UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ZONA CENTRO BOGOT CUNDINAMARCA

CEAD JOS ACEVEDO y GMEZ
INFORME DE PRACTICA # 7

PRACTICA N 7 ESTUDIO DE LOS PARAMETROS CROMATOGRAFICOS A SER APLICADOS EN MUESTRAS

AMBIENTALES

Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Escuela de Ciencias Bsicas, Tecnologa e Ingeniera ECBTI.
Qumica Ambiental. Grupo # 2 Lab. Bogot Colombia. Tutor Juan Gabriel Perilla Jimnez

Sesin 1: sbado 16 de septiembre de 2017

Entrega Informe: sbado 14 de octubre de 2017

Estudiante Correo Cdigo Tutor Correo Tutor

Terico
Diana Dianasans317@hotmail.com 1.022.346.002 Sandra Sandra.albornoz@unad.edu.co
Constanza Liliana
Snchez Albornoz

RESUMEN:

La cromatografa de gases GC es bsicamente una tcnica de separacin, su gran capacidad para resolver
muestras complejas ha conducido a utilizarla cada vez ms como una tcnica analtica. Est utilizando, ha
conducido al desarrollo de una instrumentacin, que utilizando siempre la separacin por elucin, puede
operar en continuo, con mayor eficiencia en la separacin y con mayor control de las condiciones
cromatografas para incrementar la reproductividad de los resultados el desarrollo de este tipo de anlisis
requiere un equipo costoso y muy delicado para el manejo de una persona que no sea experta por esta razn
el software de simulacin de cromatografa de gases (GC) ha sido reconocida como una herramienta educativa
eficaz, ya que permite entre otras ventajas conocer la forma como opera un equipo de cromatografa
GC real, variar parmetros como los tipos y tamaos de las columnas que el equipo real requiere la compra y el
remplazo de cada columna a la vez, se obtiene n resultados rpidos sin ningn costo y es muy verstil
facilitando el estudio de esta tcnica de separacin e identificacin de sustancias.

OBJETIVOS:

GENERAL:

Aprender a manejar cada uno de los componentes del programa de simulador de cromatografa de gases (GC)
y aplicarlo en el desarrollo de la actividad.

ESPECIFICOS:
 UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
ZONA CENTRO BOGOT CUNDINAMARCA
CEAD JOS ACEVEDO y GMEZ
Usar el simulador GC aprendiendo de la cromatografa y sus aplicaciones garantizando un adecuado resultado
en los anlisis de la separacin de muestras.

MARCO TEORICO

Simulado HPLC

El simulador HPLC es un simulador de cromatografa lquida de alto rendimiento basado en la web.

Ajustar una serie de parmetros experimentales en los parmetros cromatogrficos incluyendo el
tiempo de retencin, la eficiencia de la columna, y de contrapresin. Es un software de cdigo
abierto de distribucin gratuita en los trminos de la licencia No comercial
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza y se
inyecta en la cabeza de una columna cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una
fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase mvil no
interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de
la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-slido (GSC) y la
cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que se utiliza ms ampliamente, y que se
puede llamar simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida
y la retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente
este proceso de adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de
cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de
especies gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase estacionaria molculas de
lquido inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de diversos componentes como
el gas portador, el sistema de inyeccin de muestra, la columna (generalmente dentro de un
horno), y el detector
Un cromatgrafo de gases es el siguiente:
 1. Fase mvil
2. Puerto de inyeccin
3. Horno de la columna
4. Columnas
5. Fase estacionaria
6. Detector
7. Sistema de registro de datos

Parte Experimental

PARTE 1

Reconocimiento de los parmetros cromatogrficos en cromatografa lquida de alta eficiencia (CLAE)

Defina y explique cmo se relacionan los siguientes conceptos. Incluya cuando

corresponda, el smbolo y ecuacin que representa al concepto:

1. Factor de separacin.
2. Resolucin.
3. Eficiencia.
4. Factor de retencin.
5. Tiempo de retencin.
6. Tiempo muerto.
7. Ancho de banda (sigma total)
8. Cromatografa lquida en fase normal.
9. Cromatografa lquida en fase reversa.
10. Gradiente de elucin.
11. Elucin isocrtica.

