Biologia Celular e Molecular I

Captulo I: Princpios de organizao e funo celular

Perspectiva histrica sobre o conceito de clula:

Em 1665, Hooke observa cortia ao microscpio chamando aos espaos visveis

clulas;

Em 1674-1687 Antoine Van Leeuwenhoek descreve animalnculos;

No ano de 1838 Matthias Schleiden diz que as clulas representam a unidade

estrutural e funcional de todos os seres vivos, ou seja, cada clula possui uma
organizao molecular que lhe permite desempenhar as funes que caracterizam a
vida. Sendo que um ano mais tarde, em 1839, Theodor Schwan defende essa mesma
teoria;

Em 1858 Rudolf Virchow diz que cada animal representa o somatrio de unidades
vitais, cada uma das quais rene por completo todas as propriedades da vida
omnis cellula a cellula. Teoria Celular;

A Teoria Celular aceite nos finais do sculo XIX quando Pasteur prova que no
existe gerao espontnea.

Caracterizao geral de clulas procariotas e eucariotas:

As clulas vivas classificam-se em procariotas e eucariotas

Clulas Procariotas:
Respresentadas esssencialmente pelas bactrias;
Correspondem aos descendentes mais directos das primeiras formas de vida
h cerca de 3.5 bilies de anos;
Tm pequenas dimenses;
Apresentam grande variedade morfolgica e organizao celular simples;
 No possuem ncleo, mas sim nucleide (rea ocupada pelo material
gentico);
Possuem ribossomas especficos;
Podem possuir, ou no, outras estruturas como flagelos, fmbrias, cpsula,
incluses citoplasmticas,, estruturas membranosas intracitoplasmticas,
vesculas gasosas e endosporos;
Em geral, os procariotas reproduzem por fisso binrias, gemulao,
fragmentao, produo de esporos em esporngios, fisso mltipla, entre
outros processos de reproduo assexuada;
As clulas procariotas no possuem membranas a definir compartimentos
individualizados, sendo que as principais funes so desempenhadas pela
membrana citoplasmtica;
As clulas procariotas dividem-se em dois principais grupos, Bacteria e
Arquea.
A parede celular das clulas procariotas , geralmente, uma camada rgida,
que envolve a membrana celular. Constitui o principal suporte mecnico da
clula, confere-lhe estabilidade e actua como barreira fsica. Relativamente
estrutura e composio qumica da parede celular existem diferenas entre as
bactrias e as arqueas.

Parede celular das bactrias:

-Quase todas as bactrias apresentam nas suas paredes celulares um polmero rgido,
insolvel em gua e quimicamente complexo, designado peptidoglicano ou murena. Este
componente da parede bacteriana, responsvel pela sua rigidez e morfologia, nunca ocorre
nas paredes das arqueas.

-O peptidoglicano ou murena um heteropolmero constitudo por cadeias lineares de dois

aminoacares, o cido N-acetilmurmico e a N-acetilglucosamina, dispostos
alternadamente e unidos por ligaes glicosdicas (1-4).

- possvel classificar as bactrias em dois grupos distintos, em funo da constituio das

suas paredes celulares, utilizando uma tcnica designada colorao de Graam
desenvolvida em 1884 por Christian Graam.

-O que se verifica que as bactrias consideradas Graam (-), possuem uma parede celular
mais complexa e estratificada, sendo uma das camadas constituda por uma fileira de
peptidoglicanos pouco espessa e a outra, designada membrana exterior, constituda por
lipopolissacardeos, protenas e fosfolpidos. esta membrana exterior a chave do
processo de diferenciao. Relativamente s bactrias consideradas Graam (+), verifica-se
que estas possuem uma espessa camada de peptidoglicanos, contudo no so formadas
pelos ditos lipopolissacardeos, protenas e fosfolpidos.
Parede celular das arquea:

-A parede celular das arquea no contem peptidoglicanos, mas um polmero semelhante

designado pseudopeptidoglicano pode estar presente em algumas arquea, enquanto que
noutras a parede celular de natureza proteica ou glicoproteica.

-o pseudopeptidoglicano formado por N-acetilglucosamina e cido N-

acetiltalosaminurnico (em vez de cido N-acetilmurmico), os dois aucares so unidos
por ligaes glicosdicas (1-3) em vez de (1-4) e as cadeia peptidicas ligadas ao cido
N-acetiltalosaminurnico contm L-aminocidos.

Formas predominantes de clulas procariotas:

1) Cocos forma esfrica

Diplococos (pares de cocos)
Ttradas (associaes de quatro cocos)
Estreptococos (associao de cocos em cadeia)
Estafilococos (grupos irregulares de cocos)
Sarcina (grupos cubides de cocos)

2) Bacilos forma cilndrica ou em bastonete

3) Espirilos forma helicoidal rgida

4) Espiroquetas forma helicoidal flexvel

Clulas Eucariotas:
Dividem-se em dois grandes grupos: clulas animais e clulas vegetais;
Possuem membranas internas que envolvem compartimentos especficos, os
organelos;
Presume-se que existam na Terra h cerca de 1.5 bilies de anos;
Apresentam ncleo, o qual encerra o material gentico;
Alm do ncleo possuem, na generalidade, muitos outros organelos como as
mitocndrias, reticulo endoplasmtico liso e rugoso, vesculas de Golgi;
peroxoissomas, lisossomas, cloroplastos, entre outros;
 O citosol destas clulas possui um arranjo de protenas fibrosas
colectivamente chamadas de citoesqueleto, sendo que 3 classes de fibras o
compem: os microtbulos (polmeros da protena tubulina); os
microfilamentos (constitudos por actina) e os filamentos intermedirios.

Constituintes moleculares e macromoleculares da clulas:

Noo de Vrus:

Vrus so pequenos parasitas acelulares que no possuem capacidade de reproduo

prpria, nem metabolismo independente no sendo, portanto, considerados um
organismo vivo;
So parasitas celulares obrigatrios formados por uma molcula de DNA ou RNA
envolvida por uma camada proteica, a cpside, que por vezes possui enzimas;
Muitos vrus possuem um invlucro externo semelhante membrana plasmtica das
clulas;
Os vrus no tm mecanismos de reparao do material gentico e, por isso, a taxa
de mutao elevada;
So apenas visveis ao microscpio electrnico.

Reproduo de um vrus:

1) O vrus liga-se a receptores especficos da membrana da clula hospedeira;

2) A parte interna do vrus entra para o interior da clula;
3) As protenas virais so degradadas;
4) O material gentico (DNA ou RNA) viral replica-se e transcrito, sendo produzidas
as protenas virais;
5) As protenas virais formam a nova cpsula que envolve o material gentico;
6) O novo vrus abandona a clula e espalha-se no organismo e infecta outras clulas.

As infeces virais podem ser lticas ou no lticas:

A infeco viral ltica requer absoro, penetrao, sntese de protenas

virais e do genoma de replicao, montagem dos vrus de replicao e
libertao de centenas a milhares de vrus, acarretando a morte das clulas
hospedeira. A libertao de vrus revestidos ocorre pela abertura da
membrana citoplasmtica da clula hospedeira

As infeces no-lticas ocorrem quando o genoma viral integrado no

DNA da clula hospedeira e geralmente no leva levam morte celular
Clonagem e contagem de vrus:

-O nmero de partculas virais infecciosas numa amostra

pode ser quantificado por um teste de plaqueamento. Esse
teste realizado pela cultura de uma amostra diluda de
clulas virais sobre uma placa coberta com clulas
hospedeiras, sendo em seguida contado o nmero
ocorrente de leses locais, chamadas placas. A placa
forma-se na caixa de Petri sempre que um vrus isolado
infecta uma clula isolada. O vrus replica-se nessa clula
hospedeira inicial e em seguida lisa a clula, libertando
muitos novos vrus, que, por sua vez, infectam as clulas
vizinhas da caixa de petri. Depois de alguns desses ciclos
de infeco, clulas suficientes foram lisadas para
produzir uma placa visvel na camada de clulas no
infectadas remanescentes.
Tendo em conta que os vrus na placa so derivados de um mesmo vrus parental, eles
constituem um clone viral.

Membranas Biolgicas:

As membranas biolgicas so bicamadas de lpidos anfipticos, os fosfolpidos, que

fazem com que a membrana seja impermevel gua e a molculas solveis em
meio aquoso, onde se intercalam protenas que podem ser integrais, quando
atravessam todo o plano hidrofbico da bicamada ou perifricas, quando se
encontram associadas a apenas um dos folhetos da bicamada;
So estruturas termodinamicamente estveis, cuja manuteno no requer hidrlise
de ATP;
Permitem a separao do contedo celular do espao extracelular;
Fluidez e assimetria so duas caractersticas presentes em todas as membranas
biolgicas.
A fluidez traduz-se pelo marcado movimento lateral a que os fosfolpidos e
protenas esto sujeitos ao longo do plano de cada um dos dois folhetos da
bicamada.
A assimetria expressa-se pela diferente composio molecular observada nas duas
metades da membrana, isto , os fosfolpidos e as protenas no se encontram
distribudos de forma equivalente nos dois folhetos da membrana, estando os
glicolpidos presentes apenas no folheto exoplasmtico da bicamada fosfolipidica.
 Lpidos da membrana:

Fosfolpidos
Os fosfolpidos so as molculas lipdicas mais abundantes nas
membranas biolgicas;
So molculas anfipticas e, portanto, so constitudas por duas
extremidades que reagem de forma diferente presena de gua:
uma cabea polar hidroflica e duas caudas apolares hidrofbicas de
cidos gordos.
Na presena de gua, os fosfolpidos anfipticos orientam-se de
modo a evitarem o contacto das suas extremidades hidrofbicas com
as molculas de gua. Por esta razo organizam-se espontaneamente
em pequenas formaes esfricas as micelas ou, tal como
observado nas membranas biolgicas, em bicamadas, com as
extremidades hidrofbicas dos fosfolpidos orientadas face a face, e
para o interior da membrana.
Existem quatro tipos de fosfolpidos principais: fosfatidilcolina;
esfingomielina; fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina. O nico
destes fosfolpidos que apresenta carga negativa a fosfatidilserina,
os outros trs fosfolpidos so neutros a pH fisiolgico.
O arranjo geomtrico da extremidade hidrofbica dos fosfolpidos,
nomeadamente aquele que deriva do grau de saturao dos cidos
gordos, condiciona a sua fluidez, tal como altera a temperatura a que
preciso descer para induzir a transio da fase lquida fase
cristalina da membrana. por esta razo que os fosfolpidos
 saturados apresentam uma difuso lateral menos rpida na membrana
e atingem uma transio de fase a temperaturas menos baixas que os
fosfolpidos insaturados.

Colesterol
O colesterol , a seguir aos fosfolpidos, a molcula lipdica mais
abundante nas membranas biolgicas.
essencial para que no ocorram roturas na bicamada fosfolipidica.
So molculas que tm maior facilidade em saltar entre os dois
folhetos da membrana (movimento de flip-flop) do que os
fosfolpidos.
Refora a impermeabilidade da bicamada gua, diminui a fluidez
da membrana e tambm a temperatura a que se regista a transio de
fase.
As membranas procariotas so totalmente desprovidas de molculas
de colesterol.
Esfingolpidos
Os enfingolpidos possuem um grupo polar e duas caudas apolares,
no possuindo glicerol, ao contrrio dos glicerofosfolpidos.
So constituidos por uma molcula de esfingosina-amino-alcool de
cadeia longa ou um seu derivado e por uma molcula de cido gordo
de cadeia longa e um grupo polar - que ligado por uma ligao
glicosdica ou por um fosfodister.

Glicolpidos
Uma pequena percentagem dos lpidos da membrana contm
oligossacardeos, deste modo recebem a designao de glicolpidos.
Os glicolpidos esto distribudos com total assimetria na membrana
Encontram-se apenas no folheto exoplasmtico da membrana
exterior das clulas eucariticas.
Os glicolpidos no tm a capacidade de executarem movimentos de
flip-flop entre os dois folhetos da membrana.
Os glicolpidos podem actuar como receptores especficos de
molculas presentes fora da clula, podendo tambm ligar-se a
componentes da matriz intercelular.
Mobilidade e assimetria das membranas biolgicas:

Os lpidos apresentam movimentos a nvel da membrana biolgica, sendo que esses

movimentos so tanto de rotao sobre si prprios, quando de lateralidade no plano
da membrana.
O movimento lateral dos lpidos faz-se dentro de cada um dos dois folhetos da
bicamada, sendo raras as permutas destas molculas entre os dois folhetos (flip-
flop) devido barreira hidrofbica que os separa, o que requer aco enzimtica e
consumo de energia.
A desigual composio qumica dos fosfolpidos da bicamada implica a natureza
assimtrica da membrana. Os dois folhetos apresentam tambm diferenas de carga
elctrica, sendo que o folheto citoplasmtico apresenta maior carga negativa.
A assimetria no regra universal para todas as molculas da membrana, dado que
as molculas de colesterol se encontram, geralmente, em nmero semelhante nos
dois folhetos da membrana.

