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IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS EN EL LABORATORIO POR

MEDIO DE PRUEBAS BIOQUMICAS


Autores: Bernal De Len Johely Tatiana.1 Arias Adriana Carolina.2 Navarrete Hernndez
Yenni Esperanza.3 Julio Anglica Mara4. Jurado Anglica Julieth5
Correo Electrnico: johellybernal@gmail.com

la bacteria Staphylococcus aureus la cual ser


analizada en la discusin de ste trabajo.
RESUMEN
Este documento es el resultado de la prctica
de laboratorio del curso de Microbiologa, en PALABRAS CLAVE
la que, al aplicar diferentes pruebas
Identificacin microbiana, Pruebas
bioqumicas, se logr la tipificacin del
bioqumicas, Tincin Gram, Bacteria,
microorganismo bacteriano conocido como
Staphylococcus aureus, medios de cultivo.
Staphylococcus aureus. El resultado fue
posible ya que se realiz la tincin Gram del
microorganismo en la que se identific su
INTRODUCCIN
morfologa bacteriana. Adems, se utilizaron
diferentes medios de cultivo para su siembra, El presente artculo tiene como objetivo
entre los que se encuentran los agares, LIA, mostrar los resultados de la prctica de
CITRATO, TSI, Sim, McConkey, Eosina, SS laboratorio de Microbiologa en la que se
y los caldos de cultivo Brila e Indol, los utilizaron diferentes tcnicas de
cuales, despus de la siembra, fueron identificacin de microorganismos basadas
sometidos a diversas temperaturas y opciones en su capacidad metablica con el fin de
de oxgeno. Por medio de las pruebas determinar con qu tipo de microorganismo
bioqumicas realizadas se logr la obtencin se est trabajando, cules son sus
de las caractersticas microbianas que caractersticas y cmo reacciona ante las
permitieron la identificacin, lo que se pruebas bioqumicas a las que somete;
evidencia grficamente en las tablas y las adems, observar la coloracin de Gram y la
fotografas anexadas. El anlisis de los morfologa de las bacterias en cada tipo de
resultados deriv en asegurar que el colonia.
microorganismo presente en las muestras era

1
Estudiante de Zootecnia Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD. Microbiologa grupo 3.
2
Estudiante de Zootecnia Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD. Microbiologa grupo 3.
3
Estudiante de Zootecnia Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD. Microbiologa grupo 3.
4
Estudiante de Tecnologa de Regencia Farmacia Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD.
5
Estudiante de Tecnologa de Regencia Farmacia Universidad Nacional Abierta y a Distancia - UNAD
(estafilococos). Lo anterior es un gran avance
para la identificacin del microorganismo y
El desarrollo de la prctica se basa en la
acorta las opciones de bsqueda para el
necesidad que tiene el estudiante de aprender
descubrimiento que se pretende.
a identificar microrganismos, adems, de
utilizar los diferentes medios de cultivos
existentes, as como las sustancias de tincin
Figura 1. Tincin Gram
y el microscopio de modo correcto, siendo
capaz de observar e interpretar resultados.