1. Factor de separacin:

Define que tan selectiva es una columna para separar dos picos, la columna puede ser selectiva a una
separacin que identifica por un valor alto de este factor. El factor de selectividad de una columna para
dos especies A y B se define como:
Donde KB es el coeficiente de distribucin para la especie ms fuertemente retenida B, y K A es el
coeficiente de distribucin para la menos retenida o que incluye con ms rapidez. La especie A. segn
esta definicin a siempre es mayor que la unidad, porque b es el compuesto ms retenido Donde K b y Ks
son los factores de capacidad de B y de A respectivamente.

2. RESOLUCION:

Es el parmetro que expresa el grado de separacin que se puede obtener en un sistema cromatogrficos
para dos componentes dados relaciona la capacidad separadora de un sistema cromatogrficos para dos
componentes se define como

Donde Rs es la resolucin, tRA y tRB son los tiempos de retencin de los componentes AyB y aA y Ab son
las anchuras de los picos del cromatogramas de los anteriores componentes La resolucin puede
observarse directamente sobre el cromatograma de picos. Se tendr una buena resolucin si los picos no
se solapan, y est perfectamente delimitado cada pico sin que el principal de uno con el final del otro.

3. EFICIENCIA:

Se utiliza el concepto de piso terico y se define este como la seccin terico transversal en el cual se
realiza el equilibrio de particin durante el flujo de fase mvil cuando mayor sea el nmero de platos
terico mayor ser la eficiencia de la columna El nmero de platos tericos mide la capacidad para
separar los componentes, no la retencin de los mismos la eficiencia o el nmero de platos se puede
observar directamente a partir del cromatograma observando la agudeza de los picos

Donde (n) es el nmero de platos tericos L es la longitud de la columna, H es la altura de cada plato tR
es el tiempo corregido de retencin de un componente y si es la altura del pico cromatogrficos y:

Si H tiene un valor pequeo la distancia entre los platos es menor y por lo tanto la eficiencia ser mayor
por el contrario si h es grande la columna es poco eficiente para separar ese componente ya que sus
molculas estarn muy difundidas.
 4. FACTOR DE RETENCION:

Es un parmetro que describe la velocidad de migracin de los solutos

Donde Ka es el coeficiente de distribucin de la especie a Vz es volumen de la fase de la fase mvil,

cuando el factor de capacidad para una especie es mucho menor la elucin tiene lugar y van rpido que
es difcil determinar con exactitud los tiempos de retencin.

5. TIEMPO DE RETENCION:

Tiempo transcurrido desde la introduccin de la muestra hasta que le componente alcanza el detector.

6. TIEMPO MUERTO:

Tiempo requerido para que una especie no retenida alcance el detector, es el tiempo de migracin de la
especie no retenida; es el tiempo necesario para que, por trmino medio una molcula de la fase mvil
pase a travs de la columna

7. ANCHO DE BANDA (sigma total).

Corresponde al intervalo de longitud de onda comprendido entre los puntos entre la transmitancia (de
radiacin transmitida por la fuente y que llega a la rendija de salida) alcanza la mitad de su mximo de
transmisin o el intervalo de 6 longitudes de onda que contiene el 75% de la energa radiante que
proviene del monocromador. La anchura de banda se puede expresar en los trminos de la apertura o
amplitud de las rendijas S y la dispersin lineal reciproca del monocromador como:

SBMW= S.D-1

8. CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN FASE REVERSA

Tambin se basa en la Hidrofilia y la lipfila, la fase estacionaria consiste en una matriz de silica
empacada que lleva unidad covalente una cadena alqulica en N carbonos C-8 significa que se incorpora
una cadena octil y C-18 octadecil

9. CROMATOGRAFIA LIQUIDA EN FASE NORMAL:

Se basa en la hidrofilia y la lipfila usando una fase estacionaria polar y una fase mvil menos polar as
los compuestos hidrofobilos eluye ms rpidamente que los Hidrolificos. La fase est constituida por una
matriz de silica a los que se unen grupos silanol, amino y nitrilo que le confieren polaridad relativa
respecto a la fase mvil

10. GRADIENTE DE ELUCION:

Este tipo de elusin se utiliza cuando se obtiene una mezcla compleja de compuestos con polaridad
diferente. Los diferentes compuestos son eludidos Modificando gradualmente la composicin de la fase
mvil durante el transcurso de la cromatografa (aumento de la fuerza inica, modificando la polaridad,
etc.) el resultado sobre su elucin en un acortamiento de los tiempos de retencin, el factor de retencin
disminuye conforme aumenta la gradiacion del grupo gradiente y el compuesto eluye.