Protenas da membrana:
A massa de uma protena de membrana de tamanho mdio 40 a 60 vezes
superior massa de um fosfolpido.
Grande parte das protenas da membrana, contm resduos sacardeo e so,
portanto, glicoprotenas.
Tal como acontece com as molculas lipdicas da membrana, as protenas esto
sujeitas a movimentos de rotao e lateralidade e, tal como acontece com os
glicolpidos, no lhes permitido movimentos de flip-flop entre os dois folhetos
da bicamada.
A maior parte das funes especficas da membrana desempenhada pelas
protenas, nomeadamente a formao de canais para a passagem de gua e o
transporte activo de ies e pequenas molculas, a expresso de receptores
envolvidos na activao celular ou em fenmenos de endocitose, a ancoragem
da membrana a elementos do citoesqueleto, etc.

Descrio morfolgica e funcional dos vrios organitos de uma clula eucaritica:

 Ncleo:
o maior organelo nas clulas eucariotas;
Delimitado do citoplasma pelo invlucro nuclear;
Apresenta uma forma aproximada de esfera com 10 micrometros de
dimetro;
Encerra o patrimnio gentico da clula, sob a forma de molcula de DNA;
Funciona como centro de controlo da clula e como local onde decorrem a
armazenagem e replicao do DNA;
Circundado por duas membranas. A membrana nuclear interna define o
prprio ncleo. Em muitas clulas, a membrana nuclear externa tem
continuidade com o retculo endoplasmtico rugoso, e o espao definido
entre estas membranas tem continuidade com o lmen do retculo
endoplasmtico rugoso.
As duas membranas nucleares parecem fundir-se nos poros nucleares. Os
poros funcionam como canais que regulam o movimento de material entre o
ncleo e o citosol.
Em clulas metabolicamente activas frequente observar um ou mais
nuclolos, locais onde se formam os ribossomas, a partir de protenas
especficas e RNA. Os nuclolos no esto isolados por membranas do resto
do ncleo.
O interior do compartimento nuclear - nucleoplasma - uma soluo aquosa
em tudo semelhante ao citosol, que contm uma rede de filamentos
associados ao invlucro nuclear.

Retculo Endoplasmtico:

Constitui uma parte do extenso sistema endomembranar que compe a

maioria do citoplasma de uma clula eucaritica. Em certas locais contnuo
com o invlucro nuclear. O retculo pode ser funcional e estruturalmente
dividido em retculo endoplasmtico rugoso e retculo endoplasmtico liso;

O retculo rugoso deve o seu nome ao facto de as suas membranas conterem

ribossomas, locais de sntese proteica. As protenas so lanadas para o
interior das membranas, onde so transformadas ou dirigidas a outras
localizaes da clula.

O retculo liso no apresenta ribossomas nas suas membranas e nele as

protenas sintetizadas no retculo rugoso so quimicamente alteradas.
Ocorrem ainda no seu lmen a hidrlise do glicognio, sntese de esterides
e alterao de drogas e outras substncias nocivas ao organismo.

Complexo de Golgi:
 Deve o seu nome ao cientista italiano que primeiro o observou ao
microscpio ptico composto. formado por sculos membranosos
achatados designados cisternas e pequenas vesculas.

O aparelho de Golgi recebe do retculo endoplasmtico rugoso, protenas

transportadas em vesculas membranosas. Essas molculas so ento
separadas e modificadas quimicamente, sendo depois encaminhadas para as
suas localizaes definitivas. Destinam-se ao exterior da clula e so
"embaladas" em vesculas que se iro fundir com a membrana plasmtica e
libertadas para o exterior. Destinam-se tambm ao citoplasma, as vesculas
iro fundir-se com outros organitos.

As vesculas formadas pelo R.E.R. so recebidas pela face cis, ou de

recepo, do Golgi, as protenas alteradas no lmen das cisternas e
libertadas pela face trans, ou de formao, virada para a membrana
plasmtica. ~

Mitocndria:

o organito responsvel pela transformao da energia contida nos

alimentos em energia metablica (ATP). Estas transformaes designam-
se, no seu conjunto, respirao celular.

As mitocndrias tm duas membranas, como o ncleo ou os cloroplastos.

A membrana externa lisa e fornece proteco, embora seja bastante
permevel passagem de substncias. A membrana interna contm
grandes complexos proteicos envolvidos na sntese de ATP e na
respirao celular. Esta membrana est dobrada em pregas achatadas
designadas cristas, que aumentam grandemente a sua rea. O nmero de
cristas varia muito com a taxa metablica da clula em que a mitocndria
se encontra.

A matriz a regio interna da mitocndria, rodeada pela membrana

interna. Contm numerosas protenas envolvidas nos processos
respiratrios, bem como ribossomas e DNA, usados na sntese da maioria
das suas protenas.

Peroxissoma:

um organito relativamente pouco conhecido, no qual produtos

txicos para a clula, como perxido de hidrognio, so
degradados em produtos inofensivos, como gua e oxignio.
 Exclusivamente em clulas vegetais existem organitos
semelhantes, designados glioxissomas.

Centrossoma:

uma regio mais ou menos amorfa, localizada perto do envelope

nuclear em clulas animais. Ao centro desta zona est um par de
estruturas cilndricas designadas centrolos e dispostas em ngulo
recto, como um L.

Centrolos:

Esto intimamente relacionados com o movimento celular, seja

por meio de flagelos ou de clios, em cuja base existe sempre um
corpo basal, em tudo semelhante ao centrolo tpico. Esta relao
confirmada pelo facto de muitas vezes os flagelos ou clios
serem reabsorvidos e os seus corpos basais deslocados para o
interior da clula, passando a funcionar como centrolos.

A estrutura do centrolo formada por nove grupos de trs

microtbulos fundidos. Estes nove conjuntos formam a "parede"
da estrutura, ligeiramente rodados para o interior, como hlices de
uma turbina. Cada conjunto est ligado longitudinalmente ao
adjacente por outro tipo de protenas.

Plastdeos:

Caractersticos das clulas vegetais e tm uma estrutura prpria: so

envolvidos por um envelope com duas membranas, a mais interna das
quais se diferencia num sistema complexo, e que rodeia uma matriz mais
ou menos homognea, o estroma. Os plastdeos so geralmente
classificados segundo o tipo de pigmentos que contm.

Os cloroplastos so plastdeos que apenas existem em clulas

autotrficas, ditas vegetais. As clulas animais, heterotrficas, no
produzem cloroplastos mas podem apresent-los, perfeitamente
funcionais, retirados da digesto parcial de clulas vegetais ou devido a
algas verdes que vivem em simbiose nesses tecidos. Esta situao
bastante comum em corais e anmonas. o local onde se realiza a
fotossntese, pelo que contm grande quantidade de pigmentos,
 nomeadamente clorofilas. Geralmente localizam-se nos lados longos das
clulas, perto da parede celular. A sua estrutura faz lembrar a da
mitocndria, pois tambm apresenta duas membranas. A membrana
externa bastante permevel, permitindo a passagem da maioria das
pequenas molculas. A membrana interna bem mais selectiva e onde
se localizam os complexos que captam a luz para as reaces
fotossintticas. Forma dobras designadas tilacides. Quando os
tilacides aparecem empilhados como moedas designam-se grana. O
espao interno do cloroplasto designa-se estroma e rodeado pela
membrana interna. Neste espao, tal como na mitocndria, encontra-se
DNA e ribossomas, capazes de comandar numerosas protenas presentes
no cloroplasto. No entanto, o controlo nitidamente do ncleo, sendo a
maior parte do material sintetizado com DNA nuclear e transferido para
o plastdeo. Em algas verdes e plantas frequente encontrar no estroma
gros de amido e/ou pequenas gotas de lpidos. Estes so produtos de
armazenamento temporrio, quando o organismo fotossintetiza
activamente.

Os cromoplastos so plastdeos de tamanhos muito diversos que

armazenam outro tipo de pigmentos (que no clorofila), principalmente
carotenides. So responsveis pelas cores amarela, laranja e vermelha
de folhas velhas, flores e frutos maduros. Podem desenvolver-se a partir
de cloroplastos em que a clorofila e as membranas internas se
desintegram e grandes quantidades de carotenides so armazenados. A
sua funo na planta no bem reconhecida, embora sejam
fundamentais na atraco de insectos e vertebrados.

Os leucoplastos so plastdeos no pigmentados. Alguns sintetizam

amido - amiloplastos - outros prtidos e mesmo lpidos. Quando
expostos luz transformam-se em cloroplastos.

Caracterizao de imagens obtidas em microscpio:

O microscpio o instrumento bsico para o estudo da clula. A inveno do microscpio

atribuda a Antoine Leeuwenhoek e Robert Hooke no sc. XVII. J no sculo XIX,
Schleiden e Schwann, com base nas observaes microscpicas at a efectuadas, elaboram
a teoria segundo a qual todos os seres vivos so constitudos por clulas. Desde a as
tcnicas e metodologias para observar as clulas e a sua estrutura tm evoludo
continuamente. As tcnicas citoqumicas vieram possibilitar a identificao e localizao de
diversas molculas constituintes das clulas e o desenvolvimento dos microscpios
electrnicos possibilitou avanos extraordinrios acerca da sua ultra-estrutura.
Simultaneamente ao desenvolvimento do microscpio electrnico, foram desenvolvidas
outras tcnicas analticas que permitem isolar organelos celulares e efectuar o estudo in
vitro de suas molculas e funes.
Os microscpios pertencem a duas categorias, dependendo do princpio em que se baseia a
ampliao: luminoso ou ptico (utiliza radiao constituda por fotes) e electrnico (utiliza
um feixe de electres).

Comparao entre os dois tipos de microscpios, ptico e electrnico:

Caracterstica Microscpio ptico Microscpio electrnico

de transmisso
Ampliao 25 a 1500 x 1 500 a 200 000 x
Limite de resoluo 0,2 m 0,4 a 0,5 m
na prtica 1 m (10 )
Tipo de radiao Feixe de fotes Feixe de electres
Comprimento de onda da 0,4 a 0,7 m 0,05
radiao (+/- 0,55m)
Tipo de lentes pticas Electromagnticas
Visualizao da amostra Visualizao directa Em cran fluorescente
Espessura dos cortes 5 a 10 m 0,02 a 0,1 m (20 a 100
m)
Coluna Coluna em vcuo
 Comparao entre diferentes tipos de microscopia

Tipo de microscopia Ampliao total Aspecto do objecto Exemplos de

aplicaes
Campo luminoso 1000 2000 x Objectos corados ou Determinao dos
no; as bactrias, elementos
geralmente coradas, morfolgicos
assumem a cor do grosseiros de
corante bactrias, leveduras,
fungos, algas,
protozorios
Campo escuro 1000 2000 x Geralmente no Microorganismos
corados; o objecto que exibem algum
aparece brilhante ou dado morfolgico
iluminado sobre caracterstico em
um fundo escuro estado vivo e em
suspenso lquido
(ex. espiroquetas)
Ultravioleta 1000 2000 x No possvel a Diferenciao de
visualizao directa; componentes
fotografado celulares, com base
em maior ou menor
absoro da luz
ultravioleta
Fluorescente 1000 2000 x Brilhante e corado; Tcnicas de
cor do corante diagnstico, nas
fluorescente quais o fluorocromo
fixado ao organismo
revela a sua
identidade
Contraste de fase 1000 2000 x Vrios graus de Exame de estruturas
brilho celulares em clulas
vivas de
microorganismos
como leveduras,
algas, protozorios e
algumas bactrias
Electrnica (TEM) 200 000400 000 x Observao em Exame de vrus e da
cran fluorescente ultra-estrutura
celular
 Captulo II: Gentica Molecular - Mecanismos e expresso
Gentica

Gene a unidade fundamental fsica e funcional da hereditariedade,

constituindo todo o segmento da molcula de DNA que contm informao para
a sntese de protenas. Segmentos de DNA com um determinado nmero de
nucletidos e com uma ordem prpria constituem uma unidade de linguagem
qumica designada por gene. O gene um segmento de um cromossoma a que
corresponde um cdigo distinto, uma informao especfica para produzir uma
determinada protena ou controlar uma caracterstica, por exemplo, a cor dos
olhos.

Cromossoma uma molcula de DNA, extremamente longa e associada a

protenas. Contm vrios genes que so responsveis por diferentes
caractersticas.

Cromatina - A cromatina existe nas formas distendida e condensada.

