1.

LAS ENZIMAS

En todos los organismos es preciso sintetizar macromolculas a partir de molculas sencillas, y

para establecer los enlaces entre stas se necesita energa. Esta energa se consigue rompiendo los
enlaces qumicos internos de otras macromolculas, sustancias de reserva o alimentos. Todo ello com-
porta una serie de reacciones coordinadas cuyo conjunto se denomina metabolismo. Dado que las
sustancias que intervienen en estas reacciones son, generalmente, muy estables, se requerira una
gran cantidad de energa para que reaccionaran entre s, ya que, si no, la velocidad de reaccin sera
nula o demasiado lenta. Para acelerar la reaccin en un laboratorio bastara con aumentar la
temperatura o bien con aadir un catalizador, es decir, una sustancia que aumente la velocidad de la
reaccin. En los seres vivos, un aumento de temperatura puede provocar la muerte, por lo que se opta
por la otra posibilidad, es decir, el concurso de catalizadores biolgicos o biocatalizadores. Las
molculas que desempean esta funcin son las enzimas.

Las enzimas son, con la excepcin de las ribozimas, que se explicarn ms adelante, protenas
globulares capaces de catalizar las reacciones metablicas. Son solubles en agua y se difunden bien en
los lquidos orgnicos. Pueden actuar a nivel intracelular, es decir, en el interior de la clula donde se
han formado, o a nivel extracelular, en la zona donde se segregan.

Las enzimas cumplen las dos leyes comunes a todos los catalizadores: la primera es que
durante la reaccin no se alteran, y la segunda es que no desplazan la constante de equilibrio para que
se obtenga ms producto, sino que simplemente favorecen que la misma cantidad de producto se
obtenga en menos tiempo. Las enzimas, a diferencia de los catalizadores no biolgicos, presentan una
gran especificidad, actan a temperatura ambiente y consiguen un aumento de la velocidad de reaccin
de un milln a un trilln de veces.

En 1981 se descubri un ARN que, sin precisar la intervencin de ninguna protena, es capaz de
catalizar reacciones de corte y empalme conducentes a la eliminacin de segmentos de ARN. Se lo
denomin ribozima. Posteriormente se ha descubierto un ARN capaz de catalizar la sntesis de otro
ARN, teniendo, por tanto, actividad enzimtica.

l.l. ACTIVIDAD ENZIMATICA

En toda reaccin qumica se produce una transformacin de unas sustancias iniciales,

denominadas reactivos o sustratos (S), en unas sustancias finales o productos (P). Esta
transformacin no se verifica directamente, ya que es necesario un paso intermedio en el cual el
reactivo se active, de forma que sus enlaces se debiliten y se favorezca su ruptura. Este paso
intermedio recibe el nombre de complejo activado y requiere un aporte de energa, generalmente en
forma de calor, que se conoce como energa de activacin.
Las enzimas pueden actuar de dos formas: unas, fijndose mediante enlaces fuertes (covalentes) al
sustrato, de modo que se debiliten sus enlaces y que no haga falta tanta energa para romperlos; y
otras, atrayendo a las sustancias reaccionantes hacia su superficie de modo que aumente la posibilidad
de encuentro y que la reaccin se produzca ms fcilmente.
 Las enzimas, una vez que han realizado la transformacin del sustrato o sustratos en
productos, se liberan rpidamente de ellos para permitir el acceso a otros sustratos.

Las enzimas suelen formar complejos multienzimticos, de forma que el producto de una
enzima constituye el sustrato de la siguiente. Esto permite que no sea precisa una elevada
concentracin del sustrato. Adems, se pueden disponer en las membranas celulares, lo que permite
formar compartimientos donde el sustrato alcance concentraciones notables aunque en la clula no sea
abundante.

Algunas enzimas no son activas hasta que sobre ellas actan otras enzimas o iones. Estas
enzimas se denominan zimgenos o proenzimas. Por ejemplo, el pepsingeno, que el HCl transforma
en pepsina.

Algunas enzimas que realizan bsicamente la misma funcin presentan variantes moleculares,
es decir, diferencias en la secuencia de aminocidos. Suelen presentar diferencias de velocidad de
reaccin. Generalmente se encuentran en diferentes tejidos o compartimientos celulares o aparecen
en diferentes estadios del desarrollo. Estas enzimas se denominan isoenzimas o isozimas.