11. ELUCION ISOCRTICA:

Los compuestos eluyen usando una fase mvil de composicin constante durante toda la cromatografa.
Todos los compuestos terminan migrando a travs de la columna hasta el final.

PARTE II

Efecto de la estructura de los compuestos (solutos) y de la composicin de

la fase mvil sobre la retencin y la resolucin.

1. Dibuje estructuras de los siguientes compuestos utilizando las convenciones

de cua/slash representando los ngulos de enlace adecuados:

Acetofenona Benzofenona Etilparabeno

Butilparabeno Propiofenona Propilparabeno
Ketoprofeno 3-nitrofenol 4-nitrofenol
2. Sobre la base de sus estructuras:
 a)Prediga el orden de elucin de los compuestos, partiendo del menos al
ms retenido en RPLC (Cromatografa lquida en fase reversa). Justifique
su respuesta.

b)Cules son los principales usos de cada uno de estos compuestos?

Acetofenona: La Acetofenona es un compuesto orgnico de frmula

C6H5C(O)CH3. Es la cetona aromtica ms simple. Este lquido viscoso
incoloro es un precursor en la preparacin de numerosas resinas y
fragancias. Se utiliza como un catalizador de polimerizacin para la
fabricacin de resinas. Se utiliza como producto intermedio para productos
farmacuticos, agroqumicos y otros compuestos orgnicos

Benzofenona: es un compuesto aromtico, cristalino e insoluble en agua,

que acta como filtro para las radiaciones UV en tintas y barnices, as como
en productos como perfumes y jabones, entre otros, en los que previene y
evita la degradacin del color y del olor causada por los rayos UV, en lo que
se conoce como Proceso de Curado UV.

Etilparabeno: Los parabenos son usados ms de lo que se debera en la

mayora de los cosmticos, medicamentos e incluso en muchos alimentos por
su efecto bactericida y fungicida, es decir, para que no aparezcan bichitos
extraos en los potecitos y se puedan utilizar por ms tiempo

Butilparabeno: El Butilparabeno es un polvo cristalino inodoro y incoloro a

temperatura ambiente, muy utilizada como conservante en alimentacin,
medicina y cosmtica. Lo encontraris muy a menudo; se utiliza muchsimo
en muchos productos del cuidado de la piel e incluso en medicinas tan
comunes como el ibuprofeno

Propiofenona: Reactivos comunes, productos farmacuticos, perfumes y la

industria de la sntesis orgnica.
Propilparabeno: es un ster proplico de cido p-hidroxibenzoico, que en s
es un derivado del cido benzoico. A pesar de que se produce naturalmente,
se sintetizan todos los Propilparabeno comerciales. Debido a su relativa falta
de toxicidad y la rapidez con que se absorben, metabolizan y se excretan,
Propilparabeno se utilizan en productos como conservante, para los
propsitos antimicrobianos o como agente aromatizante en un gran nmero
de productos - ms de 25.000 productos cosmticos sola, segn el Grupo de
Trabajo Ambiental. La FDA ha iniciado recientemente estudios de seguridad
en Propilparabeno, pero actualmente enumera como seguro de usar.

Ketoprofeno: es un frmaco antiinflamatorio no esteroideo, Tiene una

potente actividad analgsica. Sirve para el tratamiento de enfermedades
reumticas, traumatologas y procesos inflamatorios en general. Puede
administrarse va oral (50 o 200 mg) o parenteral (100mg intramuscular y
Endovenoso). El Ketoprofeno es un derivado del cido fenil-propanoico.

3-nitrofenol: uso principal para manufacturas, tinturas, pigmentos,

productos de caucho y sustancias fungicidas

4-nitrofenol: es usado principalmente en las manufacturas de

medicamentos, fungicidas, tinturas y para oscurecer el cuero Los compuestos
2-, 3- y 4-Nitrofenol son contaminantes muy comunes en la industria y
pueden afectar severamente al ecosistema acutico por su elevada toxicidad.
Su biodegradabilidad, si bien es posible, es lenta. Por este motivo, su
degradacin es complicada

