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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA “AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓ N ESTRUCTURAL
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA “AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓ N ESTRUCTURAL

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

“AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN ESTRUCTURAL DE ALCALOIDES A PARTIR DE HOJAS Y TALLOS DE Tabernaemontana siphilitica Lobo SanangoUTILIZADO COMO ANTIMALÁRICO EN LA REGIÓN LORETO”

TESIS

Para Optar el Título de:

INGENIERO QUÍMICO.

Presentado por los Bachilleres:

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Erick Vidal Taricuarima

Asesores:

Ing. Lastenia Ruiz Mesía Dra. Ing. Wilfredo Ruiz Mesía Dr.

IQUITOS - PERU

2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONÍA PERUANA

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

Tesis para optar el título profesional de “INGENIERO QUIMICO” aprobado por unanimidad con calificación de Buena, en Sustentación Publica por el Jurado Calificador nombrado por la Facultad de Ingeniería Química conformado por:

…………………………………. Ing. Maritza Grández Ruíz. Dra. Presidenta.

Ing. Maritza Echevarría Ordóñez.M.sc. Miembro

…………………….…………….

………………………………… Ing. Juan M. Rojas Amasifén. Dr. Miembro

……………………………… Ing. Lastenía Ruíz Mesía. Dra. Asesora

…………………….…………. Ing. Wilfredo Ruíz Mesía. Dr. Asesor

DEDICATORIA.

A DIOS Porque: Jamás nos dejó solos En los momentos donde Hubo aflicción, vimos que
A DIOS
Porque:
Jamás nos dejó solos
En los momentos donde
Hubo aflicción, vimos que no nos
Olvidó, ¡gracias!, por darnos la
Vida y permitirnos conocer
Amigos sinceros y verdaderos.
Hivelli & Erick
A LA FAMILIA A nuestros hijos: Joab, Tracy y Caleb, que son nuestras inspiraciones y
A LA FAMILIA
A nuestros hijos: Joab, Tracy
y Caleb, que son nuestras
inspiraciones y fuerzas para seguir
luchando hasta lograr cumplir
nuestras metas.
A nuestros padres: Marlenia,
Reynaldo y Nilda por su amor y
apoyo incondicional, por estar
siempre a nuestro lado en todo
momento.

AGRADECIMIENTO.

Nuestro profundo agradecimiento a las instituciones y personas que hicieron posible su desarrollo:

Al laboratorio de Investigación de Productos Naturales Antiparasitario de la Amazonía (LIPNAA - UNAP) “Gabriel de la Fuente Martin”.

Al ProyectoBúsqueda y obtención de compuestos con actividad antimalárica y anthileishmanicida a partir de especies vegetales amazónicas.” por el apoyo financiero para la ejecución de esta tesis.

De una manera muy especial nos referimos, A la Dra. Lastenia Ruiz Mesía, por sembrar en nosotros el aprecio y el amor a esta ciencia, y por enseñarnos cualidades para ser mejores profesionales en este mundo globalizado y competitivo. Gracias por permitirnos formar parte de su equipo y por la oportunidad de hacer la tesis en mención, nuestro agradecimiento es infinito que no basta con simples palabras, solo

nos queda decirle,

”No

la defraudaremos”

Un profundo agradecimiento para el

por todo su apoyo en la elaboración de esta tesis.

maestro y amigo; al Dr. Wilfredo Ruiz Mesia,

Un agradecimiento especial para nuestra amiga incondicional; la Ing. Leonor Arévalo Encinas, por su importantísima e indispensable contribución a este trabajo, por su vitalidad, simpatía, y su gran paciencia.

Al instituto de productos Naturales y Agrobiología de Canarias-España, en mención del Dr. Matías Reina y Q.F. Liliana Ruiz por el apoyo en la espectroscopía de esta tesis. A todos los miembros del LIPNAA., Al Sr. Cesar Tuesta, Al Sr. Jaime del Águila, y a la Sra. Rosita Vásquez.

Tesis financiada por el Proyecto:

“Búsqueda y obtención de compuestos con actividad antimalárica y anthileishmanicida a partir de especies vegetales amazónicas.” – UNAP.

INDICE GENERAL

RESÚMEN

INTRODUCCIÓN

1. Marco teórico

CAPITULO I

01

1.1.

Especie en estudio

04

1.1.1. Aspectos Botánicos

04

1.1.2. Descripción Botánica

04

1.1.3. Nombres Comunes

05

1.1.4. Usos Comunes

05

1.1.5. Distribución del Género Tabernaemontana

05

1.2.

Alcaloides

1.2.1. Definición

09

1.2.2. Clasificación de los Alcaloides

12

1.2.3. Alcaloides Indólicos

13

1.2.4. Distribución de los Alcaloides Indólicos

18

1.2.5. Biogénesis de los Alcaloides Indólicos

20

1.2.6. Farmacología

24

1.2.7. Propiedades físicas y Químicas

27

1.2.8. Extracción de Alcaloides

28

CAPITULO II

2. Materiales y Métodos

2.1. Material Botánico

30

2.2. Materiales de Laboratorio y otros

30

 

2.2.1. Materiales de vidrio

30

2.2.2. Adsorbentes

31

2.2.3. Solventes Orgánicos

31

2.2.4. Reactivos

31

2.3. Técnicas Instrumentales y Equipos

31

 

2.3.1. Resonancia Magnética Nuclear (RMN)

31

2.3.2. Espectrometría de Masas (EM)

32

2.3.3. Espectroscopia de Infrarrojo (IR)

32

2.4.

Técnicas Cromatográficas

32

2.4.1. Cromatografía de Columnas (C.C.)

32

2.4.2. Cromatografía de Capa Fina (C.C.F.)

33

2.4.3. Cromatografía en Capa Fina Preparativa. (C.C.F.P.)

33

2.5.

Procedimiento Experimental

33

2.5.1. Preparación de las Muestras

33

2.5.2. Extracción de Alcaloides de las Hojas y Tallos de la Tabernaemontana Siphilitica

34

2.5.3. Fraccionamiento Cromatográfico del Extracto Alcaloidal ácido de Las Hojas y Tallos de la Tabernaemontana siphilitica

Fraccionamiento Cromatográfico del Extracto Alcaloidal ácido de Las Hojas y Tallos de la Tabernaemontana siphilitica

2.5.3.1.

Aislamiento y purificación de las fracciones alcaloidales Obtenidas del extracto Alcaloidal acido de las hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica

36

36

2.5.4.

Fraccionamiento Cromatográfico del extracto Alcaloidal

Básico y residuo de hojas y tallos de Tabernaemontana Siphilitica

38

 

2.5.4.1

Aislamiento y purificación de las Fracciones alcaloidales Obtenidas del extracto Alcaloidal Básico y Residuo de las

 
 

hojas y tallos de

Tabernaemontana siphilitica

39

 

2.5.5.

Datos Físicos y Espectroscópicos de los Alcaloides aislados

40

2.5.5.1. Coronaridina

 

41

2.5.5.2. 19 S- Heyneanina

42

2.5.5.3. Coronaridina hidroxindolenina

43

2.5.5.4. 3-Oxocoronaridina

 

44

 

CAPITULO III

3.

Discusiones y Resultados.

 

3.1. Resultados

 

47

3.2. Determinación Estructural de los Alcaloides Aislados

47

 

3.2.1. Alcaloide Coronaridina

 

47

3.2.2. Alcaloide 19 S- Heyneanina

50

3.2.3. Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

53

3.2.4. Alcaloide 3- Oxocoronaridina

55

Conclusiones

59

Recomendaciones

60

Referencias Bibliográficas

61

Anexos

76

Certificado del Herbarium Amazonense

94

LISTA DE TABLAS, FIGURAS Y DIAGRAMAS.

1. Lista de Tablas. Tabla N° 01. Distribución del género Tabernaemontana en el Perú

06

Tabla N° 02. Datos de RMN de 1 H, 13 C, HMQC, COSY, NOESY de 19S- Heyneanina Tabla N° 03. Datos de RMN de 1 H, 13 C, HMQC, COSY, NOESY

52

 

de 3- OXO-

Coronaridina

58

2. Lista de Figuras. Figura N° 01. Estructura de Alcaloides Indolicos

14

Figura N° 02 Subtipo de Alcaloides Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano

15

Figura N° 03

Alcaloides Oxoindólicos

18

Figura N° 04

Biogénesis de los Alcaloides Tipo Iboga y Aspidosperma

21

Figura N° 05

Biogénesis de los Alcaloides indol glucosídicos

21

Figura N° 06

Biogénesis de alcaloides tipo yohimbina, Ajmalicina y Corinanteina

22

Figura N° 07

Biogénesis de los alcaloides tipo Iboga y Aspidosperma

23

Figura N° 08

Biogénesis de los alcaloides tipo Piridocarbazol

24

Figura N° 09

Estructura de la Ellipticina

26

Figura N° 10

Diferentes Esqueletos Alcaloidales

28

Figura N° 11

Fraccionamiento de masas de Coronaridina

48

Figura N° 12

Alcaloide Coronaridina Publicado

49

Figura N° 13

Alcaloide Coronaridina Aislado en el LIPNAA-UNAP

49

Figura N° 14

Alcaloide Heyneanina Publicado

51

Figura N° 15 Alcaloide Heyneanina Aislado en el LIPNAA-UNAP

51

Figura N° 17

Fraccionamiento de masa de Coronaridina

Hidroxindolenina

54

Figura N° 18 Figura N°19

Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina Publicado Alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina Aislado en el

55

LIPNAA-UNAP

55

Figura N° 20 Figura N° 21

Alcaloide 3- Oxo Coronaridina Publicado Alcaloide 3- Oxo Coronaridina Aislado en el LIPNAA-

57

UNAP

57

Figura N° 22

NOESY del Alcaloide 3-Oxocoronaridina

58

Figura N° 23

Espectro de Masa del alcaloide Coronaridina

77

Figura N° 24

Espectro de IR del Alcaloide Coronaridina

77

Figura N° 25

Espectro de RMN de 1 H del alcaloide Coronaridina

78

Figura N° 26

Espectro de Masa del alcaloide 19S-HEYNEANINA

79

Figura N° 27

Espectro de IR del alcaloide 19S-HEYNEANINA

79

Figura N° 28

Espectro de RMN de H + de alcaloide 19S-HEYNEANINA

80

Figura N° 29

Espectro de RMN de 13 C del alcaloides 19S-HEYNEANINA

80

Figura N° 30

COSY del alcaloide 19S-HEYNEANINA

81

Figura N° 31

NOESY del alcaloide 19S-HEYNEANINA

82

Figura N° 32

HSQC de 13 C del alcaloides 19S-HEYNEANINA

83

Figura N° 33

Espectro de Masa del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

84

Figura N° 34

Espectro de IR del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina

84

Figura N° 35

Espectro de RMN de 1 H del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina

85

Figura N° 36

Espectro de RMN de 13 C del alcaloide Coronaridina

Hidroxindolenina

85

 

Figura N° 38

NOESY del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

87

Figura N° 39

HSQC del alcaloide Coronaridina Hidroxindolenina

88

Figura N° 40

Espectro de Masa del alcaloide 3-Oxocoronaridina

89

Figura Nº 41

Espectro de RMN de 1 H del alcaloide 3-Oxocoronaridina

89

Figura Nº 42

Espectro de RMN de 13 C del alcaloide 3-Oxocoronaridina

90

Figura Nº 43

COSY del alcaloide 3-Oxocoronaridina

91

Figura Nº 44

NOESY del alcaloide 3-Oxocoronaridina

92

Figura Nº 45

HSQC del alcaloide 3-Oxocoronaridina

93

3.

Lista de Diagramas.

Diagrama N° 01. Extracción de Alcaloides de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica

35

Diagrama N° 02. Fraccionamiento, Aislamiento y Purificación de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica del extracto Alcaloidal acido

45

Diagrama N° 03. Fraccionamiento, Aislamiento y Purificación de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica del extracto Alcaloidal Básico y Residuo

46

RESÚMEN

El presente trabajo de investigación tiene por objetivo, aislar e identificar los alcaloides de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica (Apocinaceae), especie vegetal que se utiliza tradicionalmente como antimalárico en la amazonia peruana. El estudio se realizó en las instalaciones del Laboratorio de Investigación de Productos Naturales Antiparasitarios de la Amazonia" Gabriel de la Fuente Martín" LIPNAA-UNAP, en lo referente a la extracción, fraccionamiento cromatográfico, purificación y aislamiento de los alcaloides y en el Instituto de Agrobiología de Canarias del Consejo Superior de Investigación Científico de Tenerife (España) se realizaron, la toma de los espectros de RMN, espectrometría de masas de alta y baja resolución, los experimentos, bidimensionales de coherencia cuántica homo y heteronucleares, los cuales permitieron determinar las estructuras químicas de los alcaloides aislados.

