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UNIVERSIDAD NACIONAL DE JULIACA

CARRERA PROFESIONAL : INGENIERIAS

CURSO : BIOLOGIA

SEMESTRE : I y II

DOCENTE : Blgo. VICTOR C. HUANACUNI AJROTA

Juliaca; Agosto del 2017

INTRODUCCIN

La presente Gua de Prcticas para el Laboratorio de Biologa Celular contempla


experimentos y actividades debidamente organizados de acuerdo al programa
establecido; que permitir al estudiante vincular los aspectos estudiados en teora
con actividades prcticas mediante la realizacin d e proyectos comunes.

Cabe mencionar que esta gua de Laboratorio de Biologa Celular tuvo


un antecedente muy importante, ya que en el plan rgido tambin hubo un manual
de laboratorio para esta materia, pero debido a que el plan de estudios de la
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica en el ao 2002 fue reestructurado
por consiguiente tuvo que ser modificado el contenido de esta
experiencia educativa y por lo tanto, las prcticas de laboratorio en su mayora
cambiaron.

Por otra parte, la Biologa Celular es una ciencia bien fundamentada,


reconocida como disciplina despus de establecerse la teora celular;
dotada de instrumentos de anlisis cada vez ms poderosos para explorar los
procesos internos de la clula. Su objetivo inicial fue describir con mxima
precisin todas las estructuras caractersticas de las clulas animales y vegetales
y de los seres unicelulares, las modificaciones en el curso de la vida de las
clulas, su diversidad dentro de estos seres o a lo largo del desarrollo
embrionario, etc.

La Biologa Celular, se coloc con prontitud dentro de los campos ms importantes


de la biologa y constituy un foco de convergencia y fundamento de todos los
mtodos; slo el estudio de las propiedades de las clulas individuales permitira
comprender el funcionamiento y la constitucin de las estructuras pluricelulares.
De ser una ciencia descriptiva, la biologa celular se transform en ciencia
experimental con el objetivo esencial de mejorar la comprensin de las estructuras
y de los mecanismos a nivel molecular. Actualmente sus principales metas de
estudio son: el trfico membranario en el interior de las clulas, el citoesqueleto, la
biognesis de los organelos llamados semiautnomos, las funciones de las
matrices extracelulares y la sealizacin de la membrana. Por ser una ciencia
integrativa y multidisciplinaria, la biologa celular suprime las fronteras artificiales
entre diversos mtodos y aporta una visin ms completa de las estructuras y de
las funciones celulares; identifica a las molculas constitutivas de los organelos,
ubica las enzimas en compartimientos, estudia las relaciones fisiolgicas entre
ellas y mide los flujos metablicos y energticos en las condiciones fsico-qumicas
que se encuentran in vivo.

Los experimentos que aqu se incluyen estn diseados para realizarse con el
equipo de laboratorio con el que cuenta nuestra facultad, la metodologa incluida
est centrada en el desarrollo de habilidades de ejecucin y de razonamiento que
permitan al alumno tener un buen desempeo en un laboratorio de biologa
celular; fomentando as, tanto el trabajo individual como colectivo.

Cada prctica incluye una breve revisin terica, sin la intencin de suplir los libros
de texto, que contienen informacin ms detallada. En la evaluacin del
aprendizaje se consideran la realizacin de prcticas, participacin, entrega de
reportes escritos y exmenes tericos. Adems, sta gua de prcticas para el
laboratorio de biologa celular incluye los trminos para que el alumno alcance una
mayor comprensin en su aprendizaje.
OBJETIVO

En la gua de prctica consiste en adiestrar a los estudiantes de diferentes


carreras profesionales que estn vinculados al curso de biologa general,
conocern la estructura y funcin molecular de diferentes clulas vegetales,
animales, protistas y procariotas.

PRCTICA No. 01

USO Y CUIDADO DE UN MICROSCOPIO

OBJETIVO:

Conocer la importancia del microscopio en el campo de la Biologa Celular, as


como las partes que lo integran, uso y cuidado del mismo.

FUNDAMENTO:

Un microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a


simple vista (Ver Fig. 1.1). Ello se consigue mediante un sistema ptico compuesto
por lentes de cristal, que al ser atravesadas por los rayos de luz reflejados por el
objeto, forman una imagen amplificada de l. (5)
Los microscopios se pueden clasificar desde un punto de vista muy sencillo en:
Simples y compuestos. Se le da el nombre de microscopio simple a todas aquellas
lentes con montura o sin ella, de distintos espesores y dimetros, biconvexas o
planoconvexas, que nos permiten amplificar los objetos, comnmente
conocidas como lupas. Un microscopio compuesto est constituido por
la combinacin de dos sistemas de lentes convergentes. Uno, prximo
al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y que acta como
microscopio simple. Otro prximo al objeto denominado objetivo.(1)

Figura 1.1 Partes del microscopio Tornillo para fijar el condensador Transportador
del condensador Anillo para la abertura del diafragma del
condensador Objetivo Anillo de dioptra Ocular binocular Ocular Portaobjetos
giratorio Base Fuente de luz Botn de encendido Tornillo macromtrico Tornillo
micromtrico Platina Brazo Cabezal Tornillo del cabezal Tornillo del carro mvil

GENERALIDADES:

Descripcin del microscopio compuesto: Sistema de soporte:


Pie o base: la funcin de esta pieza es dar estabilidad al microscopio y soporte
a las dems partes que lo integran.

P l a t i n a : es una pieza metlica cuadrada con un orificio en el centro por el cual


pasa la luz, posee a su vez un carro mvil con una pinza que sujeta la muestra
permitiendo su movilizacin para la observacin.

B r a z o : es el soporte que va desde la base hasta el sistema ptico, es el


sostn de dicho sistema. Sistema ptico.

O c u l a r e s : son lentes que se encuentran en el cabezal d e l microscopio,


separados por un diafragma que permite el movimiento de estos para obtener una
imagen con mejor calidad y comodidad de visin.

Objetivos (seco dbil 10X, seco fuerte 40X e inmersin 100X): es la parte
mas importante del microscopio, se conforman por varias lentes que corrigen las
aberraciones, se encuentran en la parte baja del cabezal sujetos a un
carrusel o revolver que permite el cambio de un objetivo a otro. Sistema de
iluminacin.

F u e n t e l u m i n o s a : es la luz proporcionada por una lmpara ubicada en la


base del microscopio, la cual pasa a travs de la platina proporcionando
iluminacin a la muestra.

Condensador: es un sistema de lentes con gran abertura, que se encuentra


entre la platina y la fuente de iluminacin; puede subir o bajar dependiendo del
objetivo que se est utilizando.

Diafragma: se encuentra situado debajo de la platina y permite regular la


cantidad de luz que pasa por el condensador.
Sistema de ajuste:

Tornillo macromtrico o de enfoque rpido: se utiliza para conseguir un


ajuste aproximado de la imagen a observar.

T o r n i l l o m i c r o m t r i c o o d e e n f o q u e f i n o : su desplazamiento es
mucho ms lento y permite enfocar claramente nuestra imagen.

Tornillo de carro mvil: se utiliza para desplazar la laminilla sobre la platina


hacia los lados, hacia atrs y hacia delante.

MANIPULACIN DE UN MICROSCOPIO:

1.- El banco y la mesa debern encontrarse a una altura que le permita al


Observador el uso del microscopio en posicin vertical y d e manera confortable.

2.- Encender la fuente de iluminacin.

3.- Montar la preparacin que se desea observar.

4. Separar los binoculares ajustndolos a su propia distancia interpupilar.

5. Enfocar entre el ojo derecho y el izquierdo. Los tubos porta oculares son
susceptibles de ajuste, esto se logra enfocando primero la imagen
con el objetivo de menor aumento, usando los tornillos macro y
micromtrico. Si la imagen no es clara, sube o baja el ocular
izquierdo mediante el movimiento del anillo que rodea el tubo
p o r t a o c u l a r h a s t a obtener una imagen ntida, as el microscopio
queda ajustado a su propia visin ocular.

6. Para enfocar con cualquier objetivo, especficamente el seco fuerte (40 X) y


con el de inmersin (100X), debers acercar el objetivo a la
preparacin, mirndolo de lado para controlar el descenso
h a s t a q u e l a lente frontal de dicho objetivo quede dentro de la distancia
focal. Solamente entonces debers mirar por el ocular alejando lentamente el
objetivo hasta o b t e n e r el enfoque correcto, el cual se
o b t e n d r m o v i e n d o e l t o r n i l l o micromtrico.