A aparncia da cromatina extrada dos ncleos e examinada a microscpio electrnico

depende da concentrao de sal a qual est exposta. Em baixas concentraes e na
ausncia de caties covalentes como Mg+2, a cromatina isolada assemelha-se a um
colar de contas. Nessa forma distendida, o cordo composto por DNA livre, chamado
DNA de ligao (linker), que se une as estruturas em forma de contas, chamadas
nucleossomos. Os nucleossomos, compostos de DNA e histomas ao redor do qual o
segmento de 147pb de DNA enrolado, tm um dimetro de aproximadamente 10nm e
so as unidades estruturais primrias das cromatinas. Se a cromatina for isolada em
concentraes salinas fisiolgicas, assumir a forma mais condensada como uma fibra,
de 30 nm de dimetro.
A cromatina das regies transicionalmente inactivas do DNA das clulas parece estar
em uma forma condensada de fibras, as quais formam estruturas altamente
condensadas.
A cromatina das regies de DNA com transcrio activa nas clulas parece estar numa
forma aberta, distendida.
A acetilao e desacetilao reversvel dos resduos de lisiona da extremidade N-
terminal das histomas H2A, H2B. H3 e H4 controlam a fora de ligao entre o DNA e
octmero de histonas e afectam o arranjo dos nucleossomos na forma condensada da
cromatina.
As caudas das histonas tambm podem ser modificadas por metilao, fosforilao e
monoubiquitanao. Essas modificaes influenciam a estrutura da cromatina pela
regulao da ligao das caudas das histonas s outras protenas associadas cromatina
menos abundante.
A cromatina hipoacetilada e transicionalmente inactiva assume uma forma mais
condensada e mais resistente DNase I do que a forma hiperacetilada e
transicionalmente activa da cromatina.
Cada cromossoma eucaritico contm uma nica molcula de DNA compactada nos
nucleossomos e arranjada na fibra de cromatina de 30nm, a qual est fixada a uma
protena de suporte em stios especficos. O dobramento adicional do suporte compacto
ainda mais a estrutura na forma altamente condensada apresentada pelos cromossomas
em metfase.

Cromossomas
Em eucariotas, a unidade estrutural do material gentico, consistindo de uma nica
molcula linear de DNA dupla fita e protenas associadas. Na maioria dos procariotas,
uma nica molcula circular de DNA dupla fita constitui quase totalidade do material
gentico.
Durante a metafase, os cromossomas eucariticos tornam-se to condensados que
podem ser observados individualmente ao microscpio ptico.

O caritipo, o conjunto de cromossomas em metfase, caracterstico de cada espcie.

Espcies altamente relacionadas podem exibir caritipos muito diferentes, indicando
que a informao gentica similar pode ser organizada nos cromossomas de vrias
maneiras.
A anlise de bandeamento e a pintura de comossomas, um mtodo mais preciso,
utilizado por identificar os diferentes cromossomas humanos em metfase e para
detectar translocaes e deleces.
O padro de bandas altamente reprodutvel dos cromossomas politnios permitiu a
localizao do DNA da Drosophila por hibridizao in situ e a visualizao de
delees cromossmicas e rearranjos que provocam alteraes no padro normal de
bandas.
Quando os cromossomas em metfase sofrem descondensao, durante a interfase,
certas regies, denominadas heterocromatina, permanecem muito mais condensadas
que a maior parte da cromatina, chamada eucromatina.
Trs tipos de sequencias de DNA so necessrias para que uma longa molcula de
DNA linear actue como um cromossoma: uma origem de replicao, chamada ARS em
leveduras; uma sequncia de centrmero (CEN); e duas sequencias telomtricas (TEL)
nas extrimidades do DNA.
Fragmentos de DNA de at 106 pares podem ser clonados em vectores de cromossoma
artificial de levedura (YAC)

Cromossomas homlogos: uma de duas clulas de cada tipo morfolgico do

cromossoma presente em uma das clulas diplide; tambm chamado homlogo.
Cada homlogo derivado de um dos progenitores.
 Cromossoma politnico: cromossoma dilatado composto por muitas cpias
paralelas dele prprio, formado por ciclos mltiplos de replicao do DNA, sem
separao cromossomal. Os cromossomas politnos, os quais tm padres de
bandas altamente reprodutveis so encontrados nas glndulas salivares e alguns
outros tecidos.

Mecanismo molecular de transcrio em clulas procariticas:

Nas clulas procariotas, a trasncrio dos RNA celulares, quer sejam ribossomais,
mensageiros, de transferncia ou outros, processa-se sob catlise de uma nica RNA
polimerase bacteriana. A RNA polimerase bacteriana apresenta uma estrtutura
oligomtrica, em que cada uma das subunidades constituintes confere propriedades
bioqumicas especificas, inerentes sua complexidade e funo. A transcrio nos
procariontes ocorre ao nvel do citoplasma, simultaneamente traduo e compreende trs
etapas, iniciao, elongao e terminao.

!!!!!FALTA ESPECIFICAR CADA UMA DAS ETAPAS!!!!!

Regulao da expresso gentica:

Se a expresso dos genes no fosse regulada por mecanismos especficos, a clula

produziria constantemente protenas em elevadas quantidades. Mas nem todas as protenas
so necessrias em determinadas circunstncias e nas mesmas quantidades.

Regulao ao nvel da Transcrio:

Um gene no possui apenas na sua sequncia bases que sero transcritas para RNA; possui
sequncias associadas sua regulao e ligao com a RNA polimerase:
o Promotor: regio do DNA qual se liga uma RNA polimerase para dar
incio transcrio.
Procariontes: o promotor tem a designao de Pribow-box.
Eucariontes: os promotores existem em maior nmero e a
maiores distncias. Estas sequncias permitem a ligao de
determinadas protenas que auxiliam a ligao da RNA
polimerase.
 o Indutor: protena que induz a transcrio, mediando a ligao da RNA
polimerase ao DNA.

o Repressor: protena que se pode ligar ao DNA, impedindo que a RNA

polimerase avance, actuando como mecanismo de controlo da transcrio,
ao regular a produo de RNAm de acordo com as necessidades.

Ao impedir a sntese de novo RNAm pelo mecanismo da transcrio, a clula

consegue regular a produo de protenas, pois os RNAm que tinha produzido
anteriormente apresentam um perodo de vida curto, degradando-se em cerca de
dois minutos. Um ciclo de degradao e nova sntese de RNAm nas clulas ocorre
rpida e continuamente, o que constitui um requisito fundamental para o controlo da
transcrio e um procedimento fulcral na regulao da expresso gnica em
procariontes.

Regulao ao nvel da estrutura da cromatina:

Heterocromatina: zonas onde a cromatina se encontra altamente condensada e onde

os genes no so transcritos (encontram-se silenciados).
Eucromatina: regies com menor grau de condensao que, como se encontram
menos enroladas, permitem a ligao da RNA polimerase ao DNA, possibilitando a
ocorrncia da transcrio.
O grau de condensao da cromatina permite, assim, controlar a expresso de um
grande conjunto de genes, facilitando ou impedindo o contacto entre a enzima e o
DNA.

Regulao ao nvel do processamento, traduo do RNAm e ps-traduo:

O processamento de RNA inclui, nos eucariontes, o processo de exciso, em que

determinados fragmentos de RNA so removidos, no sendo assim traduzidos em
protenas. Ao nvel deste processo pode ocorrer regulao na seleco dos
fragmentos a remover: um mesmo gene, ao ser transcrito em dois rgos distintos
origina RNAm iguais; todavia, este pode sofrer mecanismos de exciso diferentes,
originando RNAm maduros igualmente diferentes. Consequentemente, nos dois
rgos podem formar-se duas protenas com funes diferentes, codificadas por um
mesmo gene.
A clula consegue controlar o tempo de durao de uma molcula de RNAm,
manuseando a produo de protenas. Se uma molcula de RNAm tiver um tempo
de vida longo, poder ser repetidamente lida pelos ribossomas, sendo assim
traduzida em muitas molculas de protenas iguais entre si. Se tiver, pelo contrrio,
um tempo curto de vida, poucas protenas se formaro a partir desse RNA. O tempo
de vida pode ser modificado por complexos protecos que se ligam e protegem o
RNAm da degradao por enzimas presentes no citoplasma.
 Traduo: a manipulao das protenas especficas que permitem a ligao dos
ribossomas ao RNAm permite clula adequar a traduo, controlando a
quantidade de protenas que se formam por leitura do RNAm.

Regulao nos Procariontes:

Expresso constitutiva: quando as protenas so permanentemente necessrias e os

respectivos genes so permanentemente transcritos.
Expresso induzida: as protenas so apenas necessrias quando a bactria se
encontra a crescer em condies especiais.

Pelo facto de se tratar de clulas mais simples, a regulao ocorrer essencialmente

ao nvel da transcrio, em detrimento da traduo. O processamento de RNAm no
ocorre nas clulas procariticas, pois o RNAm, logo aps a transcrio,
imediatamente traduzido pelos ribossomas.

Os genes bacterianos possuem tambm sequncias reguladoras, localizadas na sua

proximidade. Estas sequncias so em menor nmero e menos complexas que as
dos eucariontes.

Modelo do Opero:

Em 1961, Franois Jacob e Jacques Monod propuseram o Modelo do Opero como

principal mecanismo de controlo da expresso dos genes em bactrias.

Opero: unidade funcional constituda pelos seguintes elementos:

o Genes estruturais: conjunto de genes que codificam protenas com funes

relacionadas, como, por exemplo, as vrias enzimas de uma determinada via
metablica.

o Promotor: sequncia especfica de nucletidos do DNA qual se liga a RNA

polimerase e onde tem incio a transcrio.

o Operador: sequncia de DNA que controla o acesso da RNA polimerase ao

promotor e que permite activar ou desactivar a transcrio de todos os genes
estruturais.

o Gene Regulador: encontra-se a uma determinada distncia do opero, tem o

seu prprio promotor e codifica o repressor.
 o Repressor: protena alostrica com duas formas, uma activa e uma inactiva.
especfico, reconhece e liga-se apenas ao operador de um determinado
opero.

A transcrio dos genes estruturais do opero origina uma longa molcula de

RNAm. Este RNAm tem sinais de iniciao e de paragem que permitem
individualizar as diferentes protenas.

Tipos de regulao dos genes em procariontes:

o Regulao negativa: o opero bloqueado pela forma activa do repressor. A

ligao do repressor activo ao operador impede a ligao da RNA
polimerase ao promotor e inibe a transcrio.

Opero repressvel:
O repressor sintetizado na forma inactiva,
com pouca afinidade para o operador, o que
permite a transcrio dos genes estruturais. O
produto final da via metablica funciona como
co-repressor e, quando a sua quantidade
aumenta, liga-se ao repressor e activa-o. O
repressor activo liga-se ao operador e bloqueia
a transcrio. Quando a quantidade do produto
final diminui, a transcrio retomada.
Processo de regulao caracterstico de vias
anablicas que sintetizam produtos essenciais
a partir de percursores. A suspenso da
transcrio de genes que codificam um
produto presente no meio em quantidade
suficiente permite poupar recursos e energia,
sendo essencial para a resposta variao das
condies ambientais e adaptao evolutiva.
Ex: Opero trp em E.coli.

Opero indutvel:
O repressor sintetizado na forma activa e
liga-se ao operador, bloqueando a transcrio
dos genes. Um indutor inactiva o repressor e
induz a transcrio dos genes.
Processo de regulao caracterstico de vias
catablicas. Genes que codificam enzimas so
apenas transcritos se o substrato estiver
presente.
Opero lac em E.coli.
Exemplo de Opero indutvel: Aco do Opero da lactose em procariontes
(regulao em resposta a factor externo):

Num meio pobre em lactose, as molculas de -galactosidase

(enzima que degrada a lactose) que existem no interior de uma clula
de E. coli so em nmero reduzido.
Depois de se adicionar lactose ao meio, a clula rapidamente produz
esta enzima, em grandes quantidades, para a sua degradao.
Quando a produo de -galactosidase induzida, so produzidas
mais duas enzimas: uma permease e uma trancetilase.
Estas enzimas so codificadas por genes estruturais.
Para alm de os trs genes serem adjacentes no mesmo cromossoma,
eles so tambm transcritos num nico RNA policistrnico. Mas,
enquanto no houver lactose no meio, esses genes no so expressos.
No processo de regulao negativa, em operes como o da lactose, e
na ausncia de substrato, uma protena repressora liga-se ao
operador, impedindo que a RNA polimerase se ligue ao promotor, de
tal forma que a transcrio no ocorre. Esta protena repressora
resulta do chamado gene regulador (ou gene l ou lac l), situado
prximo dos genes estruturais.
O repressor liga-se a uma regio do DNA prxima do gene que
codifica para a -galactosidase e perto do ponto em que se inicia a
transcrio do RNA policistrnico. a especificidade do repressor (o
repressor tem a capacidade de reconhecer uma sequncia especfica
de DNA, ou seja, um operador especfico) que determina que este se
ligue ao ponto no DNA prximo do gene que ele controla, e no
noutro local ao longo do cromossoma.
Estando o repressor ligado ao operador impedida a transcrio do
DNA pela RNA polimerase.
Derivados da lactose, ou a prpria lactose, podem ligar-se ao
repressor, alterando a sua configurao. Assim, este deixa de ter
afinidade com o operador, e permite a ligao da RNA polimerase ao
promotor, possibilitando a transcrio do opero.

o Regulao positiva: uma protena reguladora, o regulo, estimula

directamente a expresso dos genes
O regulo activado pela ligao de uma molcula
especfica. Na sua forma activa, liga-se a um local a montante
do promotor, facilitando o acesso da RNA polimerase ao
promotor e induzindo a transcrio.
Um mesmo regulo actua em diferentes operes.
Regulao em Eucariontes:

Apenas uma pequena parte do genoma dos eucariontes ocupada por genes que
codificam protenas. No entanto, o nmero de protenas produzidas pelos
eucariontes excede largamente o nmero de genes. Este facto pode ser explicado
tendo em considerao o seguinte:
os exes codificam sequncias de aminocidos, designadas
domnios, que podem fazer parte de mais do que uma protena.
Diferentes combinaes de exes formam diferentes protenas;
sequncias de DNA, que funcionam como intres num determinado
contexto, podem funcionar como exes e codificar protenas num
contexto diferente.