Las hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica, se secaron a la temperatura de

20 o C obteniéndose (1.27 Kg) de planta seca y molida, a partir del cual se obtuvo el

extracto Etanólico (161.9g) por maceración con etanol por un periodo de 32 días. El extracto Etanólico (161.9g) se disolvió en H 2 SO 4 0,5 N, se extrajo con CH 2 Cl 2 obteniéndose 2.72g de extracto alcaloidal ácido, el extracto acuoso se basificó a pH=9 con NH 4 OH después de extraer con CH 2 Cl 2 y evaporar se obtuvo (552.1 mg).

Y (376 mg) de residuo Alcaloidal. El extracto alcaloidal acido se volvió a extraer a

pH= 9 y se obtuvo (60.9 mg). Por cromatografía de capa fina se unieron los extractos alcaloidales dando un peso de 989 mg. Utilizando técnicas cromatográficas de columna, cromatografía de capa fina, cromatografía preparativa se aislaron cuatro

alcaloides. La estructura química se determino por la interpretación de sus datos espectroscópicos (RMN 1 H y 13 C, COSY, NOESY y HSQC) y datos espectrométricos y por comparación con los datos publicados en la bibliografía química, los cuales fueron identificados como: CORONARIDINA, 19 S HEYNEANINA, CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA, 3-OXO- CORONARIDINA.

INTRODUCCIÓN

Las civilizaciones antiguas consideraron muchas plantas por sus propiedades curativas. Este conocimiento se fue transmitiendo a lo largo de los siglos, sin que se supiera por qué o cómo actuaban, pero sí era indiscutible que las plantas podían curar diversas enfermedades y constituían la mayor fuente de medicamentos para el hombre y los animales. Hoy se sabe que las propiedades medicinales de las plantas son responsabilidad de algunos grupos de sustancias de diversa composición química conocidas como metabolitos secundarios.

Las Plantas medicinales, son todas aquellas plantas que contienen, en alguno de sus órganos, principios activos, los cuales, administrados en dosis suficientes, producen efectos curativos en las enfermedades de los hombres y de los animales en general. Se calcula en unas 260.000 las especies de plantas que se conocen en la actualidad, de las que el 10% se pueden considerar medicinales. Las plantas poseen una gran cantidad de metabolitos primarios y secundarios que les permiten crecer, multiplicarse, defenderse y sobrevivir.

Los alcaloides, son las más numerosas de los metabolitos secundarios de gran diversidad estructural de carácter básico; en su mayoría de origen vegetal, algunos pocos de origen animal que suelen tener actividad biológica incluso a dosis muy bajas; La familia Apocinaceae se encuentra distribuida en todo el mundo, pero principalmente en las áreas tropicales, comprende 250 a 550 géneros que agrupa 3700 a 5100 especies, ricas en alcaloides indólicos y muchas de ellas reportadas como antimalárico por las diferentes etnias amazónicas (Vásquez Martínez.

1997).

La familia Apocynaceae en el Perú consta de 37 géneros y 158 especies (Brako & Zarucchi, 1993; Ulloa et al., 2004), pueden ser bejucos, lianas, árboles y arbustos. En este trabajo se reconoce 14 endemismos de 10 géneros.

Los alcaloides, se encuentran en las semillas, raíces, cortezas y hojas; al estado libre o como glucósidos, o formando sales con ácidos orgánicos. Ninguna otra

o formando sales con ácidos orgánicos. Ninguna otra Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 1 Erick Vidal
o formando sales con ácidos orgánicos. Ninguna otra Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 1 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

1

Erick Vidal Taricuarima

clase de productos naturales posee tal enorme variedad de estructuras. La familia Apocynaceae, constituyen una de las familias de plantas con flor más importantes por su diversidad, distribución y utilidad, la misma ha sido poca estudiada a nivel regional. Estas especies se caracterizan por sintetizar alcaloides del tipo Indólicos, oxindólicos. (A. Situación Perú, 2003).

Los alcaloides se caracterizan por la presencia de nitrógeno básico, teniendo propiedades de formar sales solubles en el agua con ácidos orgánicos e inorgánicos, mientras que sus bases libres son solubles en solventes orgánicas. Se encuentran en todos los órganos de la planta: semilla, raíces, cortezas, hojas, flores. (Asociación latinoamericana. 2008).

Los antimaláricos conocidos actualmente, son producto de la investigación extranjera, en países donde la malaria fue superada y sus líneas de investigación se dirigen a otros campos, por ello en el Perú en especial Loreto (Iquitos) la UNAP, ha priorizado líneas de investigación en la Búsqueda y Obtención de nuevos compuestos con actividad antimalárica a partir de especies vegetales amazónicas, esta investigación permite validar las plantas que el poblador amazónico utiliza tradicionalmente para el tratamiento de la malaria. La selva amazónica alberga las 2/3 partes de la biodiversidad del mundo; reportándose 170 especies de uso antimalárico. (Maco M. et al; Ruiz L, et al.2007).

Tabernaemontana, es un género muy extenso, que pertenece a la familia de las Apocináceas y consta aproximadamente de 100 especies distribuidas por todo el trópico, así como en algunas regiones subtropicales, del mundo. Las especies se utilizan en la medicina tradicional y para otros fines, las formas y los usos medicinales son muy variados.

El género Tabernaemontana, presenta muchas aplicaciones biológicas la bibliografía científica reporta que se han encontrado extractos de plantas y compuestos puros con actividad citotóxica y antitumoral , actividad frente a diferentes bacterias: Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli,

Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 2 Erick Vidal Taricuarima
Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 2 Erick Vidal Taricuarima

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

2

Erick Vidal Taricuarima

Staphylococcus aureus meticilino resistentes, Streptococcus faecalis, Salmonella enteritidis, Shigella flexneri, Staphylococcus epidermidis, Acynetobacter lwoffii, actividad antimalárica, leishmanicida entre otras actividades biológicas(Geran. 1972), (V.S. Prakash. 2002), (Ramanitrahasimbola. et al., 2001).

Esta investigación, tiene como objetivo, la identificación de los alcaloides a partir del extracto etanólico de las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica. El aislamiento y purificación de los alcaloides se realizó utilizando técnicas cromatográficas de columna (C.C), Cromatográfica Preparativa(CP), Cromatografía de capa Fina(CCF), cromatografía de exclusión molecular y la elucidación estructural por medio de técnicas espectroscópicas, espectrométricas, y por comparación de sus datos físicos con los reportados en la bibliografía química.

físicos con los reportados en la bibliografía química. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 3 Erick Vidal
físicos con los reportados en la bibliografía química. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 3 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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3

Erick Vidal Taricuarima

1. MARCO TEÓRICO

CAPITULO I

1.1.

ESPECIE EN ESTUDIO La especie en estudio es Tabernaemontana siphilitica (Apocinaceae) conocida en la región Amazónica como Lobo Sanango”. (Mejía y Rengifo)

1.1.1.

ASPECTOS BOTÁNICOS. Descripción de la especie:

1.1.1. ASPECTOS BOTÁNICOS . Descripción de la especie:  Nombre Común : “ Lobo Sanango” 

Nombre Común

: Lobo Sanango”

Nombre Científico

: Tabernaemontana siphilitica

Familia

: Apocinaceae

Género

: Tabernaemontana

Especie

: Siphilitica

Reino

: planta

División

: Magnoliophyta

Clase

: Magnoliopsida

Orden

: Gentianales

Autor Epíteto Específico

: (L. f.) Leeuwenb

Determinador

: Leeuwenberg, J. M.

Fecha determinación

: 1992

1.1.2. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA Árbol de hasta 8 metros de altura. Exudación de látex blanco abundante y pegajoso. Hojas simples, opuestas, con margen entero, glabras, color verde brillante. Flores agrupadas en inflorescencias terminales y axilares, con corola verde y bordes blancos. Frutos folículos fusionados uno al frente del otro, de color verde y amarillo al madurar, cada uno contiene una semilla. Posee también potencial ornamental. Se distribuye por Colombia,

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

CIRNA-LIPNAA

Guyana, Surinam, Guyana Francesa, Ecuador, Venezuela, Brasil y Perú. Crece en Loreto, San Martín, Huánuco, Junín, Madre de Dios y Ucayali. (Duke 2009).

1.1.3. NOMBRES COMUNES En la Amazonía Peruana esta especie es conocida como lobo sanango, capeshini, uchu sanango, (Rengifo y Mejía), en los países vecinos como Colombia también es conocido como Borrachero negro, borrachero arbustivo. (www.plantas toxicas).

1.1.4. USOS COMUNES Tabernaemontana siphilitica, es una especie vegetal muy utilizada por el poblador amazónico para el tratamiento como antiinflamatorio, febrífugo, analgésico, emético, sedante, sudorífico y tranquilizante. (Duke 2009). La revisión bibliográfica del género Tabernaemontana nos permitió verificar que esta especie, no reporta estudios químicos ni farmacológicos, por lo que es necesario aislar e identificar sus componentes químicos.(IICA,

1999).

1.1.5. DISTRIBUCIÓN DEL GÉNERO TABERNAEMONTANA. El género Tabernaemontana lleva el nombre de Jacob Theodor. Müller, Tabernaemontana que pertenece a la familia de las Apocynaceae (Leeuwenberg, 1991), es un gran género que presenta una gran variedad de especies, con estructuras químicas complejas e interesantes. Hay alrededor de 100 especies de Tabernaemontana, ampliamente distribuido en los trópicos, 18 en África, 15 en Madagascar, 21 en Asia tropical, y cerca de 50 en el neotrópico. Este género es una fuente muy rica de una serie de alcaloides indólicos con esqueletos de carbono interesantes y novedosas actividades biológicas (Van Beek. 1984,1988). En todas partes, las especies se utilizan en la medicina tradicional y para otros fines, las formas y los usos medicinales son muy variados y la decocción sirve para el lavado de heridas y para baños de vapor para el tratamiento de sífilis.

y para baños de vapor para el tratamiento de sífilis. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 5
y para baños de vapor para el tratamiento de sífilis. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 5

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

5

Erick Vidal Taricuarima

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

CIRNA-LIPNAA

En el Perú se encontraron 15 especies del género Tabernaemontana, 14 de ellos se encuentran en el Departamento de Loreto. Los cuales se indican en la Tabla 01.

TABLA N° 01. Distribución del género Tabernaemontana en el Perú.

DISTRIBUCIÓN EN EL PERÚ

 

ESPECIE

 

UBICACIÓN

 

Tabernaemontana Columbiensis

Dpto. Huánuco y San Martin

 

Tabernaemontana Cuspidata

Dpto. Loreto y Ucayali

 

Tabernaemontana Cymosa

Dpto. Loreto y San Martin

 

Tabernaemontana Flavicans

Dpto. Huánuco, Loreto, Madre de Dios y San Martin

Tabernaemontana heterophyla

Dpto. Loreto, Madre de Dios y San Martin.

Tabernaemontana hirtula var.maynensis

Dpto. Loreto

 

Tabernaemontana Luciliae

Dpto.

Huánuco,

Loreto

y

San

Martin

Tabernaemontana Macrocalix

Dpto. Amazonas y Loreto

 

Tabernaemontana Markgrafiana

Dpto. Amazonas, Loreto y Ucayali

Tabernaemontana Sananho

Dpto. Amazonas, Ayacucho, Huánuco, Junín, Loreto, Madre de Dios, Pasco, San Martin y Ucayali.

Tabernaemontana Siphilitica

Dpto. Amazonas, Huánuco, Loreto, Madre de Dios y San Martin.

Tabernaemontana Stenolaba

Dpto. Loreto, Madre de Dios

 

Tabernaemontana Tessmannii

Dpto. Loreto y San Martin.

 

Tabernaemontana Undulata

Dpto. Amazonas, Huánuco, Junín, Loreto, Pasco, San Martin y Ucayali.