A) Objetivos de menor aumento (5X Y 10X): descender el condensador


afondo, bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla), subir el objetivo
con el tornillo macromtrico hasta ver la imagen a travs de los oculares.
Suba un poco el condensador en caso de que la iluminacin sea
insuficiente.

B) Objetivo de gran aumento (40X): Colocar el condensador a la mitad de la


distancia, bajar el objetivo sobre la preparacin (sin tocarla).
Subir el objetivo con el tornillo macromtrico muy lentamente hasta ver la
imagen e n el campo y perfeccionar el enfoque con el
tornillo micromtrico. Mover el condensador hasta obtener
iluminacin suficiente.

C) Objetivo de inmersin: Colocar la preparacin perfectamente


seca, p o n e r u n a p e q u e a g o t a d e a c e i t e d e i n m e r s i n
s o b r e l a p a r t e a examinar, subir el condensador a tope.
O b s e r v a p o r l o s o c u l a r e s y enfoca con el tornillo micromtrico.

ABERTURA NUMRICA.

La abertura numrica (A.N.) de un objetivo es una cifra exacta calculada


matemticamente a partir de su dimetro y su longitud focal equivalente, pero a
pesar de ser una caracterstica importante, slo es necesario
saber que la abertura numrica se encuentra marcada sobre la
l e n t e , q u e e x p r e s a e l tamao del cono de la luz y que de ella
depende la cantidad que atraviesa la lente y en particular su poder de
resolucin y su mxima amplificacin til.(5)

CUIDADOS PARA UN MICROSCOPIO.


El microscopio deber guardarse en un lugar seco y cubierto del polvo, ya que
ste adems de dificultar la observacin, daa las lentes cuando se frotan sin
que stas se hayan limpiado.

Al trasladarlo de un lugar a otro debe tomarse del brazo con una mano y con la
otra sostenerlo de la base.

Debers de cerciorarte que las lentes se encuentran limpias de polvo


antes de utilizarlo, de no ser as, deben limpiarse cuidadosamente utilizando
para ello un papel especial para lentes, el cual se obtiene en las pticas o
en las tiendas de artculos fotogrficos.

Las lentes no debern quitarse del sitio que les corresponde para que no se llene
de polvo el interior del equipo, adems es necesario desmontar partes internas
para limpiarlo.

Cuando emplees aceite de inmersin debers limpiar las lentes una


vez terminada la observacin, ya que si llegara a secarse sera difcil de
limpiarse, esto puedes hacerlo con el mismo papel para las lentes.

Nunca debers desarmar un microscopio, ya que si lo llegaras a hacer sin tener


conocimientos de ello, podrs desajustarlo o daarlo de sus partes. Es
por ello que existe personal especializado.

Las lentes podrn limpiarse con agua destilada, partes metlicas o plsticas del
microscopio debern limpiarse con un trapo de algodn y se les da brillo con
aceite mineral.

Todas las preparaciones que se hagan y se tengan que teir, limpiarlas del
reverso para que no pierdan nitidez.

Al terminar la observacin, debers limpiar perfectamente las lentes.


En caso de tener alguna duda en el cuidado del equipo o alguna falla mecnica o
elctrica, debers de dar aviso al encargado del laboratorio.(6)

FACTORES QUE DAAN AL MICROSCOPIO.

1 . Lavar las lentes con alcohol.

2 . Mojar los objetivos con xilol o alcohol, o bien con alguna otra sustancia.

3. Usar papel ordinario para limpiar las lentes.

4 . Poner los dedos sobre las lentes.

5. Limpiar el soporte o la platina con xilol.

6.Limpiar el interior de las lentes con tela o papel, en caso de que sea
completamente necesario, utiliza un pincel de cerdas muy pequeas y/o utiliza
papel seda.

7 . Dejar el microscopio sin oculares.

8.Guardar el microscopio con aceite de inmersin en el objetivo.

9. Transportar el microscopio con una sola mano.(3)

OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS:

Microscopio de Contraste de Fases.

Su sistema est compuesto por lente ocular, anillo de fases, lente del
objetivo, lente del condensador y diafragma anular. Tiene una
amplificacin de 1,000 a 2,000 nm. Permite observar estructuras muy
difciles de distinguir. No requiere de una tincin.

Microscopio de Fluorescencia.
Se compone de un primer filtro de corte o filtro de excitacin, espejo dicroico,
segundo filtro de corte o filtro de emisin, fuente de iluminacin y condensador. Se
observan muestras teidas, inmunofluorescencia directa o indirecta.

Microscopio de Interferencia.

Es un instrumento que permite la medida de la masa de regiones pequeas y


transparentes de clulas vivas, obtenindose datos de tipo cualitativo y
cuantitativo. Sus componentes son analizador rotable, un cuarto de longitud de
onda, objetivo de interferencia, condensador, polarizador y filtro de interferencia.

Microscopio Electrnico de Barrido.

Est compuesto por un can de electrones (nodo, ctodo y electroimn),


sistema de barrido y de lentes. Su resolucin depende de la cantidad de
electrones emitidos, contando as con un lmite de resolucin. Tiene una
amplificacin de 100,000 a 200,000 veces y una alta resolucin en 3D.

Microscopio Electrnico de Transmisin.

Est compuesto por can electrnico, lente condensadora, cmara de muestra,


lente objetiva, lente intermedia, proyector, pantalla fluorescente y cmara (placa
fotogrfica). Utiliza electrones con una longitud de onda de 0.5 . Proporciona un
aumento de las clulas de 100, 000 veces aproximadamente. (4)

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:

1)Cul es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?


2)Qu importancia tiene el uso del microscopio en la Biologa Celular?
3)Por qu es necesario utilizar aceite de inmersin al utilizar el
objetivo del mismo nombre?
4 ) Qu significa resolucin, poder de resolucin y amplificacin, as mismo de
qu factores depende cada uno de ellos? Presenta tus respuestas a manera
de tabla.
5 ) Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo:
fuente de iluminacin, condensador, longitud de onda, tipo de tincin,
resolucin, amplificacin, tipo de lentes, etc.

BIBLIOGRAFA:

1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopa. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial


Fernando Aldape Barrera. Pgs. 95-107

2. Coll, J. 2000. Experimentos con el microscopio. Mxico D.F. Primeraedicin.


Ediciones Omega S.A. Pgs. 63-65

3. L p e z , C . 1 9 8 7 . Microscopia en el laboratorio. X a l a p a . F a c u l t a d d e
Bioanlisis, U. V. Pgs. 10-21

4. Nachtigall, W. 2002. Microscopa. Materiales. Instrumental. Mtodos. Mxico


D.F. Segunda edicin. Editorial Omega. Pgs. 8-13

5. Vovides, A. 2000. Microscopa ptica: para las ciencias biolgicas. C h i a p a s .


U n i v e r s i d a d d e C i e n c i a s y A r t e s d e l E s t a d o d e C h i a p a s . Pgs.
14-19

6. Wallis, T. 1998. Microscopa analtica. Mxico D.F. Primera edicin. Editorial


ACRIBIA. Pgs. 9-23

PRCTICA N 02

MICROTOMO
https://es.slideshare.net/adaminaa/14-microtomos

OBJETIVO:

Aprender a realizar cortes histolgicos utilizando el microtomo.

FUNDAMENTO:

Los microtomos son mquinas o instrumentos empleados para


obtener lminas muy delgadas (cortes) de los tejidos que sern
estudiados. Segn el tipo de trabajo, la forma en que se hizo la preparacin y
la inclusin del tejido, se emplean muchos tipos de microtomos; algunos
estn adaptados para un trabajo especial (Ver Fig. 2.1)

ndices de refraccin, y a los cambios pticos que se producen cuando el agente


aclarante penetra entre los elementos tisulares muy refractantes; es decir, el
ndice de refraccin de los agentes aclarantes es aproximadamente igual al de
los tejidos. La mayora de las sustancias verdaderamente aclarantes son aceites esenciales.
Los buenos agentes aclarantes deben eliminar pronto el alcohol y aclarar rpidamente
sin endurecimiento; no deben disolver los colorantes de anilina, ni evaporarse
demasiado rpido en los baos de parafina.

