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Resumen

Se realizaron 2 tipos de cromatografa, sobre papel y sobre capa fina (usando como
sustrato silica gel seco) para separar los constituyentes de diferentes mezclas de
sustancias incluyendo tinta de marcador, analgsicos, mezcla de aminocidos y
constituyentes vegetales. Se emplean diferentes solventes para observar sus efectos
sobre el proceso de separacin (el ascenso de componentes sobre el sustrato por
accin del arrastre del disolvente). Se calculo la razn de flujo RF entre la distancia
recorrida por el componente con respecto a la recorrida por el solvente, estos valores
se encuentran tabulados dentro del informe en detalle debido a la cantidad de datos.
Se pudo apreciar que la cromatografa es una tcnica en la separacin e identificacin
de sustancias con propiedades fisicoqumicas similares y que el efecto del solvente en
esta tcnica esta determinado en gran medida por qu tan polar es.

Palabras claves: cromatografa, papel, capa fina, marcador, analgsicos,


aminocidos, constituyentes vegetales, razn de flujo, polaridad y solvente.

Introduccin mantendr en el mismo lugar en el que


empez, con los componentes aun
La cromatografa es un mtodo de mezclados. Por otro lado si el solvente es
separacin fsico para la purificacin y mucho ms polar que la muestra, esta ser
caracterizacin de una mezcla compleja, desplazada totalmente por el solvente,
es un conjunto de tcnicas basadas en el llegando a moverse pero a la misma
mismo principio de retencin selectiva [1]. medida en que avanza el solvente
Las tcnicas cromatografcas son muy obtenindose as un solo punto de muestra
variadas pero en todas ellas hay una fase aun si separarse en sus componentes.
mvil que consiste de un flujo (gas o
liquido) que arrastra a la muestra a travs La idea es entonces usar un
de una fase estacionaria llamada tambin solvente (o una mezcla de solventes) que
adsorbente y es bsicamente un material tenga una polaridad media y as desplace
poroso sobre el cual los componentes de a cada componente hasta un punto
la muestra pueden adherirse (como papel determinado distinto. La eleccin del
y silica gel en el caso de esta prctica). solvente adecuado no es una ciencia
exacta, se hace por ensayo y error, por lo
La forma en que se separan los que se han desarrollado listas (llamadas
componentes de una mezcla viene dada series eluotrpicas) de compuestos
por la diferencia entre la interaccin del ordenados segn la polaridad (es decir,
componente con el disolvente y el segn su electricidad para eludir
componente con el sustrato [2]. componentes.
Bsicamente si la mezcla del componente
es mas polar que el disolvente, esta se
El limitante ms comn en la
selectividad de la cromatografa como La cromatografa de papel como su
tcnica de separacin (al menos como se nombre lo indica consiste en colocar un
trata de cromatografa sobre papel o capa pequeo punto o lnea de muestra en una
fina) es que los componentes posean tira de papel, este es, luego puesto en un
polaridades muy similares ya que esto recipiente con solventes en el fondo que es
hace que sea desplazados hasta el mismo sellado; el solvente asciende por el papel
punto y por tanto no se separa. La por una accin capilar, se encuentra con la
importancia de las tcnicas muestra y esta comienza a moverse con el
cromatogrficas radica en su utilidad: solvente por arrastre. El papel esta hecho
mediante ellas se pueden separar los en gran parte por celulosas que es una
componentes de una mezcla obteniendo sustancia solar, por lo que los
sustancias ms puras que pueden ser componentes ms polares tendrn a
usadas posteriormente (paso final de recorrer una menor distancia ya que
sntesis orgnica). En cromatografa ms cuesta mucho verse su interaccin con el
avanzada (analticas) se pueden sustrato.
determinar la existencia de ciertos
compuestos en la mezcla incluso la La cromatografa en capa fina son
proporcin en que estn presentes. similares a la cromatografa en papel solo
que en la fase estacionaria en vez de ser
En la cromatografa el analto son papel es un capa fina de material
las sustancias de inters a separar de la adsorbente como anilina (Al2O3 en polvo
mezcla; un cromatograma es el resultado fino), silica gel (SiO4 en forma granular,
grafico de la cromatografa. Existen vtrea y porosa), o algn otro sustrato
diferentes tipos de cromatografa segn el inerte. Comparado con el papel, esta
estado fsico de la fase mvil cromatografa tiene la ventaja de ser ms
(cromatografa de gases y liquido) segn rpida y de poder elegir los sustratos.
su mecanismo (cromatografa por
intercambio inico, por exclusin por A menos que cada compuesto sea
tamao, entre otras) y segn la forma de la coloreado, luego de realizar la
capa estacionaria (cromatografa en cromatografa no se vern los
columna y planar). componentes separados por lo que hay
que aplicar alguna tcnica de visualizacin.
La cromatografa planar es aquella Estas tcnicas se clasifican en destructiva,
donde la fase estacionaria se presenta semi-destructiva y no-destructiva. Ejemplo
como un plano, dicho plano puede ser un de la destructiva es poner H2SO4 caliente
papel o una capa de partculas solidas en el sustrato, los componentes se
dispersas sobre un soporte. Diferentes destruyen y quedan como manchas;
componentes de la mezcla viajan a ejemplo de la semi-destrutiva es colocar
distancias diferentes dependiendo de qu cristales de Yodo en recipiente sellado con
tan fuerte sea la interaccin con la fase el cromatograma , el yodo se sublima y
estacionaria en comparacin con la fase satura el aire dentro del recipiente, el vapor
mvil. Dado un solvente y un sustrato, la entonces colorea como manchas los
razn entre la recorrida por un compuesto lugares donde estn los compuestos, se
y la recorrida por el solvente se conoce llama semi-destructiva por que el yodo
como razn de flujo (o factor de retencin puede o no reaccionar con los compuestos
Re) es constante y puede ser usada como y cambiar sus composiciones; por ultimo
ayuda en la identificacin de sustancias estn las no destructivas que se basa en
desconocidas. usar luz U.V de corta y larga longitud de
onda (normalmente se usan en algunos
adsorbentes especiales con polvos
fluorescentes). Con el yodo y con la luz
ultra violeta puede que algunos
compuestos no se visualicen.

