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1.- Definicin de Cromatografa.

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de mezclas complejas, la cual


tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia; es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de
retencin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los
compuestos dan como resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una
separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla.

La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados
posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de
material empleadas suelen ser muy pequeas.

Clasificacin de los mtodos de separacin en cromatografa[editar]


Las distintas tcnicas cromatogrficas2 se pueden dividir segn cmo est dispuesta la fase estacionaria:

Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales
tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una columna. Segn el fluido empleado
como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases se aplica a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de compuestos no


voltiles, se recurre a procesos denominados de "derivatizacin", a fin de convertirlos en otros compuestos que
se volatilicen en las condiciones de anlisis.

Dentro de la cromatografa lquida, destaca la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, del ingls High
Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad,
normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no polar, y la fase
mvil posee carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma o de otros
disolvente polares, como por ejemplo, metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la
fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil era un
disolvente orgnico poco polar. Una serie eluotrpica es un rango de sustancias de diferentes polaridades que
actan como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.

Fase
Tipos Fase estacionaria
mvil

Cromatografa en
Lquido Papel de celulosa.
papel

Cromatografa en Lquido Gel de slice o almina.


capa fina

Columnas capilares de slice fundida, con recubrimientos internos de varios


Cromatografa de
Gas tipos de siloxanos enlazados, columnas empaquetadas con tierras diatomeas
gases
hechas de tubos de vidrio o metal.

Cromatografa
Lquido
lquida Relleno de siloxano de octilo o siloxano de octadecilo.
(polar)
en fase reversa

Cromatografa Lquido
Relleno de slice, almina o un soporte al que se unen qumicamente grupos
lquida (menos
polares (ciano, amino, etc).
en fase normal polar)

Cromatografa
lquida Lquido
Resinas de intercambio inico.
de intercambio (polar)
inico

Cromatografa
Relleno de pequeas partculas de slice o polmeros con red de poros
lquida Lquido
uniforme.
de exclusin

Cromatografa
lquida Lquido Partculas finamente divididas de slice o de almina.
de adsorcin

Cromatografa de
Columnas abiertas de slice fundida con recubrimientos internos de varios
fluidos Lquido
tipos de siloxanos enlazados y de enlaces cruzados.
supercrticos

Trminos empleados en cromatografa3[editar]


Analito es la substancia que se va a separar durante la cromatografa.
Fase mvil es la fase que se mueve en una direccin definida. Puede ser un lquido (cromatografa de
lquidos o CEC). un gas (cromatografa de gases) o un fluido supercrtico (cromatografa de fluidos
supercrticos). La muestra que se est separando/analizando (formada de analito/s y el disolvente) se
inyecta en la fase mvil que se mueve a travs de la columna. En el caso de la cromatografa lquida de alta
resolucin, HPLC, la fase mvil es un disolvente no polar como el hexano (fase normal) o bien algn
disolvente polar (cromatografa de fase reversa).
Fase estacionaria es la sustancia que est fija en una posicin durante la cromatografa. Un ejemplo es la
capa de gel de slice en la cromatografa en capa fina.
Cromatografa analtica se emplea para determinar la existencia y posiblemente tambin la concentracin
de un analito en una muestra.
Fase enlazada es una fase estacionaria que se une de forma covalente a las partculas de soporte o a las
paredes internas de la columa.
Cromatograma es el resultado grfico de la cromatografa. En el caso de separacin ptima, los diferentes
picos o manchas del cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla separada.
Cromatgrafo es el equipo que permite una separacin sofisticada. Por ejemplo, un cromatgrafo de
gases o un cromatgrafo de lquidos.
Cromatografa es el mtodo fsico de separacin en el cual los componentes que se van a separar se
distribuyen entre dos fases, una de las cuales es estacionaria (fase estacionaria) mientras la otra (la
fase mvil) se mueve en una direccin definida.
Eluyente es la fase mvil que atraviesa la columna.
Serie eluotrpica es una lista de disolventes clasificados segn su poder de dilucin.
Fase inmovilizada es una fase estacionaria que est inmovilizada sobre partculas de soporte, o en la
pared interior del tubo contenedor o columna.
Cromatografa preparativa se usa para purificar suficiente cantidad de sustancia para un uso posterior,
ms que para anlisis.
Tiempo de retencin es el tiempo caracterstico que tarda un analito particular en pasar a travs del
sistema (desde la columna de entrada hasta el detector) bajo las condiciones fijadas. Vase
tambin: ndice de retencin de Kovats
Muestra es la materia que va a ser analizada en la cromatografa. Puede consistir en un simple
componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla es tratada en el curso del anlisis, la fase o
fases que contienen los analitos de inters es llamada igualmentemuestra mientras el resto de
sustancias cuya separacin no resulta de inters es llamada residuo.
Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la fase mvil lquida en
cromatografa de lquidos.
Capacidad de carga Es la cantidad mxima de muestra que puede ser separada en una sola carga.
Capacidad de fraccionamiento Es el nmero mximo de componentes que pueden ser separados en
una sola operacin.
Selectividad Es la capacidad de poder discriminar y distinguir entre dos componentes.