A regulao da expresso gnica como resposta a factores internos e externos

A maioria do material gentico de uma clula no se expressa, encontrando-se

reprimido.
Este controlo da expresso gentica est na origem da diferenciao
celular, permitindo que s os genes especficos de um tecido sejam
expressos nas clulas que o compem. Assim, a expresso gnica o
principal factor que determina as caractersticas estruturais,
funcionais e comportamentais de uma clula, sendo a responsvel
pela ontogenia celular (histria do desenvolvimento de um
organismo ao longo da sua vida).

Numa dada clula, um gene pode exprimir-se s em determinados estdios de

desenvolvimento ou em resposta a factores externos, como a modificao das
condies ambientais.

Aco das hormonas esterides (regulao em resposta a factor interno):

so produzidas nas glndulas reprodutoras e libertadas na corrente
sangunea, onde podem alcanar todas as clulas;
possuem a capacidade de atravessar a membrana plasmtica e de se
ligarem a receptores no interior da clula. O complexo que se forma
pode entrar no ncleo pelos poros e ligar-se ao DNA, estimulando a
expresso de genes especficos, cujas protenas sero responsveis
pelo desenvolvimento de algumas caractersticas sexuais.

Aco do Calor em eucariontes (regulao em resposta a factor externo):

Quando as clulas se encontram sujeitas a temperaturas superiores a
42C, mesmo que por curtos perodos de tempo, sofrem alteraes
nas suas protenas. Estas adquirem outras conformaes e podem
deixar de ser funcionais, o que pode levar a morte celular.
 Nestas situaes, activada a expresso de genes que originaro
protenas com capacidade de reverter as conformaes incorrectas de
outras protenas e assim impedir a sua acumulao e
consequentemente mau funcionamento celular.

Transcrio em clulas eucariticas. Caracterizao dos transcritos formados:

A transcrio consiste na sntese de molculas de RNA mensageiro (mRNA), RNA

ribossomal (rRNA) e RNA de transferncia (tRNA), a partir da molcula de DNA. Os
mecanismos subjacentes a este processo possuem um carcter universal, consistindo na
polimerizao orientada e sequencial dos nucletidos trifosfato de ribose (ATP, GTP, CTP
e UTP), efectuada pelas RNA polimerases, e usando como molde as sequncias
nucletidicas das cadeias de DNA.

Nas clulas eucariticas existem quatro RNA polimerases, uma para cada tipo de RNA a
sintetizar: polimerase I (rRNA), II (mRNA), e III (tRNA e snRNA - pequenas RNA
nucleares) e IV (transcrio dos genes do DNA mitocondrial). O processo de transcrio
efectuado em trs etapas: iniciao, elongao e terminao das cadeias polinucleotdicas
de RNA sintetizado.

No que se refere sntese de mRNA, a RNA polimerase II liga-se ao DNA por

reconhecimento de sequncias especficas, designadas promotoras, localizadas no DNA a
montante do local de iniciao da transcrio. Nestas regies, ocorrem interaces entre a
RNA polimerase e determinadas protenas reguladoras (factores de regulao). Aps
ligao, a cadeia dupla helicoidal de DNA sofre desenrolamento e desnaturao,
possibilitando deste modo a formao de duas cadeias simples de DNA, uma das quais
servir de molde para a sntese do mRNA. De seguida, os nucletidos percursores livres,
existentes no nucleoplasma, so ligados entre si de forma sequencial pela aco da RNA
polimerase II e por complementaridade com a sequncia nucleotdica da cadeia simples de
DNA molde. O processo termina quando a enzima RNA polimerase II reconhece uma
sequncia de terminao especfica.

Em eucariotas, o mRNA sintetizado numa forma imatura, o hnRNA (RNA nuclear

heterogneo), o qual posteriormente sujeito no ncleo da clula a um processamento que
inclui:
 1. modificao da extremidade 5 pela adio de um nuclesido alterado (7
metilguanosina, terminal cap);
2. adio na extremidade 3 do transcrito de uma cauda de adeninas (poliadenilao);
3. remoo das regies no codificantes (intres) do mRNA percursor e colagem das
regies codificantes, exes (splicing).

Por fim, o mRNA processado transportado do ncleo para o citoplasma da clula, onde
ocorre a traduo da informao gentica nele contida.

As molculas tRNA so sintetizadas no ncleo pela aco da RNA polimerase III e o seu
processamento envolve a adio de uma sequncia CCA no terminal 3 de todas as
molculas. Ocorre ainda a metilao enzimtica, atravs da S-adenosilmetionina, em
aproximadamente 1% das unidades ribose. Por outro lado, tambm efectuada a
modificao de algumas bases que facilitam o estabelecimento da sua estrutura. O nmero
de molculas de tRNA superior ao nmero de codes com significado (61), sendo nas
clulas eucariticas superior a 70. Todas as molculas de tRNA podem assumir uma
estrutura secundria em folha de trevo, apresentando 4 zonas de emparelhamento entre
bases complementares e 3 dobras, uma das quais inclui um tripleto nucleotdico
(anticodo), determinante na incorporao correcta do aminocido na protena.

Na sntese do rRNA, tanto as clulas eucariticas como procariticas sintetizam molculas

percursoras de elevado peso molecular que posteriormente so processadas em RNAs
ribossomais, atravs de clivagens endo- e exo-nucleolticas.

Existem 4 tipos de molculas de RNA nas clulas eucariticas: 28 S, 18 S, 5,8 S, e 5 S (as

partculas subunitrias so geralmente designadas de acordo com o respectivo coeficiente
de sedimentao). Destas molculas, 3 (28 S, 18 S e 5,8 S) so sintetizadas no nuclolo, a
partir de um transcrito primrio (rDNA), que dividido em trs molculas maduras de
RNA. Estas molculas combinadas com a molcula 5 S (sintetizada no ncleo) e com
protenas ribossomais constituem as subunidades ribossomais primrias 40 S e 60 S, dos
ribossomas, as quais so transportadas para o citoplasma e assumem o seu papel na sntese
de protenas. As duas subunidades ribossomais so combinadas apenas na presena do
mRNA e dos tRNAs activados (sob a forma de aminoacil-tRNA) e desempenham um papel
fundamental na seleco dos sinais de incio da traduo.

O ribossoma (estrutura no membranar) constitui a fbrica de sntese de protenas,

atravs da informao vinculada no RNA mensageiro (mRNA).
 Comparao entre procariotas e eucariotas no que se refere ao processo de transcrio.

Procariotas Eucariotas

Caixa Pribnow regio 35 a Caixa Hogness TATA (-25);

10 (TATAAT)
Regio caixa CAAT (-75) (nem sempre
promotora presente)
mRNA Monocistrnico (codifica a Monocistrnico
sntese de apenas uma protena) e
policistrnico
RNA-polimerase Apenas uma RNA polimerase I rRNA
RNA polimerase II mRNA
RNA polimerase III tRNA
RNA polimerase IV DNA
mitocndrial
Estabilizao do Inexistente Modificao da extremidade 5
mRNA com metilguanosina (capping) e
adio de uma longa cadeia de
adeninas (poliadenilao)
Iniciao Ligao da RNA-polimerase ao Ligao da RNA-polimerase ao
promotor (factor s) promotor, aps a ligao de
protenas de iniciao ao DNA
Intres Inexistentes Eliminados atravs do processo
de splicing
Localizao Ocorre acoplada traduo Citoplasma

Controlo Simples Complexo, atravs da ligao de

factores de transcrio em vrios
locais das regies dos promotores
Abundncia e variedades dos diferentes RNAs nas clulas:

DNA:
o Armazenamento e transmisso da informao gentica.
o Encontrado nos cromossomas e em pequenas quantidades nas mitocndrias
e cloroplastos.
o Encontra-se associado a protenas histonas nos cromossomas das clulas
eucariotas.

o A molcula de DNA formada por duas cadeias anti-paralelas de

nucletidos, dispostas em hlice em torno de um eixo.

o A direco das ligaes 3 e 5 dister-fosfato de uma cadeia inversa em

relao da outra cadeia (cadeias antiparalelas).

o Pareamento: Adenina Timina e Guanina Citosina (ligadas por pontes de

hidrognio)

o Distncia entre as bases: 0.34 nm; cada volta completa da hlice contm 10
nucleotdeos.

o A hlice dupla tem um dimetro de 2nm.

o Factores que Mantm a estabilidade da hlice:

bases (hidrofbicas) dentro da hlice;
resduos de desoxirribose (hidroflicos) e cido fosfrico (ionizado e
hidroflico) na periferia, em contato com a gua intracelular;
pontes de hidrognio - entre os dois filamentos polinucleotdicos da
hlice dupla;
interao hidrofbica das bases pareadas.

RNA
o Filamento nico; com a excepo de alguns vrus.
o Trs variedades:
tRNA ( transferncia)
mRNA (mensageiro)
rRNA (ribossmico)

tRNA

Um grupo de pequenas molculas de RNA que funcionam como dadores de

aminocidos durante a sntese da protena. Cada tRNA est covalentemente
ligado a um aminocido especfico foramando aminoacil-tRNA
 Funo: transferir a.minocidos para as posies correctas nas cadeias
polipeptdicas em formao nos polirribossomas.

Combina-se com o aminocido e capaz de reconhecer no mRNA uma

sequncia de trs bases - codo.

A sequncia de trs bases no tRNA que reconhece o codo designada por

anti-codo.

Para cada aminocido existe pelo menos um tRNA.

um filamento com uma extremidade terminando pela sequncia CCA -

cido adenlico (A) precedido de duas molculas de cido citidlico (C).

Apresenta segmentos formados por uma hlice dupla (devido formao de

pontes de hidrognio).

Representao plana - folha de trevo (com o anticodo numa extremidade).

mRNA

Qualquer RNA que especifica a ordem dos aminocidos numa protena (a

estrutura primria).

Produzido por transcrio do DNA pela RNA polimerase.

Nos eucariotas, o produto inicial de RNA (transcrito primrio) sofre o

processamento para produzir o mRNA funcional.

Representa a transcrio de um segmento de uma das cadeias da hlice de

DNA.

A molcula de mRNA bem maior do que a de protena por ele formada

(p/q so necessrios 3 nucletidos para codificar um aminocido).

Cada mRNA tem uma cauda de poli-A (vrios cidos adenlicos) adicionada
no interior do ncleo celular.

Na outra extremidade do mRNA (extremidade 5), um pequeno capuz (cap)

nucleotdico adicionado por outras enzimas.

O DNA transcreve os mRNAs que vo ser traduzidos em protenas.

 rRNA

muito mais abundante do que os outros tipos de RNA.

Constitui 80% do RNA celular.

Existe combinado com protenas, formando os ribossomas.

Quando presos a filamentos de mRNA, os ribossomas formam os polirribossomos,

onde tem lugar a sntese de protenas.

Cada ribossoma constitudo por duas subunidades que se prendem de modo

reversvel no incio da sntese da molcula protica, separando-se quando a protena
est terminada.

Os ribossomos das mitocndrias e dos cloroplastos so iguais aos das clulas

procariticas.

De um modo geral:
O mRNA leva a informao gentica (do ncleo para o citoplasma celular)
para a sequncia de aminocido;
O tRNA identifica e transporta os aminocidos at os polirribossomas, que
fornecem suporte molecular para a sntese protica.

RNAp
Uma enzima copia uma fita de DNA (a fita molde) para fazer a fita de RNA
complementar usando como substrato ribonucleosdeos trifosfatadose

Mecanismos moleculares de transcrio pelas RNA Polimerase I, II e III e modificaes

ps transcricionais dos transcritos primrios.

Nos ncleos das clulas Eucariticas, encontram-se trs tipos de RNA polimerase
DNA dependentes:

1) A RNA polimerase I, responsvel pela sntese de cerca de 80% da totalidade do

RNA celular, localiza-se no nuclolo, transcrevendo os genes dos RNA ribossomais,
que conduzem produo dos rRNA 18S; 5,8S e 28S. Esta polimerase insensvel
inibio pela -amanitina.
2) A RNA polimerase II, responsvel pela sntese de cerca de 2% do RNA celular,
localiza-se no nucleoplasma, e catalisa a sntese dos produtos primrios precursores
 dos RNA mensageiros, que do origem ao hmRNA nuclear. A RNA polimerase II
inibida pela -amantina a baixa concentrao (~0,1 g. ).