3. Ejecute el HPLC simulator (http://www.hplcsimulator.org/)

4. Configure el simulador segn las caractersticas descritas en la Tabla 1

Tabla 1 Primera configuracin del HPLC Simulator
Fraccin
del
Modo de
Composicin de Solvente A: Solvente B: solvente
elucin:
la fase mvil Agua Metanol B
Isocrtico
(%v/v):
50
Volumen de
Propiedades Temperatura
inyeccin (L): Flujo (mL/min): 20
cromatogrficos (C): 25
10
Constante Desplazamiento Puntos
Propiedades
de tiempo de la seal Ruido: 2.0 marcados:
generales
(s): 0.1 (min): 0.0 300
Tamao
Fase Dimetro
Propiedades de Longitud de
estacionaria: interno
la columna (mm): 100.0 partcula
Agua (mm): 4.6
(m): 3.0

5. Registre en la Tabla 2 y para cada compuesto: el tiempo de retencin (tR),

el factor de retencin (k) y el ancho de banda (sigma total). Adjunte una
imagen del cromatograma obtenido.

Imagen cromatograma obtenido de la configuracin del simulador de acuerdo a la tabla

19

Tabla 1 Resultados primera configuracin del HPLC Simulator

 Ancho
Tiempo de
Factor de
de banda
retencin
retencin
Compuesto (k) (sigma
(tR)
Acetofenona 0,1343 1,5254 total)
0,2111
Butilparabeno 0,7494 13,0915 1,0414
Ketoprofeno 03564 5,7020 0,5031
Benzofenona 0,6690 11,5799 0,9308
Propiofenona 0,2434 3,5762 0,3513
3-nitrofenol 0,1349 1,5371 0,2119
Etilparabeno 0,2007 2,7739 0,2952
Propilparabeno 0,3832 6,2047 0,5394
4-nitrofenol 0,1262 1,3728 0,2013

Imagen cromatograma p a r a cada compuesto

Ilustracin 1Imagen cromatograma Acetofenona

Ilustracin 2 Imagen cromatograma Butlparabeno
Ilustracin 3 Imagen cromatograma benzophenono

Ilustracin 4 Imagen cromatograma propiopheneone

Ilustracin 5Imagen cromatograma ethylparaben

Ilustracin 6 Imagen cromatograma propylparaben

 Ilustracin 7 Imagen cromatograma

Ketoprofeno

Ilustracin 8 Imagen cromatograma 3-

nitrophenol
 Ilustracin 9 Imagen cromatograma 4-
nitrophenol

6. Tabla 2 Resultados primera configuracin del HPLC Simulator

Ancho
de
Tiempo de Factor de
retencin retencin banda
Compuesto (tR) (k) (sigma
Acetofenona 0,0809 0,5208 total)
0,0809
Butilparabeno 0,1611 2,0296 0,1838
Ketoprofeno 0,1114 1,0948 0,1463
Benzofenona 0,2493 3,6878 0,2586
Propiofenona 0,1247 1,3452 0,1558
3-nitrofenol 0,0763 0,4345 0,1241
Etilparabeno 0,0745 0,4012 0,1231
Propilparabeno 0,1037 0,9498 0,1411
4-nitrofenol 0,0732 0,3760 0,1223
7. Cambie la composicin de la fase mvil de metanol a acetonitrilo como se
muestra en la Tabla 3.

Tabla 3 Segunda configuracin del HPLC Simulator

Composicin Modo de Fraccin del
Solvente Solvente B:
de la fase elucin: solvente B
A: Agua Acetonitrilo
mvil Isocrtico (%v/v): 50

8. Registre en la Tabla 4 y para cada compuesto: el tiempo de retencin (tR),

el factor de retencin (k) y el ancho de banda (sigma total), obtenidos
con el cambio de disolvente. Adjunte una imagen del cromatograma
obtenido.

Tabla 4 Resultados segunda configuracin del HPLC Simulator

Ancho
de
Tiempo de Factor de
retencin retencin banda
Compuesto (tR) (k) (sigma
Acetofenona 0,0809 0,5208 total)
0,0809
Butilparabeno 0,1611 2,0296 0,1838
Ketoprofeno 0,1114 1,0948 0,1463
Benzofenona 0,2493 3,6878 0,2586
Propiofenona 0,1247 1,3452 0,1558
3-nitrofenol 0,0763 0,4345 0,1241
Etilparabeno 0,0745 0,4012 0,1231
Propilparabeno 0,1037 0,9498 0,1411
4-nitrofenol 0,0732 0,3760 0,1223
Imagen cromatograma Acetofenona.