La cromatografa es un tipo de tcnica aplicada para la separacin de varios elementos


que conjugan a una mezcla, esta divisin se fundamenta en las caractersticas fsicas y
qumicas que posea cada elementos, haciendo nfasis en la capacidad de interaccin de
cada componente de la mezcla o de la solucin con una sustancia.

A grandes rasgos la cromatografa se logra por medio de la utilizacin de dos fases: una
fase mvil, el cual es una solucin que est compuesta por distintos elementos; y una
fase estacionaria, esta se caracteriza por ser un material solido que permanecer sin
cambios antes o despus de la implementacin de la tcnica, la mezcla a estudiar
permanecer con el compuesto que posea ms afinidad bien sea el que se encuentra en
fase solida o en fase mvil, de esta forma se apreciara las caractersticas generales de
cada compuesto estudiado.
a cromatografa, puede ser clasificada segn la metodologa y los materiales utilizados
en:cromatografa plana, este tipo de tcnica se realiza por medio de la utilizacin de un
material slido como un papel, gracias a esto puede subclasificarse en capa gruesa o
capa fina, debido a que la fase estacionaria reposa sobre soporte totalmente rgido, esta
capa se pone en contacto con la fase mvil que es lquida y el mismo comienza a
ascender, de acuerdo a la ubicacin de cada elemento en el papel puede lograr
suidentificacin; por otra parte se encuentra la cromatografa en columna, en la cual se
utiliza varios cilindros largos cuyo nombre es bureta como fase estacionaria, y una
mezcla liquida como fase mvil, de igual forma pueden usarse otro estado fsico para la
fase mvil, como el gas, los distintos compuestos a separar van a ir ascendiendo de forma
progresiva por la columna; de acuerdo al estado fsico de las fases utilizadas para el
proceso la cromatografa puede clasificarse en: cromatografa de gases, ya que su fase
mvil es de carcter gaseoso, por otra parte est la cromatografa lquida, en la cual la
fase mvil est compuesta por un agente lquido, y por ltimo la cromatografa HPLC
caracterizada por poseer un alto nivel de eficacia y precisin en laseparacin de
compuestos.

Definicin:

La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los


componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases, una de
las cuales est en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra
(fase mvil, F.M.) se mueve en una direccin definida.

Qu es la Cromatografa?
La cromatografa es una de las tcnicas ms usadas para separar los
distintos componentes de una mezcla para su posterior estudio.
Este forma de separar componentes de una mezcla se llama separacin
cromatogrfica.

La cromatografa se aprovecha del movimiento de una mezcla por


un soporte, por ejemplo, papel o tela. Los elementos de la mezcla se
mueven por el soporte a diferentes velocidades separndose. Unos
componentes se mueven por el soporte ms fcilmente y otros se
detienen, esto hace que la mezcla se separe en bandas de diferentes
componentes.
Recuerda: Una mezcla est compuesta por dos o ms componentes con
propiedades diferentes.

La cromatografa se utiliza tanto para lograr la separacin de los


componentes de una mezcla como para medir la proporcin de
cada elemento en la mezcla.

La ciencia que se encarga de estudiar los diferentes componentes de una


sustancia es laqumica analtica, por lo que la cromatografa es una
tcnica dentro de la qumica analtica.

El soporte puede ser papel, un gas, otro lquido, etc. Es un mtodo


fsico de separacin de componentes. Luego veremos porqu se
separan, las fases y los tipos de cromatografas.