3) A RNA polimerase III, responsvel pela sntese de cerca de 20% dos RNA
celulares, est igualmente localizada no nucleoplasma, e catalisa a sntese dos RNA de
transferncia tRNA e outros pequenos RNA que incluem o rRNA 5S, o snRNA e
snoRNA. A RNA polimerase III animal sensvel inibio pela -amantina a
concentraes de ~500 , mas a RNA polimerase III de levedura e a de insecto
so insensveis a este inibidor

Mecanismos de regulao de transmisso em clulas eucaritica:

Nos organismos superiores, assiste-se, ao longo da vida, a importantes fenmenos de

diferenciao celular e desenvolvimento que do origem aos diversos fentipos celulares. O
fentipo celular, caracterizado pelo conjunto de funes especficas de clula diferenciada,
resulta do perfil qualitativo e quantitativo das protenas produzidas na clula, a cada
instante. Os mRNA que lhes do origem exprimem-se a partir de um mesmo genoma,
comum a todas as clulas do organismo. A importante diversidade fenotpica gerada resulta
da expresso diferencial e muitas vezes sequencial de genes ou de grupos de genes que
actuam em cascata.
Est actualmente demonstrado que principalmente a nvel de transcrio que se d o
controlo da expresso gentica subjacente diferenciao celular e ao desenvolvimento dos
organismos superiores.
Este modo de controlo da actividade dos genes pode ser demonstrado experiencialmente,
com o recurso a mtodos aplicveis ao estudo tanto de procariotas como eucariotas,
permitindo determinas directamente o RNA transcrito de um determinado gene e a
acumulao de protena correspondente.
Est provado que a regulao da transcrio dos genes resulta em ltima anlise da
interveno de factores proteicos que interagem com sequncias nucleotdicas especficas
situadas na maior parte das vezes a montante dos genes, e que constituem stios promotores
da transcrio, assim como as prprias RNA polimerases.

Descoberta do Cdigo Gentico:

Em 1865, Gregor Mendel estabeleceu pela primeira vez os padres de hereditariedade de
algumas caractersticas existentes em ervilheiras, mostrando que obedeciam a regras
estatsticas simples. Embora nem todas as caractersticas mostrem estes padres de
hereditariedade mendeliana, o trabalho de Mendel provou que a aplicao da estatstica
gentica poderia ser de grande utilidade. Desde essa altura, padres mais complexos de
hereditariedade foram demonstrados.
A partir da sua anlise estatstica, Mendel definiu o conceito de alelo como sendo a unidade
fundamental da hereditariedade. O termo "alelo" tal como Mendel o utilizou, expressa a
ideia de "gene", enquanto nos nossos dias ele utilizado para especificar uma variante de
um gene.
S depois da morte de Mendel que o seu trabalho foi redescoberto, entendido (incio do
sculo XX) e lhe foi dado o devido valor por cientistas que ento trabalhavam em
problemas similares.
Mendel no tinha conhecimento da natureza fsica dos genes. Actualmente sabemos que a
informao gentica est contida no DNA e manipulao desse mesmo DNA pode alterar a
hereditariedade e as caractersticas dos organismos.

Mecanismo molecular de traduo:

A traduo ocorre em trs etapas (iniciao, alongamento e terminao), nas quais a

informao presente no mRNA e organizada em codes (conjunto de 3 nucletidos),
reconhecida pelos anticodes presentes nos tRNAs que transportam os resduos de
aminocidos. Cada codo do mRNA e o respectivo aminocido so incapazes de se
reconhecer mutuamente, sendo necessrio um adaptador que possibilite esse
reconhecimento. Esta funo de adaptador ento executada por molculas de tRNA que
servem de ponte entre os aminocidos e o mRNA, de forma a ser permitida a traduo da
informao codificada no mRNA, em protena nos ribossomas.

O processo de sntese proteica iniciado em geral pelo codo AUG (codo de iniciao)
que especfica, tendo por base o cdigo gentico, o aminocido metionina. Todas as
protenas recm-sintetizadas contm metionina como primeiro aminocido, que
frequentemente clivado pouco depois por uma amino peptidase.

A traduo iniciada com a formao de um complexo de iniciao ao nvel do codo de

iniciao (AUG), que consiste na cadeia de mRNA, num tRNA com o anticodo
complementar (UAC) e carregado com o primeiro aminocido (metionina) (vide formao
do complexo aminoacil-tRNA); e na ribossomal 40 S, ligados numa sequncia de
reconhecimento especfica do mRNA (terminal cap). Nos eucaritas, o tRNA iniciador
(tRNAMet) inicialmente posicionado na subunidade 40 S com a ajuda de um factor de
iniciao (eIF), ainda antes da ligao ao mRNA.
Aps a formao do complexo de iniciao d-se a ligao da subunidade ribossomal 60S a
este complexo (formando-se o complexo de incio 80S, vide ribossomas) e iniciada a
etapa de alongamento da cadeia peptdica. Nesta altura os factores de incio desligam-se e o
ribossoma est pronto a receber o segundo aminoacil-tRNA e a formar a primeira ligao
peptidica catalizada por uma peptidil-transferase.

As duas subunidades do ribossoma contm 3 locais adjacentes para a associao s

molculas de tRNA: locais aminoacilo (A), peptidilo (P) e de sada (E). No decorrer do
processo, as molculas de tRNA ligam-se numa primeira fase ao local A, sendo depois
deslocadas para o local P e finalmente para o local E.

A elongao tem incio quando o anticodo do segundo aminoacil-tRNA encontra o local

A, complementar do codo do mRNA existente nesta posio. Este processo dependente
de GTP e de determinados factores de elongao. Simultaneamente, o primeiro t-RNA
deslocado para o local P (e libertado posteriormente atravs do local E) ficando o peptidil-
tRNA na posio A. Seguidamente, o ribossoma desloca-se uma distncia equivalente a um
tripleto, em relao ao mRNA, o que expe o codo seguinte (local A) e permite a
aceitao de um novo aminoacil-tRNA no local A.

A terminao da sntese da cadeia peptdica ocorre quando, ao nvel do local A, surge um

dos codes de terminao (UAA, UAG e UGA). Para cada um dos referidos 3 codos no
existe correspondncia para nenhum dos aminocidos (ver cdigo gentico) e a sntese
proteica bloqueada. A terminao requer um factor de dissociao (e-RFn), que se liga ao
ribossoma na presena de GTP. Com a formao deste complexo, o factor de dissociao
tem a capacidade de reconhecer o codo de terminao e induzir a hidrlise da ligao
aminoacil simultaneamente com a hidrlise do GTP com subsequente libertao do
polipptido e do complexo RF+GDP.
Posteriormente sua sntese, a protena nascente pode sofrer modificaes ps-traduo
(protelise parcial e glicosilao), as quais so essenciais para que essa mesma protena se
possa tornar biologicamente activa.

Captulo III: Gentica Molecular Mecanismo de sntese do DNA

O DNA um polmero de nucletidos unidos entre si por ligaes de hidrognio, nas

clulas esto dispostos em dupla fita sendo que cada fita esta orientada em sentido contrario
a outra, por este motivo dito anti-paralelo, os nucletidos so compostos por acares as
pentoses, radicais fosfatos e bases azotadas As bases azotadas so:
Adenina;
Guanina;
Citosina;
Timina.

Os nucletidos de uma fita da molcula de DNA podem interagir com os nucletidos da fita
complementar atravs de pontes de hidrognio entre suas bases azotadas, sendo que a
Adenina se liga por meio de duas pontes de hidrognio Timina, e a Citosina se liga
atravs de trs pontes com a Guanina.
A replicao semi-conservativa do DNA exige que duas cadeias polinucleotdicas que
formam a hlice do DNA se separem, de modo a expor as bases que iro orientar o
emparelhamento dos nucletidos para formao das novas cadeias complementares s
cadeias moldes.
A separao de duas cadeias da hlice do DNA ocorre medida que as novas cadeias vo
sendo sintetizadas. A regio de separao das cadeias tem a forma de uma letra Y e
denominada forquilha de replicao.
Sntese Semi-descontnua de DNA

Experincias mostraram que ambas as cadeias filhas so sintetizadas na forquilha de

replicao por um complexo de enzimas que inclui a polimerase III do DNA. No entanto,
as duas cadeias moldes so antiparalelas, Numa delas a sntese da cadeia complementar
ocorre no sentido 5 => 3, mas na outra cadeia essa sntese teria que se dar no sentido
inverso, ou seja, 3 => 5. Contudo, as duas cadeias so sintetizadas pela polimerase III do
DNA, que s catalisa o crescimento da cadeia no sentido 5 => 3.

A explicao para esse paradoxo que, na forquilha de replicao, uma das cadeias
sintetizada continuamente por uma polimerase que se move no mesmo sentido do
deslocamento da forquilha. J a cadeia com polaridade inversa sintetizada no sentido
inverso ao do deslocamento da forquilha de replicao, portanto, tambm no sentido 5 =>
3. Isso possvel porque, nesse ltimo caso, a polimerase sintetiza segmentos
polinucleotdicos curtos, que so, posteriormente, unidos para formar a nova cadeia
contnua.

Na figura abaixo podemos ver as duas cadeias sintetizadas no sentido 5 => 3.

Figura 1 -Replicao do DNA. Ambas as cadeias so sintetizadas no sentido 5 => 3. A

cadeia leading sintetizada continuamente, enquanto a cadeia lagging sintetizada
descontinuamente.

A cadeia que cresce no mesmo sentido que o deslocamento da forquilha de replicao, e

cuja sntese ocorre continuamente, chamada de cadeia leading

A cadeia que cresce no sentido oposto ao deslocamento da forquilha de replicao, e cuja

sntese ocorre descontinuamente, chamada de cadeia lagging.

Esse modo de replicao do DNA, em que uma das cadeias sintetizada continuamente e a
outra, descontinuamente, chamado de sntese semidescontnua. Costuma-se dizer tambm
que a sntese do DNA na forquilha de replicao assimtrica, pois numa das cadeias
(cadeia leading) ela ocorre continuamente, enquanto que na outra (cadeia lagging) ela
ocorre de modo descontnuo, em fragmentos. Esses fragmentos so denominados
fragmentos de Okazaki.
A descoberta dos fragmentos de Okazaki

A hiptese da sntese descontnua da cadeia lagging foi corroborada por uma

experincia realizado pelo pesquisador Reiji Okazaki1, no final da dcada de 1960. Okazaki
forneceu, a bacterias em diviso, timina tritiada, isto , um desoxirribonucleotdeo com a
base timina (=timidina) marcado com tomos de trtio (um istopo radioactivo do
hidrognio).

Esse precursor do DNA, altamente radioactivo, foi deixado em contacto com as bactrias
por apenas alguns segundos, de modo que somente o DNA recm-sintetizado, ou seja,
aquele imediatamente aps a forquilha de replicao, se tornasse radioativo. O DNA foi
ento isolado e analisado, mostrando que parte da radioactividade estava contida em
fragmentos de cadeias polinucleotdicas, com cerca de mil a dois mil nucletidos.

Quanto maior fosse o tempo de contacto das bactrias com o precursor radioactivo maior
era quantidade de radioactividade em cadeias de DNA de grande tamanho. A concluso foi
que os nucletidos eram primeiramente polimerizados em fragmentos de mil a dois mil
nucletidos, os quais eram, em seguida, reunidos para formar cadeias longas.

Esses pequenos pedaos de DNA que aparecem transitoriamente durante a sntese da cadeia
lagging foram denominados fragmentos de Okazaki.

A replicao um processo no qual uma molcula de DNA dupla fita duplicado. Devido
ao facto do DNA conter a "informao" que fundamental para codificar todas as protenas
e RNAs necessrios para se "construir" um organismo, atravs da replicao que os seres
vivos conseguem dar origem a um novo ser que possui as mesmas caractersticas de quem o
originou. A replicao tambm explica como ns, seres multicelulares, fomos formados a
partir de uma nica clula - o zigoto. Portanto, a replicao do material gentico
importante para todas as formas de vidas conhecidas. No entanto, os mecanismos de
replicao dos procariotas e eucariotas no so idnticos. Como cada fita de DNA contem a
mesma informao gentica, qualquer uma das duas fitas podem servir como molde por
isso a replicao do DNA dita semi-conservativa.

Nas clulas a replicao deve acontecer antes da diviso celular. Em procariotas a

replicao ocorre entre as divises celular enquanto nos eucariotas ocorre na fase S da
interfase. A replicao tambm pode ser reproduzida em laboratrio atravs de um ensaio
conhecido como PCR.
A replicao do DNA dita semi-conservativa porque na formao de uma nova cadeia
nucleotdica tem-se como referncia uma cadeia nucleotdica molde (ou me) do DNA que
est a ser replicado.

O DNA no se replica de forma autnoma. Para que o processo de replicao se inicie

necessrio a actuao de uma enzima, a DNA polimerase. A enzima liga-se cadeia de
DNA e desliza sobre esta, quebrando as ligaes entre as duas cadeias de nucletidos -
ligaes por pontes de hidrognio - ficando ento as duas cadeias de DNA separadas. Em
seguida, os nucletidos livres existentes no ncleo ligam-se, por complementaridade de
bases, s cadeias de DNA e a partir de uma cadeia original de DNA formam-se duas novas
cadeias.

