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INSTITUTO TECNOLGICO DE ORIZABA

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PRCTICA No. 2

CURVAS DE CALIBRACIN POR ESPECTROFOTOMETRA

OBJETIVO.

Obtener la curva de calibracin Absorbancia-Fraccin molar para sistemas


binarios.

COMPETENCIAS:
1. Obtener la curva de calibracin ndice Absorbancia-Fraccin molar para sistemas
binarios.
2. Manejar el espectrofotmetro
3. Calcular la fraccin molar de cada muestra.

FUNDAMENTOS.

De acuerdo a la Ley de Beer la absorbancia vara de acuerdo a la concentracin de


las soluciones.

INTRODUCCIN.

Cuando un haz de energa radiante monocromtica incide sobre una capa


homognea de una sustancia, parte de la energa es absorbida, otra parte es transmitida y una
pequea parte reflejada, por lo que, ignorando las prdidas debidas a reflexiones y disipacin,
la fraccin de la radiacin absorbida es una funcin de la concentracin de la sustancia en la
trayectoria de la luz y del espesor de la muestra. La ley que rige la concentracin y la cantidad
de luz o radiacin absorbida es la Ley de Beer o Ley de Lambert Beer.

LEY DE BEER.- Establece que la intensidad de un rayo de luz monocromtica decrece de


manera exponencial al aumentar la concentracin de una disolucin a travs de la
cual pasa.

Para la Ley de Beer son importantes los conceptos de transmitancia y absorbancia.

TRANSMITANCIA ( T ).- Es la relacin de las intensidades de la radiacin no absorbida,


con relacin a la muestra testigo, y de la radiacin incidente.
I
T =
Io

I = Poder de la radiacin no absorbida.


Io = Poder de la radiacin incidente. I
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ABSORBANCIA ( A ).- Es el logaritmo decimal de la recproca de la transmitancia.

1 1
A = -------- = - -----------
log T log Io

El porcentaje de Transmitancia es 100T; el porcentaje de Absorcin es 100(1-T)

Al pasar un haz de fotones por un sistema de una especie absorbente, el grado de


absorcin con respecto a la distancia atravesada es directamente proporcional al poder del haz
de fotones, la reduccin de la intensidad (-dl), puede enunciarse matemticamente como:

-dl
= kI
dx

k = Constante de proporcionalidad caracterstica de la especie absorbente y de la energa de


fotones.

x = Distancia en el medio absorbente o grosor de la capa del medio absorbente.

Reordenando y separando variables, el enunciado matemtico de que la fraccin


del poder de radiacin absorbida es proporcional al espesor atravesado queda:

dI
- = - d(ln I) = k dx
I

Estipulando que Io es el poder de la radiacin al inicio de la capa de sustancia


absorbente, es decir a una distancia cero, x = 0, y que I representa el poder radiante de la
radiacin transmitida que emerge del medio absorbente a x = b.

Io I

0 b
Fig. 3.1.- Intensidad del haz de fotones que pasa a travs de una capa de solucin.

La ecuacin puede integrarse con respecto al total del trayecto de la radiacin,


quedando:
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I b
- d ln I = k d x
Io 0

Obteniendo:

Io
ln Io ln I = ln = kb
I

Beer tambin relacion la intensidad de la luz transmitida con la concentracin de


las soluciones, para ello determin que, al aumentar la concentracin del absorbente se
produce el mismo efecto que un aumento proporcional en la longitud del trayecto de
absorcin de la radiacin. As la constante de proporcionalidad k, es a su vez, proporcional a
la concentracin de la solucin absorbente, esto es:

k = aC

usando logaritmos de base 10 en vez de naturales queda:

Io
ln = abC
I

donde a incorpora el factor de conversin de base diez, es decir, 2.303

Si la longitud del trayecto en la muestra se expresa en centmetros y la


concentracin en gramos de absorbente por litro de solucin, la constante a, llamada
absorbencia relativa especfica o coeficiente de absorcin, tiene por unidades litro/ gr. Cm

Si se desea especificar C en trminos de concentraciones molares, manteniendo b


en centmetros, entonces la ecuacin anterior se escribe:

Io
ln = bC
I

donde , en unidades de lt / mol cm, se llama absorbencia molar o coeficiente molar de


absorcin.

Para comprobar lo anterior se puede utilizar un espectrofotmetro. Las escalas de


lectura y de medicin de los espectrofotmetros estn calibradas para leer Absorbencias y
Transmitancias.

Una grfica de la TRANSMITANCIA en funcin de la concentracin ser una


curva como lo muestra la Fig.3.2
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Una grfica de la ABSORBANCIA en funcin de la concentracin ser una lnea


recta que pase por el origen, como lo muestra la Fig. 3.3.

