Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Prctica 4: precipitacin, separacin y punto isoelctrico de protenas.

Diego Vargas Gloria Paola.
Lpez Portillo Felipe de Jess.
Laboratorio de Bioqumica de Q.B.P, Seccin 3, Semestre 2/17; Grupo: 4QM1
Prolongacin Manuel Carpio y Plan de Ayala s/n, Miguel Hidalgo, Santo Toms, 11350 Ciudad de
Mxico.

Objetivos. precipitacin cambio, el blanco, no se

blanca, es poco hidrxido es soluble
soluble e4l cido soluble
Analiza el efecto que produce la modificacin de factores Etanol 96 (mL) 3.0 3.0 3.0
fisicoqumicos sobre la solubilidad de las protenas. Se observa el tubo Se observa Se observa
completamente un poco turbidez
Determinar el punto isoelctrico de la insulina, basandose Observaciones turbio, blanco y turbio el la completa,
en sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de tiene poca parte pierde la
consistencia superior consistencia del
pH. caracterstica del color huevo, por lo
huevo, un poc blanco, se tanto no se
soluble, observa ms soluble, se
Resultados. consistencia soluble. observa de
lechosa. aspecto
I. Separacin de protenas por precipitacion con sales lechoso.
(salting out).
III. Precipitacin por metales pesados.
Tabla 1. Resultados del SALTING-OUT Tabla 3. Precipitacin por metales pesados.
Biuret Interpretacin Tubo No. 1 2 3 4 5 6
Filtrado 1 Positivo Presencia de enlaces Clara de huevo
peptidicos. filtrada dil. 1:3 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
Precipitado 1 Positivo Presencia de enlaces
peptidicos.
Cloruro
Filtrado 2 Positivo Presencia de enlaces mercrico 5% 0.25 - - - - -
peptidicos. (mL)
Precipitado 2 Positivo Presencia de enlaces Nitrato de
plata 2% (mL) - 0.25 - - - -
peptidicos.
Acetato de
II. Precipitacin por efecto del pH y de solventes. plomo 5% - - 0.25 - - -
(mL)
Cloruro de
Tabla 2 Precipitacion por efecto del pH y solventes. bario 5% (mL) - - - 0.25 - -
Tubo No. 1 2 3
Cloruror de
Clara de huevo 3.0 3.0 3.0
sodio 5% (mL) - - - - 0.25 -
filtrada, dil 1:3
(mL)
HCl 0.1N (mL) 1.0 - -
NaOH 0.1N (mL) - 1.0 - Agua (mL) - - - - - 0.25
Regulador de
acetatos 0.1M, pH - - 1.0
4.7 (mL)
Se observa poca No se Se observa una
Observaciones turbidez y observa tubidez y
ningn precipitado
Tubo No. 1 2 3 4 5 6
Discusin.
Se Turbio, Turbo, Se No Se
observa lechoso, lechoso, observ se observ
Observaciones completa con un con a un obser a Los resultados de precipitacin de protenas por sales
mente poco cogulo poco van ligera indican que en el precipitado y filtrado uno, hubo una
turbio, de consistenc s o turbio. camb mente precipitacin de sales que se pus en manifiesto con el
aspecto ia de grumos ios. turbio,
lechoso huevo visibles Ms con Reactivo de biuret, un indicador de enlaces peptdicos, sin
con solub aun embargo, en el segundo precipitado y filtrado los
cogulo le. consist resultados esperados eran negativos, sin embargo, al no
encia
usar un filtro no se logr separar las protenas precipitadas
de
huevo lo que dio una prueba positiva en los resultados obtenidos,
Grado de es necesario centrifugar y hacer uso del filtro para separar
turbiedad +++ ++ ++++ + las protenas de la solucin satisfactoriamente.
Grado de Los resultados de la precipitacin por efecto del pH y
solubilidad..
solventes en las primeras observaciones antes de agregar el
etanol el cido clorhdrico este empieza a observarse turbio
ya que al agregar iones + las cargas se repelen formando
el precipitado igual que en el regulador de acetatos es
IV. Determinacin del punto isoelctrico de la insulina. turbio, por lo tanto es insoluble, contrario al hidrxido de
sodio que no precipitado y se considera soluble. Al agregar
el etanol este cambia y todos se ponen turbios y de aspecto
Tabla 4. Determinacin del punto isoelctrico de la
lechoso, ya que disminuye la constante dielctrica y se
insulina. atraen las protenas unindose y formando un mayor
Tubo c. Acetato Insulina pH Observacion precipitado.
No. acetic de 40 U/mL es
o sodio En el experimento de precipitacin de metales, los metales
0.2M 0.2 M interactan con el in carboxilato de la protena
1 0.23 0.02 6U 3.6 5 Soluble precipitando esto se debe a los efectos inter-inicos en las
(0.06mL) 10 soluble soluciones que se llevaron a cabo con los metales, entre
2 0.15 0.10 6U 4.57 5 Soluble
(0.06mL) 10 Poco
mayor sea la interaccin hay mayor precipitado, que en este
soluble caso podemos observar que interactu mas con el plomo.
3 0.05 0.20 6U 5.35 5 Insoluble En el caso de la determinacin del pulso elctrico de la
(0.06mL) 10 insoluble insulina se formo un precipitado en el tubo 3 y se sabe que
4 0.01 0.24 6U 6.13 5 Soluble la carga neto que presentan los pptidos y protenas es
(0.06mL) 10 soluble
5 0.00 0.25 6U 10.6 5 Soluble mnima y en una sustancia qumica es equivalente a cero.
(0.06mL) 7 10 soluble