Etapas da Polimerizao do DNA:

A replicao inicia-se numa zona da cadeia denominada tripleto de iniciao, neste local as
helicases comeam a abrir a cadeia para ambos os lados da origem quebrando as ligaes
de hidrognio existentes entre as bases complementares, formando-se um replico que
constitudo por duas forquilhas de replicao. Em seguida liga-se s cadeias de DNA a
enzima RNA primase que vai sintetizar um primer que consiste numa sequncia de bases de
RNA que vo iniciar a sntese visto que a DNA polimerase III no tem a capacidade de o
fazer, devido a ausncia de grupos hidroxilos -OH expostos. Aps a sntese do primer a
DNA polimerase III vai continuar o processo que ocorre no sentido da extremidade 5' para
a extremidade 3' da nova cadeia. Como a DNA polimerase vai actuar para ambos os lados
da origem de replicao, por cada cadeia simples de DNA existente vai existir uma parte da
nova cadeia que vai ser sintetizada na direco da replicao, essa cadeia sintetizada de
modo continuo e denomina-se cadeia contnua e existe uma outra parte da cadeia em que a
direco da replicao contrria direco da sntese, esta cadeia vai ser sintetizada
descontinuamente, isto , a RNA primase vai sintetizar vrios primer's ao longo da cadeia
comeando o mais prximo da origem de replicao e terminando no mais distante e a
partir da vo formar-se fragmentos, denominados fragmentos de Okazaki constitudos pelo
DNA, enquanto que entre estes fragmentos vo ainda existir os primer's, que sero
removidos e substituidos por DNA, pela aco de uma outra DNA polimerase, a DNA
Polimerase I. Como a DNA polimerase no consegue estabelecer a ligao entre esses
nucletidos e os que se encontram nas extremidades dos fragmentos de Okazaki, formam-
se lacunas entre o grupo fosfato de um, e o carbono 3' do outro. Esses nucletidos so
posteriormente ligados pela DNA ligase. A esta cadeia chama-se cadeia descontnua. As
partes finais da cadeia de DNA denominadas telmeros so sintetizadas pela RNA
telomerase por um processo de transcrio inversa, isto , esta enzima sintetiza DNA tendo
por molde RNA. Durante todo o processo de replicao actuam outras enzimas entre elas as
SSB e as topoisomerases que tm como funo evitar o enrolamento da cadeia durante a
sntese.

Replicao

Cada fita de um duplex de DNA parental actua como molde para a sntese de uma fita-filha
e permanece unida a esta nova fita, formando um duplex com a mesma (mecanismo semi-
conservativo). As novas fitas so sintetizadas no sentido 5 3.
A replicao tem incio numa sequncia denominada de origem. Cada molcula de DNA
cromossmico eucaritico contm mltiplas origens de replicao.
As DNA polimerases, diferentemente das RNA polimerases, no so capazes de promover
o desenrolamento das fitas de duplex de DNA e no podem iniciar a sntese de novas fitas
complementares sobre as fitas-moles.
Numa forquilha de replicao, uma fita-filha sofre replicao contnua. A outra fita (fita
retardada) formada a partir de uma srie de fragmentos de Okazaki descontnuos, a partir
de iniciadores sintetizados com algumas centenas de nucletidos entre eles.
Os ribonucletidos da extremidade 5de cada fragmento de Okazaki so removidos e
substitudos pela expresso da extremidade 3do fragmento de Okazaki seguinte. Como
etapa final, os fragmentos de Okazaki adjacentes so unidos pela DNA ligase.
As hlices usam a energia da hidrlise de ATP para a separao das fitas parentais (moldes)
de DNA. A primase sintetiza um pequeno iniciador que tem, inicialment, a sua extremidade
3estendida por uma DNA polimerase , resultando numa pequena fita-filha.
A maioria do DNA das clulas das clulas eucariticas sintetizada pela Pol, que substitui
a Pol e continua a extenso da fita-filha no sentido 5 - 3. A Pol permanece estvel
associada ao molde por meio da ligao de uma protena Rfc que, por sua vez, se associa
PCNA, a uma protena trimtrica que circula a dupla hlice de DNA resultante.
A replicao de DNA geralmente ocorre por um mecanismo bidireccional no qual duas
forquilhas de replicao so formadas sobre a origem e se movem em sentidos opostos, e as
duas fitas-moldes so copiadas em cada forquilha.
A sntese do DNA eucaritico in vivo regulada pelo controle da actividade das hlices
MCM que iniciam a replicao de DNA em origens mltiplas, espaadas sobre o DNA
cromossmico.
Mecanismo geral e molecular de replicao em procarioticas e eucariticas:

Em clulas eucariticas, a replicao do genoma ocorre durante uma subfase especfica do

ciclo celular, a fase S. dada a extenso do genoma eucaritico, a replicao inicia-se
simultaneamente em mltiplos stios, de modo a assegurar a replicao da totalidade do
genoma num intervalo de tempo correspondente durao da fase S, aproximadamente 6-8
horas. A identificao de sequncias que funcionam como origens de replicao foi
efectuada com sucesso em leveduras, sendo ainda insuficiente a sua caracterizao em
eucariotas superiores.

Nos eucariotas, a activao das diferentes origens de replicao obedece a um complexo

programa de regulao temporal e espacial, ainda insuficientemente compreendido. Os
estudos iniciais sobre a replicao de genomas eucariticos utilizaram a tcnica de
autorradiografia de fibras de DNA que, quando conjugada a metodologia de pulso-caa,
permite acompanhar a dinmica de replicao do DNA e a individualizao de replies.
Estes trabalhos demonstraram:
1) Que os replies ocorrem em agregados;
2) Que as origens de replicao de um mesmo agregado so activas
simultaneamente;
3) Que agregados de replices diferentes podem ser replicados em perodos
diferentes da fase S.

Para um mesmo tipo celular mantendo-se o padro de actividade transcricional, sequncias

de DNA especficas so replicadas tambm em subfases especficas da fase S. No seu
conjunto, estes dados indicam que os agregados de replices que so um reflexo de
organizao especial do genoma, correspondem a unidades funcionais genmicas, sujeitas a
um programa de activao temporal bem definido. Este conceito funcional aplicado aos
replices reforado pelo achado que estes correspondem, frequentemente, a unidades
transcricionais, situando-se as zonas de iniciao de replicao na proximidade de
elementos de regulao transcricional.
Para o estudo da replicao do DNA no interior do ncleo tem sido utilizado a incorporao
de precursores modificados em ncleos intactos ou permeabilizados, com subsequente
deteco do DNA substitudo por tcnicas imunocitqumicas. Os resultados obtidos com
esta abordagem demonstraram que a sntese de DNA ocorre, simultaneamente, em
numerosos stios discretos do ncleo, denominados focos de replicao. Este achado
compatvel com os da autorradiografias de fibras de DNA que demonstraram que em
eucariticas se verifica actividade simultnea de mltiplos replices dispersos no genoma.
A comparao do numero de focos de replicao do nmero estimado de replices em
actividade dado momento permitiu sugerir que cada foco de replicao corresponde
aproximadamente a 40 replices.
No incio da fase S, os focos de replicao so pequenos e numerosos e distribuem-se mais
ou menos, homogeneamente pelo nucleoplasma, sobre regies eucromticas. Na segunda
metade da fase S, os focos so maiores dimenses e menos numerosos e organizam-se
segundo padres variveis o tipo celular, dependendo da distribuio da heterocromatina
sobre a qual se localizam. De um modo geral a heterocromatina associada ao nuclolo
replica-se na poro intermdia nucleoplasmticas e heterocromatina perifrica podem
dependendo do tipo celular, replicar quer na poro intermdia, quer na poro terminal da
fase S.
O estudo da replicao do DNA no contexto do ncleo celular permite concluir que
sequncias que replicam numa subfase especfica da fase S tm um arranjo espacial
caracterstico, segundo padres morfolgicos que correspondem a compartimentos
cromatnicos individualizveis. Uma vez que em cada subfase da fase S se replicam
conjuntos de sequncias bem definidas, os dados obtidos nos estudos de replicao in situ
apontam para um elevado nvel de organizao tridimensional do genoma interfsico.
Indicam tambm que a activao de agregados de replices ocorre de forma integrada com
a sua distribuio em compartimentos nucleares distintos. No seu conjunto sugerem um
papel para a organizao do ncleo na replicao do genoma.

Mecanismos de Reparao do DNA:

Todos os organismos vivos possuem DNA, e todas as molculas de DNA possuem um

mecanismo de reparao que evita que ocorram erros no momento da sua duplicao.

Os mecanismos de reparao do DNA so guiados, principalmente, por protenas

codificadas pelo prprio DNA (entre as quais, a DNA-Polimerase a principal). Estas
protenas reconhecem eventuais danos na sequncia de nucletidos durante o processo de
replicao, e actuam promovendo a substituio da rea danificada por uma semelhante
original. O processo possui uma margem de erro mnima, e evita que haja morte celular ou
mutaes decorrente de tais danos.

H casos em que os danos no podem ser reparados naturalmente (como no caso de quebras
na cadeia de DNA causadas por radiaes ionizantes, ou no caso do surgimento de dimeros
de pirimidina), e nestes casos a replicao (tambm coordenada pela mesma DNA-
Polimerase) abortada e a clula morre. Mas h casos em que simples trocas, inverses,
adies ou deleces de sequncias de nucletidos passam despercebidas pelos mecanismos
de reparao, fazendo com que a clula se reproduza mesmo com DNA danificado, gerando
linhagens mutantes, nas quais a DNA-Polimerase reconhecer a rea afectada como
"normal".

Reparao antes da replicao:

 Mecanismos de reparao do DNA

i)Fotorreactivao

Em E.coli danos causados por UV so revertidos parcialmente se as clulas, aps a

radiao UV, so expostas a luz na banda do azul, do espectro visvel.
O processo dependente da activao de uma protena enzima de fotorreactivao(PRE).
A reparao por fotorreactivao parece no ser essencial em E.coli.
A enzima PRE no foi detectada em eucariotas.

ii)Reparao por exciso de bases azotadas e de nucletidos

Mecanismo de reparao do DNA em procariticas e eucariotas, no dependentes da luz

O erro existente numa das cadeias da dupla hlice do DNA reconhecido e

removido por aco de uma nuclease;
Uma DNA polimerase (DNApolimeraseI em E.coli) preenche o local de
exciso, colocando nucletidos por complementaridade com os da cadeia
intacta;
A enzima DNAligase estabelece a ligao entre a extremidade 3-OH da
sequncia de nucletidos inserida e a restante cadeia.

A reparao por exciso de bases azotadas (BER) reconhece e substitui pequenas alteraes
nas bases azotadas do DNA, resultantes de mutaes espontneas ou da aco de agentes
qumicos.
Estes erros no impedem a replicao e transcrio do DNA.
A reparao por exciso de nucletidos (NER) est relacionada com a reparao de
mutaes que distorcem a configurao normal da molcula de DNA, como as ocasionadas
por radiao UV.
Estes erros impedem a replicao e transcrio do DNA.
 Reparao aps a replicao: reparao mismatch, reparao por recombinao e
sistema de reparao SOS

Um dos erros mais comuns consiste na insero, pela DNApolimeraseIII, de um nucletido

errado (no complementar). Em bactrias este tipo de erro ocorre 1 vez em cada 100 000
inseres (1x10-5).
A prpria enzima tem capacidade para rever e corrigir os erros (pro-ofreading),
comportando-se como uma exonuclease. Assim cerca de 99% dos erros so corrigidos. A
taxa de erro final de ~ 1x 10-7.

i) Reparao mismatch

Mecanismo proposto por Robin Hollidayno final dos anos 70 para explicar a correco de
erros resultantes da insero errada de nucletidos na replicao.
O par de nucletidos no complementar reconhecido, mas o sistema de reparao sabe
qual deles o incorrecto. (????? CHINS!!!!)

Em E.coli o processo de reconhecimento baseia-se na metilao do DNA. Uma enzima, a

adenina metilase, reconhece a seguinte sequncia do DNA :

5... GATC ... 3

3... CTAG ... 5

A enzima adenina metilase adiciona um grupo metilo(CH3) a cada nucletido de adenina,

modificao que estvel durante todo o ciclo celular.

Aps um ciclo de replicao, as cadeias sintetizadas de novo permanecem

temporariamente no metiladas, o que permite que a enzima de reparao
bacteriana(DNApolimeraseI) reconhea o erro. A DNApolimerase liga-se cadeia no
metilada, e uma endonuclease corta o fragmento de DNA que contm o erro.

ii)Reparao por recombinao

Sistema de reparao proposto por Miroslav Radman em E. coli

Ocorre quando o dano na cadeia de DNA no foi corrigido por outros sistemas e a
replicao ocorre com falhas.

A enzima RecA determina um processo de troca por recombinao, em que a falha na

cadeia de DNA sintetizada de novo preenchida pela insero de um segmento da cadeia
complementar intacta.
A falha criada na cadeia complementar posteriormente preenchida pelo mecanismo de
reparao que envolve a DNA polimeraseI e a DNA ligase
 iii) Sistema de reparao SOS

Sistema que em E. coli envolve um conjunto de DNA polimerases (Translesional

polimerases) que permitem que a replicao prossiga apesar de existir um erro numa das
cadeias do DNA.

iv) Reparao de leses em ambas as cadeias (double strand break repair)

Em clulas eucariotas, quando ambas as cadeias de DNA sofrem leses (ex. radiao
ionizante), um mecanismo de reparao utiliza o DNA do cromossoma homlogo no
danificado para reparar a mutao.