Cromatografa Ejemplos
Un ejemplo, si sobre un mantel blanco se derrama un poco de vino tinto,
transcurrido un tiempo se observa que la mancha no es uniforme, sino
que hay una zona con predominio de tonos azules y otra en que la
tonalidad es roja. Eso es porque se ha producido una separacin
cromatografa de los pigmentos del vino.

Las tintas de los rotuladores son una mezcla compuesta por algn
disolvente (parte lquida de la mezcla) y diferentes pigmentos. Algunos
colores, como el negro, suelen ser mezcla de dos o tres pigmentos
diferentes. Para separar estos pigmentos podemos realizar una
cromatografa. Luego veremos como.

Algunos de los ejemplos en los que se usa la cromatografa a diario son:

- Se suele usar para tomar pruebas de la escena de un crimen (el


anlisis de muestras de sangre o de telas).

- Verificacin de incendios provocados (identificacin de las sustancias


qumicas responsables de un fuego).

- Anlisis de sangre despus de la muerte o en vida para determinar los


niveles de alcohol, drogas o sustancias venenosas en el cuerpo.

- Tambin se utiliza para determinar la composicin de los alimentos.

- Para mirar los niveles de contaminacin, por ejemplo, del agua o del
aire.

- Para el estudio de mezclas complejas en cosas tales como alimentos,


perfumes, petroqumica, y produccin farmacutica.

- Tambin puede ser fundamental para salvar millones de vidas. El


mortal virus del bola, que se ha cobrado ms de 5.000 vidas desde su
aparicin a finales del ao pasado, ha causado pnico en los medios y en
los pases de Sierra Leona, Guinea y Liberia, en los que se ha limitado en
gran medida. A medida que los cientficos tratan de combatir la
enfermedad, la cromatografa se ha revelado como muy til para
determinar qu anticuerpos son ms eficaces en la neutralizacin de
bola.
2.- Sistema Cromatogrfico.

3.- Fase mvil y Fase estacionaria.

Fases de la Cromatografa
Las cromatografas se hacen en dos fases. Una esttica y otra mvil.

En la fase esttica o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte fijo, por


ejemplo papel.

En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en nuestro ejemplo un papel.

En la fase mvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya est sobre el
soporte de la fase esttica, por ejemplo un lquido que se mueve por el papel con la
mezcla. En la fase mvil empezar el proceso de separacin de los componentes de la
mezcla al moverse a distintas velocidades por el lquido los distintos componentes de la
mezcla sobre el papel.

4.- Adsorcin y Absorcin.


La adsorcin es un proceso por el cual tomos, iones o molculas de gases, lquidos o slidos disueltos son
atrapados o retenidos en una superficie,12 en contraposicin a la absorcin, que es un fenmeno de volumen.
Es decir, la adsorcin es un proceso en el cual, por ejemplo, un contaminante soluble (adsorbato) es eliminado
del agua mediante el contacto con una superficie slida (adsorbente).2 El proceso inverso a la adsorcin se
conoce como desorcin.
En qumica, la adsorcin de una sustancia es la acumulacin de una sustancia en una determinada superficie interfacial entre dos
fases. El resultado es la formacin de una pelcula lquida o gaseosa en la superficie de un cuerpo slido o lquido.

Absorcin es la operacin unitaria que consiste en la separacin de uno o ms componentes de una


mezcla gaseosa con la ayuda de unsolvente lquido con el cual forma solucin (un soluto A, o varios solutos, se
absorben de la fase gaseosa y pasan a la lquida). Este proceso implica una difusin molecular turbulenta o una
transferencia de masa del soluto A a travs del gas B, que no se difunde y est en reposo, hacia un lquido C,
tambin en reposo. Un ejemplo es la absorcin de amonaco A del aire B por medio de agua lquida C. Al
proceso inverso de la absorcin se le llama empobrecimiento o desorcin; cuando el gas es aire puro y el
lquido es agua pura, el proceso se llama deshumidificacin, la deshumidificacin significa extraccin de vapor
de agua del aire.1

Adsorcin: es un proceso fsico o qumico por el cual tomos, iones o molculas


son atrapadas o retenidas en la superficie de un material

Absorcin: es un proceso fsico o qumico en el cual tomos, molculas o


iones pasan de una primera fase a otra incorporndose al volumen de la
segunda fase.

