veces ms. Desechar el resto del macerado.
Agregar 1,5 ml de H O sobre el lquido extrado. Agitar, observar y comparar con el
2 2

tubo anterior.
Tubo 3: Colocar aproximadamente 0,1 gr de Cloruro Frrico (FeCl ) en el fondo del
3

tubo de ensayo sostenido con pinzas de madera. Agregar enseguida 1,5 ml de


H O Agitar el tubo sin tapar teniendo cuidado con las manos y rostro, es una
2 2.

reaccin violenta. Observar la reaccin.


Tubo 4: Colocar aproximadamente 0,1 gr de dixido de manganeso (MnO ) en el 2

fondo del tubo de ensayo. Agregar enseguida 1,5 ml de H O . Agitar el tubo sin
2 2

tapar.
Actividad Prctica N2
Materiales:
Tubos de ensayo
Saliva
Gradillas
Hielo
Bao mara a 37C y 100C
Vasos de precipitado
Lugol
Buffer fosfato pH 7,0
Pipetas
Solucin de almidn al 0,3% en H O 2

2.1 Influencia de la concentracin de enzima


Montaje Experimental y Procedimiento 2:
Preparacin de dilucin de enzima amilasa: Recolectar
aproximadamente 2 mL de solucin con amilasa, extrada de la boca de
algn integrante del grupo, previamente enjuagada con agua destilada. Se
prepara con ella diluciones de saliva que tengan concentraciones
decrecientes de enzima (1:20; 1:40; 1:80 y 1:160). Utilizar pipetas de vidrio
y rotularlas. Llenar los tubos de ensayo de acuerdo con la siguiente tabla y
agitar:

Tubo de ensayo Dilucin a preparar Muestra H O destilada


2 Volumen total

1:20 1:20 0,5 mL de saliva 9,5 mL 10 mL

1:40 1:40 2 mL dil 1:20 2 mL 4 mL

1:80 1:80 2 mL dil 1:40 2 mL 4 mL

1:160 1:160 2 mL dil 1:80 2 mL 4 mL

Preparacin del medio de ensayo: Preparar cuatro tubos de ensayo


numerados como se indica en la siguiente tabla y agitar

Tubo de 1 2 3 4
ensayo

Buffer fosfato 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL

Dilucin de 1,5 mL de 1,5 mL de 1,5 mL de 1,5 mL de dilucin


saliva dilucin 1:20 dilucin 1:40 dilucin 1:80 1:160

Preparacin del sustrato: Preparar cuatro tubos con 2 mL de almidn


0,3% en H O, marcando cada tubo con: 1a, 2a ,3a ,4a.
2

Tubo de ensayo 1a
2a
3a
4 a

Almidn al 0,3 % 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

Ensayo enzimtico: Poner la batera de tubos a bao Mara (37C)


durante unos 3 minutos para ambientar sus contenidos a dicha
temperatura. Enseguida, se vaca el contenido de los tubos agregando la
enzima sobre el sustrato, es decir, tubo 1 sobre el tubo 1 , agitando a
suavemente. Se incuba inmediatamente los tubos que contienen las
mezclas durante 10 minutos a 37C. Acto seguido, se agrega una gota de
Lugol diluido a cada tubo. Anotar los resultados. Idear una escala arbitraria
para indicar las diferentes concentraciones de enzima empleada y sealar
la tasa de reaccin.
2.2 Influencia de la temperatura en la actividad enzimtica
Se incuban una serie de tubos de ensayo, conteniendo el sustrato y la enzima a
distintas temperaturas durante un tiempo constante. Utilizando la enzima amilasa
obtenida de la saliva, se utiliza la dilucin 1:20 obtenida en la actividad 2.1 y como
sustrato una suspensin de almidn 0,3% en H O destilada.
2