Tabernaemontana Vanheurckii

Dpto.

Cuzco,

Huánuco,

Loreto,

Madre

de

Dios,

San

Martin

y

Ucayali.

 
de Dios, San Martin y Ucayali.   Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 6 Erick Vidal Taricuarima
de Dios, San Martin y Ucayali.   Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 6 Erick Vidal Taricuarima

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

6

Erick Vidal Taricuarima

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

CIRNA-LIPNAA

Del estudio de los diferentes géneros de Tabernaemontana Se detectó actividad frente a diferentes enfermedades como por ejemplo:

De Tabernaemontana Catharinensis. (Pereira 1999. Burkart A. 1979) detectó actividad frente a Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Staphylococcus aureus meticilino resistentes, Streptococcus faecalis, Salmonella enteritidis, Shigella flexneri, Staphylococcus epidermidis, Acynetobacter lwoffii. Tabernaemontana fuchsiaefolia, actualmente se utiliza en la medicina tradicional para el tratamiento de la malaria en Sao Paulo y Paraná (Zocoler et al. 2005). Atribuyó la actividad biológica a los alcaloides bisindolico, (Frederick et al. 2000). Voacamine es activa in vivo (43% de reducción de la parasitemia a 10 mg / kg por vía oral mediante la prueba de supresión de Peters) y presenta de cierta especificidad en la fase trofozoítos y esquizontes. (Ramanitrahasimbola. Et. 2001).

Los principales problemas de este género se refieren a la identificación taxonómica. En varios casos, los grupos de investigación han trabajado en la misma planta sin darse cuenta, porque los nombres utilizados en la identificación del material posteriormente han sido reconocidos como pertenecientes a la misma especie, por ejemplo, Tabernaemontana Crussa con 5 sinónimos y Tabernaemontana coffeoides con muchos sinónimos y numerosos taxones.

Los resultados químicos deben ser capaces de dar información acerca de las rutas biosintético implicadas en la producción de alcaloides indólicos, así como la quimiotaxonomía del género. También pueden ser de ayuda en la búsqueda de nuevos compuestos medicinales interesante o en la validación del uso de una planta o extracto frente a diferentes dolencias o enfermedades. En contraste con la enorme cantidad de investigación Fitoquímica, hay poca información farmacológica. Una mejor cooperación entre los fitoquímicos y farmacólogos podría llevar a conclusiones nuevas y útiles. La etnobotánica da muchos ejemplos de usos similares de

La etnobotánica da muchos ejemplos de usos similares de Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 7 Erick
La etnobotánica da muchos ejemplos de usos similares de Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 7 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

7

Erick Vidal Taricuarima

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

CIRNA-LIPNAA

diferentes especies del mundo, y aunque algunos de los usos son cuestionables, es difícil creer que todo lo informado carezca de valor científico, se espera que los estudios químicos y etnobotánicas contribuyan a la identificación taxonómica de las especies de este género. También se espera que los datos etnobotánicas proporcionen nuevas pistas y estimulen más investigación, porque muchas especies aún no se han investigado química y farmacológicamente; a fin de descubrir nuevas moléculas con actividades biológicas interesantes.

El género Tabernaemontana se caracteriza por sintetizar alcaloides indólicos y bisindólicos, así tenemos que de Tabernaemontana Accedens. se aislaron los alcaloides: Accedine, N 1 -Demethyl-16-epi-accedine, N 1 - Methyl-16-epi-affinine, Accedinine Accedinisine, Voacamidine Voacamine. (Achenbach. 1975). De Tabernaemontana affinis. Se aislaron los alcaloides: Serpentine, Yohimbine, Affinisine, Affinine, Vobasine, Coronaridine, Coronaridine pseudoindoxyl, Olivacine. (Chaves.1960, F. Abreu 1976, J. Weisbach 1963). De Tabernaemontana Alba. Se aislaron los

alcaloides: Tabersonine, Coronaridine. (0. Collera 1962, F. Abreu 1976). De

Tabernaemontana albiflora, Se aislaron los alcaloides: Coronaridine, 18- hydroxycoronaridine, (20R)-18,19-dihydroxy-pseudovincadifformine,

Ibophyllidine, 19-hydroxyibophyllidine (C. Kan, 1981). De Tabernaemontana

amblyocarpa. Se aislaron

los alcaloides: Akuammidine, Vallesamine, (+)-

Isovoacangine, Voacristine, Isovoacristine. (I. Pérez. 1980). De

Tubotaiwine,

Tabernaemontana

amygdalifolia.

Se

aislaron

los

alcaloides:

12-

Demethoxycylindrocarpidine Homocylindrocarpidine, 5 Oxocylindrocarpidine,

O-Demethylpalosine (H.Achenbach

arbórea. Se aislaron los alcaloides: Tabersonine, Voacangine, Isovoacangine, Voacamine, 19-epi-Voacorine. (Chaverri. 1980, D. Kingston. 1978 y 1980). De

16-epi-

pleiocarpamine, (+)-Tubotaiwine, Conopharyngine, Conopharyngine hydroxyindolenine, (6R)-3,6-oxidocoronaridine, (-)-Heyneanine, 19-epi- Heyneanine, Coronaridine hydroxyindolenine, 11-Hydroxycoronaridine,

1967 y I981). De Tabernaemontana

Tabernaemontana

attenuata.

Se

aislaron

los

alcaloides:

Tabernaemontana attenuata. Se aislaron los alcaloides: Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 8 Erick Vidal Taricuarima
Tabernaemontana attenuata. Se aislaron los alcaloides: Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 8 Erick Vidal Taricuarima

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

8

Erick Vidal Taricuarima

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

10-Hydroxyheyneanine,

Ibophyllidine.

(A.

CIRNA-LIPNAA

Amico

1977).

De

Tabernaemontana brachyantha. Se aislaron los alcaloides: Normacusine B,

Anhydrovobasindiol,

Voacorine,

Conopharyngine.

(M.B.

Patel.

1973).

De

Tabernaemontana bufalina. Se aislaron los alcaloides: Dregamine, Silicine,

Aparicine Pandoline, 20-epi-pandoline Pseudotabersonine, Pandine. (M.J.

Hoizey. 1995; M. Zeches. 1975). De Tabernaemontana capuronii. Se

aislaron los alcaloides: Capuronine; Capuronidine; 14,15- Anhycrocapuronidine; 14,15-Anhydro-1,2-dihydrocapuronidine; (20R)- capuvosidine, Capubosine, Dehydroxycapuvosine, N4-Demethylcapuvosine (I.

Chardon. 1978). De Tabernaemontana

alcaloides: Dregamine, Tabernaemontanine, Vobasine Voaphylline, Lochnericine Tabersonine. (B. Talapatra. 1975, M. Elkeiy. 1966). De

alcaloides: Voacamine,

Tabernaemontanine, Conoduramine, Tabernaelegantine A, Tabernaelegantine B, Tabernaelegantine C, Tabernaelegantine D, Tabernaelegantanine A, Tabernaelegantanine B, Tabernaelegantanine C, Tabernaelegantanine D (M. Gorman. 1960, B. Talapatra. 1975, B. Gabetta. 1975, E. Bombardelli. 1976).

De Tabernaemontana Macrocalix. Se aislaron los alcaloides: Tabersonine,

Coronaridine. (J. Bruneton. 1979). De Tabernaemontana Sananho. Se

aislaron los alcaloides: Coronaridine, 3-Hydroxycoronaridine, (-)-Heyneanine, (-)-Ibogamine. (K. Raj, 1974).

los

Divaricata.

Se

aislaron

Tabernaemontana

Elegans.

Se

aislaron

los

1.2. ALCALOIDES. 1.2.1. Definición

Los alcaloides son sustancias orgánicas nitrogenadas con carácter básico y mayoritariamente de origen Vegetal. Tienen una estructura generalmente compleja y ejercen acciones fisiológicas diversas incluso a dosis muy bajas. Son tóxicos y capaces de precipitar con ciertos reactivos característicos. Hay, sin embargo, determinadas sustancias que se consideran alcaloides y que no cumplen las características generales de los alcaloides. (Kuklinski. 2000).

generales de los alcaloides. ( Kuklinski. 2000 ). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 9 Erick Vidal
generales de los alcaloides. ( Kuklinski. 2000 ). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 9 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

9

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CIRNA-LIPNAA

Muchas plantas contienen compuestos con un profundo impacto fisiológico con dosis muy pequeñas. Los agentes activos de estas sustancias vegetales han sido aislados y se han descubierto que son sustancias con numerosas aplicaciones. (Ajarem et. al.1990).

Los alcaloides se caracterizan por tener sabor amargo, generalmente presentan propiedades básicas debidas al Nitrógeno de su estructura. Son compuestos orgánicos, se forman a partir de aminoácidos. En la mayoría de los alcaloides, el Nitrógeno pertenece a un ciclo. Como bases libres; son solubles en disolventes orgánicos (polares y apolares) e insolubles en agua y solubles en mezclas hidroalcoholicas. Y en forma de sal son solubles en agua y mezclas hidroalcoholicas, pero insolubles en disolventes orgánicos apolares. Su solubilidad depende del pH. Los alcaloides oxigenados son sólidos cristalizables, incoloros o blancos y con un punto de fusión característico. Se obtienen mediante extracción con disolventes. Los alcaloides no oxigenados son líquidos volátiles de olor característico se obtienen por destilación con arrastre de vapor. (Kuklinski. 2000).

Hasta la fecha se conocen alrededor de 26900 alcaloides aislados de plantas, hongos, organismos marinos y mamíferos, de los cuáles un total de 21120 son derivados de plantas. Se han encontrado 186 familias compuestas por 7231 especies pertenecientes a 1730 géneros (14.2%) que contienen alcaloides, 35 en las que se han detectado alcaloides pero aún no se han aislado, quedando aún 153 familias (aproximadamente 674 géneros y 5835 especies) por estudiar. (Cordell, G. A.et al. 2001).

Algunas familias poseen una marcada tendencia a elaborar alcaloides: esto ocurre tanto en las Monocotiledóneas (Amarilidácea, Liliácea) como en las Dicotiledóneas (Anonácea, Apocynaceae, Fumariaceae, Laurácea, Loganiácea, Magnoliácea, Menispermácea, Papaverácea, Ranunculácea, Rubiácea, Rutácea, Solanácea, etc.). En estas familias algunos géneros contienen alcaloides, mientras que otros se encuentran desprovistos de

alcaloides, mientras que otros se encuentran desprovistos de Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 10 Erick Vidal
alcaloides, mientras que otros se encuentran desprovistos de Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 10 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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10

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ellos. En pocos casos existen alcaloides en todos los géneros (Papaverácea). (Jean Bruneton et. al. 2001).

Los alcaloides se localizan en determinadas regiones de los vegetales, en forma de ácidos orgánicos; unos en las hojas (coca, tabaco); otros en las frutas y semillas (nuez vómica), en la corteza de los árboles (quina), en las raíces (altea), etc.

Durante mucho tiempo, los alcaloides han sido considerados como productos del metabolismo únicamente vegetal. Realmente también existen estructuras alcaloídicas en los animales. A veces se trata de productos formados a partir de alcaloides contenidos en los vegetales incluidos en la dieta alimenticia del animal: es el caso de la castoramina, que proviene de la metabolización de los alcaloides de los nenúfares que consume el castor, o bien el de los alcaloides pirrolizidinicos que se encuentran en algunas mariposas. Otras veces los alcaloides aislados parecen ser productos del metabolismo animal: este es el caso especial de los anfibios urodelos (salamandras) o de los anuros (sapos). (Jean Bruneton, 2001).

Los alcaloides poseen masas moleculares que varían entre 100 y 900. Las bases no oxigenadas son líquidas a temperatura ambiente (nicotina, esparteína, coniína), las que contienen oxígeno en su fórmula, sólidos cristalizables, raramente coloreados (berberina), capaces de desviar la luz polarizada, las bases cristalizadas dan puntos de fusión netos, sin descomposición por debajo de 200°C, en su forma libre, los alcaloides (bases) son insolubles o muy poco solubles en agua, solubles en disolventes orgánicos apolares (éter, cloroformo, hexano) o poco polares (acetato de etilo) y solubles en disolventes orgánicos polares (alcoholes de elevada graduación).