Adsorcin y absorcin son dos palabras muy similares que tienden a ser confundidas por
muchas personas debido a que su pronunciacin es muy similar. Ante todo, se trata de
dos procesos fsico-qumicos en los cuales los tomos, iones y molculas de una sustancia
se trasladan o camban en su composicin y forma.

A pesar de lo anterior, se trata de dos palabras totalmente distintas con aplicaciones y


significados diferentes, los cuales sealaremos en este artculo a fin de aclarar las
posibles dudas que los lectores puedan tener.

Adsorcin
La adsorcin es un proceso fsico o qumico por el cual tomos, iones o molculas son
atrapados o retenidos en la superficie de un material. Se puede decir adems que, la
adsorcin es un fenmeno superficial, ya que, la sustancia adsorbida no se introduce en
el volumen del cuerpo, sino solo se adhiere a la superficie del mismo. Por lo que, en este
proceso, existe una verdadera fuerza de atraccin que hace que una partcula se adhiera
a otra partcula de otro material.

Adicionalmente, en la adsorcin los tomos de sustancias gaseosas y lquidas se unen a


una superficie slida, en algunos casos los tomos comparten electrones con los tomos
de la sustancia slida, por lo que, como se indic anteriormente, se forma una capa fina
pero no penetra en el interior.

Por ejemplo: La extraccin de humedad del aire comprimido es un proceso de adsorcin


en el cual se hace pasar el aire comprimido por un lecho de almina u otro material
activo, que retiene las molculas de agua.

Absorcin
La absorcin es un proceso fsico o qumico en el cual tomos, molculas o iones pasan
de una primera fase a otra, incorporndose al volumen de la segunda fase. La absorcin
puede ser un proceso qumico o fsico segn exista o no reaccin qumica:

Como proceso qumico, la absorcin es un proceso que separa los componentes


de un gas a partir de la inclusin de un solvente en estado lquido, con el que
crea una solucin.
Como proceso fsico, la absorcin es una disminucin en la intensidad de la
radiacin que atraviesa un cuerpo, es decir, es aquel proceso de transferencia de
energa de las ondas electromagnticas o sonoras a un medio cuando lo
atraviesan o inciden en l.

Adicionalmente, la absorcin es un fenmeno de volumen, ya que, se da cuando una


sustancia se introduce en la estructura de otra. En sntesis, se puede decir que, la
absorcin es un proceso de transferencia de materia que consiste en poner en contacto
un gas con un lquido, para que ste disuelva determinados componentes del gas,
dejndolo libre de los mismos.

Por ejemplo: Los gases que contienen dixido de azufre, como los gases de las calderas,
se pueden poner en contacto con la piedra caliza para formar un insoluble sulfito de
calcio.
Tal y como se aprecia en las definiciones, existen diferencias importantes entre estos dos
conceptos, a manera de resumen se puede decir que:

La adsorcin se refiere a la adherencia de molculas a una superficie mientras


que la absorcin se refiere a la transferencia, es decir, a la incorporacin de
molculas en el interior de otra sustancia.
La adsorcin se realiza en la mayora de los casos con sistemas slido-lquido y
slido-gas mientras que la absorcin se realiza en sistemas lquido-lquido y
lquido-gas.
La adsorcin es un fenmeno superficial mientras que la absorcin es un
fenmeno de incorporacin.

La absorcin es cuando una sustancia se introduce en la estructura de otra. Ejemplo: una esponja absorbe agua,
entonces si cortamos la esponja en pedazos vamos a encontrar agua en todas partes de la estructura de la esponja
La adsorcin es un fenmeno superficial, la sustancia adsorbida no se introduce en el volumen del cuerpo, sino solo
se adhiere a la superficie. No es que la sustancia se deposit en la superficie, como su fuera tierra que est sobre la
mesa, sino que existe una verdadera fuerza de atraccin que hace que esa partcula sea difcil de sacar.
Los catalizadores de los autos, funcionan sobre este mecanismo, los gases de escape se adsorben sobre la
superficie del catalizador y all se descomponen qumicamente, para despus desorberse y seguir el camino hacia la
salida del cao de escape.

Adsorcin es un proceso por el cual los atomos de sustancias gaseosas y lquidas se unen a una superficie slida,
pero en algunos casos los atmos comparten electrones con los atmos de la sustancia slida con lo cual se forma
una capa fina pero no penetra en el interior.