1.2. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS

Segn su estructura, se pueden diferenciar dos tipos de enzimas: las enzimas estrictamente
proteicas, que son holoprotenas, y las denominadas holoenzimas, que son enzimas constituidas por la
asociacin, ms o menos fuerte, de una fraccin polipeptdica o apoenzima y de una fraccin no po-
lipeptdica o cofactor.

Los cofactores pueden ser activadores inorgnicos, como los iones metlicos, que generalmente se
encuentran en pequeas cantidades (menos de un 0,1 por 100, por lo que son oligoelementos). Por
ejemplo, el Zn en las carboxipeptidasas, el Mg en las quinasas, el K en la piruvato quinasa, etc.

Tambin pueden ser activadores orgnicos, como los grupos prostticos, molculas
fuertemente unidas a la cadena polipeptdica, como, por ejemplo, el grupo hemo en los citocromos, el
erupo hemino en las peroxidasas, etc.; o coenzimas, molculas que actan asociadas a enzimas, como,
por ejemplo, el ATP, el NAD, las vitaminas, etc. As pues, los oligoelementos y las vita minas resultan
imprescindibles para los organismos, ya que son cofactores de diversas enzimas.

En la cadena polipepddica de una enzima se pueden distinguir tres tipos de aminocidos:

- Aminocidos estructurales, sin funcin dinmica.
- Aminoeidos de fijacin, encargados de establecer enlaces dbiles con el sustrato.
Constituyen el centro de fijacin de la enzima.
- Aminocidos catalizadores, que se unen al sustrato mediante enlaces covalentes, de forma
que en dicho sustrato se debilita la estructura molecular favoreciendo su ruptura. Constituyen el
centro cataltico de la enzima.

Ambos centros, el centro de fijacin y el centro cataltico, suelen hallarse contiguos y forman
el llamado centro activo de la enzima.

1.3. LAS COENZIMAS

Las coenzimas pueden actuar de distintas formas: Algunas cenzimas no se fijan a la enzima,
sino que actan conjuntamente en la transformacin del sustrato; otras se fijan a la apoenzima
formando parte del centro activo. En este caso, la unin coenzima con la apoenzima se denomina
holoenzima. Las coenzimas suelen alterarse durante la reaccin enzimtica, pero, una vez acabada
sta, se regeneran rpidamente, y vuelven a ser funcionales.
Las coenziznas no suelen ser especficas de un solo tipo de apoenzima, dndose algunos casos
de coenzimas que pueden unirse a ms de 100 tipos de apoenzimas diferentes, cada una con una
funcionalidad especfica.
Entre las coenzimas ms conocidas se encuentran el NAD (nicotinamidaadenn-dinucletido), el
NADP (fosfato de NAD), el FMN (flavin-mononucletido), el FAD (flavn-adenn-dinucletido), etc.
Todas ellas pertenecen a enzimas deshidrogenasas, como, por ejemplo, el NAD, que capta hidrgenos,
transformndose en NADH2, y los transporta hasta un aceptor final de hidrgenos. Otras coenzimas
importantes son la coenzima A, encargada de transferir grupos acilo (-CO-CH3,) y el ATP (adenosn-
trifosfato), que transfiere grupos fosfato.

1.4. REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

La actividad de una enzima depende de un cierto nmero de factores, entre los que estn la
temperatura, el pH, la concentracin del sustrato, los activadores, los inhibidores, etc.

a) Temperatura. Si a una reaccin enzimtica se suministra energa enforma de calor, al ser

captada por las molculas es transformada en energa cintica. As, aumenta la movilidad de
estas molculas y, por tanto, el nmero de encuentros intermoleculares. Si la temperatura es
excesiva, la enzima se desnaturaliza perdiendo totalmente sus propiedades, lo que paraliza la
actividad enzimtica. Existe una temperatura ptima para la cual la actividad enzimtica es
mxima.
 b) pH. Todas las enzimas tienen dos valores lmite de pH entre los cuales son efectivas.
Traspasados estos valores, la enzima se desnaturaliza y deja, de actuar. Entre estos lmites
existe un pH ptimo con el cual la enzima posee una mxima eficacia. El pH ptimo est
condicionado por el tipo de enzima y de sustrato, debido a que el pH influye en el grado d
ionizacin de los radicales que componen el centro activo de la enzima y tambin influye en el
grado de ionizacin de los radicales del sustrato. As, cada reaccin enzimtica tendr un pH
ptimo; por ejemplo, la pepsina es ms efectiva sobre la hemoglobina con pH = 2,2 y sobre la
ovoalbmina con pH = 1,5.