Objetivos

Objetivo General

Aplicar la cromatografa como


tcnica de separacin (tanto en papel
como en capa fina) presente en varias
mezclas de compuestos.

Objetivos Especficos

Identificar los componentes presentes


en pigmentos de marcadores utilizando
la tcnica de cromatografa ascendente
de papel y los patrones necesarios.

Determinar los posibles aminocidos


del jugo de limn, tomate y naranja
utilizando la tcnica de cromatografa
ascendente de papel y los patrones
necesarios.

Identificar los componentes presentes


en analgsicos (migran y rhinal),
utilizando la tcnica de cromatografa
de capa fina y los patrones necesarios.

Identificar los componentes presentes


en pigmentos vegetales (rosas y
siempre verde), utilizando la tcnica de
cromatografa de capa fina y los
patrones necesarios
Datos Experimentales

Tabla 1. RF Cromatografa ascendente de varias tintas de marcado

PIGMENTOS EN QUE SE RECORRIDO


# PUNTO SUSTANCIA RF
DESCOMPONE (CM)
- Solvente 4:1:5 - (9,60,1) -
Rojo (0,10,1) (0,010,01)
1 Marcador de color Azul medio (0,50,1) (0,050,01)
Fucsia (2,80,1) (0,290,01)
Rojo (0,10,1) (0,010,01)
2 Marcador de color
Azul claro (0,50,1) (0,050,01)
Amarillo (0,10,1) (0,010,01)
3 Marcador de color
Azul medio - -
Amarillo (0,30,1) (0,030,01)
4 Marcador de color
Azul medio - -
5 Marcador de color Rojo (0,60,1) (0,060,01)
Amarillo (0,40,1) (0,040,01)
6 Marcador de color
Naranja (0,70,1) (0,070,01)
7 Marcador de color - - -
8 Marcador de color - - -
9 Marcador de color Fucsia muy claro - -
10 Marcador de color Amarillo (0,20,1) (0,020,01)
Fucsia muy claro (0,10,1) (0,010,01)
11 Marcador de color Azul medio (0,60,1) (0,060,01)
Morado - -
Rojo claro - -
12 Marcador de color
Fucsia muy claro - -
Azul medio - -
13 Marcador de color
Amarillo muy claro - -

*En esta tabla se muestran los resultados de emplear el solvente 4:1:5 con los trece puntos
de marcadores, los pigmentos en los cuales se separ, cuanto recorri el solvente y cuanto
recorri cada pigmento medido desde el centro de la mancha como lo indica la bibliografa y
la razn entre ambas distancias. En anexo B1 muestra este cromatograma.
Tabla 2. RF Cromatografa ascendente de aminocidos