Bibliografa.
Clculos Plummer, D. (1994). Introduccin a la
Clculos de pH. Indicar el pulso isoelctrico para insulina. bioqumica prctica. Madrid: Universidad de
Barcelona. Pg(s). 120-135

Preguntas extra.
Qu es salting out? y Qu es salting in?.

Cuando se aade sal a una solucin de protena ocurre un

incremento en la solubilidad y esto se conoce con el
nombre de solubilizacin por salado (salting in). Este
incremento inicial en la solubilidad se debe a la
estabilizacin de la protena efectuada por un descenso en
el coeficiente de actividad de los grupos ionognicos. A
medida que se aumenta la fuerza inica, se obtiene un
mximo en la solubilidad seguido por un descenso en la
misma que se conoce como insolubilizacin por salado
(salting out).

Qu es una fuerza inica?

Es una medida adecuada del efecto de las interacciones,
ion-ion y ion-solvente, en una solucin electroltica. La
fuerza inica se define como un medio de la sumatoria de
la concentracin molar (o molal) de cada tipo de in,
multiplicada por el cuadrado de la valencia

Constante dielctrica?
Propiedad de un medio que es dielctrico, es decir, que no
posee conductividad elctrica, por lo cual se tratan como
aislantes de la electricidad, relacionndolo con la
permisividad que tiene un medio a la electricidad.

Debye-Hckel

P. Debye y E. Hckel (1923), trabajaron en el problema de

las interacciones inicas, sobre la base de que los iones en
solucin se encuentran rodeados de un exceso de iones de
carga opuesta (atmsfera inica), que limita su movimiento
(es ms probable, por ejemplo, que un in positivo,
considerado central o de referencia, se encuentre rodeado
por iones negativos, que por iones de su mismo signo). El
movimiento se ve limitado en dos aspectos: la atmsfera
inica es deformada cuando el in central se mueve, de
manera que su centro se encuentra detrs del in, y el
movimiento de ste es retardado por la atmsfera (efecto
de relajacin); tambin, esta ltima, al tener carga opuesta
a la del ion central, tender a moverse en sentido contrario
a la del ion, debido al campo elctrico, durante la migracin
(efecto electrofortico). Las atracciones interinicas y el
efecto del solvente son, en esencia, la causa de la
desviacin que sufren los electrolitos del comportamiento
ideal. Es importante, por otra parte, hacer referencia a la
cantidad conocida como fuerza inica, I, que es una medida
adecuada del efecto de las interacciones, ion-ion y
ionsolvente, en una solucin electroltica.