Imagen cromatograma Butilparabeno:

Imagen cromatograma Ketoprofeno:

Imagen cromatograma Benzofenona.

Imagen Cromatograma Propiofenona:

Imagen Cromatograma 3 nitrofenol:

Imagen cromatograma Etilparabeno:

Imagen cromatograma Propilparabeno:

Imagen Cromatograma 4-nitrofenol:

9. Explique por qu se da el cambio en los tiempos de retencin y en la
separacin de los compuestos cuando el metanol es sustituido por el
acetonitrilo. En qu caso se obtiene una mejor separacin?

Rta: Se ve como se desprende el solvente de la muestra ms con el

solvente metanol que es ms polar y permite mayor desprendimiento de
la muestra caso contrario de acetonitrilo

10. Cul es la importancia del agua en la composicin de la fase mvil?

Rta: el agua es un compuesto de alta polaridad que se absorber

fuertemente sobre la superficie, evitando la absorcin de los solutos por lo
que estos no se retendrn

La presencia de molculas de agua en la fase mvil conduce a una

desactivacin de la superficie de la fase estacionaria a mayor proporcin
de agua la polaridad de la fase aumenta lo que hace que el tiempo
necesario para el desprendimiento sea mayor, por el contrario, si la
proporcin del puente b es mayor dicho puente disminuye.
11. , la diferencia en los cambios de energa libre (G) para la retencin
de los solutos en las fases mviles MeOH/Agua 50/50 y ACN/Agua 50/50,
segn las siguientes ecuaciones:

Tabla 5 Resultados de energa al cambiar la fase mvil

Fase mvil
MeOH/Agua ACN/Agua
Compuesto G
(50/50) (50/50)
G1 G2
Acetofenona 0,2111 0,0809 0,1302

Butilparabeno 1,0414 0,1838 0,8576

Ketoprofeno 0,5031 0,1463 0,3568

Benzofenona 0,9308 0,2586 0,6722

Propiofenona 0,3513 0,1558 0,1955

3-nitrofenol 0,2119 0,1241 0,0878

Etilparabeno 0,2952 0,1231 0,1721

Propilparabeno 0,5394 0,1411 0,3983

4-nitrofenol 0,2013 0,1223 0,079

12. Cules solutos poseen las diferencias ms grandes y ms pequeas en

la energa libre asociada a la retencin, comparando las fases mviles
MeOH/Agua (50/50) y ACN/Agua (50/50)? Explique la naturaleza de esos
cambios.
13. Con los hallazgos realizados hasta ahora, elabore una conclusin sobre
el efecto de la estructura de los solutos y la composicin de la fase mvil
sobre la retencin y la resolucin.

Rta: El mecanismo de separacin en cromatografa de fase reversa se basa

en la distribucin del soluto entre la fase mvil y la estacionaria. La elucin o
el soluto del arrastre durante esta fase mvil, se inicia con un eluyente y se
eleva la polaridad.

PARTE III
Efecto del porcentaje del modificador en la composicin de la fase mvil
sobre la retencin y la resolucin.

1. En el listado de compuestos, elimine 7 solutos dejando solo a

Acetofenona y Etilparabeno.

2. Fije las condiciones del simulador de acuerdo con la Tabla 6.

 Tabla 6 Tercera configuracin del HPLC Simulator
Fraccin
Modo de del
Composicin de Solvente A: Solvente B:
elucin: solvente B
la fase mvil Agua Metanol
Isocrtico (%v/v):
95
Volumen de
Propiedades Temperatura
inyeccin (L): Flujo (mL/min): 10
cromatogrficos (C): 25
5.0
Constante Desplazamiento Puntos
Propiedades Ruido:
de tiempo de la seal marcados:
generales 2.0
(s): 0.1 (min): 0.0 3000
Dimetro Tamao
Fase
Propiedades de Longitud interno de
estacionaria:
la columna (mm): 100.0 (mm): partcula
Agua
4.6 (m): 3.0

Para el adecuado desarrollo de esta actividad es indispensable que siga con

anterioridad el tutorial en video y desde el programa sobre el manejo del HPLC
Simulator, que encontrar siguiendo el enlace:

Video: http://www.youtube.com/watch?v=wYEDJu0pJy4

Sobre el programa: http://www.hplcsimulator.org/simulator.php

PARTE I
Reconocimiento de los parmetros cromatogrficos en cromatografa
lquida de alta eficiencia (CLAE)

Defina y explique cmo se relacionan los siguientes conceptos. Incluya cuando

corresponda, el smbolo y ecuacin que representa al concepto:

12. Factor de separacin.

13. Resolucin.
14. Eficiencia.
15. Factor de retencin.
16. Tiempo de retencin.
17. Tiempo muerto.
18. Ancho de banda (sigma total)
19. Cromatografa lquida en fase normal.
20. Cromatografa lquida en fase reversa.
21. Gradiente de elucin.
22. Elucin isocrtica.