La basicidad de los alcaloides les permite formar sales con ácidos minerales (clorhidratos, sulfatos, nitratos) u orgánicos (tartratos,

(clorhidratos, sulfatos, nitratos) u orgánicos (tartratos, Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 11 Erick Vidal
(clorhidratos, sulfatos, nitratos) u orgánicos (tartratos, Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 11 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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sulfamatos, maleatos). Las sales de alcaloides son generalmente solubles en agua y en alcoholes diluidos, salvo raras excepciones, son insolubles en disolventes orgánicos. Las sales cristalizadas se conservan bastante bien y constituyen habitualmente la forma comercial de estas moléculas. (Jean Bruneton. et al.2001).

1.2.2. CLASIFICACIÓN DE LOS ALCALOIDES.

Para clasificar un compuesto como alcaloide es preciso tomar sus cualidades químicas y farmacológicas.

La clasificación de los alcaloides, se dio generalmente por la similitud con estructuras moleculares más simples, otras veces son designados según su origen, género o especie de plantas del cual fueron aislados por primera vez.

Dada la amplitud del tema, nos limitaremos a presentar ejemplos de los alcaloides más comunes en cada uno de los grupos siguiente. (GROS, E.

1995).

Alcaloides Pirrolidínicos

Alcaloides Piridínicos y Piperidínicos

Alcaloides Isoquinolínicos y Fenilletilamínicos

Alcaloides Morfínicos

Alcaloides Quinolínicos

Alcaloides Indólicos

Alcaloides Imidazólicos

Alcaloides Quinazolínicos

Alcaloides Quinilizidínicos

Alcaloides Pirrolizidinicos

Alcaloides de la Erythrina

Alcaloides de la Amaryllidacea

Alcaloides de Lycopodio

Alcaloides Esteroidales

Alcaloides Diterpénicos

 Alcaloides Esteroidales  Alcaloides Diterpénicos Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 12 Erick Vidal
 Alcaloides Esteroidales  Alcaloides Diterpénicos Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 12 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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12

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1.2.3 ALCALOIDES INDÓLICOS.

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Abarcan una gran variedad y diversidad estructural que va desde simples derivados de la triptamina, carbazoles, β-carbolinas, hasta esqueletos más elaborados que involucran la condensación de triptamina común segundo

aminoácido, una molécula de isopreno, policétidos o terpeno.

4

5

4

5 3 6 N 7
5
3
6
N
7

H

N 9
N 9

8

H 1

2 6

NH 2

1 7

Triptamina

Carbazol

3

2

5 4 6 3 N 7 N 9 8 H 1
5
4
6
3
N
7
N 9
8
H 1

-Carbolina

De todos ellos, el grupo más importante y más extensamente estudiado son los alcaloides indólicos monoterpénicos que derivan biogenéticamente de un único precursor construido por condensación del aminoácido triptófano con el monoterpenos ecologanina. (M.V. Kisakürec 1982). Kisakürec y Hesse los clasifica en nueve grupos que derivan de los esqueletos fundamentales I (Corinante), II (Aspidospermas) Y III (Ibogal) (Fig. 1).

Los grupos vincosano, vallesiacotamano, corinanteano, estrichnano y aspidospermatano adoptan el esqueleto I, los grupos plumerano y eburnano el esqueleto II y el ibogano y tacamano el III (Fig. 1).

 
 

Esqueleto I

Corinante

1).   Esqueleto I Corinante Esqueleto II Aspidosperma Esqueleto III Iboga Hivelli Ericka

Esqueleto II

Aspidosperma

 Esqueleto I Corinante Esqueleto II Aspidosperma Esqueleto III Iboga Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 13

Esqueleto III

Iboga

I Corinante Esqueleto II Aspidosperma Esqueleto III Iboga Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 13 Erick Vidal
I Corinante Esqueleto II Aspidosperma Esqueleto III Iboga Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 13 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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13

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Facultad de Ingeniería Química-UNAP NH N H H O
Facultad de Ingeniería Química-UNAP
NH
N
H
H
O

TIPO VINCOSANO

CIRNA-LIPNAA N N H H
CIRNA-LIPNAA
N
N
H
H

TIPO VALLESIACOTAMANO

FIGURA 1. Estructura de Alcalóides Indólicos

Los alcaloides de los grupos plumerano, aspidospermatano, corinanteano e ibogano, se dividen en subtipos, dependiendo de la variación estructural del fragmento alicíclico o en unos pocos casos de la porción indólico, estos subtipos se nombran de acuerdo al miembro más representativo del mismo. (fig. 2).

acuerdo al miembro más representativo del mismo. (fig. 2). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 14 Erick
acuerdo al miembro más representativo del mismo. (fig. 2). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 14 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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N N H H H H 3 COOC OCH 3
N
N
H
H
H
H 3 COOC
OCH 3

Subtipo Corinanteina

N N H H
N
N
H
H
TIPO CORINANTEANO H CH 2 OH N N H H H N N H H
TIPO CORINANTEANO
H
CH 2 OH
N
N
H
H
H
N
N
H
H
H
O
H
3 COOC
Subtipo Sarpagina
Subtipo Ajmalicina
H 3 COOC CH 2 OH CH 3 N N N H N H O
H 3 COOC
CH 2 OH
CH 3
N
N
N
H
N
H
O
H
3 COOC
H
H
H

Subtipo Pleiocarpamina

AcOH 2 C COOCH 3 N N H H
AcOH 2 C
COOCH 3
N
N
H
H

Subtipo Akuammilina

Subtipo Vobasina

CH 3 H 3 COOC N H H N H
CH 3
H 3 COOC
N
H
H
N
H

O

Subtipo Akuammilina

OH N N H CH 3
OH
N
N
H
CH 3

Subtipo Sarpagina

CH 3 N H H N H O
CH 3
N
H
H
N
H
O

Subtipo Ervitsinia

FIGURA 2. Subtipo de Alcaloides Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano

Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 15 Erick Vidal
Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 15 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

15

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N N H H TIPO ESTRICHNANO
N
N
H
H
TIPO ESTRICHNANO
N H N H H 3 COOC COOCH 3
N
H
N
H
H 3 COOC
COOCH 3

Subtipo Precondiocarpina

N N H H TIPO ASPIDOSPERMATANO N H N H CH 2 OH H 3
N
N
H
H
TIPO ASPIDOSPERMATANO
N
H
N
H
CH 2 OH
H 3 COOC
Subtipo Stemmadenina N N H
Subtipo Stemmadenina
N
N
H
N N H H COOCH 3 H 3 COOC
N
N
H
H
COOCH 3
H 3 COOC

Subtipo Vallesamina

N O N
N
O
N

H

Subtipo Voaphillina

TIPO PLUMERANO N H N H
TIPO PLUMERANO
N
H
N
H

COOCH 3

Subtipo Tabersonina

FIGURA

2. (Continuación) Subtipo de Alcaloides Plumerano,

Aspidospermatano,

Corinanteano e Ibogano

Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 16 Erick Vidal
Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 16 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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16

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N TIPO EBURNANO
N
TIPO EBURNANO
CIRNA-LIPNAA N
CIRNA-LIPNAA
N

TIPO TACAMANO

N N H TIPO IBOGANO
N
N
H
TIPO IBOGANO
N N H
N
N
H
OH N N
OH
N
N

COOCH 3

COOCH 3

Subtipo Coronaridina

Subtipo Coronaridina

OH H 3 COOC N N O
OH
H
3 COOC
N
N
O

H

Subtipo Tabernoxidina N H O N
Subtipo Tabernoxidina
N
H
O
N

H

Subtipo Dichomina

hidroxindolenina

N N H Subtipo Cleavamina OH N H H N H
N
N
H
Subtipo Cleavamina
OH
N
H
H
N
H

COOCH 3

Subtipo Pandina

O N N H
O
N
N
H

COOCH 3

Subtipo Iboluteina N H H N H
Subtipo Iboluteina
N
H H
N
H

COOCH 3

Subtipo Pseudotabersonina

H N H H N H
H
N
H
H
N
H

COOCH 3

Subtipo Ibophillidina

FIGURA

2

(Continuación) Subtipo de Alcaloides Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano.

Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 17 Erick Vidal
Plumerano, Aspidospermatano, Corinanteano e Ibogano. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 17 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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Hay que decir que esta clasificación no es única (Geoffrey A. Cordell, 1981) y aunque atractiva por su sencillez deja de ser exhaustiva, dejando fuera a un numeroso grupo de estos compuestos, que involucran otros reagrupamientos, y entre los que citaremos los oxoindoles, como la gelsemina y la mitraphillina; los piridocarbazoles, como la ellipticina; los del grupo secodina, en los que el esqueleto secologanina está abierto; y el numeroso grupo de los bisindólicos, los cuales se clasifican según la identidad de las unidades monómeras constituyentes.

O N O N H Gelsemina
O
N
O
N
H
Gelsemina

CH 3

CH 3 N N H CH 3
CH
3
N
N
H
CH
3

Ellipticina

H N H N O H H H 3 COOC OCH 3 Mitraphillina
H N
H
N
O
H
H
H
3 COOC
OCH 3
Mitraphillina
N N H H 3 COOC
N
N
H
H 3 COOC

Secodina

Figura N° 03. Alcaloides Oxindólicos

1.2.4 DISTRIBUCIÓN DE LOS ALCALOIDES INDÓLICOS. Dejando a un lado los alcaloides indólicos simples, los cuales pueden encontrarse en al menos 35 familias de plantas (Philippe. 1985), los de mayor complejidad. los alcaloides monoterpénicos, se encuentran distribuidos casi en su totalidad entre las familias, Apocynaceae, Loganiácea y Rubiáceas, aunque también han sido encontradas en las familias Anonáceae, Euphorbiaceae, Sapotaceae, Alangiaceae e Icacinaceae. (M.V. Kisakürec).

Sapotaceae, Alangiaceae e Icacinaceae. ( M.V. Kisakürec ). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 18 Erick Vidal
Sapotaceae, Alangiaceae e Icacinaceae. ( M.V. Kisakürec ). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 18 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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La mayoría de los botánicos dividen la familia Apocinaceae (la más prolífica) en tres subfamilias: Plumerioideade, Cerberoideade y Echitoídeade. Aunque de todas ellas se han aislado alcaloides, solo en la subfamilia es además dividida en siete tribus de las que en solo cuatro, Carisseae, Tabernaemontana, Alstonieae (Plumerieae) y Rauwolfíeae, los alcaloides indólicos están presentes.

Los alcaloides representativos del esqueleto I (Corinante) son los más ampliamente distribuidos habiéndose encontrado abundantemente en los géneros Alstonia, Amsonia, Aspidospermas, Catarantus, Ochrosia, Pleicoarpa, Rauwolfia, Tabernaemontana y Vinca (Apocinaceae), en el género Estríchnos (Loganiaceae) y los géneros Chinchonas Corinante, Mitragina y Uncaria (Rubíaceae). Los alcaloides representativos del esqueleto II (Aspidospermas) están restringidos a los géneros de Apocinaceae Alstonieae, Kopsia, Pleicoarpa, Stemmadenia, Tabernaemontana y Vinca, y los del esqueleto III (Iboga) se encuentran en los géneros Apocinaceae, Ervatamia, Tabernaemontana, Stemmadenia y Voacanga.

Especial mención por su importancia merece el género Rauwolfia (Apocinaceae) que incluye alrededor de 150 especies distribuidas a lo largo de las zonas tropicales y subtropicales del mundo, encontrando su hábitat típico en selvas y sabanas. Los sistemas anulares básicos encontrados son comunes a la mayoría de las especies y están representados por los compuestos yohimbina, Ajmalicina, Sarpagina y Ajmalina. (Manske, 1965) (Fig. 2). Estos alcaloides son también encontrados en otros géneros, la yohimbina es el constituyente principal de la corteza del árbol africano Corinante yohimbe (Rubíaceae) y también se ha encontrado en los géneros, Amsonia, Vallesia, Aspidosperma y Vinca (Apocinaceae), Gelsenium y Estríennos (Loganiaceae), Corinante, Pausinitalia (Rubíaceae) y Achorrea (Euphorbiaceae). La Ajmalicina se aisló por primera vez de la Rauwolfia serpentina, pero está distribuida en

vez de la Rauwolfia serpentina, pero está distribuida en Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 19 Erick
vez de la Rauwolfia serpentina, pero está distribuida en Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 19 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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otros géneros como Vinca y Corinante. Los esqueletos tipo Sarpagina y Ajmalina, representados por los alcaloides del mismo nombre, están ampliamente distribuidos y han sido obtenidos, entre otros, de los géneros Aspidosperma, Catarantus, Picralima, Rhazia y Estríennos.