PIGMENTOS EN QUE RECORRIDO


# PUNTO SUSTANCIA RF
SE DESCOMPONE (CM)
- Solvente 4:1:5 - (8,40,1) -

1 Lisina (2gts) Fucsia (1,20,1) (0,140,01)

Morado Oscuro (1,40,1) (0,170,01)


2 Ac. Aspartico (2gts) Morado Claro (1,40,1) (0,170,01)
Morado Claro (1,70,1) (0,200,01)
3 Metionona (2gts) Morado Oscuro (3,80,1) (0,450,01)
Morado Muy Claro (5,00,1) (0,600,01)
4 Leucina (2gts) Morado Oscuro (4,50,1) (0,540,01)
Fucsia (1,30,1) (0,150,01)
5 1,2,3,4 (2gts) Morado Claro (1,60,1) (0,190,01)
Morado Oscuro (4,50,1) (0,540,01)
Fucsia (1,10,1) (0,130,01)
6 Extracto De Limn (2gts)
Morado Claro (1,80,1) (0,210,01)
Fucsia (1,10,1) (0,130,01)
7 Extracto De Naranja (2gts)
Morado Claro (1,50,1) (0,180,01)
Fucsia (1,20,1) (0,140,01)
8 Extracto De Tomate (2gts) Morado Claro (1,80,1) (0,210,01)
Morado Muy Claro (4,70,1) (0,560,01)
Fucsia (1,10,1) (0,130,01)
9 6,7,8 (3gts) Morado Claro (1,80,1) (0,210,01)
Morado Muy Claro (4,00,1) (0,480,01)
Fucsia (1,00,1) (0,120,01)
10 Ac. Aspartico (3gts)
Morado Claro (1,50,1) (0,180,01)

*En esta tabla 2 se muestran los resultados de emplear el solvente 4:1:5 con en la
cromatografa sobre papel de los aminocidos, el formato e informacin presentada es
similar a la tabla 1. En anexo B2 muestra este cromatograma.
Tabla 3. RF Cromatografa en capa fina de analgsicos y pigmentos vegetales

# RECORRIDO
SUSTANCIA RF
PLACA (CM)
Acetato de Etilo
(4,20,1) -
(Solvente)
1
Migran (3,40,1) (0,690,02)
Rhinal (3,00,1) (0,610,02)
Cloroformo (Solvente) (4,20,1) -
2 Migran (0,80,1) (0,190,02)
Rhinal (0,70,1) (0,170,02)
Butanona (Solvente) (4,90,1) -
3 Migran (4,70,1) (0,960,02)
Rhinal (4,30,1) (0,880,02)
2:9:9 (N-Butanol,
Butanona y Acetato de (4,40,1) -
4 Etilo)
Migran (4,40,1) (1,000,03)
Rhinal (4,30,1) (0,980,03)
Mejor Solvente
(4,40,1) -
(Butanona)
5 Cafena (1,20,1) (0,270,02)
Fenacctina (3,40,1) (0,770,03)
Acido Aspartico (1,30,1) (0,300,03)
Mejor Solvente
(Butanona) Placa sin (4,40,1) -
6 Activar
Migran (4,30,1) (0,980,03)
Rhinal (4,40,1) (1,000,03)
Mejor Solvente
(3,40,1) -
(Butanona)
7
Rosas (1,20,1) (0,350,03)
Siempre Verde (1,10,1) (0,320,03)