Por otro lado, se pretende reconocer la forma


de actuar del microrganismo ante los cambios
de pH y temperatura al que ser sometido, de
la misma forma que a los diferentes medios
de cultivo capaces de cambiar sus
caractersticas fsicas iniciales a fin de dar
paso a la identificacin exitosa segn lo
estipulado por las pruebas bioqumicas. La figura 1 es la foto real de la tincin de la
bacteria en el laboratorio y muestra el color
violeta que tom a partir del proceso de
RESULTADOS tincin y la agrupacin de cocos.
A parir del desarrollo de las observaciones de
las diferentes fases de la prctica, se
obtuvieron los siguientes resultados: Tabla 2. Observaciones de las Pruebas
Bioqumicas en medios de cultivo.
PRUEBAS BIOQUMICAS
Tabla 1. Resultados de la Tincin Gram Medio de Cultivo Reaccin
Agar LIA Se observa crecimiento
TINCIN GRAM
del microorganismo, se
Color Violeta da un cambio de color
Forma Redonda del medio.
Tipo de Concatenada Agar CITRATO Dio resultado negativo,
agrupacin no hubo cambio en la
coloracin del medio.
El indicador de pH azul
Los datos muestran que el microorganismo se de bromotimol
permanece de color
ti de color violeta lo que demuestra que se verde.
trata de una bacteria Gram Positiva, adems Agar TSI Se observa oxidacin
que su forma es redondeada (coco) y se del microrganismo, es
encuentra en racimos o cadenas cortas notorio por el cambio
de coloracin del medio
de rojizo a amarillo la Agar SS No se evidenci
prueba se pudo medir (Salmonella crecimiento de la
como (++), no se Shiguella) colonia.
termin la oxidacin
total. Era necesario
esperar como mnimo Tabla 3. Resultados de las pruebas
48 horas para terminar Bioqumicas.
la coloracin total. Esta
prueba permite Prueba Resultado
evidenciar LIA +
fermentacin de la CITRATO -
glucosa, lactosa y TSI +
sacarosa.
SIM -
Agar Sim Se evidenci de forma
rpida de BRILLA -
desplazamiento que INDOL +
presenta, McConkey -
adicionalmente en el EOSINA -
medio haba poca SS -
presencia de gas.
Caldo BRILLA Present poca
produccin de oxgeno. Los resultados de las Tablas 2 y 3 evidencian
Caldo INDOL se observa turbiedad del que, para las opciones dadas, se trata de la
medio lo cual indica su
bacteria Staphylococcus aureus ya que las
crecimiento en el
mismo.
pruebas bioqumicas realizadas en el
Agar McConkey Se present poco microorganismo sugieren todos los cambios
crecimiento del que produce la bacteria en los medios
microorganismo, es utilizados.
posible que se est
relacionado con el
tiempo de incubacin,
Figura 2. Evidencia de pruebas
pues solo se dejaron
incubando 24 horas. No
Bioqumicas en tubos de ensayo con
fue posible evidenciar medios slidos y semislidos en pico de
la coloracin de las flauta y medios lquidos.
colonias.
Agar Eosina Present crecimiento,
pero sin coloracin, por
ser una bacteria Gram
positiva resulta inhibida
en su crecimiento, por
los colorantes presentes
en el medio EMB.
Figura 3. Evidencia de pruebas Oxgeno El microorganismo observado
bioqumicas en medios slidos realizadas present mayor crecimiento
en cajas de Petri. con presencia de oxgeno es
decir que es Aerbico, aunque
en la prueba anaerbica
realizada con aceite en el
laboratorio tambin creci,
pero no lo hizo de la misma
manera que con presencia de
oxgeno.

Figura 4. Evidencia de las pruebas de


factores de crecimiento.
Las figuras 2 y 3 son evidencia del trabajo en
laboratorio y de los resultados obtenidos
mediante la prctica de pruebas bioqumicas
que se le realizaron al microorganismo dado
como muestra problema.