Inclusin:
Este proceso comprende la impregnacin de los tejidos con un medio que llene
todas las cavidades naturales, espacios o intersticios tisulares y an los espacios
intracelulares, y que proporcione la consistencia firme necesaria para hacer
cortes bastante delgados sin provocar distorsin y sin alterar las
relaciones espaciales del tejido y los elementos celulares. Otra ventaja fsica ms
en el caso de especmenes pequeos deriva de la maniobra de encerrarlos en un
bloque o una masa de material de inclusin, que permite manejar y fijar la muestra
al microtomo sin daar el tejido en s. Microtomo de deslizamiento:

Se dividen en un tipo en el cual la cuchilla se mantiene entre pinzas, y


en el cual la cuchilla es mvil. Este ltimo no es muy satisfactorio, solo si
se mantiene la cuchilla bien controlada, la variedad de cuchilla fija, donde lo que
se desliza es la pieza de tejido. Este tipo demicrotomo es el ms utilizado ya que
es rgido, resistente, de diseo y construccin sencillos, fcil de mantener, y que la
calidad de los cortes obtenidos con l es difcilmente igualada por cualquier otro
instrumento. Asimismo, permite obtener grandes cortes y resulta fcil hacer cortes
seriados.

Microtomo rotatorio:
En este microtomo solo puede emplearse una longitud de cuchilla
relativamente pequea, y la cuchilla ocupa una situacin peligrosa. Adems, su
diseo y construccin son complicados, lo que significa un costo elevado. No es
conveniente para cortar bloques grandes como el de deslizamiento; la mayor
parte de los investigadores lo encuentran ms rpido en caso de cortes
numerosos de bloques ordinarios.

Microtomo de balanceo:
Este tipo de microtomo es probablemente el m s simple de todos, el bloque de
tejido se monta en el extremo de un brazo mvil de resorte y la cuchilla se
mantiene rgida en posicin horizontal con el filo hacia arriba y ligeramente
inclinado hacia el bloque. Fcilmente pueden obtenerse con l series de 60 a 90
cortes; stos, sin embargo, no son absolutamente plano, sino que muestran una
ligera curvatura.

Microtomo de congelacin:
Posee una cremallera central sobre la cual se coloca el sujetador del
bloque, el cual es perforado y unido por un tubo a un cilindro conteniendo
bixido de carbono. Una simple vlvula permite la liberacin de chorros rpidos e
intermitentes de bixido de carbono que congelan el bloque y el tejido. La
cuchilla suele ir montada en un pivote por encima del bloque.

Microtomo para cortes ultra delgados:


Para la microscopa electrnica, los cortes deben tener de 50 a 120
m; para ello existen microtomos especiales. Suelen recurrir a expansin
trmica para hacer avanzar el bloque.

MATERIAL:

Microtomo de deslizamiento.
Pincel
Bao de flotacin
Portaobjetos
Algodn
Termmetro

REACTIVOS:

Alcohol
Xilol
Parafina

TCNICA:

1) Para el manejo del tejido debe fijarse:

a. Si es procesado por perfusin, debe mantenerse el tejido en el fijador


durante 24 hrs.
b. Despus se enjuaga con agua y se pone a deshidratar en alcohol, pasando por
diferentes concentraciones.

c . Despus de la deshidratacin se realiza el aclaramiento con xilol durante 3 hrs.

d. Se pone a derretir la parafina, entre 52 y 54 C.

e. Pasando el aclaramiento se coloca el tejido en un cassette con marbete y se


coloca en la parafina durante 4 hrs., realizando 2 baos, uno para quitar el exceso
de xilol y otro para cubrir completamente el tejido. El molde debe rociarse con
alcohol para desprender fcilmente, una vez endurecida la parafina.
f. Cuando el tejido ya est encapsulado en la parafina se realizan unos cortes
gruesos para quitar el exceso de la misma(desbastar).

2) El microtomo cuenta con dos palancas una que acerca el porta muestras hacia
el cabezal, y la otra, la que mueve a la muestra de arriba hacia abajo para realizar
los cortes.

3) El botn micromtrico con el cual se calibra el grosor de l o s c o r t e s ,


e l c a b e z a l q u e p o r t a l a n a v a j a p a r a l a r e a l i z a c i n d e l o s cortes
puede ser fijo o moverse de izquierda a derecha, hacia el frente y hacia atrs.

Realizacin de los cortes:

4) Una vez que el tejido est listo, se coloca de 5 a 10minutos en refrigeracin


para la realizacin de los cortes.

5) E l e g i d o e l e s p e s o r q u e s e d e s e a d a r a l o s c o r t e s , s e
coloca el porta muestras a la distancia deseada con
a y u d a d e l a s palancas y se desliza la cuchilla haciendo as el primer corte.

6) J u n t o a l m i c r o t o m o s e t i e n e p r e p a r a d o e l b a o d e
flotacin a una temperatura de 2 C debajo de la temperatura a la que
derrite la parafina (Ver Fig. 2.2).
Figura 2.2 Bao de flotacin

Si el corte realizado sale completo, se toma por un


extremo con la ayuda de un pincel ligeramente humedecido
p a r a colocarlo en el bao de flotacin.

8) E s t e b a o t i e n e c o m o f i n e x t e n d e r l a p a r a f i n a p a r a colocarla
en el portaobjetos.

9) Teniendo ya el portaobjetos rotulado, se introduce en el bao por debajo de la


muestra y se levanta hacia la muestra para que se coloque sobre este, una vez fro y seco se
puede observar.

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:


CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:
1) Qu es el microtomo y para que sirve?
2) Qu precisin tiene el microtomo al realizar los cortes?
3) Qu importancia tiene usar el bao de flotacin?
4) Por qu es necesario utilizar el proceso de fijacin?
5) Cul es la importancia de utilizar el aclaramiento en una muestra?

BIBLIOGRAFA:

1. L y n c h , M . 1 9 9 2 . M t o d o s d e l a b o r a t o r i o . M x i c o . S e g u n d a
e d i c i n . Editorial interamericana. Pgs. 1129-1145
PRCTICA N. 03

PREPARACIONES TEMPORALES

OBJETIVO:
Aprender a realizar una preparacin temporal, til en la observacin de diversos tipos de
muestras.

FUNDAMENTO:
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una p r e p a r a c i n
temporal es aquella que es utilizada en el momento de la
observacin, ya que requiere que el medio de montaje no se evapore
t a n rpidamente y que sea posible que el material biolgico se conserve por
un tiempo (algunos das) en condiciones de ser observado; las frescas solo se
usan durante la prctica y posteriormente se lavan. Y las
p e r m a n e n t e s s o n aquellas preparaciones que duran para siempre, por lo que se debe
hacerse con un material especial como el blsamo de Canad, para que el cubre objetos
permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante aos (Ver
Fig.3.1).(2)
Fig. 3.1 Preparacin temporal

Fig. 3.2 Material para montaje de muestras

GENERALIDADES:

En general una preparacin microscpica se define como el resultado de una serie de


operaciones destinadas a colocar material de observacin en una capa de poco espesor, lo
ms pequea y representativa posible. Pudiendo ser e n s e c o , l q u i d o o e n
vivo, o en partes sobre una superficie de vidrio
transparente (portaobjetos) y cubierta algunas veces con
otra de menor a u m e n t o y m s d e l g a d a (cubreobjetos).
(Ver Fig. 3.2)
Los portaobjetos deben ser de vidrio lo ms transparente posible, de un espesor aproximado
de 2 mm y de unas medidas estndar de 16 x 26 mm. Los bordes pueden ser o no
esmerilados. Algunos tienen una concavidad circular e n su centro
destinada a recibir gotas de lquido con elementos para su
estudio. Los cubreobjetos son de muchos tamaos, los habituales son de 18 x 18m m , 2 0
x 20 mm y 22 x 32 mm y diversas formas, los ms comunes
son cuadrangulares. Su espesor es aproximadamente de 0.25 mm. A manera de
sugerencia, tanto el portaobjetos como el cubre objetos antes de ser utilizados debern
limpiarse con alcohol para eliminar la grasa y el polvo.(3)

MATERIAL:
Microscopio compuesto.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Pipeta pasteur o gotero.
Frasco gotero con agua.
Aguja de diseccin.

MATERIAL BIOLOGICO:

Hongo de pan.