1.2.5 BIOGÉNESIS DE LOS ALCALOIDES INDÓLICOS Los alcaloides indólicos derivan biogenéticamente del triptófano. La mayor parte de los alcaloides de este tipo poseen un grupo indol que se presenta casi de forma invariable como triptamina. En los alcaloides indólicos complejos, la unidad de triptófano o triptamina se condensa con un fragmento alicíclico de 9 o 10 átomos de carbono al que Thomas, Wenkert y otros, atribuyen un origen monoterpenoide (Cordell, 1974). (Fig.

4 y 5). El conjunto sufre consecutivas transformaciones hasta adoptar alguno de los tres tipos de estructura que establecen la base para su clasificación (Fig. 4). El descubrimiento de alcaloides indol glucosídicos como la estrictosidina (Fig. 5), supuso un gran avance en la elucidación de las rutas biogenéticas que conducen a estos alcaloides. La estrictosidina se sintetiza fácilmente en el laboratorio a partir de cultivos celulares de diversas especies de Apocinaceae, que catalizan la condensación de secologanina y triptamina para dar estrictosidina. (Fig. 5). La administración de estrictosidina (Veerporte, 1997) marcada isotópicamente

a plantas de Catarantusroseus, produjo una conversión eficaz y especifica del mismo en alcaloides representativos de los tres principales grupos

estructurales. Por otro lado, la administración de loganina marcada (Fig. 4), monoterpeno natural que se produce junto con los alcaloides indólicos,

a plantas de Vinca rosea produjo alcaloides representativos de los tres

grupos fundamentales de unidad C-9 ó C-10 marcados en las posiciones previstas. Estos experimentos, sitúan a la secologanina como el último precursor no nitrogenado de los alcaloides indólicos y determinan con exactitud la etapa de 'introducción del nitrógeno en el proceso biosintético.

del nitrógeno en el proceso biosintético. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 20 Erick Vidal
del nitrógeno en el proceso biosintético. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 20 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

20

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HO

COOH

5 4 HO OH 3 2 6 COOH
5
4
HO
OH
3
2
6
COOH

Mevalonato

OH

H O C OO H 5 4 HO OH 3 2 6 COOH Mevalonato O H

CIRNA-LIPNAA

6 3 2 4 5 4 5 3 6 2
6
3
2
4
5
4
5
3
6
2

OH

Mevalonato O H CIRNA-LIPNAA 6 3 2 4 5 4 5 3 6 2 O H
Mevalonato O H CIRNA-LIPNAA 6 3 2 4 5 4 5 3 6 2 O H

Geraniol

6 3 2 4 5 4 5 3 6 2 O H G e r a
6 3 2 4 5 4 5 3 6 2 O H G e r a
Esqueleto Aspidosperma Esqueleto Corinante Esqueleto Iboga N N N H H H N H CH
Esqueleto Aspidosperma
Esqueleto Corinante
Esqueleto Iboga
N
N
N
H
H
H
N
H
CH 3
OH
H
3 COOC
H
3 CO
H
N
COOCH 3
O
H
3 COOC
CH 3
COOCH 3
Coronaridina
Ajamalicina
Vindolina

FIGURA 04. Biogénesis de los Alcaloides Tipo Iboga y Aspidosperma

NH 2 N H Triptamina CHO H OGlu H O H 3 COOC Secologanina
NH 2
N
H
Triptamina
CHO
H
OGlu
H
O
H 3 COOC
Secologanina
NH HO N H H H OGlu H H O O H 3 COOC H
NH
HO
N
H
H
H
OGlu
H
H
O
O
H
3 COOC
H
3 COOC
Estrictosidina
Loganina

OGlu

FIGURA 05. Biogénesis de los Alcaloides indol glucosídicos

05. Biogénesis de los Alcaloides indol glucosídicos Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 21 Erick Vidal
05. Biogénesis de los Alcaloides indol glucosídicos Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 21 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

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En la Figura 6, se esquematizan las principales rutas biogenéticas conducentes a los tres principales tipos de esqueletos, donde los alcaloides estrictosidina, geisoschicina y stemmadenina ocupan un papel relevante.

NH N H H H H O H 3 COOC
NH
N
H
H H
H
O
H
3 COOC
NH N N CHO N H H H H OGlu H H H 3 COOC
NH
N
N
CHO
N
H
H
H
H
OGlu
H
H
H
3 COOC
CHO
H
3 COOC
CHO
Estrictosidina A B N N N N N N H H H H H H
Estrictosidina
A
B
N
N
N
N
N
N
H
H
H
H
H
H H
H
H
H
H
3 COOC
C
H
H
3 COOC
H
3 COOC
O
OH
OH
Yohimbina
N N H H H A H O H 3 COOC N N N N
N
N
H
H H
A
H
O
H 3 COOC
N
N
N
N
Ajmalicina
H
H
H
H
H
B
H
H
OH
N
H
3 COOC
H
3 COOC
N
H
H
OCH 3
Corinanteina
H
H 3 COOC
OH
Geisoschizina

FIGURA 6. Biogénesis de alcaloides tipo yohimbina, Ajmalicina y Corinanteina.

de alcaloides tipo yohimbina, Ajmalicina y Corinanteina. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 22 Erick Vidal
de alcaloides tipo yohimbina, Ajmalicina y Corinanteina. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 22 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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N N N N H H CH 2 OH H 3 COOC H 3 COOC
N
N
N
N
H
H
CH 2 OH
H 3 COOC
H 3 COOC
CH 2 OH
Stemmadenina
H
N
N
N
N
N
N
H
H
H
COOCH 3
COOCH 3
COOCH 3
N N N N N H H N H COOCH 3 COOCH 3 COOCH 3
N
N
N
N
N
H
H
N
H
COOCH 3
COOCH 3
COOCH 3
Tabersonina
Coronaridina
Catarantina
(Tipo Aspidosperma)
(Tipo Iboga)
(Tipo Iboga)
FIGURA
07.
.Biogénesis de los alcaloides tipo Iboga y Aspidosperma
.Biogénesis de los alcaloides tipo Iboga y Aspidosperma Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 23 Erick Vidal
.Biogénesis de los alcaloides tipo Iboga y Aspidosperma Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 23 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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Aunque a primera vista los piridocarbazoles tales como la ellipticina parecen estar fuera de las rutas biogenéticas generales, puede postularse su biogénesis a partir del alcaloide Stemmadenia (Kansal. 1986) (Fig. 6).

N N H CH 2 OH H 3 COOC
N
N
H
CH 2 OH
H 3 COOC

Stemmadenina

OX N N H CH 2 OH H 3 COOC
OX
N
N
H
CH 2 OH
H 3 COOC
N N H CH 2 OH H 3 COOC
N
N
H
CH 2 OH
H 3 COOC
H O CH 2 N CH 3 N CH 3 N H 2 O -CH
H
O
CH 2
N
CH 3
N
CH 3
N
H
2 O
-CH 2 O
N
N
N
H
H
H
CH 3 N N H
CH 3
N
N
H

CH 3

Ellipticina

CH 3 N N H
CH 3
N
N
H

CH 3

CH

CH

3

3

FIGURA. 8 Biogénesis de los alcaloides tipo Piridocarbazol.

1.2.6 FARMACOLOGÍA El género Tabernaemontana ha sido mencionado en la literatura etnobotánica por su amplio uso en medicina tradicional. Su uso médico es común a muchas de sus especies, y está basado en sus propiedades antimicrobianas, frente a infecciones, heridas, inflamación de ojos, uñas y garganta; contra la sífilis y el mal de Hansen; antiparasitaria, frente a la disentería, diarrea y lombrices intestinales; y en el tratamiento de ulceraciones en la piel. Algunas especies son usadas como analgésicos en

en la piel. Algunas especies son usadas como analgésicos en Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 24
en la piel. Algunas especies son usadas como analgésicos en Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 24

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

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dolores de cabeza y muelas mientras que otras actúan sobre el sistema nervioso central. Estas actividades son probablemente debidas a la

presencia de alcaloides, los cuales constituyen los principales metabolitos secundarios de las plantas. Se ha descrito una amplia miscelánea de actividades farmacológicas de diversos alcaloides de la Tabernaemontana, muchos de ellos comunes a otros géneros. Un estudio de la actividad farmacológica sobre 40 alcaloides obtenidos del género Tabernaemontana (Palmisano. 1986), indican que sólo la camptothecina, su 9-metoxi derivado, y la Vincamina, poseen actividad relevante, habiendo sido

evaluada su viabilidad

Curiosamente estos alcaloides no son representativos del género, siendo encontrados en gran variedad de plantas. Así, la camptothecina, aislada originariamente del tronco del árbol chino Camptotheca acumminata, llamó la atención por la presencia en su estructura de un anillo indólico

expandido, y por qué inhibía el crecimiento de un amplio rango de tumores experimentales (carcinosarcoma Walker 256, linfoma L5178Y, tumor

celular de plasma YPC-1, etc

camptothecina actuaba inhibiendo la enzima topoisomerasa I, la cual está

implicada en varias funciones del ADN, incluyendo la síntesis de macromoléculas. Además, se encontró que esta enzima tenía una actividad exaltada en etapas avanzadas del cáncer de colon y otros tumores malignos. Actualmente, dos derivados solubles en agua de la camptothecina, son usados clínicamente en combinación con otras drogas antitumorales como cisplatinas, etoposido y taxol en Francia y Japón, mientras que otras están en fases avanzadas de evaluación clínica en Europa.

Posteriores estudios indicaron que la

clínica

(Palmisano.

1986;

Monroe.

1998).

).

Se han descrito también propiedades antibióticas en los alcaloides del género Tabernaemontana, encontrándose la máxima actividad en los alcaloides bisindólicos del tipo Iboga frente a las bacterias gram-positivas. (Van Beek, 1984, 1985).

a las bacterias gram-positivas. ( Van Beek, 1984, 1985 ). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 25
a las bacterias gram-positivas. ( Van Beek, 1984, 1985 ). Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 25

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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La ellipticina, cuya síntesis se ha logrado en sólo tres pasos, es un alcaloide ópticamente inactivo aislado originariamente de las ramas de la Ochrosiaacumminata (Apocinaceae).Subsecuentemente la ellipticina y derivados se han aislado de otras especies de los géneros Aspidosperma, Tabernaemontana y Estriednos. En 1967, un grupo de científicos australianos mostró que la ellipticina y la 9-metoxiellipticina eran activas frente a varios tumores. (Sarcoma-180, adenocarcinoma 755 y leucemia L- 1210). Otro de sus derivados, el elliptinium, (N -2-metil -9- hidroxiellipticina), ha sido probado clínicamente contra diversos cánceres (mama, nasofaríngeo, mal de Hodgkin, renal, hepático etc.). Los autores concluyeron que tiene una modesta pero inconfundible actividad y que necesita ser evaluada en combinación con otras drogas. Así, en un estudio en el que su uso se combinó con mitomicina, vinblastina y/o etoposido puso de manifiesto que esta mezcla de agentes es activa y bien tolerada en pacientes con cáncer de mama avanzado. (Gribble. 1990) La forma en la que interactúan in vivo los piridocarbazoles, tales como la ellipticina, es todavía desconocido, aunque la investigación al respecto apunta a que deben estar involucrados en más de un mecanismo de acción. (Kansal.

1986).

CH 3 CH 3 1 1 10 11 10 11 HO 2 9 N N
CH 3
CH 3
1
1
10
11
10
11
HO
2
9
N
N
8
6
3
8 6
3
N
N
7
5 4
7
5 4
H
H
CH
CH 3
3
Ellipticina
Ellipticina

CH 3

Figura N° 09. Estructura de la Ellipticina

CH 3 Figura N° 09. Estructura de la Ellipticina Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 26 Erick
CH 3 Figura N° 09. Estructura de la Ellipticina Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 26 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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1.2.7 PROPIEDADES FÍSICAS Y QUÍMICAS Los alcaloides poseen pesos moleculares que varían entre 100 y 900. Aunque la mayoría de las bases no oxigenadas son líquidas a temperatura ambiente (nicotina, esparteína, coniína), las que contienen oxígeno en su fórmula como ocurre en la casi totalidad de las estructura conocidas, son normalmente sólidos cristalizables, raramente coloreados (berberina).