O processo de reparao ocorre normalmente durante o final da fase S/ incio de G2, aps a
replicao.
Em leveduras, sabe-se que esto envolvidas pelo menos 5 protenas designadas complexo
RAD52.

Noo do ciclo celular / Mecanismos de diviso Celular: Mitose e Meiose:

Processos de diviso nuclear

Em organismos unicelulares, a clula cresce ao absorver substncias do meio e utilizando
esses materiais na sntese de compostos celulares. Quando essas clulas atingem um dado
tamanho dividem-se, obtendo-se duas clulas filhas com metade do tamanho, que crescero
e assim sucessivamente.
Em organismos multicelulares, pelo contrrio, a diviso celular e o aumento do volume
celular so o meio pelo qual o organismo cresce. Em todos os casos as clulas filhas so
geneticamente iguais clula progenitora.
A diviso celular consiste em dois processos sobrepostos ou consecutivos: mitose e
citocinese. A mitose origina dois ncleos geneticamente idnticos, enquanto a citocinese
separa o citoplasma, colocando os ncleos filhos em clulas separadas.
As clulas que se dividem activamente passam por uma sequncia definida de
acontecimentos, que se designa ciclo celular. Dependendo do tipo de clula, o ciclo
requerer tempos diferentes. Factores externos, como a temperatura ou a disponibilidade de
nutrientes tambm afectam a durao do ciclo e respectivas etapas.
O ciclo celular divide-se em interfase e mitose (ocupando geralmente entre 5 e 10% do
ciclo).
A interfase, ou seja, a fase entre duas divises mitticas, j foi considerada a fase de
repouso da clula mas tal no , de todo, verdade. Esta parte do ciclo pode ser subdividida
em trs partes:

Fase G1 - a designao desta etapa

deriva de gap = intervalo, e decorre
imediatamente aps a mitose. um
perodo de intensa actividade
bioqumica, no qual a clula cresce em
volume e o nmero de organitos
aumenta. Para que a clula passe para
a fase seguinte do ciclo necessrio
que atinja um ponto crtico designado
ponto de restrio ou start, momento
em que se do mudanas internas;
Fase S - esta a fase de sntese
(S) de DNA e, aparentemente, requer
um sinal citoplasmtico para que se
inicie. Cada cromossoma duplicado
longitudinalmente, passando a ser
formado por dois cromatdeos. Nesta
etapa numerosas protenas so
igualmente sintetizadas;

Fase G2 - esta fase conduz directamente mitose e permite formar estruturas com
ela directamente relacionadas, como as fibras do fuso acromtico.
 Mitose

A mitose um processo contnuo mas geralmente consideram-se, por uma questo de

facilidade, quatro etapas: Profase, Metafase, Anafase e Telofase. No decorrer destas etapas,
o material gentico sintetizado na fase S do ciclo celular dividido igualmente por dois
ncleos filhos. Este processo est associado diviso de clulas somticas.

A mitose iniciada apenas em presena de um factor promotor da mitose (MPF)

proteico citoplasmtico, que provoca a condensao dos cromossomas. As variaes de
concentrao de MPF esto relacionadas com as variaes de uma outra protena conhecida
por ciclina. Aparentemente, quando a ciclina atinge uma certa concentrao no citoplasma,
o MPF activado. Durante a mitose a ciclina rapidamente destruda, aumentando
novamente durante o ciclo seguinte.

Um dos primeiros sinais do prximo incio da mitose o surgimento de uma faixa

relativamente densa de micrtubulos logo abaixo da membrana citoplasmtica. Esta faixa
envolve o ncleo num plano que corresponder ao plano equatorial do fuso acromtico
mittico. Esta faixa desaparece aps a formao do fuso acromtico mas corresponder ao
local onde se forma a separao entre as duas clulas filhas.

A durao da mitose varia com o tipo de clula, de tecido e de organismo.

As etapas da mitose, propriamente dita, decorrem da seguinte forma:

Profase - vista ao M.O.C. a transio entre a fase G2 e a Profase no ntida.

Durante esta etapa, a mais longa de todo o processo mittico, a cromatina condensa-se
gradualmente em cromossomas bem definidos. Durante este processo visvel que cada
cromossoma compostos por dois cromatdeos enrolados um no outro, pois o DNA foi
duplicado durante a fase S. No final da Profase os cromatdeos esto visveis lado a lado,
unidos pelo centrmero, uma sequncia especfica de DNA que ligar a molcula s fibras
do fuso acromtico. A presena do centrmero divide cada cromatdeo em dois braos.
durante esta fase que surge em volta do ncleo a chamada zona clara, que contm os
microtbulos. Estes inicialmente esto orientados ao acaso mas no fim da etapa esto
alinhados paralelamente superfcie do ncleo, ao longo do eixo do fuso acromtico. O
nuclolo desintegra-se e, determinando o final da etapa, o envelope nuclear desaparece;

Metafase - esta etapa inicia-se com a formao do fuso acromtico, uma estrutura
tridimensional larga no centro e afilada nas extremidades, que ocupa a rea anteriormente
ocupada pelo ncleo. As fibras do fuso so feixes de microtbulos e vo-se ligar a
complexos proteicos especializados - cinetcoros - desenvolvidos nos centrmeros durante
a Profase. Estes microtbulos do cinetcoros estendem-se, juntamente com os microtbulos
polares, para os plos da clula. Atravs deles vai ocorrer o alinhamento dos cromossomas
no centro do fuso, formando a placa equatorial. Nesta situao os cromatdeos esto em
posio de se separarem. O alinhamento das fibras do fuso acromtico ocorre a partir dos
centros de organizao dos microtbulos. Em animais e protistas esse centro organizador
o centrossoma, uma nuvem de material amorfo que rodeia o par de centrolos. Em clulas
vegetais, que no contm centrossomas, os organizadores existem e garantem a formao
do fuso, mesmo que os plos sejam pouco definidos;

Anafase - esta etapa, muito breve, comea bruscamente, com a separao

simultnea de todos os cromatdeos pelos centrmeros. Cada cromatdeo toma agora para si
a designao de cromossoma. medida que os cinetcoros se deslocam em direco a
plos opostos os braos dos cromossomas so arrastados, sendo as pontas dos braos mais
longos as ltimas a serem separadas. Este movimento em direco aos plos parece dever-
se ao encurtamento dos microtbulos junto ao cinetcoro, como se este "comesse" o
caminho ao longo das fibras. No final da Anafase dois conjuntos idnticos de cromossomas
encontram-se em cada plo;

Telofase - nesta etapa final da mitose, a separao dos dois conjuntos de

cromossomas finalizada pela formao da membrana nuclear, a partir de retculo
endoplasmtico rugoso. O fuso acromtico desaparece e os cromossomas relaxam
novamente, tornando-se indistintos. O nuclolo reconstitudo e cada ncleo entra na
interfase.

Tal como referido anteriormente, a citocinese um processo que se sobrepe mitose

e corresponde diviso do citoplasma.

Na maioria das clulas decorre por invaginao da parede celular, se presente e pela
constrio da membrana citoplasmtica. No entanto, em clulas vegetais a separao ocorre
atravs da formao do fragmoplasto.

Esta estrutura um sistema de fibras semelhantes s do fuso, formadas por

microtbulos mas organizados perpendicularmente ao eixo do fuso. A esta rede de fibras
vem juntar-se vesculas do Golgi contendo substncias ppticas para formar a lamela
mdia. As suas membranas fundem-se para formar a membrana plasmtica em formao,
do centro para o exterior, em direco parede celular j existente. Os plasmodesmos
forma-se igualmente neste momento, quando tbulos de retculo endoplasmtico liso so
apanhados no meio desta rede. Por ltimo, cada clula filha deposita a sua parede celular
sobre a lamela mdia assim formada.

Meiose
A meiose ocorre apenas em clulas diplides especializadas e apenas em ocasies
determinadas do ciclo de vida de um organismo. Atravs deste fenmeno nuclear, uma
nica clula diplide d origem a quatro clulas haplides, designadas gmetas ou esporos.

Um gmeta uma clula que se une a outra semelhante para formar um zigoto
diplide. Pelo contrrio, um esporo pode formar um organismo haplide sem se fundir com
outra clula.
 A meiose consiste em duas divises nucleares sucessivas, designadas I e II. Cada uma
destas divises apresenta na sua essncia as mesmas etapas que a mitose:

Profase I - nesta etapa os pares de cromossomas tornam-se visveis com longos

filamentos delgados. Tal como na mitose, j foram duplicados durante a interfase
precedente, logo so constitudos por dois cromatdeos unidos pelo centrmero. No entanto,
nesta fase, o grau de condensao tal que parecem estruturas unas. Os cromossomas
homlogos emparelham de forma muito precisa, que se inicia em vrios pontos e depois
progredindo como um ziper que se fecha. Cada homlogo provm de um progenitor
diferente. Este emparelhamento - sinapse - fundamental para a ocorrncia de meiose, pelo
que este fenmeno no pode ocorrer em clulas haplides. Nesta altura os pares de
homlogos designam-se bivalentes. Durante a sinapse pedaos de cromatdeos soltam-se e
voltam a ligar-se, ao acaso entre os quatro cromatdeos presentes, processo designado
crossing-over. Estas trocas podem ser vistas ao microscpio pela formao de figuras em
forma de X designadas quiasmas. Ao longo da Profase os quiasmas e sinapses
desaparecem, tal como o nuclolo;

Metafase I - nesta etapa, tal como na mitose, o fuso acromtico torna-se visvel e os
microtbulos ligam-se aos centrmeros dos cromossomas bivalentes. Estes cromossomas
emparelhados deslocam-se, ento, para o centro da clula formado a placa equatorial, agora
com cada centrmero do par em lados opostos da placa;

Anafase I - esta etapa inicia-se com a separao dos cromossomas homlogos, que
se deslocam para plos opostos da clula;

Telofase I - nesta etapa a espiralizao dos cromossomas diminui, dando-lhes uma

aparncia alongada. Novas membranas nucleares so sintetizadas a partir de retculo
endoplasmtico rugoso enquanto se para gradualmente para a interfase. Finalmente, o fuso
acromtico desaparece e o nuclolo reorganiza-se. Saliente-se, no entanto, que estes
acontecimentos podem no ser to distintos, passando directamente da Telofase I para a
Profase II;

Profase II - no incio da segunda diviso os cromatdeos continuam unidos pelo

centrmero, pelo que esta diviso se parece muito com a mitose. Se a membrana nuclear
tiver sido refeita na Telofase I ir desaparecer, tal como o nuclolo, e os cromossomas iro
condensar novamente;

Metafase II - forma-se novamente o fuso acromtico e os cromossomas alinham-se

na placa equatorial;

Anafase II - os centrmeros dividem-se e afastam-se, levados pelos microtbulos do

fuso acromtico, levando os cromossomas simples para cada um dos plos;

Telofase II - reorganizao da membrana nuclear e nuclolo, com relaxao dos

cromossomas, formando ncleos interfsicos.
 Consequncias da Meiose :

Durante a meiose o material nuclear foi duplicado uma vez e dividido duas vezes, pelo
que cada clula filha apresenta metade do nmero de cromossomas da clula diplide
inicial. No entanto, mais importante que a reduo do nmero de cromossomas a
consequncia gentica do processo:
Na metafase I a orientao ao acaso dos bivalentes causa uma mistura de material
materno e paterno pelos dois ncleos filhos;
Devido ao crossing-over, cada cromossoma contm genes de origem materna e
paterna.

Se a clula inicial apresentar dois pares de cromossomas existiro 4 combinaes

possveis, se tiver trs pares sero 8 e se forem 4 pares de cromossomas, 16 combinaes
possveis. A frmula geral ser 2n, o que na espcie humana corresponde a 223 combinaes
possveis, ou seja, 8388608 possibilidades (e existem muitos organismos com nmero
superior de pares de cromossomas!). Acresce ainda o crossing-over para baralhar as coisas
e pode-se considerar impossvel que uma clula resultante de meiose seja igual clula que
lhe deu origem.

A meiose difere da mitose em trs aspectos fundamentais:

Consiste em duas divises sucessivas, originando 4 ncleos;

Cada um dos 4 ncleos haplide, contendo metade do nmero de cromossomas da
celula-me, diplide;
Os ncleos haplides produzidos contm combinaes genticas inteiramente
novas.

Por este motivo, as consequncias genticas e evolutivas da meiose so profundas.

Devido meiose e fecundao os organismos diplides existem numa variedade
de formas, mesmo entre os seres da mesma espcie.