c) Concentracin del sustrato. En una reaccin enzimtica, al incrementar la concentracin

del sustrato, para una concentracin de enzima constante, se produce un aumento de la
velocidad de reaccin, tendente a restablecer el equilibrio qumico entre las concentraciones
de sustrato y de producto. Esto es debido a que, al abundar ms las molculas de sustrato,
aumenta la probabilidad de encuentro entre el sustrato y la enzima.
Si la concentracin del sustrato es excesiva, la velocidad de reaccin no aumentar, debido a
que se produce una saturacin de las enzimas, que se hallan todas en forma de complejo E-S.
Este hecho llev a L. Michaelis y M. L. Menten a formular la ecuacin siguiente:

[S]
V=Vmax_____________
[S]+KM

En la ecuacin de Michaelis-Menten se pone de manifiesto que la velocidad de

reaccin (V) depende de la concentracin del sustrato [S], de la velocidad mxima (V max) que se
puede alcanzar con una determinada concentracin de enzima y de la denominada constante de
Michaelis Menten, KM, que depende de la afinidad que hay entre la enzima y el sustrato. La
constante KM es igual a la concentracin del sustrato, para la cual la velocidad de la reaccin
corresponde a la mitad de la velocidad mxima.

d) Activadores. Algunos iones favorecen la unin de la enzima con el sustrato; por ejemplo, la
enzima fosforilasa regula la formacin de ATP a partir de ADP y un grupo fosfato (H 3P04), y
se ve activada por la presencia de iones magnesio Mg2+.

e) Inhibidores. Los inhibidores son sustancias que disminuyen la actividad y la eficacia de una
 enzima o bien impiden completamente la actuacin de la misma. La inhibicin puede ser de dos
tipos: irreversible y reversible.

- La inhibicin irreversible o envenenamiento de la enzima tiene lugar cuando el

inhibidor o veneno se fija permanentemente al centro activo de la enzima alterando su
estructura y, por tanto, inutilizndola.

- La inhibicin reversible tiene lugar cuando no se inutiliza el centro activo, sino que
slo se impide temporalmente su normal funciona miento. Existen dos formas:
competitiva y no competitiva.

-La inhibicin reversible competitiva se debe a la presencia de un inhibidor

cuya molcula es similar al sustrato, por lo que puede competir con ste en la fijacin al centro
activo de la enzima. Si se fija el inhibidor, la enzima no puede romperlo, como hara con el
sustrato. Por tanto, la enzima no puede actuar hasta que no se libera de dicho inhibidor.

-La inhibicin reversible no competitiva es debida a un inhibidor que, o acta

sobre el complejo enzima-sustrato hacindolo fijo, o se une a la enzima impidiendo el
acceso del sustrato al centro activo.

l.5. ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

Los aminocidos de fijacin de una enzima se disponen en el espacio de forma que pueden
establecer enlaces con los radicales de la molcula del sustrato. Esto origina una especificidad entre
la enzima y el sustrato, ya que slo producir actividad enzimtica cuando los radicales de los
aminocidos de fijacin coincidan espacialmente con radicales del sustrato y permitan su unin.

Existen tres tipos de especificidad:

- Absoluta, Cuando la enzima slo reconoce un tipo de sustrato. Por ejemplo, la enzima D-
fructosa 6-fosfotrnsferasa acta nicamente sobre la D-fructosa, produciendo D-fructosa-6-
fosfato, pero no puede actuar sobre la L-fructosa.
- De grupo, cuando la enzima reconoce slamente un grupo de molculas similares que poseen
un tipo determinado de enlace qumico. Por ejemplo la a-glucosidasa acta slo sobre los glcidos en
los que aparece el enlace glucosdico alfa.
 - De clase, cuando la actuacin de la enzima no depende del tipo de molcula sino del tipo de
enlace. Por ejemplo las fosfatasas separan los grupos fosfato de cualquier tipo de molcula.