TCNICA:

1. Colocar en un portaobjetos una gota de agua con el gotero.


2. Tomar una pequea muestra con la aguja de diseccin del hongo de p a n
y extindelo sobre la gota de agua que
a p l i c a s t e e n e l porta objetos.
3.Colocar el cubreobjetos sobre tu muestra, cuidando que no
v a y a a tener aire al momento de que sea colocado.
4. Proceder a observar con el objetivo seco dbil y seco fuerte, cuidando que
al momento de enfocar no rompas el cubreobjetos.
5. Dibuja lo que observaste en tu preparacin.
Fig. 3.2 Material para montaje de muestras

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:


CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:

1) Por qu son importantes las preparaciones temporales?


2) Qu propiedades tiene este medio de montaje?
3) Cules son las preparaciones que se pueden hacer en el laboratorio?

FECHA DE REALIZACIN:

BIBLIOGRAFA:

1. Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda edicin. Editorial


Mdica Panamericana. Pgs. 24-27
2. C u r t i s , H . 2 0 0 4 . B i o l o g a . M x i c o D . F . S e x t a
e d i c i n . E d i t o r i a l panamericana. Pgs. 17-18
3. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Panamericana. Pgs. 13-15
4. V i l l e e , C . 2 0 0 3 . B i o l o g a . M x i c o D . F . O c t a v a e d i c i n . E d i t o r i a l
M c Graw Hill. Pgs. 43-45
5. Vovides, A. 2000. Microscopa ptica: para las ciencias
biolgicas.C h i a p a s . U n i v e r s i d a d d e C i e n c i a s y A r t e s d e l E s t a d o d e
C h i a p a s . Pgs. 14-19
6. Wallis, T. 1998. Microscopa analtica. Mxico D.F. Primera
edicin.Editorial ACRIBIA. Pgs. 9-23
PRCTICA N. 04

DIVERSIDAD CELULAR

OBJETIVO:
Establecer las semejanzas y diferencias entre las clulas vegetales y animales.

FUNDAMENTO:

La clula es la unidad bsica funcional y estructural ms pequea de los o r g a n i s m o s


vivos. S e compone de partes caractersticas, cu yo trabajo esta
coordinado de tal manera que cada tipo de clula lleva a cabo una
funcin estructural bioqumica nica. Las clulas realizan
numerosas reacciones q u m i c a s p a r a d a r o r i g e n a l p r o c e s o v i t a l
que se lleva a cabo de manera compartimentalizada; es decir,
estructuras especializadas dentro de la clula efectan reacciones qumicas
aisladas, las cuales estn coordinadas unas con o t r a s p a r a m a n t e n e r c o n v i d a
tanto la clula como los tejidos, rganos, sistemas y todo el
organismo.(4)R e g u l a n el flujo de entrada y de salida de los
m a t e r i a l e s a f i n d e asegurar las condiciones ptimas para el proceso vital
prevaleciente dentro de ellas. Asimismo, utilizan su informacin gentica para
guiar la sntesis de la mayora de sus componentes y dirigir gran parte de sus
actividades qumicas; entre stas, la generacin de ATP, por desdoblamiento
de los nutrientes, la sntesis molecular, la transportacin de las molculas dentro y entre
las clulas, la remocin de los desechos y el movimiento parcial o incluso de toda la clula.

GENERALIDADES:

Las unidades bsicas de todos los organismos tienen


m u c h a s caractersticas en comn, pero no todas ellas poseen todo
e l c o n j u n t o d e componentes. (1)Caractersticas de las clulas animales, clulas
vegetales y protistas. Las clulas animales se pueden distinguir fcilmente de las vegetales
en v i r t u d de marcadas diferencias. Los animales poseen
ciertos sistemas organizados caractersticos, son capaces de
moverse por s mismos y dependen completamente de sustancias
preformadas para obtener energa y carbono; stas son nicamente algunas de
sus caractersticas ms notorias.
Las plantas superiores contienen el pigmento verde llamado clorofila, lo que les permite
efectuar la fotosntesis, son generalmente inmviles y tienen sistemas organizados de
manera peculiar. Un nmero considerable de organismos unicelulares exhiben carcter es
tanto de plantas como de animales, a estos como poseen esta peculiaridad lo clasifican
como protistas.

Caractersticas exclusivas de la clula animal.


Centrosoma, cilios y flagelos. Virtualmente todas las clulas animales y un
escaso nmero de clulas vegetales muy primitivas o inferiores, tienen una e s t r u c t u r a
citoplasmtica, llamada centrosoma. En la clula en reposo se
presenta usualmente cerca del ncleo a manera de una pequea regin mas
clara con fibras radiadas a manera de una estrella y una o dos
p e q u e a s granulaciones que se tien profundamente en su parte central, a las que se les
ha dado el nombre de centriolos. Las clulas de las plantas
s u p e r i o r e s n o tienen centrosoma, aunque en su lugar presentan dos pequeas
reas claras d u r a n t e l a d i v i s i n c e l u l a r a l a s q u e s e l e s l l a m a
c a s q u e t e s p o l a r e s , q u e aparentemente tienen la misma funcin que el
centrosoma durante la divisin celular. Adems, el centrosoma controla la actividad y
la formacin de los cilios y f l a g e l o s , estructuras citoplasmticas
f i l a m e n t o s a s y d i s t e n d i d a s q u e s e proyectan a partes de la superficie
externa de la membrana celular en cierto t i p o d e c l u l a s . L o s c i l i o s s o n
r e l a t i v a m e n t e c o r t o s y s e p r e s e n t a n e n g r a n cantidad, mientras que los
flagelos son considerablemente ms largos y en menor numero. Ciertos
organismos unicelulares poseen un gran nmero de cilios o flagelos que se
mueven rtmica y coordinadamente; pueden contarse por cientos y son los
causantes de la movilidad de estas formas unicelulares. Ciertos epitelios que
tapizan las superficies internas del organismo, tales como la trquea humana, poseen
grandes cantidades de cilios. Estos movimientos c o o r d i n a d o s o r i g i n a n
c o r r i e n t e d e f l u i d o s y d e a i r e h a c i a e l e x t e r i o r d e l a superficie
celular, expulsando partculas extraas pequesimas que penetran al a t r q u e a . L o s
flagelos tambin se encuentran en muchos organismos
unicelulares y en la gran mayora de las clulas espermticas de animales y
vegetales. Su accin, a manera de ltigo, favorece la movilidad de
e s t a s clulas (Ver Fig. 4.1)

Fig. 4.1 Clula animal

Caracteres exclusivos de la clula vegetal.

Pared celular. Esta, es una de las caractersticas ms sobresalientes dela clula vegetal.
Consiste de una envoltura moderadamente rgida de material i n e r t e , q u e r o d e a a
c a d a u n o d e l o s p r o t o p l a s t o s . A u n q u e e s s i n t e t i z a d a y secretada por el
citoplasma de la clula vegetal, estrictamente hablando no puede considerarse
esta pared celular como un componente de la clula, sino c o m o u n d e p o s i t o
e x t r a c e l u l a r . E n l a m a y o r a d e l a s p l a n t a s v e r d e s , e s t compuesta
principalmente de un carbohidrato muy complejo llamado celulosa y segn el tipo de clula
vegetal que se trate, adems de la celulosa, puede tener varias sustancias, incluyendo sales,
lignina, sustancias parecidas a las grasas repelentes de agua tales como ceras y suberina. La
pared celular vara considerablemente en grosor dependiendo del tipo d e t e j i d o
vegetal y de las condiciones de crecimiento. En clulas vegetal es
maduras consiste, por lo regular, de tres capas y casi siempre es mucho ms
gruesa que la membrana celular adyacente. A diferencia de l a
m e m b r a n a celular, es permeable a la mayora de las molculas y no controla
el paso de materiales hacia dentro y hacia fuera de la clula. En efecto, la pared celular
escomo una especie de armazn que le sirve a la clula vegetal para proteger,
mantener y servir de apoyo a la clula y a la planta en general. Muchas clulas animales
tambin depositan materiales extracelular es a l r e d e d o r d e l a s u p e r f i c i e
externa de sus membranas celulares. Estos depsitos no
c o n t i e n e n c e l u l o s a o c e r a , v a r a n c o n s i d e r a b l e m e n t e e n s u composicin
y se les llama sustancias intersticiales. A diferencia de esta pared celulsica, estas
sustancias no tienen una organizacin definida y no dan el efecto de una
estructura a manera de una pared. En la mayora de los tejid os vegetales, la
sustancia intersticial acta como un cemento que mantiene unidas a l a s c l u l a s ; s e
e x t i e n d e a l h i n c h a r s e l a c l u l a , o f r e c i e n d o p o c a o n i n g u n a proteccin
contra las rupturas del protoplasto. Cuando la clula pierde agua se adapta a la forma
que toma al contraerse. Por el contrario, las membranas celulsicas o paredes
celulares de las plantas superiores, bacterias y hongos, m a n t i e n e n m a s o
menos su forma y tamao, a pesar de los cambios en el v o l u m e n
del protoplasto debido a los cambios en el contenido de
a g u a , evitando as la ruptura del protoplasto (Ver Fig. 4.2).(2)
Fig. 4.2 Clula vegetal