Mientras en la absorcin no se produce esto y sustancia es absorvida totalmente por el slido.

Ejemplo prctico para el da durillo, vamos que si te das una crema y se te queda como una capa fina en el exterior
se a producido una ADSORCION. Mientras que si la crema penetra en tu piel es una ABSORCION.

Se llama sorcin a los procesos qumicos y fsicos por los que una sustancia queda agregada o
unida a otra sustancia, cada una proveniente de fases separadas. Segn como se produzca, la
sorcin se puede clasificar en diferentes tipos, los dos ms comunes son la absorcin y
la adsorcin. El fenmeno contrario a la sorcin es la desorcin.

La diferencia clave entre ambos procesos es que en la absorcin hay transferencia de masa y
volumen entre ambas fases, mientras que la adsorcin es un fenmeno superficial y cada fase
permanece separada.

Absorcin
La absorcin es el fenmeno de sorcin en el que tomos, molculas o iones pasan de una fase fluida (lquido o gas) a
otra fase que puede ser fluida o slida. En la absorcin hay transferencia de materia de una fase A (absorbato) a una
fase B (absorbente), la sustancia absorbida difunde en el material absorbente y queda disuelta o dispersa en el.

La absorcin implica que la concentracin de absorbato aumenta en la fase absorbente, la cual aumenta de masa y
volumen. La absorcin suele darse por procesos fsicos, como la disolucin de absorbato en el absorbente, pero
tambin qumicos, cundo el absorbato sufre una reaccin qumica con algn componente del absorbente.

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Desde un punto de vista termodinmico, el proceso de absorcin es endotrmico, pues implica que el absorbente
capture y transforme energa al distribuir el absorbato en su propia masa y volumen.

Adsorcin
La adsorcin es el fenmeno de sorcin en el que una sustancia A (adsorbato) presente en una fase fluida (lquido o
gas) queda adherida a la superficie de una sustancia B en fase slida (adsorbente).No hay transferencia de masa
entre las fases, sino que el adsorbato crea una capa superficial sobre el adsorbente.

La adsorcin se puede producir tambin por fenmenos fsicos o qumicos. Por ejemplo, el adsorbato puede quedar
fijado en la superficie por atraccin elctrica o por fuerzas de van der Waals, ambos fenmenos fsicos (fisisorcin),
pero tambin puede quedar adherido por formacin de un enlace qumico, es decir, con intercambio de electrones
(quimisorcin).

La adsorcin es un fenmeno exotrmico que ocurre de forma espontnea hasta que el adsorbente queda saturado.
La capacidad de adsorcin, al ser un fenmeno superficial, depende en gran medida de la superficie expuesta del
adsorbente. La mayora de adsorbentes comerciales se distribuyen en forma microcristalina para aumentar la
superficie por volumen. Por ejemplo, el carbn activado presenta superficies de hasta 1200 m 2 por gramo de producto.
Otros adsorbentes muy utilizados son el gel de slice, la almina activada y la zeolita.

Las tres diferencias clave


1. La absorcin es un fenmeno de masa y volumen; la adsorcin es un fenmeno superficial.

2. La absorcin es un proceso endotrmico, la adsorcin es un proceso exotrmico.

3. En la absorcin, el absorbato se distribuye con una concentracin homognea en el absorbente; en la


adsorcin, el adsorbato se acumula en la superficie.

5.- Teoras cromatogrficas.


Aunque hay muchas y variadas tcnicas cromatogrficas, el objetivo de
todas es separar las sustancias que forman una mezcla y enviarlas
secuencialmente a un detector para que las determine y cuantifique.

Todas se basan en el mismo fenmeno: permitir que las sustancias


que forman una mezcla entren en contacto con dos fases (un lquido y un
gas, un slido y un lquido, etc.). Una de las fases es esttica (no se
mueve) y tender a retener las sustancias en mayor o menor grado; la
otra, fase mvil, tender a arrastrarlas. Cada sustancia qumica tiene
distinta tendencia a ser retenida y a ser arrastrada.