Fig. 3.2.- Grfica Transmitancia Concentracin Fig. 3.3.- Grfica Absorbancia Concentracin

La Fig.3.4 muestra la comparacin de las escalas de Absorbancia y Transmitancia.

TRANSMITANCIA % 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

ABSORBANCIA % 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1 2

Fig. 3.4.- Comparacin de las escalas de ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA.

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO.

Los reactivos utilizados son solventes altamente inflamables por lo que se debe
tener cuidado al manejarlos.

MATERIAL Y EQUIPO REACTIVOS

1 Espectrofotmetro UV Gnesis 50 ml. Metanol


2 Foto-celdas 50 ml. Agua destilada
24 Frasquitos con tapn. 50 ml. Acetona.
2 Soportes. 50 ml. Cloroformo.
4 Buretas
2 Pinzas dobles para bureta.
4 Vasos de p.p. de 100 ml.
Etiquetas.

PROCEDIMIENTO.
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1. Conecte el espectrofotmetro de la Fig.3.5.


2. Encienda el espectrofotmetro, usando el botn de POWER que est en el lado derecho
del tablero de control.
3. Ajuste la posicin de la lmpara de Deuterio (UV), tirando hacia fuera de la palanca,
hasta que llegue al tope.
4. Mueva el switch de energa de la lmpara de DEUTERIO-UV, oprima el botn
STARTER aproximadamente 2 segundos y sultelo. Deje que se caliente durante 30 min.
5. Seleccione la longitud de onda deseada con el selector (para el sistema metanol-agua es
260 para el sistema acetona-cloroformo es 320).
6. Abra la cubierta del compartimiento de la muestra.
7. Llene la celda con una solucin en blanco (es la muestra del frasco 1) e insrtelo dentro
del compartimento para la muestra. Cirrelo.
8. Seleccione el modo de operacin: ABSORBANCIA usando el selector de MODO
9. Fije en LO (BAJO) la perilla de SENSIBILIDAD localizada en el centro de la parte de
abajo del frente del aparato.
10. Fije 100% TRANSMITANCIA- 000% ABSORBANCIA para el blanco usando el botn
de control 100 %T / 0% A localizado en el lado izquierdo de la parte baja del frente del
aparato. Si no se puede fijar 100 %T- 000% A para el blanco, mueva la perilla de
SENSIBILIDAD a la M (MEDIO) o, si es necesario, a la posicin HI (ALTO),
Asegrese de ajustar el 100 %T / 0% A cada vez que ajuste la SENSIBILIDAD.
11. Retire el blanco
12. Llene en la misma forma la cubeta o celda, con cada una de las muestras a medir.
Determine y anote la ABSORBANCIA para cada una en la Tabla de Datos Experimentales.

TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES. SISTEMA AGUA METANOL.

VH2O VCH3-OH ABSORBANCIA FRACC. MOLAR X


MUESTRA Ml Ml
1 5 0
2 4.7 0.3
3 4.5 0.5
4 4.0 1.0
5 3.5 1.5
6 3.0 2.0
7 2.5 2.5
8 2.0 3.0
9 1.5 3.5
10 1.0 4.0
11 0.5 4.5
12 0 5.0

TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES. SISTEMA CLOROFORMO ACETONA.


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V CLOROF. VACETONA ABSORBANCIA FRACC. MOLAR X


MUESTRA Ml ml
1 5 0
2 4.7 0.3
3 4.5 0.5
4 4.0 1.0
5 3.5 1.5
6 3.0 2.0
7 2.5 2.5
8 2.0 3.0
9 1.5 3.5
10 1.0 4.0
11 0.5 4.5
12 0 5.0

CLCULOS Y GRFICAS:

1. Para el sistema agua-metanol use la fraccin molar de la prctica anterior y para el de


cloroformo acetona calcule la fraccin molar con respecto a la acetona:

Moles de acetona
Xacetona =
Moles de acetona + Moles de cloroformo

2. Construya una curva de calibracin para cada sistema, colocando la Absorbancia en el


eje Y y la Fraccin molar de cada muestra en el eje X.

F. molar

OBSERVACIONES.

NOTA: Hacer las anotaciones y agregar fotos de las observaciones pertinentes.

CONCLUSIONES.

NOTA: Escribir conclusiones claras, amplias y precisas.

BIBLIOGRAFA.
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Debe llevar los siguientes Datos: Nombre del libro, Nombre del autor por orden alfabtico,
Edicin, Pginas consultadas.

IDENTIFICACIN Y TRATAMIENTO DE RESIDUOS GENERADOS.

Anotar la cantidad de Residuos generados en la prctica, y describir el y/o los tratamientos


aplicados.