Casi siempre son capaces de desviar la luz polarizada, las bases cristalizadas dan puntos de fusión netos, sin descomposición sobre todo por debajo de 200°C. Por regla general, en su forma libre, los alcaloides bases son insolubles o muy poco solubles en agua, solubles en disolventes orgánicos apolares (éter, cloroformo, hexano) o poco polares (acetato de etilo) y solubles en disolventes orgánicos polares (alcoholes de elevada graduación).

La basicidad de los alcaloides es muy variable y esta propiedad se encuentra estrechamente ligada a la disponibilidad del doblete libre de nitrógeno. Los agrupamientos electro-atrayentes adyacentes al átomo de nitrógeno disminuyen la basicidad, los grupos electro-donadores la exaltan: colchicina y piperina son, debido a la existencia del carbonilo de la amida, prácticamente neutros.

El sistema heterocíclico puede poseer por sí mismo una basicidad variable:

así en la piridina con seis electrones - y también en la quinoleína e isoquinoleína, el doblete de nitrógeno está disponible y su basicidad es manifiesta. En el caso del pirrol o del indol, el doblete del nitrógeno participa en la aromaticidad por lo que no son básicos (incluso tienen cierto carácter ácido), también: la pirrolidina, insaturada, es una base fuerte. La basicidad se encuentra así mismo influida por los impedimentos estéricos (al menos en moléculas policíclicas complejas). Subrayemos finalmente que la basicidad es un factor de inestabilidad en estas moléculas, que al estado de base y en disolución, son sensibles al calor, a la luz y al oxígeno.

disolución, son sensibles al calor, a la luz y al oxígeno. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág.
disolución, son sensibles al calor, a la luz y al oxígeno. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág.

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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La basicidad de los alcaloides les permite formar sales con ácidos minerales (clorhidratos, sulfatos, nitratos) u orgánicos (tartratos, sulfamatos, maleatos). Las sales de alcaloides son generalmente solubles en agua y en alcoholes diluidos, salvo raras excepciones, son insolubles en disolventes orgánicos. Las sales cristalizadas se conservan bastante bien y constituyen habitualmente la forma comercial de estas moléculas.

(Bruneton. 2001).

N N N N N H H H H Pirrol Pirrolidina Piperidina Piridina Indol O
N
N
N
N
N
H
H
H
H
Pirrol
Pirrolidina
Piperidina
Piridina
Indol
O
O
N
N
N
O
Quinoleina
Isoquinoleina
Piperina

Figura N° 10. Diferentes Esqueletos Alcaloidales

1.2.8 EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES.

La extracción de alcaloides se fundamenta, por regla general, en el hecho de que se encuentran habitualmente en la planta al estado de sales y en su basicidad, es decir, en la diferente solubilidad de las bases y de las sales en agua por una parte y en disolventes orgánicos.

El material vegetal contiene a menudo cantidades apreciables de grasas (especialmente en las semillas), así como ceras, terpenos, pigmentos y otras sustancias lipófilas que pueden interferir en el proceso extractivo, sobre todo induciendo la formación de emulsiones. Para evitar en todo o en parte estos problemas tecnológicos, se debe proceder a una

parte estos problemas tecnológicos, se debe proceder a una Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 28 Erick
parte estos problemas tecnológicos, se debe proceder a una Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 28 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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deslipidación previa de la materia molturada. El éter de petróleo o el hexano se utilizan frecuentemente en esta operación: excepcionalmente los alcaloides pueden extraerse con estos disolventes si se emplean en medio neutro.

con estos disolventes si se emplean en medio neutro. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 29 Erick
con estos disolventes si se emplean en medio neutro. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 29 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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CAPITULO II

2. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1. Material Botánico. Se utilizó las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica, las cuales fueron recolectadas en el rio Yarapa, Provincia de Maynas, Distrito de Fernando Lores, al extremo Suroeste de la reserva Pacaya-Samiria, comunidad Haldar, departamento de Loreto, Fue identificado por un botánico del Herbarium Amazónico de la UNAP, la exicata se encuentra depositada y codificada con el N° 025580 J. Ruiz.

2.2. Materiales de Laboratorio y otros.

2.2.1. Materiales de vidrio

Matraz Vaso de precipitado 500ml. Vaso de precipitado 50 ml.

Embudo

Envase (para macerar).

Balón (1000, 250, 100 ml). Balón buchi Rotavapor y balones boca esmerilada para rota vapor. Bomba de vacío Viales (pequeño para colocar los extractos). Pipetas Pasteur

Baquetas Gradilla Tubos de ensayo

Probeta (1000,100, 10 y 5 ml) Agua destilada Peras de separación Capilares

Papel filtro

Papel aluminio

Espátulas

Papel higiénico Nueces para soporte

Soporte universal.

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2.2.2. Adsorbentes

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Cromatofolios de Oxido de Aluminio 60- F 2 5 4 . Merck. 254 . Merck.

Cromatofolios de Oxido de Silicio 60 – F 2 5 4 . Merck. F 254 . Merck.

Silicagel y alúmina neutra para cromatografía de columna.de Oxido de Silicio 60 – F 2 5 4 . Merck. 2.2.3 . Solventes Orgánicos

2.2.3. Solventes Orgánicos

Hexano (Hx)

Hexano (Hx)

Ciclo Hexano

Ciclo Hexano

Cloroformo (CHCl 3 )

Cloroformo (CHCl 3 )

Acetato de etilo (OAcet)

Acetato de etilo (OAcet)

Di etilamina

Di

etilamina

Metanol (MeOH)

Metanol (MeOH)

Etanol (EtOH)

Etanol (EtOH)

2.2.4.

Reactivos

Ácido cítrico (C 5 H 8 O 7 ) 5 H 8 O 7 )

Hidróxido de sodio (NaOH)Reactivos Ácido cítrico (C 5 H 8 O 7 ) Hidróxido de amonio (NH 4 OH)

Hidróxido de amonio (NH 4 OH) 4 OH)

Yoduro de potasio (KI)de sodio (NaOH) Hidróxido de amonio (NH 4 OH) Sulfato de sodio anhidro (Na 2 SO

Sulfato de sodio anhidro (Na 2 SO 4 anhidro) 2 SO 4 anhidro)

Agua destilada (H 2 O) 2 O)

Reactivo de Dragendorff. Se disuelve 8.0 g. de Bi (NO 3 ) 3 . 5 H 2 O en 20 ml de HNO 3 y 3 ) 3 . 5 H 2 O en 20 ml de HNO 3 y 27,2 g. de KI en 50 ml de agua destilada se mezclan

las 2 soluciones y se deja reposar por 24 horas. Se decanta la solución

y se enrasa a 100 ml.

2.3. TÉCNICAS INSTRUMENTALES Y EQUIPOS.

2.3.1. RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR (RMN)

han sido realizados en

espectrómetros Bruker, Avance 400 MHz y Bruker, AMX 500 MHz.

Los espectros de RMN

1 H

y

13C,

y Bruker, AMX 500 MHz. Los espectros de RMN 1 H y 13C, Hivelli Ericka Ricopa
y Bruker, AMX 500 MHz. Los espectros de RMN 1 H y 13C, Hivelli Ericka Ricopa

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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Los productos se disolvieron en CDCls y como referencia interna se usó CHCl 3 . Los experimentos de correlación homo y heteronuclear 1 H - COSY, NOESY, HSQC y HMBC fueron realizados en el espectrómetro Bruker AMX de 500 MHz, usando los programas suministros por la firma de Bruker. Los valores de los desplazamientos químicos (6) se expresaron en ppm en relación con el disolvente empleado como referencia interna y las constantes de acoplamiento (J) en Hz.

2.3.2. ESPECTROMETRÍA DE MASAS (EM).

Los espectros de masas de baja y alta resolución fueron realizados con un espectrómetro Vg Micromass modelo Zab 2F. La temperatura de la fuente fue de 220°C y la energía de ionización de 70 eV. Para cada producto se indica los picos más significativos y su intensidad relativa.

2.3.3. ESPECTROSCOPÍA DE INFRARROJO (IR) Los espectros de IR se realizaron en un espectrofotómetro Perkin - Elmer modelo 1600 / FTIR. El producto puro disuelto en CHCls seco se aplicó en la superficie de una pastilla de NaCl (5mm de espesor), evaporándose el disolvente a continuación. Los valores de frecuencia (v) se expresaron en cm -1

2.4. TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS.

2.4.1. CROMATOGRAFÍA DE COLUMNAS (C.C).

Para las cromatografías en columna, se usaron como fase estacionaria Alúmina básica Actividad I art 1076, alúmina 90 Actividad II y III art 1097 y Silicagel 60 art 1.07734. Como fase móvil se utilizó mezclas de disolventes de hexano- hexano, hexano - acetato de etilo y acetato de etilo - metanol en polaridad creciente.

etilo y acetato de etilo - metanol en polaridad creciente. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 32
etilo y acetato de etilo - metanol en polaridad creciente. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 32

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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2.4.2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCF). El seguimiento de las columnas cromatográficas se hizo por cromatografía de capa fina (CCF), utilizando placas comerciales:

Cromatofolios de óxido de aluminio 60 F 2 54 neutro, tipo E (MERCK), Cromatofolios de óxido de aluminio básico Polygram Alox N/UV 2 54 (NACGEREY-NAGEL), Cromatofolios de gel de sílice F 1500/LS 254 (MERCK) y Cromatofolios de Oxido de Silicio POLIGRAM SIL G/U V 254 . MACHEREY - NAGEL. Como eluyente se usaron los mismos solventes que para las columnas cromatográficas. Para la visualización de los alcaloides se empleó el reactivo de Dragendorff.

2.4.3. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA PREPARATIVA (CCFP).

Para la separación de los productos se utilizaron los mismos Cromatofolios que en cromatografía en capa fina 20 x 20cm, dichas placas se usaron a escala preparativa, sembrándose en éste caso entre 10 y 25 mg. de producto por placa. Como fase móvil se usó los mismos disolventes que en cromatografía de columna y en algunos casos se eluyó con ciclohexano y dietilamina.

2.5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

2.5.1. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS.

Las hojas y tallos de la Tabernaemontana siphilitica colectada, fue finamente dividida, secada a temperatura de 20°C durante 15 días, molida y pesada, obteniendo un peso de 1.27 Kg, la que se utilizó para preparar el extracto.

de 1.27 Kg, la que se utilizó para preparar el extracto. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág.
de 1.27 Kg, la que se utilizó para preparar el extracto. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág.

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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2.5.2. EXTRACCIÓN

DE ALCALOIDES DE LAS HOJAS Y TALLOS

DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

A 1.27 kg de hojas y tallos de Tabernaemontana siphilitica seca y

molida se adiciono 7 litros de etanol y se dejó en maceración durante 72 horas, se filtró; este proceso se repitió 5 veces hasta agotamiento.

El filtrado se concentra a presión reducida en un rotavapor, obteniéndose el extracto Etanólico (161.9 g).

El extracto Etanólico (161.9 g) se disolvió con H 2 SO 4 0.5 N, Se

extrajo con CH 2 Cl 2, obteniéndose 2.72 g de extracto alcaloidal acido.