Dependiendo de la naturaleza de la fase esttica y de la fase


mvil se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa

a) Cromatografa slido-lquido: La fase esttica o estacionaria es un


slido y la mvil un lquido.
b) Cromatografa lquido-lquido: La fase esttica o estacionaria es un
lquido anclado a un soporte slido.

c) Cromatografa lquido-gas: La fase esttica o estacionaria es un


lquido no voltil impregnado en un slido y la fase mvil es un gas.

d) Cromatografa slido-gas: La fase estacionaria es un slido y la


mvil un gas.
Segn el tipo de interaccin que se establece entre los
componentes de la mezcla y la fase mvil y estacionaria podemos
distinguir entre.

a) Cromatografa de adsorcin: La fase estacionaria es un slido polar


capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante
interacciones de tipo polar.

b) Cromatografa de particin: La separacin se basa en las


diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases
estacionaria y mvil, que son ambas lquidas.

c) Cromatografa de intercambio inico: La fase estacionaria es un


slido que lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se
puede intercambiar por aquellos iones presentes en la fase mvil.
6.- Qu es un cromatgrafo?
Un Cromatgrafo es un aparato que se emplea para realizar las cromatografas.

La cromatografa es un conjunto de tcnicas que permiten identificar, separar y determinar compuestos qumicos en mezclas complejas.

Cabe destacar desde un principio que en todas las tcnicas cromatogrficas hay:

Una Fase estacionaria y una Fase mvil.

En Cromatografa de gases, la fase mvil es un gas, el cual se hace pasar a travs de una fase estacionaria.

En Cromatografa Lquida, la fase mvil es un lquido que se hace pasar a travs de una fase estacionaria.

Un Cromatografa de Fluidos Supercrticos la fase mvil es un fluidos supercrtico que tambin pasa a travs de una fase estacionaria.

Cmo funciona el cromatgrafo de gases


Posted By: SeguredPosted date: octubre 18, 2004In: Seguridad

Cromatografa

Keulemans ha definido la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase estacionaria, de gran rea
superficial, y la otra es un fluido (fase mvil) que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria.

La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta como soporte, de
gran rea superficial. La fase mvil es un fluido (puede ser gas, lquido o fluido supercrtico) que se usa como
portador de la mezcla.
En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los rectores del proceso
de separacin: la adsorcin y la absorcin.

La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un slido,
quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.
Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza de la substancia
adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del adsorbente, y de la concentracin.
La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la tendencia que
tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma.

Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos.


Segn, Giddings, se puede clasificar la Cromatografa por sus variantes:

Fase Mvil (puede ser gaseosa, lquida fluido supercrtico)


Fase Estacionaria
Mecanismo de Retencin (tipos de equilibrios implicados en la transferencia de los solutos entre las fases).
Forma de Contacto entre las fases (columna superficie plana)
Dimensionalidad
Escala Fsica
Gradientes
Teoras del proceso Cromatogrfico

El proceso cromatogrfico, aparentemente simple en prctica, es en realidad una compleja unin de fenmenos
tales como hidrodinmica, cintica, termodinmica, qumica de superficie y difusin.

Hasta la fecha se han propuesto muchas teoras, que incluyen complejos modelos matemticos para poder
explicar el comportamiento de los solutos en las columnas cromatogrficas. Las ms estudiadas son: La Teora
de los Platos Tericos (Martin y Synge), la Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg, Klinkenberg y Sjenitzer) y
la Teora Desarrollada (Golay) para Columnas Capilares.

Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por una serie de platos que
contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen de fase estacionaria en cada plato es constante; que el
volmen de fase mvil es constante de plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en equilibrio, y que
el valor del Coeficiente de Distribucin es constante e independiente de la concentracin del soluto.

La principal desventaja de la Teora de los Platos Tericos es la falta de conexin entre la eficiencia de la
columna cromatogrfica, el tamao de la partcula, la difusin, la velocidad de flujo y la temperatura. La otra
desventaja es que utiliza un modelo basado en muchas suposiciones.

La Ecuacin que rige esta teora es:

N = 16(tr/w)2

La Teora Cintica considera el proceso cromatogrfico en funcin de los factores cinticos que intevienen en
l.
Siendo estos factores:
Las mltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su movimiento (migracin) a travs del
empaque de la columna, provocando variaciones en la velocidad del flujo.
La Difusin Axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil.
La cintica de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases mvil y estacionaria.
La Ecuacin de Van Deemter,

HETP H = A + B/u + Cu

donde u= L(cm)/ traire(seg)

Columna

Es el lugar donde ocurre la separacin. Se dice que es el corazn de un cromatgrafo.