PARTE II
Efecto de la estructura de los compuestos (solutos) y de la
composicin de la fase mvil sobre la retencin y la resolucin.

14. Dibuje estructuras de los siguientes compuestos utilizando las

convenciones de cua/slash representando los ngulos de enlace adecuados:

Acetofenona Benzofenona Etilparabeno

Butilparabeno Propiofenona Propilparabeno
Ketoprofeno 3-nitrofenol 4-nitrofenol

15. Sobre la base de sus estructuras:

c) Prediga el orden de elucin de los compuestos, partiendo del

menos al ms retenido en RPLC (Cromatografa lquida en fase
reversa). Justifique su respuesta.
d)Cules son los principales usos de cada uno de estos compuestos?

16. Ejecute el HPLC simulator (http://www.hplcsimulator.org/)

17. Configure el simulador segn las caractersticas descritas en la Tabla 1.

Tabla 7 Primera configuracin del HPLC Simulator

Fraccin
del
Modo de
Composicin de Solvente A: Solvente B: solvente
elucin:
la fase mvil Agua Metanol B
Isocrtico
(%v/v):
50
Propiedades Temperatura Volumen de Flujo (mL/min): 20
cromatogrficas (C): 25 inyeccin (L):
 10
Constante Desplazamiento Puntos
Propiedades
de tiempo de la seal Ruido: 2.0 marcados:
generales
(s): 0.1 (min): 0.0 300
Tamao
Fase Dimetro
Propiedades de Longitud de
estacionaria: interno
la columna (mm): 100.0 partcula
Agua (mm): 4.6
(m): 3.0

18. Registre en la Tabla 2 y para cada compuesto: el tiempo de

retencin (tR), el factor de retencin (k) y el ancho de banda (sigma
total). Adjunte una imagen del cromatograma obtenido.
19.

Tabla 8 Resultados primera configuracin del HPLC Simulator

Ancho
Tiempo
Factor de de
de
Compuesto retencin banda
retencin
(k) (sigma
(tR)
total)
Acetofenona
Butilparabeno
Ketoprofeno
Benzofenona
Propiofenona
3-nitrofenol
Etilparabeno
Propilparabeno
4-nitrofenol

20. Cambie la composicin de la fase mvil de metanol a acetonitrilo como

se muestra en la Tabla 3.

Tabla 9 Segunda configuracin del HPLC Simulator

Composicin Solvente Solvente B: Modo de Fraccin del
 de la fase elucin: solvente B
A: Agua Acetonitrilo
mvil Isocrtico (%v/v): 50

21. Registre en la Tabla 4 y para cada compuesto: el tiempo de

retencin (tR), el factor de retencin (k) y el ancho de banda (sigma
total), obtenidos con el cambio de disolvente. Adjunte una imagen
del cromatograma obtenido.
22. Explique por qu se da el cambio en los tiempos de retencin y en
la separacin de los compuestos cuando el metanol es sustituido por
el acetonitrilo. En qu caso se obtiene una mejor separacin?
23. Cul es la importancia del agua en la composicin de la fase
mvil?

Tabla 10 Resultados segunda configuracin del HPLC Simulator

Ancho
Tiempo
Factor de de
de
Compuesto retencin banda
retencin
(k) (sigma
(tR)
total)
Acetofenona
Butilparabeno
Ketoprofeno
Benzofenona
Propiofenona
3-nitrofenol
Etilparabeno
Propilparabeno
4-nitrofenol