Son Plastos.
Estructuras citoplasmticas unidas que se encuentran en las clulas
de las plantas superiores y en ciertos organismos unicelulares, pero
n u n c a e n l a s clulas de animales superiores. Aunque su tamao, forma y color pueden
variar de manera considerable, segn el tejido de que se trate, del organismo y de las
condiciones de desarrollo, a menudo se presentan en forma de cuerpecillos
discoides o esfricos que se encuentran libremente en el citoplasma.(3)

MATERIAL:

Microscopio compuesto.
Porta y cubreobjetos.
Gotero con bulbo.
Corcho de botella.
Navaja de rasurar nueva.
Pinzas.
Hisopos estriles.
Lancetas estriles.
Torundas con alcohol.
Tubos al vaco Vacutainer de tapa morada.
Ligadura.
Pipeta pasteur.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Centrfuga clnica.
Frascos de boca ancha limpios y secos.

MATERIAL BIOLGICO:
Bulbo de cebolla.
Sangre.
Semen.
Orina.
Polen.

REACTIVOS:
Solucin salina isotnica.
Solucin de Locke.
Azul de metileno al 1%.
Colorante de Wright.
Buffer de Fosfatos.
Aceite de inmersin.

TCNICA PARA LAS CLULAS DEL CORCHO:

1. Toma el corcho con la mano izquierda, sujeta firmemente y corta una rebanada muy
fina colocando la navaja un poco oblicua a la superficie.
2. Cuando se haya obtenido el corte lo suficientemente delgado, se coloca en un
portaobjeto y se le agrega una gota de agua y se cubre.
3 . Debe evitarse las burbujas de aire.
4. Obsrvese con menor aumento sobre todo las orillas del corte donde habitualmente es
ms delgado.
5. Dibuja una pequea porcin de este material e indica la forma y el tamao de las
clulas.
6 . Responde lo siguiente:

a) Qu estructura se ve dentro de ella?

b) Q u p a r t e d e l a c l u l a e s l a q u e e v i t a q u e e l a g u a p e n e t r e e n
las clulas?

TCNICA PARA LAS CLULAS DE CEBOLLA:

1.Corta un bulbo de cebolla en 4 partes, se observar que cada parte


s e separa por s sola en capas llamadas envolturas u hojas.

2.Toma una de estas escamas con la superficie


cncava y rmpela. Entonces observars que se desprende
c o n f a c i l i d a d u n a c a p a m u y delgada y transparente que es la epidermis.

3. Toma un fragmento y colcalo sobre un portaobjetos con una gota de agua


de modo que la superficie que estaba en contacto con la escama que de hacia
arriba. Usa un fragmento de epidermis de no ms de 1 cm y cbrelo con un
cubreobjetos.

4 .Observa con menor aumento y contesta lo siguiente:


a) Cmo se aprecia la morfologa de las clulas y sus paredes?

5. Retira la preparacin de la platina del microscopio y coloca una gota de a z u l d e


metileno de un lado de la preparacin, en el borde
d e l cubre objeto para que la solucin entre por capilaridad. Observa con
un menor aumento.

6.Contesta lo siguiente:

a)Cul es el color y la forma del ncleo? Observa los


n c l e o s con seco fuerte.

b)Cul es la ubicacin de este organelo en la clula?

7.Alrededor del ncleo se encuentra una sustancia granular


q u e s e h a teido ligeramente que es el citoplasma, descrbelo. Compara las clulas
de la cebolla con las del corcho.
a)En qu difieren?
b)En qu se asemejan?
c)Consideras que las formas y tamaos celulares
e s t n relacionados con las funciones de las mismas?

TCNICA PARA LAS CLULAS DE POLEN:

1. Colocar unas partculas de polen sobre un portaobjetos.


2. Agregar una gota de agua y colocarle un cubreobjetos cuidando
d e n o dejar burbujas de aire.
3.Observar la morfologa al microscopio con el
o b j e t i v o d e m e n o r aumento.

TCNICA PARA CLULAS ANIMALES:

1.Coloca una gota de solucin salina isotnica en un portaobjetos limpio, con


un hisopo frota ligeramente la cara interna de la mejilla y el material que obtengas
mzclalo con movimientos rotatorios junto con la solucin s a l i n a i s o t n i c a
hasta obtener un material con aspecto lechoso
homogneo. Agrega una gota de azul de metileno y cubre la preparacin con un
cubreobjetos.

2.Con el objetivo seco dbil, localiza las clulas y compralas con


l a s d e las plantas. Vas a encontrar algunas clulas asociadas, otras dobladas o rotas.
Busca una o dos que estn completas con el objetivo seco fuerte. E l n c l e o e s
c l a r a m e n t e v i s i b l e s i s e a j u s t a l a l u z c o n v e n i e n t e m e n t e , tambin se
podr observar el citoplasma.

TCNICA PARA PUNCIN VENOSA:

1 . Una vez seleccionado el sitio de puncin, con una torunda se frota perfectamente el
lugar elegido, sin pasar la torunda por el mismo sitio. Con esto se eliminan suciedad y
detritus celulares y se evita la introduccin de grmenes al puncionar.

2 . Mientras el alcohol se seca, se aplica un torniquete con l igadura, unos 7


centmetros por encima del sitio de puncin. No se debe dejar muy apretado
pues provocara xtasis venosa que podra modificar los v a l o r e s h e m t i c o s .
D e s d e l u e g o q u e e l t o r n i q u e t e n o d e b e s e r m u y apretado, pues
podra ser molesto para el paciente. Se invita al paciente a apretar el puo, con lo que
favorece la fijacin de la vena adems de que la c o m p r e s i n m u s c u l a r
a u m e n t a e l f l u j o v e n o s o c o n l a d i l a t a c i n d e l a s venas.

3. Se fija la vena en posicin, sosteniendo el brazo del paciente con l a m a n o m i e n t r a s


s e e s t i r a n y c o m p r i m e n l o s t e j i d o s b l a n d o s s i t u a d o s debajo de donde
se va a puncionar. Se toma el maneral del vacutainer y haciendo un ngulo
de 15 con el brazo, se perfora la piel a lo largo de la cara lateral de la
vena. Se hace avanzar la punta de la aguja debajo de la piel de 0.5 a 1 cm y
luego se perfora la pared de la vena. La introduccin se hace con suavidad pero con
suficiente rapidez para reducir las molestias. U n a vez que est
s a l i e n d o l a s a n g r e , s e r e t i r a l a l i g a d u r a p a r a e v i t a r hemlisis.

4 . Cuando la aguja haya penetrado la vena, se introduce el tubo en el maneral de sujecin,


el que se mantiene fijo con la otra mano, hasta que el tapn del tubo sea atravesado
por la aguja situada dentro del maneral. Una vez que el tubo se llen, se
extrae y se repite la operacin con tantos tubos como sea necesario.

5 S e i n v i t a a l p a c i e n t e a a b r i r s u p u o . La
a g u j a s e r e t i r a e n s e n t i d o inverso a como se
i n t r o d u j o t a m b i n d e m a n e r a s u a v e p e r o c o n u n s o l o movimiento. De
inmediato, se coloca una torunda impregnada de alcohol en el sitio de puncin,
ejerciendo presin sobre la zona y mantenindola as por lo menos de 3 a 4
minutos para evitar la formacin de hematomas.

6 Una vez extraida la muestra, es indispensable mezclarla i nvirtiendo la


muestra para que se mezcle con el anticoagulante y de esta manera evitar una
posible coagulacin de la misma.

FROTIS DE SANGRE:

1. Coloca una gota de sangre en el extremo de un portaobjetos y con otro


extiende hacia el otro extremo.