Los materiales con los cuales generalmente se pueden elaborar las columnas son: cobre, aluminio, acero
inoxidable, vidrio tefln.
El relleno puede ser un slido, un lquido recubriendo un slido.
Podemos clasificar las columnas segn el propsito del proceso cromtografico:

Empacadas
Analtica
Preparativas
Capilares
W.C.O.T. (Wall Coated Open Tubular)
S.C.O.T. (Support Coated Open Tubular)
Factores que Afectan la Eficiencia de una Columna

Longitud de la Columna
Dimetro de la Columna (1/4, 1/8, 1/16 de dimetro externo)
Tamao de las partculas del relleno
Naturaleza de las fases
Cantidad de fase estacionaria
Temperatura de la columna
Velocidad del gas portador
Cantidad de muestra inyectada
Material del cual est elaborada la columna
Enrollado de la columna
Soporte

La funcin bsica del soporte es la de mantener (sostener, retener) la fase estacionaria. Idealmente debera
ser un material inerte que mantiene la fase estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada.
La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita. Qumicamente es casi todo slice, con
algunas impurezas. Tambin se conoce como Tierras Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el
campo de los soportes debido a su estructura, superficie y disponibilidad.

Hay que tener en cuenta dos cosas a la hora de escoger un soporte:


La Estructura, Caractersticas Fsicas (contribuye a la eficiencia de la columna cromatogrfica):
Tamao de partcula
Dimetro del poro
Densidad
rea Superficial
y

la Qumica de Superficie Caractersticas Superficiales (gobierna la participacin del soporte en los resultados
de la separacin).
Grupos silanoles activos
Iones metlicos
Adems de las caractersticas anteriores, la seleccin del soporte va a depender tambin de:

la naturaleza de la muestra
la naturaleza de la Fase Lquida
el uso que se le va a dar a la columna:
General
Especfico
Precio
Podemos resumir que un buen soporte debe reunir las siguientes caractersticas:

Elevada Superficie por unidad de volmen


Estabilidad Trmica
Dureza mecnica suficiente para que pueda resistir los procedimientos de revestimientos y relleno
Inactividad qumica o de adsorcin
Baja resistencia al paso de la fase mvil
La eliminacin reduccin de los sitios activos de adsorcin (tambin conocido como Desactivacin de la
Supeficie) de un soporte cromatogrfico puede efectuarse de varias maneras:

Remocin por lavado con cido (NAW AW)


Eliminacin Remocin por reaccin del Grupo Silanol
Saturacin de la superficie con una fase lquida
Impregnando recubriendo con material slido inerte
Fase Estacionaria Lquida

Al hablar de fase estacionaria lquida entramos en contacto con dos palabras trminos: Polaridad y
Selectividad.

Las fases lquidas podemos clasificarlas segn sus polaridades cromatogrficas, nos valemos de unas
constantes que determinan dicha polaridad. Existen dos sistemas:

Constante de Rohrchneider
Constante de McReynolds
Existen muchas discusiones sobre este tema para poder definir y describir el parmetro polaridad en
cromatografa, podemos decir que la polaridad de una fase estacionaria lquida se refiere a las interacciones
intermoleculares que involucra dipolos permanentes.
Selectividad es definida como las diferentes atracciones intermoleculares
Varias cualidades ha de reunir un lquido para servir como fase estacionaria:

Viscosidad
Tensin Superficial
Tensin de Vapor
Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil
Reversibilidad del Reparto
Estabilidad Trmica
Gas Portador

El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una
matriz adecuada para el detector.

Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:

Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar
Detectores

Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eludas a la salida de la columna
cromatogrfica. Podemos expresar que el detector son los ojos de un cromatgrafo.
El Detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible directamente, en una seal
elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica.
En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre el gas portador puro y el mismo
gas portador llevando cada uno de los componentes que previamente se han separado en la columna, esta
accin se traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificar mediante un registrador grfico
integrador permitiendo indicar el momento que salen de la columna los componentes.

Clasificacin de los detectores

Estos pueden ser clasificados:

Detectores segn su Grado de Selectividad :


Universales. Responde a la mayora de los solutos que pasan por l.
Especficos Selectivos. Exhibe una gran respuesta a un grupo particular de substancias con un mnimo de
respuesta a otras.