El extracto acuosa se basificó a pH= 9, con solución de NH 4 OH,

después de extraer con CH 2 Cl 2 repetidas veces y evaporar se obtuvo 552.1 mg de extracto alcaloidal básico y 376 mg de residuo

alcaloidal. El extracto alcaloidal acido se volvió a extraer a pH= 9 y

se obtuvo 60.9 mg. Por cromatografía de capa fina se unieron los extractos alcaloidales dando un peso de 989 mg.

unieron los extractos alcaloidales dando un peso de 989 mg. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 34
unieron los extractos alcaloidales dando un peso de 989 mg. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 34

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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DIAGRAMA N° 01. EXTRACCIÓN

DE

ALCALOIDES

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DE

LAS

HOJAS

Y

TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

Hojas y Tallos secos de Tabernaemontana siphilitica 1.27 Kg
Hojas y Tallos secos de
Tabernaemontana siphilitica
1.27 Kg

Etanol (Temp. 20°C) Filtrar

Extracto Etanólico 161.9 g Disolver en H 2 SO 4 0.5N Agitar 3 horas Filtra
Extracto Etanólico
161.9 g
Disolver en H 2 SO 4 0.5N
Agitar 3 horas
Filtra y Extraer con CH 2 Cl 2
Solución acuosa
Residuo
Agitar 3 horas
Filtra y Extraer con CH 2 Cl 2
Basificar a pH 9, con
NH 4 OH
Agitar 3 horas
Ext. Alcaloidal
Acido (2.72 g)
Solución acuosa
Basificar a pH 9, con NH 4 OH
Agitar 3 horas
Filtra y Extraer con CH 2 Cl 2
Ext. Alcaloidal
básico (60.9 mg)
Solución acuosa
se desecha
Ext. Alcaloidal Básico
(552.1 mg)
Residuo
Solución acuosa
376 mg
se desecha
(552.1 mg) Residuo Solución acuosa 376 mg se desecha Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 35 Erick
(552.1 mg) Residuo Solución acuosa 376 mg se desecha Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 35 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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2.5.3. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRÁFICO DEL EXTRACTO ALCALOIDAL ÁCIDO DE LAS HOJAS Y TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

A 2.72 g del extracto alcaloidal acido 1, se fraccionó en una columna cromatográfica de diámetro interno de 4.5 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente óxido de aluminio actividad II y III (Al 2 O 3 ), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como: hexano acetato de etilo, metanol de polaridad creciente. Se obtuvo 75 fracciones de 250 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 2 fracciones: A 4-10 (848 mg), B 31-33 (121.6 mg).

2.5.3.1. AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LAS FRACCIONES ALCALOIDALES OBTENIDAS DEL EXTRACTO ALCALOIDAL ACIDO DE LAS HOJAS Y TALLOS DE TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

La fracción A 4-10 (848 mg), se fraccionó en una columna cromatográfica de diámetro interno de 5 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente óxido de aluminio básica actividad I (Al 2 O 3 ), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como: hexano acetato de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 74 fracciones de 250 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observada a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 3 fracciones: C 13-15 (83.5 mg), D 14-21 (36.5 mg), E 35-42 (121.6 mg), F 59-64 (33.7 mg)

D 14-21 (36.5 mg), E 35-42 (121.6 mg), F 59-64 (33.7 mg) Hivelli Ericka Ricopa Cotrina
D 14-21 (36.5 mg), E 35-42 (121.6 mg), F 59-64 (33.7 mg) Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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La fracción C 13-15 (83.5 mg) después de realizar los estudios de:

EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se identificó como: CORONARIDINA (codificado como C). La fracción D 14-21 (36.5 mg), se sembró en 03 cromatofolios de Óxido de Silicio 60 a escala preparativa, se eluyó 3 veces en mezcla de Hexano Acetato de Etilo (90:10), a la luz de la lámpara del U.V. Se observa dos alcaloides siendo uno de ellos mayoritario. Después de separar los alcaloides del adsorbente se obtuvo: PTLC- 1 (17.9 mg), PTLC- 2 (1.2 mg).

La fracción 14-21, PTLC 1 (17.9 mg), después de realizar los estudios de: EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se identificó como: CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA (codificado como H).

La fracción E 35-42, (121.6 mg). Se fraccionó en una columna cromatográfica de diámetro interno de 2 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente oxido de silicio 60 (0.063-0.200 mm) (SiO2), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:

hexano, acetato de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 34 fracciones de 100 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observada a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 1 fracción: P 12-19 (9.2 mg). La fracción P 12-19 (9.2 mg), Después de realizar los estudios de:

EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se identificó como: 19-S-HEYNEANINA (codificado como S).

La fracción F 59-64 (33.7 mg), Se sembró en 03 cromatofolios de Óxido de Silicio 60 a escala preparativa, se eluyó 2 veces en mezcla de Hexano Acetato de Etilo (50:50), a la luz de la lámpara del U.V.

Acetato de Etilo (50:50), a la luz de la lámpara del U.V. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina
Acetato de Etilo (50:50), a la luz de la lámpara del U.V. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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37

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Se observa un alcaloide mayoritario. Después de separar el alcaloide del adsorbente se obtuvo: PTLC- 1 (19.3 mg).

La fracción 59-64, PTLC- 1 (19.3 mg), Después de realizar los estudios de: EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se identificó como: 3-OXOCORONARIDINA. (Codificado como O).

La fracción B 31-33 (121.6 mg). Se fraccionó en una columna cromatografica de diámetro interno de 2 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente oxido de aluminio actividad II y III (Al 2 O 3 ), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:

hexano, acetato de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 35 fracciones de 100 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observada a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 2 fracciones: G 12-19 (9.5mg); H 31-35 (56.1 mg).

2.5.4. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRÁFICO DEL EXTRACTO ALCALOIDAL BASICO, Y RESIDUO DE HOJAS Y TALLOS DE TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

A 989 mg del extracto alcaloidal residuo 1, se fraccionó en una columna Flash de diámetro interno de 9 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente oxido de silicio 60 (0.063-0.200 mm) (SiO2), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:

hexano, acetato de etilo, metanol de polaridad creciente. Se obtuvo 53 fracciones de 1L, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la

en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la Hivelli Ericka Ricopa Cotrina
en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 2 fracciones: G 2- 4 (34.7 mg), H 5-12 (66 mg),

2.5.4.1. AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LAS FRACCIONES ALCALOIDALES OBTENIDAS DEL EXTRACTO ALCALOIDAL BÁSICO Y RESIDUO DE LAS HOJAS Y TALLOS DE TABERNAEMONTANA SIPHILITICA.

La fracción G 2 - 4 (34.7 mg), se fraccionó en una columna Cromatográfica de diámetro interno de 1.5 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente oxido de aluminio actividad II y III (Al 2 O 3 ), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:

hexano, acetato de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 45 fracciones de 100 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis Cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 2 fracciones: I 8-9 (12.2 mg), J 14-19 (0.2 mg). no se trabajó por ser una mezcla compleja y poca cantidad

La fracción I 8-9 (12.2 mg, Después de realizar los estudios de: EM, RMN de 1H Y 13C experimentos homo y bidimensionales se identificó como: 19- S HEYNEANINA. (Codificado como S).

La fracción H 5-12 (66 mg). Se fraccionó en una columna cromatográfica de diámetro interno de 2 cm, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente óxido de silicio 60 (0.063-0.200 mm) (SiO 2 ), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como:

hexano, acetato de etilo de polaridad creciente. Se obtuvo 112 fracciones de 100 ml, cada una de estas fracciones se concentraron en rotavapor hasta sequedad. El análisis Cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos

de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 39
de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 39

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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permitió agrupar 3 fracciones: I 36-38 (1.3 mg), J 63-65 (21.6 mg), La fracción 36-38 no se trabajó por ser una mezcla compleja y poca cantidad. La fracción L 63-65 (21.6 mg), Se purificó en una micro columna, se utilizó como fase estacionaria el adsorbente oxido de Aluminio actividad II y III (Al 2 O 3 ), como Fase móvil se utilizó mezclas de solventes como: hexano, acetato de etilo (90:10). Se obtuvo 13 fracciones. El análisis Cromatográfico de las fracciones obtenidas en cromatografía de capa fina y observados a la luz de la lámpara de U.V. y revelado con el reactivo de Dragendorff nos permitió agrupar 2 fracciones: M 5-7 (2.3 mg), N 20-26 (1.7 mg).

2.5.5 DATOS FISICOS Y ESPECTROSCÓPICOS DE LOS ALCALOIDES AISLADOS

De

los

extractos

alcaloidales

Coronaridina,

19 S- Heyneanina,

3-Oxocoronaridina.

se

aislaron

cuatro

alcaloides:

Coronaridina Hidroxindolenina,

La estructura química de estos alcaloides se determinaron mediante datos físicos: punto de fusión, y por sus datos espectroscópicos: U.V, E.M, I.R, RMN, 1H y 13C.

La estructura de los alcaloides se determinaron haciendo uso de las correlaciones Homo y Hetero nucleares: HSQC y HMBC; y las correlaciones escalares y espaciales COSY y NOESY.

y las correlaciones escalares y espaciales COSY y NOESY. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 40 Erick
y las correlaciones escalares y espaciales COSY y NOESY. Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 40 Erick

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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2.5.5.1. CORONARIDINA.

Sólido amorfo,  D - 31.5º(c, 0.314g/100mL, CHCl 3 ).

α

25

CIRNA-LIPNAA N N H
CIRNA-LIPNAA
N
N
H

CO OCH 3

IR (CHCl 3 ) max. cm -1 : 3366, 2930, 1676, 1238, 751.

EM de baja resolución, m/z (int. relativa. %): 338 M + (100), 323 (40), 309 (8), 279 (11), 253 (14), 214 (36), 215 (11), 208 (19), 207 (11), 195 (11), 194 (9),180 (12), 168 (17), 167 (19), 154 (35), 148 (12), 136 (94), 135 (26), 130 (19), 124 (44), 122 (32), 108 (10).

EM de alta resolución, m/z: [M] + 338.2004 calculado para un C 21 H 26 N 2 O 2 , 338.2053.

RMN de 1 H (500 MHz, CD Cl 3 ): δ H 8.04 ( 1H,sa, N-H), 2.97 (1H,m, H-3R), 2.85( 1H,m, H-3S), 3.44 (1H, m, H-5R), 3.24 (1H, m, H-5S),

3.20 (1H, m, H-6R), 3.03 (1H,m, H-6S), 7.51 (1H,d, J= 7.6 Hz,H-

9),7.12 (1H,ddd, J=1.2, 7.7, 8.9 Hz, H-10), 7.18 (1H, DDD, J=1.2, 7.1,8.1 Hz, H-11),7.27(1H, da, J=7.8Hz, H-12), 1.96 (1H,m, H-14),

1.63 (1H,m, H-15R), 1.20 (1H,m, H-15S), 1.78 (1H, m, H-17R), 2.64

(1H, da, H-17S), 0.95 (1H,t, J=7.4, H-18), 1.49 (2H,m, H-19), 1.38

(1H,m, H-20), 3.62 (1H,sa, H=21), 3.75 (3H,S, COOCH 3 ).

RMN 13 C (400 MHz, CDCl 3 ) :δ C 136.0 (s, C-2), 52.1 (t, C-3), 53.4 (t, C-5), 21.0 (t, C-6), 110.7 (s, -7), 127.2 (s, C-8), 119.0 (d, C-9), 119.6 (d, C-10), 122.7 (d, C-11), 110.8 (d, C-12), 136.0 (s, C-13), 27.4 (d, C-14), 32.1 (t, C-15), 54.9 (s, C-16), 36.5 (t, C-17), 11.9 (q, C-18),

26.8 (d, C-19), 39.2 (d, C-20), 57.5 (d, C-21), 52.6(q, COOCH 3 ),

176.2 (s, COOCH 3 ).

C-21), 52.6(q, COO C H 3 ), 176.2 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka Ricopa
C-21), 52.6(q, COO C H 3 ), 176.2 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka Ricopa

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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2.5.5.2. 19 S- HEYNEANINA

Alcaloide aislado como sólido amorfo

(36.5mg):  D -25º(c,0.18 CHCl 3 ).

α

25

g/100mL,

CIRNA-LIPNAA N O H N H
CIRNA-LIPNAA
N
O H
N
H

C O OCH 3

IR

(CHCl 3 )

máx.

cm -1 :

1163,1068, 750.

3259,

1728,1658,

1462,1372,

1240,

EM de baja resolución, m/z (int. relativa. %): 354(100), 353 (20), 340(15), 339 (63), 337 (31), 336 (51), 310(16), 309(18), 277 (6), 249(6), 228(8), 224(10), 214(38),206(10),195(13), 180(13), 99(4),97(11), 96(20),94 (17) ,85(48), 83 (68), 81(11), 71(14), 69(20), 67(15),57(22), 55(23).

EM de alta resolución, m/z: [M] + 354.1945 calculado para un C 21 H 26 N 2 O 3 , 3541943.