2. Seca el frotis al aire.

3. Una vez seco el frotis se coloca en un puente de tincin, para realizar la


tincin de Wright de la siguiente manera: con un gotero,
a g r e g a r colorante de Wright a todo el frotis y dejarlo reposar 5 minutos, una vez
pasado el tiempo agregar sobre el mismo co lorante con otro
g o t e r o buffer de fosfatos y dejarlo reposar durante 15 minutos, a intervalos de
5minutos, soplar sobre el frotis con una pipeta pasteur hasta observar la
presencia de capa verde metlica.

4.Una vez cumplido el tiempo, quitar el colorante al


c h o r r o d e a g u a durante 5 30 segundos.

5.Despus del lavado, quitar el exceso de agua inclinando el


frotis y tocando con un papel secante el borde inferior. Limpiar la parte
posterior del portaobjetos.

6.Secar las preparaciones al aire.

7.Para montar la preparacin al microscopio, se deber agregar una gota de


aceite de inmersin y observar a 100X.

8. I m g e n e s de las diferentes clulas sanguneas que


p u e d e n s e r observadas en un frotis (Ver Fig. 4.3).
a) Neutrfilo segmentado (37)
b) Basfilo (56)
c) Eosinfilo (50)
d) Monocito (59)
e) Linfocito (78)

TCNICA PARA LA OBTENCIN DEL SEMEN:

1. L a m u e s t r a d e b e r o b t e n e r s e p o r m a s t u r b a c i n y d e p o s i t a r l a e n u n
frasco de boca ancha el cual deber estar perfectamente limpio. Esta
muestra preferentemente deber estar lista pocos minutos antes de la
realizacin de la prctica, para observar la
m o v i l i d a d d e l o s espermatozoides (Ver Fig. 4.4).2 . U n a v e z q u e
se tiene la muestra, colocar una gota de semen en el
centro de un portaobjetos, agregar una gota de azul de metileno al 1% y cubrirla con un
cubreobjetos.3 . O b s e r v a r l a m u e s t r a a 1 0 y 4 0 X , r e a l i z a n d o d i b u j o s d e
l a s e s t r u c t u r a s observadas.
Figura 4.4 Partes del espermatozoide

Figura 4.5 Clulas del epitelio pavimentoso

TCNICA PARA LA PREPARACIN DE MUESTRA DE ORINA:

1. O b t e n e r u n a m u e s t r a d e o r i n a ( a p r o x i m a d a m e n t e 1 0 a 1 5 m l ) e n u n
frasco de boca ancha perfectamente limpio sin restos de detergente.
2. Colocar en un tubo de ensayo de 13 x 100 mm, aproximadamente 5 ml. de orina y
centrifugarla durante 5 minutos a 2,500 rpm.

3.Una vez pasado el tiempo, saque el tubo de la


c e n t r f u g a y p o r decantacin eliminar el sobrenadante,
resuspenda e l s e d i m e n t o y agregue unas de azul de metileno, espera 5
minutos y agrega una gota de la solucin de orina con azul de metileno a un portaobjetos
y cbrela con un cubreobjetos.

4. Observa al microscopio con el objetivo seco dbil y seco fuerte (Ver Fig.4.5).
5. Realiza dibujos de las estructuras observadas en cada preparacin

NOTA:

Resuelve cada una de las preguntas anteriores.

Elabora una tabla comparativa de las clulas observadas.

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:


CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:

1) Qu diversidad celular se encuentra en el frotis de sangre?2)En el frotis de semen Qu


clulas identificas? Todos son normales?3)Qu funcin tienen cada una de las clulas
sanguneas?4 ) Q u analoga estructural existe entre los
e s p e r m a t o z o i d e s y l o s protozoarios?

FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:

1. Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin.


Editorial Panamericana. Pgs. 42-47

2. Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segunda edicin. Editorial


Revert. Pgs. 23-29

3. N a s o n , A. 1990. El mundo biolgico. Mxico D.F. Prime ra


e d i c i n . Editorial Limusa. Pgs. 176-184

4. V i l l e e , C . 2 0 0 3 . B i o l o g a . M x i c o D . F . O c t a v a e d i c i n . E d i t o r i a l
M c Graw Hill. Pgs. 56-58, 121-124, 128

5. Y o u n g , A . 2 0 0 1 . Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin.


E d i t o r i a l Nueva Imagen. Pgs. 101-108

PRCTICA No. 05

CLULAS PROCARITICAS Y EUCARITICAS

OBJETIVO:

Establecer algunas diferencias morfolgicas entre clulas procariticas y


eucariticas, as como entre clulas vegetales y animales
m e d i a n t e l a observacin de las mismas.

FUNDAMENTO:

Desde que Robert Hooke observ las celdas de corcho, otros cientficos s e d i e r o n a l a
t a r e a d e i n v e s t i g a r c m o e s t a b a n f o r m a d o s l o s s e r e s v i v o s . Fueron
tres de ellos quienes conformaron lo que conocemos ahora como la Teora
Celular: el botnico Matthew Schleiden quien propuso a la clula como la unidad
estructural de las plantas, el zologo Theodor Schawn que hizo lo mismo con
los animales, y el mdico y fisilogo Rudolph Virchow que conjunt las propuestas
anteriores y propuso que la clula se origina de otra clula.(4)Existen dos tipos de clulas
en la naturaleza: las procariticas como las b a c t e r i a s , q u e e s t n c o n f o r m a d a s
p o r u n a m e m b r a n a c e l u l a r , c i t o p l a s m a , material gentico y ribosomas (Ver
Fig. 5.1). Y las eucariticas como las de los protistas, hongos, plantas y animales,
que adems de las estructuras de las bacterias, tiene organelos membranosos,
con material gentico encapsulado e n u n n c l e o ( V e r F i g . 5 . 2 ) . T o d o e s t o
s e c o n o c e g r a c i a s a l a m i c r o s c o p a electrnica.(1)
GENERALIDADES:

Las clulas comparten muchas caractersticas estructurales, pero hay una clara
diferencia entre la organizacin de las clulas procariticas y la de las e u c a r i t i c a s . E n
particular, las clulas de los procariotes (bacterias, algas v e r d e -
azules y algas herbi verdes) son pequeas y simples. Tienen
u n a membrana citoplsmica, generalmente delimitada por una pared celular rgida; u n
nucleoide que consta de una sola molcula de ADN
circular y que representa todos los genes del organismo
(genoma); y un citoplasma qu e c o n t i e n e ribosomas y una
g r a n v a r i e d a d d e m o l c u l a s q u e m e d i a n e l metabolismo pero
carecen de membranas internas permanentes. Al carecer de estas membranas sus clulas no
poseen un ncleo, no poseen mitocondrias, ni c l o r o p l a s t o s , ni retculo
e n d o p l s m i c o , n i a p a r a t o d e g o l g i , n i l i s o s o m a s , n i peroxisomas, ni
vacuolas. Si bien, algunas bacterias poseen flagelos, estos c o n s t a n d e u n
solo filamento, a manera de un solo microtbulo. No est
presente, pues, el ordenamiento multifilar que se encuentra en los
c i l i o s y flagelos de otros organismos.(3)

El trmino procaritico se utiliza a menudo para distinguir las clulas delas bacterias y
de las algas, de las clulas provistas de ncleo o eucariticas, d e t o d o s l o s
dems organismos. Todos los procariotes son organismos
unicelulares.
En contraste, las clulas de los cuatro reinos de los
o r g a n i s m o s eucariticos (protistas, hongos, animales y vegetales) son ms grandes
y estn caracterizadas por muchos compartimientos membranosos (Ver Fig.
5.3, 5.4).L a c a r a c t e r s t i c a p r i m a r i a d e l a s c l u l a s e u c a r i t i c a s e s e l
n c l e o c o n s u s cromosomas. E l c i t o p l a s m a q u e r o d e a a l n c l e o ,
l i m i t a d o a s u v e z p o r l a membrana, incluye una variedad de organelos,
teniendo cada clase su propia organizacin estructural y funcin o funciones
particulares en la clula. Adems de los organelos membranosos, como el retculo
endoplsmico, al aparato de Golgi, las mitocondrias, los
l i s o s o m a s , l o s c l o r o p l a s t o s ( e n l a s c l u l a s fotosintticas) y
otros, tambin hay ribosomas, centriolos, microfilamentos,
microtbulos y una multitud de protenas suspendidas en la porcin citoslica
del citoplasma.