Detectores Destructivos y No destructivos. Esta clasificacin, obviamente, es en referencia a si la muestra es


destruda o no.

Detectores segn su Modo de Respuesta:


Dependientes del Flujo Msico. Producen una seal que es proporcional a la cantidad de soluto que pasa a
travs de l en la unidad de tiempo pero es independiente del volmen de gas portador requerido para la
elucin.
Dependiente de la Concentracin. Dan una seal proporcional a la cantidad de soluto por unidad de volmen de
gas portador que pasa a travs de l.

Detectores segn el proceso de deteccin Ionizacin, ptico-espectroscpico, Electroqumico, etc.


Caractersticas de los Detectores

Sensibilidad. Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una seal elctrica medible.
Linealidad. Rango de masa concentracin de muestra sobre el cual el detector mantiene una sensibilidad
constante sin una desviacin arbitraria. El significado prctico de la linealidad del detector es el que le indica al
analista la concentracin para la cual el detector es confiable. Hay dos lmites en la curva de linealidad:
El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin y,
El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la curva de linealidad, normalmente se
toma un 5% de desviscin.
Rango Dinmico Lineal.Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante.
Ruido. Es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El significado de conocer el nivel de
ruido de un detector es un factor determinante en la determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite
inferior del rango lineal.
Lmite de Deteccin. Est definido como la mnima cantidad de substancia que puede producir una seal que
sea el doble del nivel de ruido.
Corriente de Fondo. Seal constante de salida generada por el proceso en el que un detector est operativo sin
que alguna substancia pasa a travs de l. Esta seal es muy importante, ya que permite diagnosticar el buen o
mal funcionamiento del detector.
Detectores ms usados en Cromatografa de Gases

Detector de Conductividad Trmica. Mide la conductividad trmica del gas portador, ocasionada por la
presencia de substancias eludas.
Detector de Ionizacin a la Llama. Basado en la medida de las variaciones de la corriente de ionizacin en una
llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia de substancias eludas.
Detector de Captura Electrnica. Basado en la electronegatividad de las substancias eludas, y su habilidad
para formar iones negativos por captura de electrones.
Detector de Fotometra a la Llama. Basada en la medida de la intensidad de la emisin molecular de la
fluorescencia de heterotomos en las molculas orgnicas.
Detector de Ionizacin de Llama Alcalina
Detector de Espectrometra de Masas
Cromatograma y su Interpretacin

Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y recomendados por la IUPAC:

Line Base
Pico Cromatogrfico
Base del Pico
rea del Pico
Altura del Pico
Ancho del Pico
Ancho del Pico a la mitad de la Altura
Medida de la Altura rea de Pico

Altura del Pico: Medida que se efectua, para cada pico de inters, desde la lnea base hasta el mximo del pico.
Los errores de malas mediciones se pueden atribuir a:

Insuficiente Resolucin
Variaciones en la lnea base
Picos extremadamente pequeos
Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de sta entre el prinpio y el final del
pico.

rea del Pico.


Existen varias tcnicas para la determinacin del rea de un Pico Cromatogrfico:
Integracin Manual

Mtodos Geomtricos
Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La altura se mide desde la lnea
base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho se mide tomando la interseccin de las dos lneas
tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico. Las limitaciones
de esta tcnica estan en el trazado de las lneas tangentes, un pequeo error al trazar las tangentes puede
afectar la medida de la altura.

Altura por ancho a la mitad de la Altura:

Mtodos Mecnicos
Planimtricos

Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego pesarlo en una balanza
analtica. El recorte y pesada depende mucho de la habilidad del operdor. Pueden introducirse errores por
cambios en la humedad del papel, la grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel. Generalmente
se recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no destruir el original.

Integracin Automtica
Electromecnica
Electrnica
Anlisis Cualitativo

Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos dividirlos en dos categoras:

Identificacin Cromatogrfica
Por Datos de Retencin
Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)

Identificacin No Cromatogrfica
Anlisis Clsicos
Identificacin por:
Adicin de Estndar
Formacin de Derivados
Sustraccin de un Componente
Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN
Anlisis Cuantitativo

Existen varios mtodos para cuantificar un pico cromatogrfico:

Normalizacin de rea
Normalizacin de rea con Factores de Respuesta
Estandarizacin Externa
Estandarizacin Interna
Referencias Bibliogrficas Recomendadas