Tabla 3. Factores de crecimiento

FACTORES DE CRECIMIENTO
Temperatura Al realizar la incubacin en 4,
20 y 37 grados centgrados, el La figura 4 muestra la evidencia de las
microorganismo, present pruebas de control de temperatura y pH en las
mayor crecimiento a una que se determinaban los factores de
temperatura 37 grados crecimiento de la bacteria estudiada en el
centgrados, la cual se laboratorio.
considera temperatura ptima
(+++) para el desarrollo y
reproduccin de la bacteria. A
20 grados tambin present un DISCUSIN
crecimiento solo que fue mucho
En la figura 1 se puede apreciar estafilococos
menor con respecto a las horas
de incubacin. Gram positivos que se encuentran en racimos,
pH Se realiz prueba con pH de 3. pares y cadenas cortas con forma redonda
7 y 11. Los resultados (coco). Esta bacteria se observa de color
demuestran que el pH ptimo es violeta ya que en el proceso de tincin donde
de 7 para la bacteria, es decir en agregaron diferentes colorantes como cristal
un medio neutro, sin embargo, violeta y fucsina bsica, quedaron teidas,
en el pH 3 creci ms que en pH
aun cuando se les retir el exceso de colorante
11, es decir, presenta mayor
crecimiento en un medio cido
con agua destilada y alcohol de 95, tomando
que uno bsico. este color caracterstico que denomina a las
bacterias que lo presentan Gram positivas.
Estas bacterias presentan este color ya que la En la prueba TSI el resultado fue positivo ya
envoltura celular de las bacterias Gram- que en esta muestra se determina la capacidad
positivas cubren la membrana citoplasmtica de un organismo de atacar un hidrato de
y una pared celular compuesta por una gruesa carbono especfico incorporado en un medio
capa de peptidoglicano, que rodea a la decrecimiento bsico, con produccin o no de
anterior. La pared celular se une a la gases, junto con la determinacin de posible
membrana citoplasmtica mediante cido sulfhdrico.
molculas de cido lipoteicoico. (Buritica,
La prueba SIM sirve para determinar si un
Castaeda , Medina, & Vargas , 2013). La
organismo es mvil o inmvil, si es capaz
capa de peptidoglicano les proporciona una
deliberar cido sulfhdrico por accin
gran resistencia a estas bacterias y es la
enzimtica de los aminocidos que contienen
responsable de retener el tinte durante la
azufre produciendo una reaccin visible de
tincin de Gram al poseer una gran
color negro y por ltimo la capacidad de
proporcin de este polmero complejo
desdoblar el indol de la molcula triptfano,
(murena) la cual no la hace susceptibles a la
adems que la consistencia del medio permite
accin del solvente orgnico, sino que este
la observacin de la movilidad de algunas
acta deshidratando los poros cerrndolos, lo
bacterias.
que impide que pueda escaparse el complejo
cristal violeta/yodo, y manteniendo la El agar LIA Mide la capacidad enzimtica de
coloracin azul-violcea. A diferencia de las un organismo para descarboxilar un
Gram-negativas, estas bacterias no presentan aminocido (lisina y arginina) para formar
una segunda membrana lipdica externa una amina, con la consiguiente alcalinidad.
(Cervantes, Garca, & Salazar, 2014) En este caso el resultado fue positivo.
En las tablas 2 y 3 se evidencian los El agar MacConkey es un medio de cultivo
resultados de las pruebas bioqumicas especfico para bacterias gram negativas y
aplicadas a la bacteria. Se determinaron como cepas que fermenten la lactosa y por lo ya
resultados positivos las pruebas de LIA, TSI mencionado anteriormente la bacteria
e INDOL y con resultados negativos a las estudiada es gram positiva, por tanto, el
pruebas de CITRATO, SIM, BRILLA, resultado fue negativo.
McConkey, ESONINA y SS.
Por todo lo anterior, se comprob que el
Algunas de las razones se justifican ya que la microorganismo estudiado es la bacteria
prueba de CITRATO determina si un Staphylococcus aureus la cual es una bacteria
microorganismo es capaz de utilizar citrato anaerobia facultativa, grampositiva,
como nica fuente de carbono para el productora de coagulasa, catalasa, inmvil y
metabolismo y crecimiento, provocando no esporulada que se encuentra ampliamente
alcalinidad, para el caso del microorganismo distribuida por todo el mundo, estimndose
la prueba dio negativa ya que no se observa que una de cada tres personas se hallan
crecimiento ni medio de color verde. (Bailn colonizadas, aunque no infectadas, por ella.
, Cruz, & Cervantes, 2004) (Cervantes, Garca, & Salazar, 2014)
CONCLUSIONES NCI%C3%93N_DE_GRAM_Y_OBSERVACI
%C3%93N_MICROSC%C3%93PICA
La prctica permiti el aprendizaje
significativo para la identificacin de Cervantes, E., Garca, R., & Salazar, P. (2014).
microrganismos, adems, de utilizar los Caractesticas generales del
Staphilococcus aureus. Rev Latinoam
diferentes medios de cultivos existentes, as
Patol Clin Med Lab, 61 (1): 28-40.
como las sustancias de tincin y el
Recuperado el 31 de mayo de 2016, de
microscopio de modo correcto. http://www.medigraphic.com/pdfs/pat
Con el desarrollo de la prctica en el ol/pt-2014/pt141e.pdf
laboratorio se pudo concluir que en los Cercenado & Canton (2010). Mtodos de
medios de cultivo las bacterias se multiplican Identificacin Bacteriana en el
y que en general todas las bacterias necesitan laboratorio de Microbiologa.
una fuente de energa, carbono, nitrgeno, Recuperado el 30 de mayo de 2016, de:
https://www.seimc.org/contenidos/doc
algunas sales, oligoelementos y agua.
umentoscientificos/procedimientosmicr
A partir de las tcnicas de tincin y pruebas obiologia/seimc-
procedimientomicrobiologia37.pdf
bioqumicas de identificacin bacteriana,
mediante estndares establecidos, se pudo Chambers H. Methicilin Resistance in
conocer que la muestra problema se trata de Sthaphylococci: Molecular and
la bacteria Staphylococcus aureus, todo ello a Biochemical Basis and Clinical
partir de sus reacciones metablicas las Implications. Clin.Microbiol.Rev. 1997.
cuales son caractersticas propias de cada Vol.10.(4). Pag.781-791
microorganismo.

Bibliografa
Bailn , L., Cruz, R., & Cervantes, A. (2004). Atlas
de pruebas bioqumicas para identificar
bacterias. Universidad Nacional
Autnoma de Mxico. Recuperado el 31
de mayo de 2016, de
http://www.academia.edu/4858992/Atl
as_de_pruebas_bioquimicas_para_iden
tificar_bacterias

Buritica, B., Castaeda , M., Medina, H., &


Vargas , Y. (2013). Tincin de Gram y
observacin microscpica. Fundacin
Universitaria de San Gil. Recuperado el
30 de mayo de 2016, de
http://www.academia.edu/6245506/TI