RMN de 1 H (500 MHz, CD Cl 3 ) :δ H 7.82 (1H, sa, N-H), 3.03 (1H, m, H-3R), 2.83(1H, d, J=9.2 Hz, H-3S), 3.50 (1H, m, H-5R), 3.17 (1H, m, H-5S), 3,19 (2H, m, H-6R), 7.71 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-9), 7,11 (1H, ddd, J =1.0, 7.9, 8.8 Hz, H-10), 7.15 (1H, ddd, J= 1.2, 7.2, 8.1, Hz, H-11), 7.27 (1H, d, J=8.0, Hz, H-12), 2.05 (1H, sa H-14), 1,92 (1H, m, H-15R), 1.56 (1H, m, H-15S), 2.01 (1H, da, J=13.3 H- 17R), 2.61 (1H, dt, J=2,0, 9,5, H-17S), 1.10 (1H, d, J = 6.4 Hz, H- 18), 4.18 (1H, q, J = 5.6 Hz, H-19), 1.49 (1H, m, H-20), 3.90 (1H, sa, H-21), 3.74 (3H, s, COOCH 3 ).

RMN 13 C (400 MHz, CD Cl 3 ) :δ C 135.6 (s, C-2), 51.3 (t, C-3), 52.4 (t, C-5), 21.4 (t, C-6), 109.9 (s, -7), 128.5 (s, C-8), 118.5 (d, C-9), 119.6 (d, C-10), 122.4 (d, C-11), 110.5 (d, C-12), 135.5 (s, C-13), 26.8 (d, C-14), 22.9 (t, C-15), 54.0 (s, C-16), 37.0 (t, C-17), 20.5 (q, C-18), 71.3 (d, C-19), 39.6 (d, C-20), 59.8 (d, C-21), 53.0 (q, COOCH 3 ), 174.8 (s, COOCH 3 ).

C-21), 53.0 (q, COO C H 3 ), 174.8 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka
C-21), 53.0 (q, COO C H 3 ), 174.8 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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CIRNA-LIPNAA

2.5.5.3. CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA

Alcaloide aislado como sólido amorfo

(17.9mg),  D -8º(c, CHCl 3 ).

α

25

1.04

g/100mL,

IR (CHCl 3 ) máx. cm -1 : 3473, 1732, 1660, 1461, 1236, 1144, 1087, 982,754.

HO N N
HO
N
N

CO OCH 3

EM de baja resolución, m/z (int. Rel. %): 354(100), 334 (17), 338

(17),

337(52), 325 (6), 295 (10),230 (7), 223 (4), 208 (4), 188(16),

160 (13), 136 (9), 122 (14), 108 (10), 96(8).

EM de alta resolución, m/z: [M] + 354.1938 calculado para un C 21 H 26 N 2 O 3 , 3541943.

RMN de 1 H (500 MHz, CD Cl 3 ):δ H 2.71 (2H,sa, H-3), 3.45 (1H, m, H-5S ¨ ), 2.91(1H, d, J=12.5Hz-H-5R), 1.93 (1H, da, J=14.4 Hz, H- 6R),1.77 (1H, m, H-6S), 7.47 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-9), 7,36 (1H, d, J = 7.3 Hz, H-10), 7.32 (1H, d,7.3 Hz, H-11), 7.24 (1H, d,7.6Hz, H-

12), 1.89 (1H, sa, H-14), 1.80 (1H, m, H-15R), 1.12 (1H, m, H-15S),

2.69 (1H, m, H-17S), 2.44 (1H, da,J=12.7 Hz17R), 0.83 (3H, t, J =

7.2 Hz, H-18), 1.42 (2H, m, H-19), 1.37 (1H, m, H-20), 3.76 (1H, sa H-21), 3.70 (3H, s,COOCH 3 ).

RMN 13 C (400 MHz, CDCl 3 ) :δ C 189.3 (s, C-2), 48.8 (t, C-3), 49.1 (t, C-5), 33.9 (t, C-6), 88.4 (s, -7), 142.7 (s, C-8), 120.9 (d, C-9), 121.5(d, C-10), 129.2 (d, C-11), 126.8 (d, C-12), 151.4 (s, C-13),

27.1 (d, C-14), 32.1 (t, C-15), 58.8 (s, C-16), 34.8 (t, C-17), 11.5 (q,

C-18), 26.6 (d, C-19), 37.6 (d, C-20), 58.5 (d, C-21), 53.2 (q,

COOCH 3 ), 173.8 (s, COOCH 3 ).

C-21), 53.2 (q, COO C H 3 ), 173.8 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka
C-21), 53.2 (q, COO C H 3 ), 173.8 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka

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2.5.5.4. 3-OXOCORONARIDINA.

Alcaloide aislado como sólido amorfo

(9.0 mg),  D -12º(c, 0.38 g/100mL, CHCl 3 ).

α

25

CIRNA-LIPNAA O N N H
CIRNA-LIPNAA
O
N
N
H

C OOC H 3

EM de baja resolución, m/z (int. rel. %): 352 M + (100), 351 ( 23), 350(41), 293 (8), 254 (9), 229 (23), 228 (26), 216(16), 214 (20), 197 (42), 195 (20), 180 (12), 168 (23), 150(10),143 (14), 138 (17), 124 (79), 84 (10).

EM de alta resolución, m/z: [M] + 352.1780 calculado para un C 21 H 24 N 2 O 3 , 3541943.

RMN de 1 H (500 MHz, CD Cl 3 ):δ H 7.96 (1H,sa, N-H),4.50 (1H,m,

H-5R), 3.22 (1H, m, H-5S ¨ ), 3.22 (2H, m H-6), 7.48 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-9), 7,11 (1H, t, J = 7.9 Hz, H-10), 7.15 (1H, t,7.9 Hz, H-11),

7.24 (1H, d, 8.0 Hz, H-12), 2.63 (1H, m, H-14), 1.41 (1H, m, H-

15R), 1.99 (1H, m, H-15S), 2.63 (1H, d, J=1.6, 15.0H-17S), 2.33

(1H, dt,J=2.6, 13.0, Hz, H-17R), 0.99 (3H, t, J = 7.4 Hz, H-18), 1.53(1H, m, H-19 A), 1.43 (1H, m, H-19B), 1.75 ( 1H,m, H-20),

4.55 (1H, s H-21), 3.65 (3H, s,COOCH 3 ).

RMN 13 C (400 MHz, CDCl 3 ) :δ C 136.1(s, C-2) 173.4 (s, C-3), 42.7 (t, C5), 21.1 (t, C-6), 109.9 (s, -7), 128.3 (s, C-8), 118.4 (d, C-9), 119.6(d, C-10), 122.4 (d, C-11), 110.6 (d, C-12), 134.2 (s, C-13),

38.2 (d, C-14), 31.0 (t, C-15), 55.9 (s, C-16), 35.9 (t, C-17), 11.4 (q,

C-18), 27.6 (d, C-19), 35.5 (d, C-20), 56.1 (d, C-21), 53.0 (q, COOCH 3 ), 176.1 (s, COOCH 3 ).

C-21), 53.0 (q, COO C H 3 ), 176.1 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka
C-21), 53.0 (q, COO C H 3 ), 176.1 (s, C OOCH 3 ). Hivelli Ericka

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CIRNA-LIPNAA

DIAGRAMA N° 02. : FRACCIONAMIENTO, AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE

LAS HOJAS Y TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA

SIPHILITICA DEL EXTRACTO ALCALOIDAL ACIDO

EXTRACTO ALCALOIDAL ÁCIDO 2.72gr C.C. Al 2 O 2 Actividad II y III Hx/OAcet/MeoH 4-10
EXTRACTO
ALCALOIDAL ÁCIDO
2.72gr
C.C.
Al 2 O 2 Actividad II y III
Hx/OAcet/MeoH
4-10
31-33
848 mg
121.6 mg
C.C.
C.C.
Sílica gel
Sílica gel
Hx/OAcet/MeoH
Hx/OAcet/MeoH
31-35
56.1
35-42 121.6 mg C.C. /MeoH 12-19 9.5 mg S
35-42
121.6 mg
C.C.
/MeoH
12-19
9.5 mg
S
59-64 33.7mg PTLC-1 19.3 mg O
59-64
33.7mg
PTLC-1
19.3 mg
O
C. C. P. Sílica gel Hx/OAcet
C. C. P.
Sílica gel
Hx/OAcet

silica gel

Hx/OAcet

31-35 56.1
31-35
56.1
13-15 14-21 83.5 mg 36.5 mg C C. C. P. Sílica gel Hx/OAcet PTLC-2 1.2
13-15
14-21
83.5 mg
36.5 mg
C
C. C. P.
Sílica gel
Hx/OAcet
PTLC-2
1.2 mg
PTLC-1 17.9 mg H LEYENDA O: 3-OXO-CORONARIDINA C: CORONARIDINA H: CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA S: 19 S-
PTLC-1
17.9 mg
H
LEYENDA
O: 3-OXO-CORONARIDINA
C: CORONARIDINA
H: CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA
S: 19 S- HEYNEANINA
H: CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA S: 19 S- HEYNEANINA Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 45 Erick Vidal
H: CORONARIDINA HIDROXINDOLENINA S: 19 S- HEYNEANINA Hivelli Ericka Ricopa Cotrina Pág. 45 Erick Vidal

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

Pág.

45

Erick Vidal Taricuarima

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

CIRNA-LIPNAA

DIAGRAMA N° 03: FRACCIONAMIENTO, AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE LAS HOJAS Y TALLOS DE LA TABERNAEMONTANA SIPHILITICA DEL EXT. ALCALOIDAL. BÁSICO Y RESIDUO.

EXTRACTO ALCALOIDAL BÁSICO Y RESIDUO 989 mg C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet/MeoH 2-4 5-12 34.7 mg
EXTRACTO ALCALOIDAL
BÁSICO Y RESIDUO
989 mg
C.C.
Sílicagel 60(0.063-0.200mm)
Hx/oAcet/MeoH
2-4
5-12
34.7 mg
66 mg
14-19 0.2 mg
14-19
0.2 mg
8-9 12.2 mg S
8-9
12.2 mg
S

C.C. Al 2 O 2 Actividad II y III Hx/OAC

C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet
C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet
C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet

C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet

C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet
C.C. Sílicagel 60(0.063-0.200mm) Hx/oAcet
36 -38 1.3 mg
36 -38
1.3 mg
63-65 21. 6 mg 5-7 20-26 2.3 mg 1.7 mg
63-65
21. 6 mg
5-7
20-26
2.3 mg
1.7 mg
C.C. Al 2 O 2 Actividad II y III Hx/OAC
C.C.
Al 2 O 2 Actividad II y III
Hx/OAC
2.3 mg 1.7 mg C.C. Al 2 O 2 Actividad II y III Hx/OAC Hivelli Ericka
2.3 mg 1.7 mg C.C. Al 2 O 2 Actividad II y III Hx/OAC Hivelli Ericka

Hivelli Ericka Ricopa Cotrina

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Erick Vidal Taricuarima

CAPITULO III

3.0. DISCUSIONES Y RESULTADOS

3.1. RESULTADOS Del extracto alcaloidal básico (1.27g), se aislaron los alcaloides: Coronaridina, 19 S- Heyneanina, Coronaridina Hidroxindolenina, 3-Oxocoronaridina. La estructura química de los alcaloides se determinaron mediante la comparación, de los datos espectroscópicos como: 1 H, EM, IR, RMN, RMN 13 C, Y por comparaciones con los datos publicados en la biografía y haciendo uso de las correlaciones homo nucleares (protón-protón) COSY Y NOESY y Heteronucleares: (Carbono-protón o protón-carbono).

3.2. DETERMINACIÓN ESTRUCTURAL DE LOS ALCALOIDES AISLADOS

3.2.1. ALCALOIDE CORONARIDINA Base aislada como sólido amorfo. En el espectro de IR se observan absorciones a 3366 cm -1 que corresponden a un N-H ; 2930 (C-H); 1676 y 1238 (COOCH 3 );

751 (C-H, anillo aromático).

El espectro de masas dio unión molecular a m/z 338 (100%), y fragmentos a: m/z

323 que representa la pérdida de un grupo CH 3 , 279, perdida del grupo éster

(COOCH 3 ), y otros fragmentos a m/z: 253 (14%), 214 (36%), 195 (11%), 154 (35%) 136 (95%) 124 (44%) y 122(32%) típicos de un alcaloide tipo iboga.

(Teris A. 1984, T.R. Govindachari. 1965)

Facultad de Ingeniería Química-UNAP

c N a b N H COOCH 3
c
N
a
b
N
H
COOCH 3

m/e 338 (100%)

c a b
c
a
b
+ N N H COOCH 3
+
N
N
H
COOCH 3

m/e 253 (14%)