Preparacin del sustrato

Tubos de ensayo Sustrato Temperatura de incubacin

1a 1,5 mL 0C

2b 1,5 mL 37C

3c 1,5 mL 100C

Preparacin de la enzima

Tubos de ensayo Enzima Tampn fosfato pH 7 Temperatura de incubacin

1 1 mL 0,5 mL 0C por 5 minutos

2 1 mL 0,5 mL 37C por 5 minutos

3 1 mL 0,5 mL 100C por 5 minutos

Ensayo Enzimtico: Luego de ambientar los tubos por 3 minutos, vaciar el


contenido de los tubos 1, 2 y 3 sobre el contenido de los tubos 1a, 2a y 3a
respectivamente. Retornar de inmediato los tubos a sus respectivos ambientes y
dejar incubando por 10 minutos.
Una vez cumplido el tiempo de incubacin, se agrega a los tubos 1a, 2a y 3a una
gota de Lugol.
Resultado y fenmenos observados
Actividad Prctica N1:
Primera Experiencia: El primer tubo consista en un
trozo de papa cruda con 1,5 ml de H2O2. En esta
experiencia se pudo observar una efervescencia o
burbujeo leve. Se aprecian burbujas en la reaccin que
corresponde al oxgeno desprendido (O2) que se
desprendi de la reaccin. Esto se debe a que la
catalasa le quita un oxgeno al perxido.
2H2O2=>2H2O + O2
Segunda experiencia
En la experiencia dos
obtuvimos las siguientes
apreciaciones: Se ve una
solucin de color gris y con
menos cantidad de burbujas
que la experiencia uno.

Experiencia tres
La reaccin cambi a color caf y adems se apreciaron muchas burbujas ms
que las experiencias anteriores. Tambin el tubo de ensayo se calent producto de
la reaccin que es exotrmica. Esta reaccin es muy rpida debido a que el
cloruro frrico acta como un catalizador y aumenta la velocidad de reaccin
2 FeCl3 + H2O2 = 2 FeCl2 + 2 HCl + O2

Experiencia cuatro
Se puede observar un color grisceo oscuro. La reaccin es sumamente veloz. Se
desprende un gas (O2) y el tubo presenta calentamiento. Adems, se observa la
descomposicin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno, sin el dixido de
manganeso la reaccin ocurrira muy lentamente (ste acta como catalizador
aumentando la velocidad de reaccin). La reaccin es exotrmica, ya que libera
calor
MnO2+ H2o2-> 2H2O +
O2

Actividad Prctica N2

Experiencia 1: En el prctico dos todos los tubos de ensayos presentaron


coloracin con Lugol, sin embargo, la tasa de reaccin fue diferente, ya que,
variaba la coloracin.

Experiencia 2: Observamos que al agregar el Lugol, ya con el procedimiento


hecho anteriormente. Apreciamos que a 0C se obtena un color sumamente claro,
en cambio, a 37C el color es semi oscuro. A los 100C el color es negro.
Resultados y Anlisis de datos
Actividad Prctica N1
(Siendo el 5 el mejor catalizador y el 1 el menos eficiente.)

Material Actividad Enzimtica

Trozo de papa cruda 3

Extracto de papa molida 2

Trozo de papa hervida 1

FeCl3 4

MnO 2 5

En esta primera actividad el objetivo es comparar catalizadores presentes en


tejidos vegetales con algunos inorgnicos. Como podemos observar en la tabla de
datos, la actividad enzimtica vara considerablemente dependiendo de la muestra
utilizada, esto podemos atribuirlo a la eficiencia o potencia del catalizador presente
en los diferentes tubos de ensayo. Comparando principalmente la cantidad de
burbujeo producido por las muestras al verter el perxido de hidrgeno, podemos
concluir que los catalizadores inorgnicos (FeCl y MnO ) son ms efectivos que los
3 2

catalizadores presentes en el tejido vegetal (catalasa). Ahora bien si comparamos


solamente la actividad enzimtica del catalizador presente en el tejido vegetal, es
decir, la catalasa, es posible afirmar que la mayor actividad est presente en la
muestra del trozo de papa cruda y la menor en la muestra del trozo de papa
hervida, respecto al ltimo se infiere que esto se debe a que la enzima al estar a
una alta temperatura deja de ser eficiente en su funcin ya que como sabemos a
una mayor temperatura el catalizador empieza a disminuir considerablemente su
actividad hasta llegar incluso a la desnaturalizacin. En el caso de la muestra del
extracto de papa molida no presenta una gran actividad debido a que
posiblemente la arena presente en el tubo haya sido un obstculo en la accin del
catalizador.
Actividad Prctica N2
Experiencia 1:
Influencia de la concentracin de enzima
(Siendo el 4 el que ms decreci y el 1 el menos decreciente)

Concentracin de Color en presencia de Lugol Tasa de Reaccin


Enzima

Dilucin 1/20 color naranjo claro 1

Dilucin 1/40 naranjo 2

Dilucin 1/80 naranjo oscuro 3

Dilucin 1/160 casi caf 4


Grfico de tasa de reaccin v/s concentracin enzimtica.