Clula animal Clula vegetal


Una membrana rodea al citoplasma y sta misma puede estar de limitada por una pared
celular rgida o por cubiertas superficiales de otras clases. En muchas clulas
la superficie celular incluye especializaciones caractersticas, como los cilios o
flagelos, las microvellosidades y las uniones con otras clulas en los tejidos. (2) Los
eucariontes pueden ser unicelulares o multicelulares; ser sexuales o a s e x u a l e s , o
bien variar considerablemente en su forma externa.
L a s relaciones evolutivas entre los tipos de las clulas modernas no estn
todava muy claras, pero los proca riontes son, sin duda, ms antiguos y
comparten un ancestro comn con los organismos eucariticos. Todas las
clulas ofrecen s i m i l i t u d e n l a e s t r u c t u r a d e s u m e m b r a n a ,
e n s u s m e c a n i s m o s p a r a almacenamiento y transferencia de informacin y
en su metabolismo; de modo que es posible que estos aspectos hayan evolucionado muy
temprano y hayan sido retenidos desde entonces en todos los linajes descendientes. Los
nuevos mtodos del anlisis molecular podrn aclarar estos
h e c h o s e v o l u t i v o s fundamentales. (5)

MATERIAL:

Lupa.
Microscopios.
Porta y cubreobjetos.
Hisopos estriles.
Mechero Bunsen.
Caja petri.
Gotero.
Aguja de diseccin.
Navaja.
Palillo de dientes.

MATERIAL BIOLOGICO:

Agua de estanque o de acuario (agua verde).


Pan y frutas con mohos.
Sarro dentario.
REACTIVOS:

Lugol.
Fucsina bsica.
Cristal violeta.
Alcohol de 90.
Azul de metileno.

TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE BACTERIAS:

1 . D i s o l v e r e n u n a g o t a d e a g u a s o b r e u n
p o r t a o b j e t o s , u n a p e q u e a porcin de sarro
dentario y con sta se realiza un frotis o extensin
Enseguida fijarlo a la llama de un mechero bunsen, para esto pasar varias
veces el portaobjetos sobre la flama cuidando que no hierva la preparacin.

2 . C o l o c a d e n t r o d e u n a c a j a p e t r i e l
p o r t a o b j e t o s , c u b r i n d o l o c o n l a solucin de
cristal violeta por un minuto. Lavar al chorro de agua cuidando que no se
arrastre la muestra.

3 . A g r e g a u n a g o t a d e l u g o l , d e j a r 1
m i n u t o y l a v a r a l c h o r r o d e agua.

4. D e c o l o r a r c o n a l c o h o l d e 9 0 . E s t a o p e r a c i n d e b e s e r r p i d a para
que no se elimine todo el colorante.

5 . C u b r i r c o n f u c s i n a b s i c a p o r m e d i o
m i n u t o . E s c u r r i r e l c o l o r a n t e y lavar al chorro de agua.

6 . D e j a r s e c a r l a p r e p a r a c i n a l
a i r e
7 . O b s e r v a r a l m i c r o s c o p i o c o n
o b j e t i v o d e i n m e r s i n . A l g u n a s
bacterias se vern teidas de color rosa y otras de violeta.8 . H a c e r
e s q u e m a s d e l a s o b s e r v a c i o n e s , s e a l a n d o
c o n s u n o m b r e las estructuras que se puedan distinguir.

TCNICA PARA LA OBSERVACIN DE PROTOZOARIOS Y ALGAS:

1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de agua verde de estanque o bien


raspar las paredes de un acuario con un portaobjetos.

2. C o l o c a r l e u n c u b r e o b j e t o s p a r a o b s e r v a r e n e l m i c r o s c o p i o c o n l o s
objetivos seco dbil y seco fuerte.3 . R e a l i z a r esquemas de los
organismos observados y sealar los nombres de las
estructuras que se puedan visualizar.

T C N I C A P A R A L A O B S E R V A C I N
D E M O H O S ( H O N G O S PLURICELULARES):

1.Colocar algunas hifas sobre un portaobjetos (desprender el moho


del pan y verduras mediante una aguja de diseccin, con
m o v i m i e n t o s suaves para no destruirlo).

2.Cubrirlas con una solucin de azul de metileno por 2 minutos.


3.Escurrir el colorante con cuidado y colocar un cubreobjetos sobre
l a s hifas. Observar a seco dbil. Realizar los esquemas correspondientes,
sealando las estructuras visibles.

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:

1) Cules fueron las diferencias que observaste al microscopio entre las clulas
eucariontes y procariontes?

2) Clasifica las clulas observadas en:


Clulas procariotas Clulas eucariotas

3)Mencionar una diferencia estructural entre las clulas


v e g e t a l e s y animales observadas al microscopio.

FECHA DE REALIZACIN:

BIBLIOGRAFA:

1. Alberts, B. 2006. "Introduccin a la biologa celular". Madrid. Segunda edicin. Editorial


Mdica Panamericana. Pgs. 53-57

2.Callen J. 2003. Biologa celular: de las molculas a los organismos. Mxico,


D.F. Segunda edicin. Editorial Continental. Pgs. 41-46
3.Cooper, G. 2002. La clula. Segunda edicin. Editorial Marbn. Pgs.23-25

4.Nelson J. 2002. Principios de Biologa. Enfoque humana. Mxico D.F. Segunda edicin.
Editorial Limusa, S.A. Pgs. 10-12

5.Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Dc ima edicin.


Editorial Prentice-Hall. Pgs. 17-22

PRCTICA No. 06

OBSERVACIN DE ORGANELOS CELULARES

OBJETIVO:

Identificar las estructuras que integran las clulas vegetales y animales es


como plastos, ncleo, etc., mediante la observacin de las preparaciones.

FUNDAMENTO:

Los organelos son estructuras especializadas que tienen formas


caractersticas y realizan funciones especficas en el crecimiento, mantenimiento y
reproduccin de las clulas ( V e r Fig. 6.1). Muchas reacciones
q u m i c a s o c u r r e n e n u n a c l u l a simultneamente, sin embargo hay
p o c a i n t e r f e r e n c i a e n t r e l o s distintos tipos de
reacciones p o r q u e o c u r r e n e n d i f e r e n t e s organelos.
Figura 6.1 Organelos celulares

Mitocondria: Constituye la central energtica de la clula. Una clula puede


tener unos pocos cientos o miles de mitocondrias. Las clulas con actividad
fisiolgica tienen un gran nmero de mitocondrias porque usan ATP en grandes
cantidades. Una mitocondria est limitada por dos membranas, cada una de
las cuales es similar en estructura a la membrana plasmtica. Las
mitocondrias se autorrepli can, un proceso que ocurre cuando se incrementa la
demanda de energa o antes de la divisin celular. (3)
MATERIAL:

Aguja de diseccin.
Vasos de precipitado.
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
Cubreobjetos y portaobjetos.
Microscopio compuesto.
Navajas.
Algodn.
Frasco de boca ancha.

MATERIAL BIOLGICO:

Elodea.(Elodea canadensis, planta acutica)


Geranio.(Pelargonium grandiflorum)
Jitomate.
Cultivo de paramecios.
Nopal.
Sanda.
Insecto.

REACTIVOS:

Azul de metileno.
Alcohol absoluto.
ter.
Solucin de yodo.
Solucin de lugol.
Cristal violeta.
TCNICA PARA CLULAS VEGETALES:

1. Coloca entre el cubreobjetos una hoja de Elodea con una gota de agua, selecciona una
clula y cuenta el nmero de cloroplastos. Haz lo mismo en diez clulas y obtn el
promedio. Observa su forma y localizacin.

2.Haz la misma operacin en clulas de corte de nopal.

3.Preparar con 48 horas de anticipacin una planta de geranio expuesta a la luz


y otra a la oscuridad.

4.Haz un corte transversal de una hoja de la planta de geranio expuesta a la luz y otra
expuesta a la oscuridad.

5.Observa y compara el contenido de cloroplastos en cada una.

6.Haz un corte delgado de pulpa de jitomate y colcalo entre


p o r t a y cubreobjetos. Obsrvalo al microscopio y anota su forma, color y tamao de los
cromoplastos. Puede observarse lo mismo macerando en agua el ptalo de una flor colorida.

7. Observa a seco dbil y seco fuerte una preparacin de un corte delgado d e l a


parte blanca de la sanda para identificar la presencia
d e leucoplastos.8 . E s q u e m a t i z a l a p o s i c i n q u e o c u p a n l a s v a c u o l a s y e l
n m e r o d e e l l a s . Se recomienda teir con cristal violeta.