1.6. ENZIMAS ALOSTRICAS

Las enzimas alostricas suelen estar constituidas por varias subunidades o protmeros. Cada
protmero posee dos centros: Un centro regulados y un centro cataltico o activo. Al unirse a ese
centro una molcula, El activador, modulador o ligando, la conformacin del protmero vara, haciendo
funcional al centro cataltico. De esta forma, la enzima alostrica pasa de un estado inhibido (T) a un
estado cataltico o activo (R). La variacin en la conformacin de un protmero se transmite a los
otros protmeros asociados hacindolos activos, efecto que se denomina transmisin alostrica.

Algunas enzimas alostricas se hallan en estado inhibido y requieren un activador,

generalmente el propio sustrato para pasar al estado activo. Por el contrario otras enzimas
alostricas se encuentran normalmente en estado cataltico, y es la unin del producto de la reaccin
enzimtica con el centro regulador lo que induce que estas enzimas pasen a un estado inhibido. Esta
caracterstica permite que las enzimas alostricass acten como reguladores en los sistemas
enzimticos constituidos por el encadenamiento de varias enzimas.

1.7. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS

Segn la funcin que realizan las enzimas, stas se clasifican en seis grupos oxidorreductasas,
transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas o sinetasas. De acuerdo con esta clasificacin,
para denominar una enzima se cita primero el nombre de un sustrato, a continuacin el nombre le la
coenzima, si la hay, y finalmente la funcin que realiza la enzima. Por ejemplo, la malonato coenzima A-
transferasa, la citocromo oxidasa, la succinato flavn-deshidrogenasa, etc. Generalmente se utiliza el
nombre del sustrato acabado en -asa. Por ejemplo: sacarasa, maltasa, amilasa, etc. Algunas enzimas,
sin embargo, conservan su antigua denominacin, como la tripsina, pepsina, etc.

En la clasificacin actual, cada enzima est numerada con cuatro cifras: a primera indica la
clase, la segunda la subclase, la tercera la subdivisin y la subclase y la cuarta es la especfica de la
enzima. Por ejemplo, la malonato CoA-transferasa es la enzima 2.8.3.3

a) Oxidorreductasas. Catalizan reacciones en las que tiene lugar una oxidacin o reduccin del
sustrato. Son enzimas propias de la cadena respiratoria. Existen 14 subclases, destacando las
deshidrogenasas y las oxidasas. Las deshidrogenasas separan el hidrgeno del sustrato (son,
por tanto, oxidantes). Usan como coenzimas el NAD, NADP, FAD, etc. Las oxidasas captan
electrones del sustrato y los transfieren a un aceptor, el oxgeno. Para ello, primero se
reducen y luego se oxidan..

b) Transferasas. Transfieren radicales de un sustrato a otro sin que en ningn momento

queden libres dichos radicales. Segn el radical a transferir, se dividen en ocho subclases.
c) Hidrolasas. Son enzimas que actan mediante reacciones de hidrlisis,
rompiendo enlaces por introduccin de los radicales - OH y - H procedentes de la
ruptura de una molcula de agua. Segn el enlace que rompan, se dividen en nueve
subclases, entre las que abundan las enzimas digestivas. En el grupo de las
hidrolasas se encuentran las esterasas, que actan sobre enlaces tipo ster; las
peptidasas, que rompen los enlaces peptdicos; las amidasas, que actan sobre
enlaces C-N, etc.

d) Liasas. Catalizan reacciones en las que se rompen enlaces C-C, C-N o C-0, con
prdida de grupos y, generalmente, con la aparicin de enlaces dobles. Por ejemplo,
las desaminasas retiran radicales amino.

e) Isomerasas. Son enzimas que regulan reacciones de isomerizacin, en las que el

sustrato se transforma en otra molcula ismera.

f) Ligasas o sintetasas. Unen molculas o radicales mediante la energa

proporcionada por la desfosforilacin de una molcula de ATP.