Calcule y reporte en la , la diferencia en los cambios de energa libre

(G) para la retencin de los solutos en las fases mviles MeOH/Agua
50/50 y ACN/Agua 50/50, segn las siguientes ecuaciones:
Tabla 11 Resultados de energa al cambiar la fase mvil
Fase mvil
MeOH/Agua ACN/Agua
Compuesto G
(50/50) (50/50)
G1 G2
Acetofenona
Butilparabeno
Ketoprofeno
Benzofenona
Propiofenona
3-nitrofenol
Etilparabeno
Propilparabeno
4-nitrofenol

24. Cules solutos poseen las diferencias ms grandes y ms

pequeas en la energa libre asociada a la retencin, comparando las
fases mviles MeOH/Agua (50/50) y ACN/Agua (50/50)? Explique la
naturaleza de esos cambios.
25. Con los hallazgos realizados hasta ahora, elabore una conclusin
sobre el efecto de la estructura de los solutos y la composicin de la
fase mvil sobre la retencin y la resolucin.

PARTE III
Efecto del porcentaje del modificador en la composicin de la fase
mvil sobre la retencin y la resolucin.

3. En el listado de compuestos, elimine 7 solutos dejando solo a

Acetofenona y Etilparabeno.
4. Fije las condiciones del simulador de acuerdo con la Tabla 6.

Tabla 12 Tercera configuracin del HPLC Simulator

 Fraccin
Modo de del
Composicin de Solvente A: Solvente B:
elucin: solvente B
la fase mvil Agua Metanol
Isocrtico (%v/v):
95
Volumen de
Propiedades Temperatura
inyeccin (L): Flujo (mL/min): 10
cromatogrficas (C): 25
5.0
Constante Desplazamiento Puntos
Propiedades Ruido:
de tiempo de la seal marcados:
generales 2.0
(s): 0.1 (min): 0.0 3000
Dimetro Tamao
Fase
Propiedades de Longitud interno de
estacionaria:
la columna (mm): 100.0 (mm): partcula
Agua
4.6 (m): 3.0

5. Registre en la Tabla 13 y para cada compuesto: el tiempo de

retencin (tR), el factor de retencin (k) y el ancho de banda (sigma
total). Adjunte una imagen del cromatograma obtenido.

Tabla 13 Resultados tercera configuracin del HPLC Simulator

Tiempo Ancho de
Factor de
de banda
Compuesto retencin
retencin (sigma
(k)
(tR) total)
Acetofenona
Etilparabeno

6. Cambie gradualmente el porcentaje de metanol en intervalos de

10% iniciando en 95% y terminando en 5% (95%, 85%, 75%,,
5%) y registre en la Tabla 14 y para cada compuesto: el tiempo de
retencin (tR), el factor de retencin (k) y el ancho de banda (sigma
 total). Adjunte una imagen del cromatograma obtenido

Tabla 14 Resultados cuarta configuracin del HPLC Simulator

Tiempo Ancho de
Factor de
% de banda
Compuesto retencin
MeOH retencin (sigma
(k)
(tR) total)
Acetofenona
95
Etilparabeno
Acetofenona
85
Etilparabeno
Acetofenona
75
Etilparabeno
Acetofenona
65
Etilparabeno
Acetofenona
55
Etilparabeno
Acetofenona
45
Etilparabeno
Acetofenona
35
Etilparabeno
Acetofenona
25
Etilparabeno
Acetofenona
15
Etilparabeno
Acetofenona
5
Etilparabeno

7. Repita el mismo proceso cambiando el metanol por acetonitrilo y

registre los resultados en la Tabla 15.

Tabla 15 Resultados quinta configuracin del HPLC Simulator

Tiempo Ancho de
Factor de
% de banda
Compuesto retencin
ACN retencin (sigma
(k)
(tR) total)
 Acetofenona
95
Etilparabeno
Acetofenona
85
Etilparabeno
Acetofenona
75
Etilparabeno
Acetofenona
65
Etilparabeno
Acetofenona
55
Etilparabeno
45 Acetofenona
Etilparabeno
Acetofenona
35
Etilparabeno
Acetofenona
25
Etilparabeno
Acetofenona
15
Etilparabeno
Acetofenona
5
Etilparabeno

8. Con los hallazgos realizados en esta seccin, elabore una

conclusin sobre el efecto del porcentaje modificado en la
composicin de la fase mvil sobre la retencin y la resolucin.
9. Si fuera contratado en un laboratorio para separar (empleando
cromatografa lquida) una mezcla los compuestos acetofenona y
etilparabeno cul sera la mejor composicin de fase mvil a
emplear? Justifique su respuesta.