*En esta tabla 3 se muestran los resultados de la cromatografa sobre capa fina usando silica
gel para los analgsicos, se especifica que solvente se uso, que analgsicos, el recorrido
total del solvente, el recorrido de cada muestra y el RF.
Discusin de resultados.
En este caso, tambin se puede
El primer ensayo realizado fue la hacer referencia, a la influencia de la
cromatografa sobre papel, para separar concentracin para identificar
los compuestos de tinta de marcador cualitativamente componentes en
negro; dos disolventes fueron empleados, cromatografa. El punto 2 contiene 2 gotas
el 4:1:5 de n-butanol, acido actico y agua de acido aspartico, mientras que el punto 9
destilada y el 2:1:1 de 1-butanol, etanol y contiene 3, en este ltimo, se ve un tono
amoniaco 2N; se escogera cul de ellos fucsia y otro morado, lo que conlleva a
sera el ms adecuado para el sistema de decir que est constituido por dos
separacin, pero en ambos casos se dio compuestos, mientras que en el primer
un arrastre continuo de la tinta, punto, slo se evidencia un compuesto
depositndose de manera lineal, muy morado claro; por ende, aqu la
parecida a la forma en que se hizo la lnea concentracin es importante para estudiar
inicial en el papel; de ello se puedo decir la muestra.
que ninguno de los dos solventes se
cataloga como una buena fase mvil, ya Algunos puntos tengan razones de
que el objetivo no es arrastrar toda la tinta, flujo similares, es indicio de que poseen el
sino fraccionar los compuestos. La mejor mismo compuesto, esto tambin se ve si
explicacin a lo ocurrido es que la tinta del presentan la misma coloracin, por
marcador no era la ms apta para la ejemplo, los morados oscuros de los
prctica, se puede tratar de una marca puntos 3,4 y 5; el morado claro del 5,6,7,y
comercial que emplea tintas orgnicas. 8 y el fucsia de los puntos 1,5,8,9 y en
mnima proporcin el 10 (tabla 2 y anexo
Siguiendo con este tipo de B1).
cromatografa, se emplearon aminocidos, Para la cromatografa ascendente
y como solvente el 4:1:5 de n-butanol, de varias tintas de marcador, se formaron
acido actico y agua destilada, adems muchas colas, debido a la presencia de
una solucin de ninhidrina al 0,5% , sta agua; y algunas ramificaciones, como
es el agente revelador, ya que los causa de la caracterstica lavable que
aminocidos son incoloros, la ninhidrina presenta el tipo de marcador empleado.
reacciona con ellos y muestra su color Visualizando, se puede acotar que el
caracterstico que va desde tonos fucsias y marcador numero 13 contiene al
morados dependiendo del pH del compuesto mas polar, mientras que el 1, 2,
aminocido. Por tratarse de cromatografa 3, 4, 10, 11 y 12 los menos polares, podra
sobre papel se puede afirmar que los decirse apolares, pues se mantuvieron en
compuestos con mayor razn de flujo son la lnea de referencia y algunos que no se
polares, por ejemplo los tonos morados de permitieron que se calculara el RF debido
los puntos 4,5 y 8; de lo contrarios, los que a que se mezclaron y se moviendo durante
se desplazaron menos, sern poco su ascenso capilar esto de pueda deber al
polares, como los puntos 5,6 y 9 donde el error humano o al mal manejo de la
color es fucsia ver tabla 2 y anexo B1. cmara de revelado.
arrastrar los compuestos afines a l hacia
Por otra parte, los puntos 1, 3, 7, 8 y partes superiores del papel, ste por ser
11 poseen el mismo compuesto, que se tericamente neutro albergar los
caracteriza por su coloracin azul, el 3, 4 y componentes apolares en la parte inferior.
10 uno con tomo amarillo y por ltimo, los Los aminocidos no poseen un color
fucsias del 9, 11 y 8. caracterstico, para revelar su
desplazamiento en la cromatografa se le
Luego, se empleo la tcnica de aade anhidrina, que cubre a los
cromatografa en capa fina, para estudiar compuestos de aminocidos con tonos
analgsico con placas de gel slice violetas, dependiendo del pH.
activadas, es decir sin contenido de agua, El iodo tambin es un agente
se dio la eleccin del solvente, haciendo revelador, usado en pigmentos vegetales,
varias pruebas para descartar y se deja activar y se visualiza la
seleccionar el ms adecuado entre el cromatografa en una cmara UV.
acetato de etilo, cloroformo, butanona, La cromatografa de capa fina, usa
2:9:9 de 1-butano. Usando migran y rhinal, como fase estacionaria gel silica, muy
se comparan los resultados una vez polar, por ende, los compuestos se
revelados, el mejor es la butanona, pues separaran de manera que los apolares se
adems de desplazar los compuesto por la muevan a una mayor distancia, mientras
placa se nota su separacin a lo largo de que los polares se retendrn en la parte
la fase estacionaria, caso contrario en los inferior.
otros solventes. Muestras den una razn de flujo
similar o muy cercana, poseern el mismo
Ya seleccionada la butanona como compuesto.
fase mvil, se colocan en placas La cromatografa es un mtodo que sirve
desactivadas cafena, fenacctina, acido para separar e identificar cuantos
aspartico, migran y rhinal, por tratarse de compuestos posee una mezcla, se ve
una capa fina de gel slice muy polar, afectada por el tipo de fase mvil y
retendr en la parte inferior a las estacionaria empleada, as como de la
compuestos afines, es decir con el menor concentracin de la muestra.
Rf calculado, como la cafena con
(0,270,02) y el menos apolar con Referencias.
(1,000,03) de Rf perteneciente al rhinal.
[1] Chromatography (n.d) Wikipedia, The
En la separacin de pigmentos
vegetales, la fase estacionaria es seca, sin Free Encyclopedia. Extrado el 6 de
presencia de agua, por tratarse de Abril 2015 desde:
compuestos poco polares, para una mejor
retencin en la capa fina; las soluciones de en.wikipedia.org/wiki/Chromatograp
rosa y siempre verde, en el mejor eluyente, hy
es decir butanona, dieron un Rf con
valores cercanos, es decir se pueden [2] Zubrick, J. (1988). The Organic Chem
poseer compuestos similares. Lab Survival Manual. A Students
Guide to Techiniques John Wiley &
Conclusin. Jons Inc.