9.De las preparaciones anteriores esquematiza los ncleos y contesta


l o siguiente:a ) C u l e s l a l o c a l i z a c i n d e l o s n c l e o s ?

b)Llena el citoplasma toda la clula?


c)Con respecto al geranio Qu podras concluir?

TCNICA PARA CLULAS ANIMALES:

1.Coloca una gota del cultivo de paramecios en un portaobjetos y encima un cubreobjetos.

2.Localiza un paramecio de buen tamao y trata de apreciar las vacuolas.

3.Coloca en un frasco un insecto con un algodn impregnado con un poco d e t e r y


tapa el frasco. Cuando ya no tenga ningn movimiento,
extrpale uno de los msculos de la pata; desmencela con una navaja y deseque con calor
suave. Coloca algunas fibras en un portaobjetos con una gota de suero fisiolgico y
examina a seco fuerte.4 . O b s e r v a l a f o r m a , e l t a m a o y e l n c l e o d e
l a s c l u l a s y c o n t e s t a l o siguiente:

a) Son semejantes las estructuras observadas en las clulas vegetales alas del insecto?

NOTA: Para realizar un cultivo de paramecios se puede conseguir agua de


florero de panten o bien colocar un poco de paja en un frasco con agua por lo menos con
una semana de anterioridad y verificar al cabo de este tiempo la presencia de
paramecios.

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:
1)Realiza un cuadro sinptico describiendo cada organelo y su funcin dentro
de la clula.
2)Elabora una tabla comparativa de organelos entre la clula animal y la vegetal.
FECHA DE REALIZACIN:
BIBLIOGRAFA:

1.Johnson, G. 2006. Biologa Celular. Mxico D.F. Segunda edicin. Editorial


Panamericana. Pgs. 71-82

2.N a s o n , A . 1 9 9 0 . E l m u n d o b i o l g i c o . M x i c o D . F . P r i m e r a e d i c i n .
Editorial Limusa. Pgs. 162-175

3.W e i s z , P . 2 0 0 0 . L a C i e n c i a d e l a B i o l o g a . M x i c o D . F .
S e g u n d a edicin. Editorial Omega, S.A. Pgs.69-75

4 Ramrez, I. 2000. Biologa celular. Mxico D.F. Primera


e d i c i n . Educacin superior tecnolgica. Editorial dgeta. Pgs. 10-17

5. V i l l e e , C . 2 0 0 3 . B i o l o g a . M x i c o D . F . O c t a v a e d i c i n . E d i t o r i a l
M c Graw Hill. Pgs. 52-56

6. Y o u n g , A . 2 0 0 1 . Biologa II. Mxico D.F. Primera edicin.


E d i t o r i a l Nueva Imagen. Pgs. 64-73

PRCTICA No. 07

PERMEABILIDAD CELULAR

OBJETIVO:

Observar y comparar el efecto de diversas sustancias qumicas a travs de la difusin en


una membrana celular por medio de la hemlisis.

FUNDAMENTO:
Existen varios mtodos para medir la presin osmtica celular; la mayor parte son fsicos.
Algunos de stos mtodos son utilizando tanto a la zanahoria como al celofn, por lo
que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando clulas vivas,
como en este caso sern glbulos rojos.(1)

GENERALIDADES:

El movimiento de agua de adentro hacia afuera de las clulas est


infludo por la semipermeabilidad de la membrana celular, o sea, su capacidad de permitir
el paso de ciertas molculas o bien impedrselo (Ver Fig. 7.1).(3)

Figura 7.1 Permeabilidad de la membrana


Figura 7.2 Mecanismos de transporte

El trmino smosis se deriva de la palabra griega que significa empujar. L a t e n d e n c i a d e


empujar sus molculas desde la porcin ms concentrada h a c i a la
menos concentrada, puede ser el resultado de una fuerza que
llamamos presin osmtica. Puesto que la presin osmtica depende de la
concentracin de los materiales en suspensin, mientras ms grande es
l a concentracin mayor es la presin osm tica y, el objetivo de esta es igualar la
concentracin de las molculas de agua en ambos lados (Ver Fig. 7.2).(2)

En los lquidos de cualquier clula viva se encuentran sales, azcares y otras sustancias en
solucin; el liquido tiene, pues, cierta presin osmtica. Cuando la clula se sumerge en
un lquido con la misma presin osmtica, no hay movimiento neto de molculas de agua dentro
ni fuera de la clula; esto es que la clula ni se hincha ni se encoge, por lo que se dice que se
encuentra en un medio isotnico o isosmtico respecto a la clula. Normalmente el
plasmasanguneo y todos los lquidos del organismo son isotnicos pues contienen la misma
concentracin de sustancias disueltas que en las clulas.(1)

Si la concentracin de las sustancias disueltas en el lquido circundante es mayor que la existente


dentro de la clula el agua tiende a salir de la clula, por lo que esta se contrae. Este
lquido es hipertnico respecto a la clula, es decir, que tiene una concentracin mayor
de solutos. Si el lquido tiene menos s u s t a n c i a s d i s u e l t a s q u e l a c l u l a , e s
h i p o t n i c o , e s d e c i r q u e t i e n e m e n o r concentracin de solutos. C u a n d o u n a
c l u l a s e c o l o c a e n u n a s o l u c i n n o i s o t n i c a , p u e d e ajustarse al
nuevo medio por modificacin de su contenido de agua, para lograr f i n a l m e n t e l a m i s m a
c o n c e n t r a c i n q u e e l m e d i o ; a e s t o s e l e c o n o c e c o m o regulacin del
volumen intracelular. Muchas clulas pueden impeler agua o ciertos solutos hacia
uno u otro lado de la membrana plasmtica, de manera q u e e n e s t a f o r m a
m a n t i e n e n u n a p r e s i n o s m t i c a d i s t i n t a d e l a d e l m e d i o ambiente.(4)

MATERIAL:
5 tubos de ensayo 13 x100 mm.
1 gradilla.
2 pipetas graduadas de 5 ml.
1 cronmetro.
Equipo para venopuncin.

MATERIAL BIOLOGICO:

Sangre.

REACTIVOS:

Glicerol 0.5 M.
Glucosa 0.5 M.
Solucin de urea 0.5 M.
Solucin de etilenglicol 0.5 M.
Solucin salina isotnica.

TCNICA PARA DETERMINAR EL PESO MOLECULAR:

1 . P r e p a r a r u n a s e r i e d e 4 t u b o s m a r c a d o s
d e l a s i g u i e n t e m a n e r a , utilizando la sangre
que se extrajo por venopuncin con
p r e v i a s indicaciones del Maestro.

Tubo N 2 ml de solucin Peso Molecular Suspensin de Tiempo de


0.5 M eritrocitos Hemlisis
1 Urea 2 gotas
2 Etilenglicol 2 gotas
3 Glicerol 2 gotas
4 glucosa 2 gotas

2. E s i m p o r t a n t e u t i l i z a r u n a p i p e t a l i m p i a y d i f e r e n t e p a r a c a d a
sustancia.

3.C e n t r i f u g a r a 2 5 0 0 r p m d u r a n t e 5 m i n u t o s y o b s e r v a r t a n t o
macroscpica como microscpicamente si se presenta la lisis.

OBSERVACIONES CON DIBUJOS:

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:

1)Por qu se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva?

2)Por qu se dice que la bicapa de la membrana constituye una barrera natural?

3)Cules con los factores que afectan la velocidad de difusin a travs de la


membrana celular?

4)Cmo esta constituida la membrana celular de tal manera que permite la permeabilidad?

FECHA DE REALIZACIN:

BIBLIOGRAFA:

1.Madigan, M. 2003. Biologa de los Microorganismos. Madrid. Decima edicin.


Editorial Prentice-Hall. Pgs. 63-68
2.Margulis, L. 2000. El origen de la clula. Barcelona; Mxico. Segundaedicin. Editorial
Revert. Pgs. 55-61

3.O r a m , R . 2 0 0 2 . B i o l o g a . S i s t e m a s v i v i e n t e s . M x i c o D . F .
P r i m e r a edicin. Compaa editorial continental. Pgs. 89-91

4.V i l l e e , C . 2 0 0 3 . B i o l o g a . M x i c o D . F . O c t a v a e d i c i n . E d i t o r i a l
M c Graw Hill. Pgs. 34-39