Los valores de Vo (velocidad inicial) se incrementan rpidamente en


concentraciones bajas de sustrato, luego se estabilizan a una planicie plana en
altas concentraciones de sustrato. Esta planicie se genera porque la enzima est
saturada, es decir, todas las molculas de enzima disponibles ya estn ocupadas
procesando sustratos. Cualquier molcula adicional de sustrato tendr que
esperar hasta que una enzima se desocupe, por lo que la velocidad de reaccin
(la cantidad de producto generado por unidad de tiempo) est limitada por la
concentracin de enzima.
Experiencia 2:
Influencia de la temperatura en la actividad enzimtica
Temperatura Color en presencia de Lugol Tasa de Reaccin

0C caf muy oscuro 2

37C caf claro 3

100C casi negro 1


(2=menor reaccin, 3= reaccin ptima, 1= nada de reaccin)
La ltima experiencia consisti en analizar cmo afectaba la temperatura a la
actividad enzimtica, de los datos obtenidos de la actividad realizada, podemos
interpretar que la accin enzimtica se ve afectada cuando las temperaturas a las
que est expuesta la enzima son extremas, es decir que a muy altas como a muy
bajas temperaturas, la accin enzimtica comienza a disminuir, lo que nos lleva a
pensar que cada enzima tiene una temperatura ptima de funcionamiento en la
cual la su actividad es mxima, ahora todo lo dicho anteriormente est
fundamentado por los datos obtenidos, dado que las tasas de reaccin se vieron
reducidas cuando la solucin que presentaba enzimas, fue expuesta a
temperaturas extremas, en este caso 0 C y 100C, en comparacin a la
temperatura ambiente 37C, en donde la tasa de reaccin fue mayor a las otras 2

Conclusiones
_________________________ ________________________
\ /
\ Cmo reconocer un /
\ catalizador biolgico y /
\ sus caractersticas? /
\ Cmo afectan /
\ factores externos /
\ en ellas? /
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\/
Las diferentes actividades realizadas durante el prctico nos entregaron la
informacin necesaria para la clasificacin y caracterizacin de los catalizadores, a
pesar que los datos obtenidos no son lo suficientes para tener un parmetro de
error mnimo es posible inferir que existen diversos factores que afectan la
actividad enzimticas.
En el primer prctico el objetivo principal era poder visualizar las diferencias en
cuanto a la eficiencia o rapidez entre catalizadores presentes en tejido vegetal y
los que son inorgnicos. De esto se infiere en cuanto a la eficacia que una
sustancia inorgnica es mejor debido a que esta es claramente ms rpida segn
los datos obtenidos.
El prctico dos consista en ver la accin de la enzima amilasa en diferentes
concentraciones, gracias a la participacin del Lugol en las muestras se logr
obtener resultados fciles de observar con respecto a la accin de la enzima. En
definitiva, a mayor concentracin de saliva en las muestras la accin de la amilasa
es ms notoria y por consiguiente a una menor concentracin la actividad
enzimtica es muy baja debido a que la cantidad de enzimas se ven
imposibilitadas de abarcar todo el almidn presente en el tubo de ensayo.
Con respecto a la ltima actividad realizada la que consista en observar el efecto
de la temperatura en los catalizadores es posible afirmar que la enzima amilasa
tiene su ptimo funcionamiento a una temperatura aproximada de 37 grados
Celsius, de igual manera inferimos que este comportamiento ser similar en la
mayora de los catalizadores. En cambio, teniendo una menor temperatura nuestra
enzima baja significativamente su actividad y sometiendo a altas temperaturas las
muestras se observa cero actividades enzimticas, por lo que se infiere que en
este punto la enzima se desnaturaliza.
En definitiva, la actividad de los catalizadores se ve afectada por diferentes
factores tales como su naturaleza, concentracin y temperatura, pero esto no
quiere decir que no existan otros que influyan en la actividad enzimtica por lo que
se tendra que ver otras variables y escenarios distintos para poder realizar un
profundo anlisis a la actividad de una enzima
Qu hemos aprendido?
De las distintas actividades realizadas en el prctico ms los apuntes entregados
por los profesores hemos aprendido que la principal funcin de las enzimas es
acelerar la velocidad de la reaccin disminuyendo la energa de activacin. Esta
situacin la apreciamos en el primer prctico donde se realiza la descomposicin
del perxido de hidrogeno, sin una enzima esta reaccin sera muy lenta. Tambin
aprendimos que las enzimas son muy sensibles a factores tales como la
temperatura. Una temperatura muy alta provocara su desnaturalizacin, en
cambio, una temperatura muy baja su inactividad.
Finalmente, hemos aprendido que las enzimas son un componente muy
importante para nuestro organismo.