En la cromatografa de papel, se
emplean compuestos polares, para ANEXOS
Muestra de clculo:
RF= (0,040,01)
Para calcular el RF de cualquier
componente se divide lo que recorri ese Vale acotar que segn bibliografa
componente entre lo que recorri el consultada la medicin de lo recorrido por
solvente en que se encuentra. El error de el compuesto se hace desde la lnea del
clculo viene dado por las frmulas de inicio hasta el centro de la mancha del
propagacin de errores. Por ejemplo con el compuesto.
RF de marcador de color # 4 en solvente
4:1:5

0,3
= 0,04
8,3

0,3 0,1 2 0,1 2


= ( ) + ( ) 0,01
8,3 8,3 0,3
Tabla 4. Reactivos a emplear en la prctica

Compuesto Estructura Importancia Industrial


NH2

Es un aminocido componente de
H las protenas sintetizadas por los
OH seres vivos. Se ha sugerido que la
Lisina
NH2 lisina puede ser benfica para
aquellas personas que presentan
O infecciones con herpes simple,
tambin prometedor para el
tratamiento de cncer.
O

Acido O Es uno de los aminocidos que


asprtico OH actan como neurotransmisores.

OH NH2

S
H
Es un intermediario en la
Metionina OH biosntesis de la cistena, la
H2N carnitina, la taurina, la lecitina, la
fosfatidilcolina y otros fosfolpidos.
O
Es uno de los veinte aminocidos
H
Leucina que utilizan las clulas para
OH sintetizar protenas reduciendo la
H2N degradacin del tejido muscular.

O
Produccin de tintas de impresin
para la industria grfica.
Produccin de tiner y solventes de
pinturas en industria de pinturas.
En la industria de adhesivos y
colas derivados de la celulosa. En
la industria alimenticia, en
productos de confitera, bebidas,
O dulces. En esencias artificiales de
Acetato de frutas.
Etilo Remocin de sustancias resinosas
O en la industria del caucho. En la
elaboracin de cueros artificiales y
para revestir y decorar artculos de
cuero.
Disolvente de compuestos
utilizados para revestir y decorar
objetos de cermica. Solvente
para la elaboracin de varios
compuestos explosivos.
Usado como reactivo relajante por
los lpidos orgnicos, el
Cl triclorometano es usado para
dormir. Adems, debido a que es
Cloroformo Cl usualmente estable y miscible con
C
la mayora de los compuestos
H Cl
orgnicos lipdicos y
saponificables, es comnmente
utilizado como solvente.

Utilizado como base disolvente en


O diversas aplicaciones y como
intermediario de sntesis del
Butanona
perxido de metil etil cetona,
usado en la catlisis de algunas
reacciones de polimerizacin.
HO O

Es un frmaco de la familia de los


salicilatos, usado frecuentemente
cido O
como antiinflamatorio, analgsico
Acetilsaliclico
(para el alivio del dolor leve y
moderado), antipirtico (para
O reducir la fiebre) y antiagregante
plaquetario.

O
Usada tanto recreacionalmente
como mdicamente para reducir la
N fatiga fsica y restaurar el estado
N
de alerta mental en los casos que
Cafena
exista una inusual debilidad o
N
aletargamiento. El consumo global
O N de cafena fue estimado en
120.000 toneladas por ao
convirtindola as en la sustancia
psicoactiva ms popular.
H
N

Fenacetina Es una medicina utilizada para


combatir el dolor muscular
O
O