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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE BIOQUMICA

BIOQUMICA II

TEMA
HIDROLISIS ENZIMTICA DE PROTENAS

Profesores:
-------

Alumno:
-----

Grupo:

Lunes (10am 2 pm)

Mesa:

Ao:

2016
OBJETIVOS
Determinar el efecto de las condiciones de reaccin (pH del medio de
reaccin, concentracin de sustrato y enzima) sobre la actividad
proteoltico de la pepsina, utilizando como sustrato la albmina de
huevo.

PROCEDIMENTO Y RESULTADOS
o EXPERIMENTO N1: Efecto de la concentracin de sustrato sobre la
actividad enzimtica de la pepsina
-Se realizan 2 mediciones de absorbancia la primera despus de agregar
los reactivos (abs. Tiempo=0) luego se volvi a leerlos despus de 20
minutos estando incubados a 37oC (abs. Tiempor=20).

Actividad enzimtica = Absorbancia inicial (T=0) - Absorbancia final (T=20)

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4


Vol.de la sol.de
1 2 2.5 3
albmina (ml)
Absorbancia inicial
0,178 0,387 0,496 0,628
(T=0)
Absorbancia final
0,176 0,380 0,450 0,575
(T=20)
Actividad
0,002 0,007 0,046 0,053
enzimtica
Tabla 1

Figura 1. Representacin grfica


o EXPERIMENTO N2: Efecto de la concentracin de enzima sobre la
actividad enzimtica de la pepsina
-Se realizan 2 mediciones de absorbancia la primera despus de agregar
los reactivos (abs. Tiempo=0) luego se volvi a leerlos despus de 20
minutos estando incubados a 37oC (abs. Tiempor=20).

Actividad enzimtica = Absorbancia inicial (T=0) Absorbancia final (T=20)

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4


Vol.de la sol.de
0.5 1 1.5 2
pepsina 1 % (ml)
Absorbancia inicial
0,344 0,348 0,350 0,362
(T=0)
Absorbancia final
0,341 0,332 0,320 0,312
(T=20)
Actividad
0,003 0,016 0,030 0,050
enzimtica
Tabla 2

Figura 2. Representacin grfica

o EXPERIMENTO N3: Efecto del pH sobre la actividad enzimtica de


la pepsina
-Se realizan 2 mediciones de absorbancia la primera despus de agregar
los reactivos (abs. Tiempo=0) luego se volvi a leerlos despus de 20
minutos estando incubados a 37oC (abs. Tiempor=20).

Actividad enzimtica = Absorbancia inicial (T=0) Absorbancia final (T=20)


Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
pH del medio 0,7 1 1,3
Absorbancia inicial
0,380 0,286 0,220
(T=0)

Absorbancia final
0,372 0,198 0,154
(T=20)

Actividad enzimtica 0,008 0,088 0,066

Tabla 3

0.1

0.09

0.08
Actividad enzimatica

0.07

0.06

0.05

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4
pH

Figura 3. Representacin grfica

DISCUSION
La pepsina es segregada por las clulas de la mucosa gstrica en forma de
zimgeno o proenzima denominado pepsingeno. Esta secrecin en forma de
un precursor inactivo es bastante comn en el caso de las enzimas
proteolticas digestivas, y se asegura as que solo desarrollen su actividad
degradativa una vez que son activadas en la luz de los rganos digestivos. La
activacin del pepsingeno se lleva a cabo por el HCl presente en la secrecin
gstrica, o autocatalticamente por la propia pepsina. El pH ptimo de la
pepsina est entre 1,5 y 2,5 lo cual se corresponde con el pH cido tpico del
contenido gstrico debido a la secrecin simultnea de HCl.
La pepsina hidroliza con preferencia los enlaces peptdicos cuyo grupo amino
pertenece a aminocidos aromticos, pero otros enlaces son tambin atacados
en forma ms lenta de modo que en las protenas comunes de la dieta la
pepsina provoca la hidrlisis de 10 a 15 % de sus enlaces peptdicos. 1

Se sabe que la velocidad de una reaccin qumica catalizada por una enzima
puede modificarse por la temperatura del medio, por cambios en el pH y por el
efecto de la concentracin de la enzima o del sustrato, estos factores afectan la
actividad enzimtica.

En el experimento 1 observamos el efecto de la concentracin de albumina,


que es nuestro sustrato, frente a la solucin de pepsina. Se apreci que a
mayor concentracin de sustrato la actividad enzimtica aumentaba este
comportamiento es caracterstico de la mayora de las enzimas y fue estudiado
por Michaelis y Menten en 1913.2 La velocidad de una reaccin catalizada (V)
nos indica la cantidad de sustrato consumido, o producto formado, por unidad
de tiempo, el cual la pepsina al encontrarse en un medio con alta temperatura
(aumento de velocidad de reaccin) y en su forma activada por el pH
adicionado (usado para simular el pH gstrico) formo el producto indicado con
cada concentracin de sustrato notndose una mayor actividad con la
concentracin de albumina en 3mL.

En el experimento 2 se observ que a mayor concentracin de pepsina


utilizando concentracin constante de albumina (sustrato) este generara mayor
cantidad de producto observndose en la grfica una pendiente en creciente
esto debido a que a mayor cantidad de pepsina suscita a un aumento de
productos formados.

En el experimento 3. La pepsina que es la principal proteasa del estmago, es


activa a pH cido y se inactiva a pH neutro. Es una endopeptidasa que hidroliza
los enlaces peptdicos en los que el grupo amino es aportado por Phe, Tyr o
Leu.3 Se not que en un momento la concentracin de Hcl que iba creciendo
descendi indicando un pH ptimo de activacin de la pepsina .
CONCLUSIONES
o Se determin las condiciones dadas que debe tener la enzima como o
es temperatura, pH , concentracin de sustrato y concentracin de
enzima que suscitan la formacin del producto.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Cardell Rosales L. Bioqumica Humana. Editorial ciencia mdica.
Ciudad de la habana:2007. Captulo 10
2. Valdivia B. Biologa General: Los sistemas vivientes. Grupo Editorial
Patria. Mxico: 2000. Pg. 76
3. Donald Voet, Judith G Voet, Charlotte W. Pratt. Fundamentos de
bioqumica: la vida a nivel molecular. Editorial Tebar. Madrid 2007.
Pg. 161