Captulo IV: Sinalizao Celular

A sinalizao celular faz parte de um complexo sistema de comunicao que governa e
coordena as actividades e funes celulares. A habilidade que as clulas possuem em
perceber e correctamente responder ao seu ambiente envolvente, forma a base do
desenvolvimento, da reparao de tecidos, da imunidade e de outras funes de
homeostasia em tecidos. Erros existentes no processamento de informao celular so
responsveis por doenas como o cancro, a autoimunidade e diabetes. Ao se entenderem
melhor os processos de sinalizao celular, muitas doenas podero ser tratadas de maneira
mais eficaz e, em teoria, tecidos artificiais podero ser fabricados.
Evoluo da unicelularidade para a multicelularidade
Estudos com seres eucariticos unicelulares: Saccharomyces cerevisae

Tipos de molcula sinal:

o protenas
o pequenos pptidos
o aminocidos
o nucletidos
o esteris
o retinis
o derivados de cidos gordos
o gases dissolvidos

Tipos de sinalizao

a) Contacto directo clula-a-clula

necessrio que haja que haja grande proximidade fsica entre as clulas
especialmente importante durante o desenvolvimento e resposta imune

b) Sinalizao por secreo de molculas

 b1) sinalizao parcrina

Molculas sinal so secretadas e afectam apenas as clulas mais prximas

Molculas sinal no se difundem muito

b2) sinalizao autcrina

Uma clula segrega molculas sinal que se ligam a um receptor da prpria clula
Efeito comunidade

b3) sinalizao endcrina

Tipo especfico de clula secretora: clula endcrina

Hormonas
Efeito a longa distncia
Transporte via corrente Sangunea

b4) sinapses qumicas

Neurnios: clulas especializadas em comunicao

Prolongamentos longos

Sinalizao endcrina Vs sinalizao sinptica

 Sinalizao endcrina Sinalizao sinptica

Sinalizao via gap junctions

Mecanismos de transduo de sinal

Receptores ionotrpicos canais inicos

Ex.: canais de Na+, canais de K+, canais de Cl-

Receptores metabotrpicos ligao de molculassinal

Ex.: pptidos (insulina); catecolaminas (epinefrina)

A activao das cascatas de sinalizao por receptores metabotrpicos pode ser de dois
tipos distintos:
- unidireccionais quebra irreversvel de ligaes
- cclicas fosforilao reversvel de molculas

Benefcios e desvantagens das cascatas cclicas

Amplificao de sinal - uma nica molcula pode produzir uma resposta muitos
milhares de vezes superior ao sinal inicial.

Integrao de numerosos processos biolgicos - atravs da deteco da flutuao da

concentrao intracelular de vrios metabolitos, permitem a integrao destes sinais em
respostas metablicas.
 Sensibilidade e Flexibilidade - h um aumento de sensibilidade relativamente a
variaes de concentrao, permitindo modular a activao/desactivao de processos
biolgicos, bem como modular a sua amplitude.

Consumo elevado de energia - estas variaes constantes aumentam o gasto de ATP a

valores acima da taxa de turn-over de ATP das clulas (1-10 mmol/L/min).

Tipos de receptores celulares

Receptores ligados a enzimas:

Receptores TGF
Receptores de citosina
Receptores tirosino-quinase
Receptores de clula T
Receptores guanilil -ciclases

Receptores inicos:

Canais inicos, controlados por ligantes: neurotransmissores, cGMP

Receptores ligados a Protenas G Trimricas:

Ligantes: epinefrina, glucagon, serotonina, vasopresina, ACTH, adenosina

Receptores: sete hlices transmenbranares

Papel dos receptores transmembranares na transduo de sinal

Receptores transmembranares possuem estrutura conservada:

- 7 hlices hidrofbicas que atravessam a membrana celular.

- Terminal N contendo unidades de oligossacardeos
- Terminal C contendo serinas e treoninas que podem sofrer fosforilao.
- Ligao do mensageiro primrio a uma bolsa formada pelos domnios
transmembranares.

Transduo de Sinal:

As protenas de sinalizao encontram-se previamente ligadas ao receptor

 As protenas de sinalizao apenas se ligam ao receptor quando este activado

Os nveis dos segundos mensageiros como o , o cAMP e o IP3, so aumentados ou

ocasionalmente, reduzidos em resposta ligao de ligantes aos receptores de superfcie
celular. Essas molculas no proteicas de sinalizao intracelular, por sua vez regulam a
actividade das enzimas e das protenas no enzimticas.
Entre as protenas conservadas que actuam na diversas vias de transduo do sinal
encontram-se as protenas G monomricas (que so pequenas) e trimricas (grandes) que
so duas classes de protenas comutoras GTPase e as Proteno-quinases e fosfatases em
que qualquer activao do receptor de superfcie celular leva directamente ou
indirectamente a alteraes na fosforilao das protenas pela sua activao.

As proteno-quinases tm 2 tipos: as que accionam fosfato ao agrupamento hidroxil em

resduos tirosina e as que adicionam fosfato ao agrupamento hidroxil em resduos serina
e/ou treosina.
As fosfatases, que removem agrupamentos de fosfato, podem actuar em concreto com as
quinases para modular o funcionamento de vrias protenas, ligando-as ou desligando-as.
De acordo com os ltimos dados, o genoma humano codifica 500 proteno-quinases e 100
diferentes fosfatases. Em algumas vias de sinalizao, o prprio receptor apresenta
actividade quinase ou fosfatase intrnseca; em outras vias o receptor interage com quinases
citoslicas ou associadas membrana.
Em geral, cada proteno-quinase fosforila resduos especficos em conjunto de protenas-
alvo cujos padres de expresso so geralmente diferentes de acordo com o tipo celular.
Vrias protenas so substratos de mltiplas quinases, e cada evento de fosforilao sobre
um aminocido diferente modifica a actividade de uma determinada protena alvo de
diferentes formas, algumas vezes activando o funcionamento, outras o inibindo.
As protenas citoslicas que contm mltiplos domnios PDZ desempenham um papel
fundamental na organizao da membrana plamtica da clula ps-sinptica. O domin
PDZ foi identificafo como um elemento comum a vrias protenas citoslicas que se ligam
a protenas integrais de membrana. Esse domnio relativamente pequeno, contendo
aproximadamente 90 resduos de aminociods e se liga a sequncia de 3 resduos presentes
na extremidade C terminal das protenas-alvo.

A maioria dos receptores de superfcie celular e dos transportadores contm mltiplas

subunidades, cada uma das quais pode se ligar a um domnio PDZ. Da mesma forma,
muitas protenas citoslicas contm tanto, domnios PDZ mltiplos como outros tipos de
domnios que participam das interaces protena-protena e, assim, podem ligar a
mltiplas protenas da membrana ao mesmo tempo. Essas interaces permitem que ocorra
o agrupamento de diversas protenas de membranas de grandes complexos. Outras
interaces protena-protena permitem que esses complexos se liguem aos filamentos de
actina que revestem a superfcie interna da membrana plasmtica. Visto que um nico
filamento de actina pode ligar vrios grupos.

Diversos receptores de protenas de transduo de sinal agrupam em plataformas de lipdos

que contm caveolina, uma famlia de protenas de aproximadamente 25kDa. As protenas
caveolina possuem um segmento hidrofbico central que, pode atravessar a membrana duas
vezes posicionando-se em ambas as extremidades N e C terminal da protena direccionadas
para o citosol. Tais agrupamentos podem facilitar as interaces entre as protenas
sinalizadas, elevando assim transduo de sinal.

A rpida interrupo da sinalizao quando o ligante em particular retirao e a

dessensibilizao do receptor sob altas concentraes de ligante ou aps a exposio
prolongada ao ligante auxiliam as clulas e responderem adequadamente quando
submetidas a diferentes circunstncias.

Protena G

Protena G
- Constituda por 3 subunidades: a (45kD), b (35kD) e g(7kD).
- Alterna entre uma forma que liga GTP (Activa) e uma forma que liga GDP (Inactiva).
- Ligao da hormona ao receptor altera a conformao da protena G para a forma
activa.
-A activao da protena passa pela abertura do local de ligao de GTP na protena G.
 Vrios processos fisiolgicos so controlados por protenas G.

Estmulo Receptor Prot. G Efector Resp. Fisiol.

Epinefrina receptor b-adren. Gs Adenil. Cicl. Degradao glicog.
Serotonina receptor seroton. Gs Adenil. Cicl. Melhoria sensorial
Acetilcolina receptor muscar. Gi Canal K activ. pacemaker
Odorantes receptor olfact. Golf. Adenil. Cicl. Olfacto

Protena G como activadora da adenilato ciclase

Sub-unidade Gsa GTP migra em direco adenilato ciclase, levando produo
de AMPc.
Formao de vrias sub-unidades de Gsa GTP por cada hormona ligada
Amplificao de sinal

As protenas G trimricas traduzem os sinais de receptores de superfcie celular

acoplados para as protenas efectivas associadas, as quais so enzimas que formam
segundos mensageiros ou protenas de canais de caties.
Os sinais mais comum so traduzidos por G, uma protena comutadora GTPase
que altera entre um estado activo com GTP associado e um estado inactivo, com o GTP. As
subunidades e , que permanecem ligadas entre elas, ocasionalmente traduzem o sinal.
 Os receptores ocupados por hormonas actuam como GEFs para protenas G,
catalisando a dissociao do GDP e permitindo a ligao do GTP. A alterao resultante na
conformao das regies comutadoras de G provoca sua dissociao da subunidade G e
a interaco com uma protena efectiva.
A Gs, que activada por diferentes tipos de GPCRs, se liga adenil-ciclase,
activando-as, aumentando a sntese de 3-5- AMP cclico (cAMP).

A activao dependente de cAMP de proteno-quinase A (PKA) medeia os diversos

efeitos de cAMP nas diferentes clulas. Os substratos para PKA e, consequentemente, a
resposta celular activao de PKA induzida por hormona variam entre os diferentes tipos
de celulares.
No fgado e nas clulas musculares, a activao de PKA induzida pela epinefrina e
por outras hormonas exerce o efeito duplo, inibindo a sntese de glicognio e estimulando a
sua quebra atravs de uma cascata de quinases.
As vias de sinalizao que envolvem segundos mensageiros e cascatas de quinases
amplificam grandemente os sinais externos.
Qos BARK fosforili-sa receptores -adrenrgicos com ligantes associados, levando
ligao de -arrestina e endocitose dos receptores. A consequente reduo no nmero dos
receptores de superfcie celular torna a clula menos sensvel a maiores concentraes de
hormona.

O posicionamento da PKA em regies especficas da clula pelas protenas de

ancoramento restringe os efeitos de cAMP a regies subcelulares determinada.

Protena G como activadora da canais inicos

O recepor muscarnico de acetilcolinba um GPCR cuja protena efectora um
canal de K+. a activao do receptor provoca a libertao da subunidade G que abre os
canais de k+. a resultante hiperpolarizao da membrana celular diminui a frequncia de
contrao da musculatura cardaca.

A Rodopsina e GPCR fotossensvel dos bastonetes composta pela protena opsina

ligada a 11-cis-retinal. A isopsina activada que, ento activa a protena G trimrica
associada, a transducina (Gt), por meio de catlise de troca de GTP livre pelo GDP ligado,
na subunidade Gt.GTP a cGMP-fosfodiesterase. A redua a nvel do cCMP mediada
por essa enzima leva ao fechamento dos canis de Na+/Ca2+ controlados por cGMP e
diminuio da libertao de neurotransmissor.

Como acontece com outras protenas G, a ligao do GTP rompe as interaces

moleculares com a G e permite que a Gt.GTP se ligue a seu efectivo junto.
 A fosforilao de osina, activada por luminosidade e mediada pela rodopino-
quinase, assim com a consequente ligao de arrestina opsina fosforilada, inibe a sua
capacidade de activao de transducina. Esse mecanismo geral de adaptao ou
dessensibilizao utilizado por outros GPCRs quando os nveis dos seus ligantes esto
elevados.

Protena G como activadora das Fosfolipase C

A estimulao de alguns GPCRs ou de outros receptores de superfcie celular leva

activao da fosfolipase C, a qual gera depois segmentos mensageiros: o IP3 difusvel e o
DAG ligado membrana.

O IP3 induz a abertura de canais de Ca2+ controlados por IP3 no retculo

endoplasmtico e a elevao do Ca2+ citoslico livre. Em resposta ao elevado Ca2+
citoslico, a proteno-quinase C recrutada para a membrana plasmtica onde activada
pelo DAG.

O complexo Ca2+/calmodulina regula a actividade de vrias protenas diferentes

inclusive a cAMP-fosfodiesterase, a xido ntico-sintase e as proteno-quinases ou fosfatase
que controlam a actividade de vrios factores de transcrio.

A estimulao de GPCR de acetilcolina das clulas endoteliais induz uma elevao

2+
no Ca cotoslico e a subsequente sntese de NO. Aps a sua difuso para as clulas
musculares lisas adjacentes, o NO activa a guanilil-ciclase intracelular e a sntese de cGMP.

A sntese de cGMP nas clulas da musculatura vascular lisa leva ao relaxamento

muscular e vasodilatao.

Protena G como activadora na transcrio de Genes

A activao da fosfolipase C por receptores acoplados protena G o ou Gq deixa o
factor de transcrio Tubby, que est ligado PIP2, inserido na membrana plasmtica das
clulas em repouso.
A activao de proteno-quinase A (PKA) induzida por sinalizao frequentemente
leva fosforilao da protena CREB que em conjunto com o co-activador GBP/300,
estimula a transcrio de diversos genes-alvo.
O complexo GPCR-arrestina activa vrias quinases citoslicas iniciando cascatas
que levam activao transcricional de vrios genes que controlam o crescimento celular.